Plant, Cell y Medio Ambiente (2001) 24, 377-381

resistencia a baja temperatura en Polylepis tarapacana, un

árbol que crece en las zonas más elevadas del mundo
F. RADA,1 C. GARCÍA-Núñez,1 C. BOERO,2 M. Gallardo,2 M. HILAL,3 J. GONZÁLEZ,2 F. PRADO,3 M. LIBERMAN-
CRUZ4 Y A. Azócar1
1
Instituto de Ciencias Ambientales y Ecológicas (ICAE), Facultad de Ciencias, Universidad de Los Andes, Mérida, Venezuela,
2
Fundación Miguel Lillo, Tucumán, Argentina, 3Facultad de Ciencias Naturales, Fisiología Vegetal, Universidad Nacional de
Tucumán, Argentina, y 4Instituto de Ecología, Universidad Mayor de San Andrés, La Paz, Bolivia

RESUMEN desde Venezuela hasta el norte de Argentina. Las diferentes

Los bosques de Polylepis tarapacana se encuentran en
Bolivia son únicas en cuanto a su distribución altitudinal
(4200-5200 m). Dadas las extremas condi-ciones
ambientales que caracterizan a estas alturas, esta especie
tiene que depender de mecanismos distintos para sobrevivir
estresantes tempera-turas. El propósito de este estudio fue
determinar los mecanismos de resistencia a baja
temperatura en P. tarapacana. El tejido se muestreó para el
contenido de hidratos de carbono y de prolina y mediciones
de micro-climáticas se hicieron en dos Alti-tudes, 4300 y
4850 m, tanto durante las estaciones cálidas fríos y
húmedos secos. capacidad de sobreenfriamiento (-3 -6 ° C
para el frío seco y -7--9 ° C durante la estación cálida húmedo)
y lesiones temperaturas (entre -18 y -23 ° C para ambas
estaciones), disuadir-minado en el laboratorio, indican que P.
tarapacana es una especie tolerantes a las heladas. Por otro
lado, un aumento en la capacidad de sobreenfriamiento, como
resultado de aumento significativo en el contenido total de
azúcar y prolina solubles, se produce durante la estación cálida
húmeda como consecuencia de una mayor actividad
metabólica. Por lo tanto, P. tarapacana, una especie tolerantes a
las heladas durante la temporada de frío desfavorable, es capaz
de evitar la congelación durante la estación más favorable
cuando las temperaturas mínimas nocturnas no son tan
extremas.
Palabras-clave: resistencia al frío; congelación de evitación;
helada toler-ANCE; línea de árboles; Andes tropicales.
INTRODUCCIÓN
El límite altitudinal superior de bosque continuo es uno de los
límites ecológicos más distintas. En tropicales Moun-tains este
límite varía alrededor de 3000 m, dependiendo de las
condiciones locales. Polylepis tarapacana, una especie de línea
de árbol que se encuentra en el Volcán Sajama en Bolivia, es
único debido a su distribución alti-tudinal. El límite de altitud
inferior de esta especie se encuentra a 4200 m y el límite
superior alcanza 5.200 m. Este límite de distribución superior
representa el máximo alti-tud en el mundo para cualquier forma
arborescente (Braun 1997; Liberman-Cruz, Gaffta y Pedrotti
1997). Todas las especies de Polylepis se limitan a la Cordillera
de los Andes, que van
especies de este género alta montaña tienen que depender de las
características adaptativas IMPRES-siva que les permiten
sobrevivir en condiciones ambientales extremas,
principalmente bajas temperaturas (Goldstein, Meinzer y Rada,
1994).
Diferentes mecanismos por los que Polylepis sericea
sobrevive bajas temperaturas nocturnas a 4100 m en los Andes
venezolanos se han descrito previamente (Rada et al. 1985).
mecanismos de evitación son suficientes para asegurar la
supervivencia de esta especie en estas condiciones ambientales,
donde se produce poca variación térmica estacional y mínimos
TEM-peraturas no han sido reportados por debajo de -10 ° C
(Azócar y Monasterio 1980). Por otro lado, Squeo et al. (1991,
1996) que trabajan con diferentes plantas tropicales y
subtropicales, que representan diferentes formas de vida, a lo
largo de gradientes altitudinales han descrito una relación muy
estrecha entre las condiciones ambientales y mecanismos de
resistencia. Según lo sugerido por otros autores (Levitt, 1980;
Sakai y Larcher 1987),
El propósito de este estudio fue determinar los mecanismos
de resistencia a baja temperatura en Polylepis tara-pacana, una
especie de árbol que crecen en el límite de altitud superior de
esta forma de vida. Dos preguntas pueden dirigirse
preocupación-ción de este objetivo. ¿Cómo funciona esta
especie, que crece bajo condiciones de estrés, comparar con
otras especies línea de árboles tropicales en términos de
mecanismos de resistencia en frío? ¿Hay diferencias
estacionales en sus mecanismos de resistencia a bajas
temperaturas debido a su distribución en latitudes donde las
diferencias de temperatura entre las estaciones marcadas se
producen?
MATERIALES Y MÉTODOS
características del lugar y material vegetal
Los Polylepis tarapacana abrir bosque forma un cinturón
continuo alrededor del Volcán Sajama en Oruro, Bolivia (18 °
7 ¢ S, 68 ° 57 ¢ W). Los estudios se llevaron a cabo en
morrenas laterales de la ladera sur del volcán en altitudes de
4,300 y 4,850 m. Esta semi-árido, tropical, de alta montaña
environ-ment tiene una temperatura media anual de 3 · 4 ° C y
pre-

Correspondencia: F. Rada. E-mail: frada@ciens.ula.ve

© 2001 Blackwell Science Ltd 377
378 F. Rada et al. colocaron en tubos herméticamente cerrados y sumergidos en
nitrógeno líquido.

cipitation de 347 mm. Striking cambios estacionales se

observan en ambas condiciones de temperatura y de agua entre
la estación cálida frío y húmedo seco. Las temperaturas
máximas y mínimas registradas a 4200 m fueron 21 ° C y -19 °
C, respectivamente (Liberman-Cruz 1986). Se hicieron estudios
de campo y recogida de muestras para el trabajo de laboratorio
durante el final de la seca medio frío y de la estación cálida
húmeda. Los árboles adultos (n = 5) fueron elegidos para
ambos estudios de campo y de laboratorio.

Los estudios de campo

Las mediciones se hicieron más de tres 24 h períodos tanto
durante la temporada de frío seco a 4,300 m (7-10 septiembre
de 1998) y la estación cálida húmeda (19-22 febrero de 1999).
En todos los períodos se midieron la temperatura del aire
(cobre-constantan termo-parejas) y humedad relativa
(psicrómetro aspirado) a los 2 h intervalos durante el día, y
también a la medianoche y antes del amanecer. El material
vegetal para el contenido carbohy-drate y prolina se recogió en
H intervalos de aproximadamente 6 durante estos mismos
períodos (0630, 1300, 1830 y 2330 h).

Estudios de laboratorio
Para determinar la temperatura a la que se produjo la
congelación de hoja y tallo de tejido (es decir, capacidad de
sobreenfriamiento), ramas con hojas tomadas de cinco árboles
diferentes, tanto en 4300 y 4850 m, se cortaron bajo el agua en
el campo, cubiertas con bolsas de polietileno y se llevaron a el
laboratorio. En el laboratorio-oratoria, hoja y tallo secciones se
colocaron en herméticamente sellados 6 cm 3tubos para evitar
cambios en el contenido de agua de los tejidos que podrían
afectar a la capacidad de sobreenfriamiento (Rada et al. 1987).
termopares de cobre-constantan se insertaron en las muestras
de hojas y el tallo y los cambios de temperatura se controlaron
con-continuamente con un registrador de gráficos. Los tubos se
sumergieron en un baño de alcohol refrigerado y la temperatura
se redujo de 5 ° C a -25 ° C a una velocidad de 8 ° C h -1. La
temperatura a la que se produjo la congelación de las muestras
se determinó mediante el marcado incremento de resultado-ing
temperatura del proceso exotérmico de la formación de hielo.
Trifenilo cloruro de tetrazolio se utilizó (TTC) de tinte para
determinar la lesión tisular (Steponkus y Lanphear 1967).
Hojas y secciones de tallo se colocan en tubos sellados y se
sumergieron en un baño de alcohol-refrigerado y la tempera-
tura se bajó como se describe anteriormente. Cinco réplicas de
cada muestra se tomaron de la baño a intervalos de 5 ° C y incu
bated-a temperatura ambiente durante 12 h. Después de este
período de incubación, la solución de TTC se aplicó a 50 mg de
cada muestra, que después se deja en la oscuridad, en la sala de
tempera-tura, durante 24 h. a continuación, se hizo un extracto
de etanol y la absorbancia a 530 nm se mide. lesión de
congelación se definió como la cantidad de TTC reducido en
las muestras que resultaron en 50% la absorbancia de la
cantidad de TTC reducido en la muestra de referencia sin
congelar a 5 ° C.

Para la determinación de hidratos de carbono y contenido de

prolina, se recogieron muestras de hojas en el campo, se
 Proline se determinó a partir de alícuotas de sobrenadante de
hidratos de carbono, antes del procedimiento de desalación
Estos tubos se colocaron en hielo seco y se transportan al
(Bates, Waldren y Teare 1973).
laboratorio. Los azúcares se extrajeron de tejidos de las hojas
como sigue (Prado et al., 1998): a 500 mg de masa fresca (FW)
de cada muestra se homogeneizó con 2 cm 3de solución de RESULTADOS
etanol al 80% usando una maja y un mortero. Después del
No hubo diferencias significativas en la temperatura lesión
calentamiento del homogeneizado en un baño de agua a 75 ° C
entre estaciones, entre los tejidos (es decir, hojas y tallos) o
durante 10 min, el material INSOL-uble se separó por
entre altitudes, para temperaturas que oscilan desde -18 hasta -
centrifugación a 5.000 ¥ g durante 10 min. El precipitado se
23 ° C (Tabla 1). Se encontraron diferencias significativas en la
volvió a extraer con 2 cm 3de 80% de etanol a 75 ° C y se capacidad de sobreenfriamiento entre las estaciones, con
centrifugó de nuevo. Los super-natants se agruparon y se valores de
secaron bajo una corriente de aire caliente y el residuo seco se - 3 a 5 ° C en la estación fría, y -7--9 ° C en la estación cálida.
re-suspendió en 1 cm3de agua y se desaló a través de una Hubo un aumento significativo en el contenido de azúcar
columna de resina de intercambio iónico (Amber-Lite MB3). soluble total del frío seco para la temporada cálida en húmedo,
El filtrado se utiliza para azúcar soluble DETERMI-naciones. como se muestra en la Fig. 1a para ciclos diarios
azúcares solubles totales se determinaron mediante el método representativos. Durante todos los períodos de medición 24 h,
de fenol-ácido sulfúrico (Dubois, Guilles & Hamilton 1956). Se la total más bajo de azúcar soluble con-tiendas de campaña se
utilizaron los procedimientos de Roe y Papadopoulos (1954) y
registraron a 0630 h, coincidiendo con las temperaturas
Cardini, Leloir y Chiriboga (1955) para determinar la fructosa
mínimas registradas durante los ciclos (temperatura
libre y sacarosa, respectivamente. La glucosa se calcula por la
datos no mostrados). En términos de azúcares individuales,
diferencia entre los azúcares solubles totales y (sacarosa +
sacarosa mostró la mayor diferencia relativa (hasta ¥ 5) entre
fructosa libre). La fracción insoluble que queda después de la
extracción con etanol se utilizó para las determinaciones de los cursos diarias de las dos estaciones, a pesar de que los con-
almidón (Rose et al. 1991). El precipitado se resuspendió en 2 tiendas de campaña de glucosa y fructosa eran más grandes
(Fig. 2).
cm3de · NaOH N 2 5 y se hirvió durante 5 min. Después de
En comparación con cantidades de ambos azúcares totales e
enfriar, el pH se ajustó a 4 · 5 usando HCl 2 N. El almidón
individuales, contenido de almidón mostró un patrón opuesto
gelatinizado resultante se hidroliza por amyglucosidases
entre las estaciones (Fig. 1b), mientras que la prolina mostraron
tamponadas de molde Rhizopus (15 IU cm 3en 0 · 1 M de
un aumento significativo en el contenido del frío seco para la
acetato de sodio, pH 4 · 5). Después de 10 min a 50 ° C, las
estación cálida húmedo, similar a los azúcares solubles (Fig .
alícuotas se retiraron y glucosa ensayaron mediante el reactivo
3).
de Nelson (Somogyi 1945). Se incluyeron espacios apropiados
y estándares utilizando almidón soluble.
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 resistencia a baja temperatura en tarapacana polylepis
379

T CAROLINA Tabla 1. temperatura del aire mínimo medido

Altitud min PD DEL SUR ESO a 5 cm (Tmin, ° C) por encima del nivel del
suelo (Liberman-Cruz 1986), la capacidad de
Septiembre (frío seco) 4300 m - Hoja -3 · 5 ± 0 · 5 -20 ± 0 · 5
sobreenfriamiento (SC, ° C) y la temperatura
Vástago -3 · 8 ± 1 · 1 -23 ± 0 · 8
de la lesión (IT, ° C) para diferentes secciones
4800 m -13 · 1 Hoja -5 · 4 ± 0 · 9 -21 ± 1 · 8
de la planta (PS) para P. tarapacana en dos
Vástago -4 · 4 ± 0 · 2 -18 ± 1 · 4 altitudes diferentes durante el frío seco
Febrero (cálido húmedo) 4300 m - Hoja -9 · 2 ± 0 · 6 -21 ± 1 · 2 (septiembre de 1998) y las estaciones cálidas
Vástago -7 · 6 ± 0 · 6 -23 ± 0 · 6 húmedas (febrero de 1999)
4800 m -6 · 1 Hoja -7 · 7 ± 0 · 6 -21 ± 0 · 7
Vástago -7 · 8 ± 0 · 5 -18 ± 1 · 3

DISCUSIÓN (una)
Aunque el sitio de estudio se considera que tiene un entorno 6
tropical alta montaña, la diferencia 7 ° C en la media y la 5

1 sacarosa FW)
temperatura mínima entre las estaciones (Tabla 1, Liberman-

metroMOLG-
Cruz 1986) determina una clara estacionalidad a la que pueden 4
responder a las plantas. 3
Los diferentes resultados para la temperatura lesión y la
2
capacidad de super-enfriamiento indican que P. tarapacana basa
principalmente en la tolerancia a las heladas que soportar 1
condiciones extremas de temperatura en las altas montañas de
Bolivia.
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381

(una)
100
sugarsF
W)

80
ol

bl
u
s

-1

60
Totalmetr

40
o(

20

0630 1230 1830 0030 0630

Hora
(segundo)

20
FW)

15
Starchma
ltoseg

10
(m
g

0630 1230 1830 0030 0630

Hora

Figura 1. (A) azúcar soluble total y (b) el contenido de almidón en

hojas de P. tarapacana durante un ciclo de 24 h en el) estaciones (frío
húmedo caliente () y seco.
 (seg
undo
)
25
Fructoe
tro FW)

20
10
me

M
-1

15
(

(do)
60
50
1 FW)
Glucos

40
- a

30
met
ro(

20
10

0630 1230 1830 0030 0630

Hora

Figura 2. contenido de azúcar individual: (a) sacarosa; (B) fructosa; (do)

glucosa en hojas de P. tarapacana durante unas 24 h ciclos en el) estaciones
(frío húmedo caliente () y seco.

Como contenidos de azúcar solubles fueron más bajos en las horas

previas al amanecer en los momentos cuando se producen
temperaturas mínimas, podemos excluir diaria descenso del punto de
congelación por Accu-mulación de solutos osmóticamente activos
como un mecanismo de evitar-ance congelación en esta especie.
Estos resultados contrastan con los obtenidos para Polylepis sericea,
que depende exclu-sivamente en los mecanismos de evitación a
través de ajuste osmótico al día, junto con un cierto grado de
sobreenfriamiento
 380 F. Rada et al.
30
25
metro( -1 FW)
15
20
10
5 Beck 1988), sino más bien se pueden usar en el metabolismo .
0630 1230 1830 0030 0630
Hora
Figura 3. contenido de prolina en las hojas de P. tarapacana
durante un 24 h ciclo en el) estaciones (frío húmedo caliente () y
seco.
capacidad, para sobrevivir las condiciones nocturnas menos
extremas en las altas montañas de Venezuela (Rada et al
1985;.. Goldstein et al 1994). Por otra parte, nuestros resultados
apoyan los resultados de Squeo et al. (1991, 1996) que sugieren
que las plantas que crecen en los ambientes más extremos
necesitan para sobrevivir a través de tolerancia a las heladas, en
comparación con aquellos en condiciones menos extremas, que
dependen de mecanismos de evitación.
Aunque P. tarapacana se puede considerar una especie
tolerantes a las heladas, las diferencias en la capacidad de
sobreenfriamiento entre las estaciones también sugieren
diferencias en la resistencia Mech-meca- entre estaciones. Las
temperaturas durante la estación fría seca pueden ser muy por
debajo de -10 ° C en cualquier noche del año. Durante esta
temporada, los mecanismos de evasión a través de super-
refrigeración no sería suficiente para proteger contra estas bajas
temperaturas nocturnas. Por lo tanto, la congelación se produce
en hojas y tallos tejidos a temperaturas comparativamente altas
(de -3 a 5 ° C) y la lesión se produce a temperaturas inferiores a
-20 ° C. Por otro lado, durante la estación cálida húmeda, las
temperaturas alcanzan raramente por debajo de -8 ° C. Durante
esta estación, aumentos de la capacidad de sobreenfriamiento
de manera significativa en el rango de temperaturas entre -7 y -
10 ° C, de manera que para la mayoría de las noches durante
esta estación, no se produce la congelación del tejido.
Un aumento significativo en el contenido de azúcares
solubles totales y prolina entre las estaciones contribuye a
diferencias en la capacidad de sobreenfriamiento a través de
cambios en las cantidades de solutos osmóticamente activos.
Una disminución en el contenido de almidón del frío seco para
la estación cálida húmeda también es compatible con la idea de
que los carbohidratos simples no se convierten en almidón
durante la última estación, más favorable. Una posibilidad
alternativa es que durante los períodos en que las temperaturas
no son extremadamente bajas del almidón existente se
convierte en hidratos de carbono solubles, aumentando así el
contenido de solutos osmóticamente activos con la
consiguiente mejora de la congelación de evitación.
A pesar de que hemos sugerido en el anterior para-
gráfico que este aumento de solutos osmóticamente activos es
una estrategia por la cual para evitar temperaturas de
congelación, tiene que quedar claro que esto no debería ser
considerado como un mech-nismo, ya que es más
probablemente una consecuencia de una mayor actividad de
meta-bolic durante la, estación cálida húmeda favorable.
contenido de azúcar solubles grandes se no necesariamente allí
para ser usados como crioprotectores para evitar la lesión por
congelación, como strated-demonio para afroalpina géneros
tales como Lobelia, Senecio y Alchemilla (Beck et al 1982;.
Las diferencias observadas en el contenido de almidón y de
azúcar soluble en P. tarapacana durante la temporada favorable
pueden ser un indicador de más altas tasas metabólicas y de
crecimiento. En un estudio preliminar, Cárdenas (2000)
describe las tasas de crecimiento de 6 mm por mes en las ramas
durante la estación favorable (enero-marzo), disminuyendo a 1
mm por mes, de abril a mayo, sin crecimiento adicional en los
siguientes meses desfavorables. Al mismo tiempo, un aumento
en el contenido de prolina durante la estación cálida favorables,
húmedo, sugiere un aumento en la piscina aminoácidos
necesarios para la actividad biosintética.
EXPRESIONES DE GRATITUD
Los autores desean agradecer a Sarah Urcullo, Marcel Estévez,
Freddy Loza, Marolin Vidaurre y don Basilio por su ayuda en
el campo. Las instalaciones de laboratorio y materiales fueron
suministrados por el suelo Análisis y laboratorios de calidad
Environ-mentales, de la Universidad de San Andrés, La Paz,
Bolivia. Este proyecto no hubiera sido posible sin la
financiación del RLB (América Botánica American Network) a
través de una subvención binacional. Los autores también
agradecen al Instituto Interamericano (IAI) por su apoyo (CRN
subvención No. 040).
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Recibido el 23 de noviembre de 2000; recibido en forma 23 de
noviembre 2000 revisado; aceptado para publicación 23 de noviembre
de 2 000
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