Instituto de Medicina Legal del Perú

Investigación de fluidos seminales con pruebas rápidas de antígeno

prostático específico (PSA), fosfatasa ácida prostática (FAP) y microscopía,
en muestras relacionadas con delitos sexuales.
Por: Tineo Tineo Dean Herman a,b, Jaime Vargas Carola a,c, Rosas Quintana Ingrid a,c
a. Laboratorio de Biología del Instituto de Medicina Legal del Perú.
b. Sociedad Latinoamericana de Genética Forense.
c. Segunda especialidad en Biología Forense.

RESUMEN
Los delitos sexuales es un problema que involucra a los diferentes estratos sociales, los
fluidos dejados por el agresor pueden servir como prueba o para individualizar al agresor;
se realizó una investigación de fluidos seminales utilizando pruebas rápidas del antígeno
prostático específico (PSA) de uso forense y el reactivo de fosfatasa ácida prostática
(FAP); con el objetivo de conocer que tan fiables son estas pruebas, se analizaron 49
muestras tales como prendas íntimas, papel higiénico, hisopados vaginales y anales
provenientes de casos de delitos sexuales; después de un previo lavado con solución
salina de cada una de las muestras se sometieron a centrifugación y del sobrenadante se
realizaron las pruebas de PSA y FAP, para complementar el estudio se realizó la
observación microscópica de todas las muestras previa fijación y coloración con
hematoxilina. En 43 muestras se detectó la presencia de fluidos seminales ya sea por
FAP, PSA o microscopía; 30 muestras resultaron positivas a la prueba de PSA y 34
positivas a FAP esto significa que hubieron muestras positivas a FAP pero negativas a
PSA y viceversa, en 23 muestras hubo correspondencia de positividad entre PSA-FAP y
en solo 17 de ellas se observaron espermatozoides; en el estudio general se observaron
espermatozoides en solo 22 muestras; en 2 muestras que dieron negativo a FAP y PSA
se observaron espermatozoides y en 2 muestras con PSA negativo y FAP positivo se
observaron espermatozoides. Considerando que la observación de espermatozoides
confirma la presencia de semen en una muestra y tomando como referencia los falsos
negativos de PSA y FAP; se encontró que la sensibilidad de la FAP fue del 86.0% y de la
prueba rápida PSA del 81.8%; sin embargo la positividad de ambas pruebas fue diferente
cuando las muestras se analizaron por grupos (grupo 1: Prendas, papel higiénico y grupo
2: hisopados vaginales); en las muestras del grupo 1 la prueba de PSA fue más efectiva y
dio positivo en un 82.6% frente a un 60.86% de positividad por FAP, y en las muestras
en el grupo 2 la prueba de FAP fue más efectiva y dio positivo en un 76.9% frente a un
46.15 de PSA, resultados que se tienen que tomar en cuenta a la hora de elegir el tipo de
reactivo. Por otro lado, el alto porcentaje de muestras que dieron reacción positiva débil o
intensa, tanto a la prueba de PSA o FAP pero que no se observaron espermatozoides,así
como muestras PSA y FAP negativas y microscopía positiva, resultados que podrían
deberse a múltiples factores en el que destaca la conservación y toma de muestra; por
tanto, no se debe tomar solamente como positivos a las muestras donde se observaron
células espermáticas, si hay convicción de un delito sexual se recomienda amplificar
marcadores genéticos STR autosómicos y del cromosoma Y con la finalidad de
individualizar al sospechoso .

Palabras claves: PSA, FAP, fluidos seminales, delitos sexuales

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1. INTRODUCCIÓN
Los delitos sexuales es un problema en
los diferentes estratos sociales, en
muchos casos las víctimas se rehúsan a
denunciar, otras van primero a los
centros de salud a curar sus heridas para
luego acudir a la consulta médico-legal,
tiempo en el cual los fluidos seminales
dejados por el agresor que servirían para
confirmar e individualizar al agresor van
desapareciendo.
El líquido seminal aproximado que se
forma de la secreción de las vesículas
seminales (60%), la próstata (30%), del
epidídimo y las glándulas bulbouretrales
de Cowper y Littre (10%). (1).
El semen es una suspensión de
espermatozoides en una solución
bioquímicamente compleja llamada
plasma seminal que se forma por el
aporte de los testículos, el epidídimo, las
vesículas seminales, la próstata, las
glándulas de Cowper, las glándulas de
Littre y los vasos deferentes (2).
Menos del 10% del volumen del semen
de una eyaculación corresponde a los
espermatozoides y más del 90% del
volumen del semen de una eyaculación
corresponde al líquido seminal.
El volumen de semen varía de 1.5 a 5
mililitros por eyaculado, y la cantidad
normal de los espermatozoides en el
semen varía de 20 a 150 millones por
mililitro(3).
En los estudios clínicos de bioquímica
seminal existen marcadores específicos
tales como: Marcadores del epidídimo (L-
carnitina, a-1,4-glucosidasa neutra, a-1,4
glucosidasa); marcador de las vesículas
seminales (la fructosa); marcadores de la
próstata (Citrato, Zinc, Fosfatasa
ácida)(4). El antígeno prostático
específico (PSA o p30) es otro marcador
específico de la glándula prostática.
2
La fosfatasa ácida (FAP) es una enzima
activa en la desfosforilación de los
ésteres ortofosfóricos. La isoenzima
hallada en el esperma es específica de la
próstata(4).
El antígeno prostático específico (por sus
siglas en inglés, PSA, también conocido
como p30) es una sustancia proteica
sintetizada por células de la próstata, su
función es disolver el coágulo seminal, es
una glicoproteína cuya síntesis es
exclusiva de la próstata (5). Una
pequeñísima parte de este PSA pasa a la
circulación sanguínea de hombres
enfermos los niveles normales en sangre
de PSA en los varones sanos es muy
bajo, del orden de millones de veces
menos que en el semen, y se elevan en
la enfermedad prostática. Los valores de
referencia para el PSA sérico son de
hasta 4,0 ng/mililitro.(6)
Antígeno Específico de Próstata (PSA) y
la fosfatasa ácida prostática han sido
bastante caracterizadas y validadas por
la comunidad Científica de Forenses,
como marcadores de la presencia de
fluido seminal en estudios de delitos
sexuales; sin embargo a la detección
fosfatasa ácida se ha catalogado a la
como prueba presuntiva y el PSA como
prueba confirmativa de fluidos seminales
(7).
Figura 1: Estructura cristalina en 3D del antígeno
prostático específico humano. Fuente NCBI
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Figura 1: Estructura cristalina en 3D de la
Fosfatasa Acida Prostática. Fuente NCBI
2. OBJETIVOS
a. Determinar la sensibilidad de las
pruebas PSA y FAP.
b. Conocer la efectividad de las pruebas
PSA y FAP según el tipo de
muestras.
c. Recomendar que tipo de prueba
solicitar en caso de delitos sexuales.
3. MATERIAL Y MÉTODOS.
3.3. Muestras: Prendas, papel higiénico,
hisopados vaginales, anales y fosfatasa ácida prostática y anotar las
paragenitales de presuntas víctimas o
sospechosos de delitos sexuales.
3.4. Reactivos
Pruebas rápidas de PSA de uso forense
marca SERATEC semicuant, que detecta
desde 2 ng/mL. de p30 (Antígeno
prostático específico). Kit de Fosfatasa
ácida prostática marca SIRCHIE.
3.1. Materiales
Hisopos, bisturí, tubos de ensayo,
gradillas, micropipeta, lámpara de luces
forenses, láminas, pipetas de
transferencia, solución salina fisiológica,
hematoxilina, aceite de inmersión.
3.2. Equipos
Centrífuga, microscopio.
3
3.5. Metodología
a. Preparación de la muestra: Si es
prenda, cortar 0.5 cm cuadrados en un
área que se sospeche la presencia de
fluidos seminales, y si es hisopado
vaginal, anal etc. usar todo el hisopo.
b. Colocar la muestra en 2 mL de
solución salina fisiológica (SSF), dejar
reposar por 30 minutos realizando
movimientos de lavado cada 10
minutos.
c. Retirar de la SSF los fragmentos de
tela o hisopados, estrujando la
muestra por las paredes del tubo.
d. Centrifugar a 3500 rpm x 5 minutos
e. Con la ayuda de una pipeta tomar 80
uL del sobrenadante y agregar en el
posillo del Kit PSA de uso forense.
f. Observar la reacción hasta por cinco
minutos, luego anotar el tipo de
reacción de positividad como: Muy
débil (+/--), débil (+/-), regular (+),
intenso (++), muy intenso (+++); la
ausencia de reacción se anotará como
(-).
g. El resto del sobrenadante traspasar en
otro tubo y realizar la prueba de
positividad según al paso anterior.
h. Realizar un frotis del sedimento, dejar
secar y colorear con hematoxilina,
luego realizar la observación
microscópica de espermatozoides,
(Prueba confirmatoria)
i. Anotar la densidad de los
espermatozoides como: Muy escasos,
escasos, regular cantidad y
abundantes, según tabla 1.
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4. RESULTADOS
En la tabla N°1 se reportan los resultados
de los ensayos realizados en un total de
49 muestras (23 prendas íntimas y 26
hisopados de partes íntimas
generalmente vaginales, relacionadas
con delitos sexuales; en 43 muestras se
detectó la presencia de fluidos seminales,
ya sea con el reactivo de FAP, PSA u
observación microscópica del
espermatozoide; 30 muestras dieron
positivo a PSA y 34 a FAP, esto significa
que hubieron muestras positivas a PSA y
negativas a FAP, y viceversa (figs. 6 y 7);
solo en 23 muestras se encontró una
correlación entre ambos reactivos (fig.3).
Las muestras se analizaron también por
microscopía, y se observaron
espermatozoides en solo 22 muestras; de
las 23 muestras que dieron positivo a
FAP y PSA solo en 17 de ellas se
observaron espermatozoides (fig.4). En 2
muestras negativas a PSA y positivo a
FAP se observaron espermatozoides y
en una muestra PSA positivo y FAP
negativo; el hecho que llamo la atención
fue observar espermatozoides en dos
muestras prenda íntima e hisopado
vaginal que dieron negativo a FAP y
PSA, para corroborar este hallazgo se
repitió hasta 3 veces el ensayo.
Se han encontrado muestras microscopía
negativa con alta reacción de positividad
(+++) al PSA y negativas a FAP (-), pero
también hay muestras negativas (-) a
PSA y alta positividad a FAP (+++). Hay
casos donde a pesar de haber una alta
reacción de positividad solo se encontró
un espermatozoide por lamina (muy
escasos).
Con la evaluación de las muestras por
microscopía se comprobó que el kit PSA
estaba detectando falsos negativos, y en
4
menor proporción en reactivo FAP; por
tanto se calcula la sensibilidad de ambos
reactivos, solo tomando como referencia
de verdaderamente positivos a la
presencia de semen las 22 muestras
donde se observaron espermatozoides.
La sensibilidad calculada para el kit PSA
fue de 81.6% y la de FAP fue de 86.0%
(tablas 3 y 4).
Sin embargo la positividad de las pruebas
de PSA y FAP es diferente cuando se
probaron frente a muestras genitales,
paragenitales y prendas, por lo que las
muestras se analizan por grupos, el
grupo 1 correspondió a calzones,
calzoncillos y papel higiénico, y el grupo
2 a hisopados vaginales y anales. El
resultado de este tipo de análisis fue que
la prueba de PSA es más efectiva para
detectar fluidos seminales en prendas
guardadas en estado de suciedad y papel
higiénico en estas mismas condiciones, y
la prueba de FAP es más efectiva en
hisopados genitales como hisopados
vaginales. En las muestras del grupo 1 la
prueba de PSA dio positivo en un 82.6%
(19 muestras) frente a un 60.86% (14
muestras) de positividad por FAP, y en
las muestras en el grupo 2 la prueba de
PSA dio positivo en un 46.15% (12
muestras) frente a un 76.9% (20
muestras) por FAP (fig.5).
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Tabla 1: Tipos de muestras empleadas en la investigación de fluidos seminales con pruebas de PSA, FAP y
microscopía, y la escala de color utilizada en las reacciones positivas.
Investigación de fluídos seminales con pruebas de PSA, FAP y Microscopía
Fosfatasa Se observaron
N° Mx Tipo de muestra PSA SERATEC
ácida espermatozoides SI/NO:
1 Calzon (+++) (++) Si Abundantes
2 Calzón (++) (+++) si Muy escasos
3 Calzón (+) (+/--) si Muy escasos
4 Calzón (+/-) (++) si Escasos
5 Calzón (+) (+++) si Escasos
6 Calzón (-) (-) si Escasos
7 Calzón (+++) (-) No
8 Calzón (+++) (+++) Si Abundantes
9 Calzón (+) (-) No
10 Calzón (-) (-) No
11 Calzón (++) (+++) Si Regular
12 Calzón (+++) (+++) Si Regular
13 Calzoncillo (+) (+) si Muy escasos
14 Calzoncillo (+++) (+) Si Regular
15 Calzoncillo (+++) (+++) Si Abundantes
16 Calzoncillo (++) (-) Si Muy escasos
17 Calzoncillo (+++) (+) No
18 Colcha (+/--) (-) No
19 H.anal (-) (+) No
20 H.anal (-) (-) No
21 H.testiculo (+++) (-) No
22 H.uretral (+++) (-) No
23 H.vaginal (+/-) (+/-) No
24 H.vaginal (+) (+++) si Escasos
25 H.vaginal (-) (+) si Escasos
26 H.vaginal (++) (++) No
27 H.vaginal (-) (++) si Regular
28 H.vaginal (++) (-) No
29 H.vaginal (-) (+) No
30 H.vaginal (-) (-) No
31 H.vaginal (++) (+) No
32 H.vaginal (-) (+/-) No
33 H.vaginal (+++) (+) No
34 H.vaginal (-) (+++) No
35 H.vaginal (-) (+) No
36 H.vaginal (+/-) (+++) No
37 H.vaginal (+) (+++) Si Abundantes
38 H.vaginal (+++) (+++) Si Abundantes
39 H.vaginal (-) (-) Si Escasos
40 H.vaginal (++) (+++) Si Regular
41 H.vaginal (-) (+) No
42 H.vaginal (-) (+) No
43 H.vaginal (-) (+/-) No
44 H.vaginal (-) (+++) No
45 Pantalon 1 (-) (-) No
46 Pantalon 2 (-) (-) No
47 Papel higienico (+) (+/-) Si Escasos
48 Papel higienico 1 (-) (-) No
49 Papel higienico 2 (+++) (+++) Si Regular
Intensidad de color en Observación de
reacciones positivas en PSA espermatozoides por
y fosfatasa ácida Microscopía
(-)= No ha y Re a cci ón Negati vo= No s e obs ervan
(+/--)= Re a cci ón muy dé bi l Muy es cas os = 1 - 2 x l ami na
(+/-)= Re a cci ón dé bi l Es cas os = 0-1 x campo
(+) = Re a cci ón re gul a r Regul ar canti dad= 1-10 x campo
(++)= Re a cci ón i nte ns a Abundantes = >10 x campo
(+++)= Re a cci ón muy i nte ns a

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Tabla N°3: Sensibilidad de la prueba rápida de

Detección de Fluidos fosfatasa ácida prostática FAP, utilizada en la
investigación de fluidos seminales
seminales a través de PSA,
FAP y la correlación entre Si hay
FAP semen
ambas pruebas
Positivo 19 (VP)
40 34
30 Negativo 3(FN)
30 23
20
10 Sensibilidad VP 0.863636
0 VP+FN
FAP positivo PSA positivo Correlación
FAP vs PSA
Positividad de la prueba PSA y FAP
Figura 3: Muestras que dieron positivo a fosfatasa según el grupo de muestras
ácida prostática (FAP) y al antígeno prostático 25 20
específico (PSA), y el número de muestras que 19
(82.6%) (76.9%)
dieron positivo a ambos reactivos. 20
14
12 (60.86%)
15 (46.5%)
Muestras positivas a PSA y
10
FAP vs observación de
espermatozoides 5
23 0
25
20 17 PSA FAP
15 Grupo 1 Grupo 2
10 6
Figura 5: Positividad de las pruebas de PSA y
5
FAP frente a diferentes grupos de muestras.
0
Grupo 1 (prendas íntimas, papel higiénico); grupo
Correlación Microscopia Microscopia
2 (hisopados vaginales y anales). Porcentajes de
FAP vs PSA positiva negativa
positividad del PSA frente al grupo 1 y grupo 2 es
positivos
de 82.6% y 46.15% respectivamente; porcentajes
Figura 4: Muestras que dieron positivo a ambos de positividad de FAP frente al grupo 1 y 2 es de
reactivos (correlación FAP-PSA) vs la 60.86% y 76.9% respectivamente.
observación microscópica; se observaron
espermatozoides (microscopía positiva), no se
observaron espermatozoides (microscopía
negativa).

Tabla N°2: Sensibilidad de la prueba rápida de

PSA de uso forense, utilizado en la investigación
de fluidos seminales.
Si hay
PSA semen
Positivo 18 (VP)
Negativo 4 (FN)

Sensibilidad VP 0.818182
Figura 6: Muestra positiva a FAP pero negativa a
VP+FN la prueba de PSA

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Figura 7: Dos casos: Muestra negativa a FAP
pero positiva a la prueba de PSA, yMuestra
positiva a FAP pero negativa a la prueba de PSA.
5. DISCUSIÓN.
Los resultados encontrados indican que,
los reactivos utilizados en investigación
de fluidos seminales en prendas o
hisopados de víctimas de violencia
sexual tienen sus ventajas y desventajas,
y depende del tipo de muestra, tiempo de
toma de muestra, conservación de la
muestra u otro factores, datos que este
estudio no se valoraron ya que las
muestras fueron remitidas al laboratorio
solo con una simple solicitud de examen
espermatologico.
En las muestras que dieron positiva a
PSA o a FAP pero que no se encontraron
espermatozoides podría deberse al
tiempo de toma de la muestra desde que
ocurrió el hecho delictivo o al tipo de
conservación y no necesariamente a una
condición de azoospermia u oligospermia
del violador. Las muestras con PSA y
FAP negativos pero en las que se
observaron espermatozoides, podrían
haber sido tomadas por encima de las 48
horas, un caso semejante es reportado
por Hotmeisher et al. (8), estos
investigadores mencionan que la FAP es
detectable en el tracto vaginal hasta 14
horas, sin embargo en este estudio
hemos encontrado varias muestras del
tracto vaginal que fueron dieron positivo a
7
FAP positivas y negativas a PSA; por
tanto no se cumple tal el enunciado.
Diversas literaturas forenses hacen
énfasis que la prueba FAP es presuntiva
y el PSA confirmativa, entendiéndose que
en toda la muestra PSA positiva debe
necesariamente ser FAP positiva, en este
estudio se concluye que no es así,
tomando en cuenta el tipo de muestra y
en el estado de conservación con que se
remitieron al laboratorio. El PSA es un
marcador específico de fluidos seminales
sin embargo es menos sensible que la
FAP, resultados similares fueron
reportados por Quispe et al.(7), quienes
analizaron 250 indicios de delitos
sexuales, en el 60% (130) de las
muestras encontraron fluidos seminales,
37% (80 muestras) con FAP, 35% (75)
con prueba de PSA tipo Elisa y 25 % por
microscopía.(tinción Fast Nuclear Red)
6. CONCLUSIONES.
 Se observaron espermatozoides en
muestras en las que no se detectó la
presencia del antígeno prostático
específico (PSA) ó fosfatasa ácida
prostática (FAP), o ambas.
 Hubieron muestras que dieron positivo
al antígeno prostático específico (PSA)
y a la fosfatasa ácida prostática (FAP),
sin embargo no se observaron
espermatozoides.
 Una intensa reacción de positividad
de las pruebas PSA ó FAP no
garantiza encontrar espermatozoides
en una muestra.
 Para la detección de fluidos seminales
el reactivo FAP resultó ser más
efectivo en hisopados vaginales, y el
PSA más efectivo en prendas
guardadas o en mal estado de
conservación.
7. RECOMENDACIONES.
Para complementar este estudio se
deben realizar pruebas genéticas
amplificando STR del cromosoma Y,
especialmente en las muestras que
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dieron PSA O FAP positiva en las que no 3%ADfico#cite_note-harrison1-1.

se observaron espermatozoides, y de esa 6. Wikipedia Cd. «Análisis del antígeno
manera determinar la sensibilidad y prostático específico (PSA)». Instituto
especificidad ambas pruebas. Nacional del Cáncer (National Cancer
En caso de convicción de un delito sexual Institute, NCI).. [Online]. [cited 2017
donde hayan pasado más de 48 horas y junio 23. Available from:
se quiera se requiera determinar la https://es.wikipedia.org/wiki/Ant%C3%
presencia de fluidos seminales, y de esta ADgeno_prost%C3%A1tico_espec%C
manera imputar al sospechoso, se debe 3%ADfico#cite_note-2.
combinar la búsqueda con FAP, PSA,
7. Quispe Mayta SE, Tarifa Espinoza S,
microscopia y pruebas de ADN.
Solíz Pacheco R, Sierra Gareca A.
.
Investigación forense del fluido
Agradecimientos
seminal en víctimas de violencia
 A la Jefatura del Instituto de Medicina
sexual, por el Laboratorio de Biología
Legal del Ministerio Público del Perú
Forense. BIOFARBO. 2010; 18(91).
 A las Gerencias de: Criminalística,
operaciones, Administración y de la 8. Hochmeister M, Rudin O, orer U,
calidad, del Instituto de Medicina Kratzer A, Gehrig C, Dirnhofer R.
Legal del Perú Evaluation of Prostate-specific Antigen
 A la Escuela del Ministerio Público (PSA) Membrane Tests for the
del Perú Forensic Identification of semen.
Progress in Forensic Genetics 7.
 A la Sub Gerencia de Laboratorios de
1998;: p. 95-96.
Toxicología Químico Legal del
Instituto de Medicina Legal del Perú.
Información adicional : tineodh@gmail.com
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específico. [Online]. [cited 2017 junio
23. Available from:
https://es.wikipedia.org/wiki/Ant%C3%
ADgeno_prost%C3%A1tico_espec%C