PRUEBAS DE ESTERILIDAD

MSc. Evelyn Sánchez Sandoval

evelyn.sanchez@uwiener.edu.pe

Farmacia y Bioquímica
Control Microbiológico de los Medicamentos
Sesión teórica N° 13
 TEMARIO
1. Introducción
2. Generalidades
3. Fabricación de preparaciones estériles
4. Personal
5. Instalaciones
6. Equipos
7. Limpieza e higienización
8. Proceso
9. Esterilización
10.Vigilancia ambiental microbiológica
11.Control De Calidad – Pruebas microbiológicas
12.Validación

2
LOGRO DE LA SESIÓN

Al finalizar esta sesión el estudiante comprende

los conceptos de esterilidad, pruebas de productos
estériles, pruebas de aptitud del medio (promoción
de crecimiento), métodos principales de
esterilización, y conoce y aplica la prueba de
validación.
REFLEXIÓN DESDE LA EXPERIENCIA

¿Sabes cómo
funciona una
empresa que ofrece
servicios de
esterilización?

https://www.youtube.com/watch?v=1LddxVif4Mw
1. Introducción

• Para la fabricación de productos estériles es necesario cumplir con requisitos especiales, con
vistas a minimizar los riesgos de contaminación microbiológica, partículas y por endotoxinas,
lo que depende en gran medida de la habilidad, conocimientos, entrenamiento y actitud del
personal involucrado.

• La seguridad en la esterilidad u otro parámetro de calidad no será establecida sobre ningún

proceso terminal o prueba al producto terminado.

• Las BPL para la fabricación de productos estériles, constituye un complemento a la

Regulación No. 16-2000 “Directrices sobre Buenas Prácticas de Fabricación de Productos
Farmacéuticos” y es de estricto cumplimiento para efectuar la fabricación de productos
estériles (Cuba, 2000).
1. Introducción

▪ Esterilidad: Ausencia de microorganismos vivos

▪ Esterilización: Destrucción y/o remoción de toda forma de vida por medio

de agentes físicos o químicos.
1. Introducción

▪ Producto estéril: Producto que requiere esterilidad,

la cual es diseñada y garantizada a través de la
validación.

▪ El mismo puede obtenerse a partir de un

procesamiento aséptico o mediante un proceso con
esterilización en el envase final.

▪ Esta calidad corresponde tanto a ingredientes

activos farmacéuticos como para producto
terminado.
Se aprueban las normas de correcta
elaboración y control de calidad de
fórmulas magistrales y preparados
oficinales
 Formas farmacéuticas estériles:
Mezclas intravenosas, citostáticos, nutrición parenteral
✓ La administración de medicamentos por vía intravenosa conlleva con frecuencia una manipulación previa que incluye
su disolución o adición a una solución intravenosa, así como su acondicionamiento en el contenedor o envase más
apropiado.

✓ Se debe garantizar no sólo las condiciones idóneas desde la preparación hasta la administración, sino el
mantenimiento de las condiciones de estabilidad, compatibilidad y esterilidad

✓ Ejemplo: Manipulación de citostáticos

❖ Los citotóxicos poseen potencial carcinogénico, mutagénico y/o teratogénico. El contacto directo con ellos puede
producir irritación de la piel, de los ojos o mucosas, ulceración y necrosis de los tejidos.
❖ Durante la manipulación deben mantenerse una serie de condiciones para minimizar el riesgo de exposición del
personal involucrado (generación de aerosoles, vertidos y contaminaciones).
❖ Dadas las características de estos medicamentos deben existir manuales de procedimiento específicos para la
preparación y manipulación de los mismos y el personal debe conocer estos manuales y realizar todas las operaciones
de acuerdo con las especificaciones en él reflejadas según sus funciones y nivel de responsabilidad..
2. Generalidades – Farmacopea Argentina 2013, 7ma Ed.

▪ La producción de preparaciones estériles debe llevarse a cabo en áreas limpias; el ingreso

a las cuales debe efectuarse a través de cierres de aire herméticos, tanto para el personal
como para los materiales. Las áreas limpias deben mantenerse de conformidad con
normas apropiadas de limpieza, y se debe suministrar a las mismas solamente aire que ha
pasado por filtros de comprobada eficiencia.

▪ Las diversas operaciones de preparación de componentes (tales como recipientes y

cierres), preparación de productos, llenado y esterilización deben llevarse a cabo en
zonas separadas dentro del área limpia.

▪ Las áreas limpias destinadas a la fabricación de preparaciones estériles se clasifican, según

las características del aire, en grados A, B, C y D.
CLASIFICACIÓN DE PARTÍCULAS EN EL AIRE PARA LAS ÁREAS LIMPIAS UTILIZADAS EN LA
FABRICACIÓN DE PRODUCTOS ESTÉRILES

Farmacopea Argentina 2013, 7ma Ed.

2. Generalidades – Farmacopea Argentina 2013, 7ma Ed.

▪ Para alcanzar los grados de aire B, C y D, el número de cambios de aire debe ser
generalmente mayor de 20 por hora en una habitación con un buen patrón de corriente
de aire y filtros de aire de alta eficacia (HEPA).

▪ Los valores bajos para los contaminantes son confiables solamente cuando se recoge un
elevado número de muestras de aire.

▪ La orientación dada con respecto al número máximo de partículas permitido corresponde

a la Norma Federal de los Estados Unidos 209E (1992) como sigue: Clase 100 (grados A y
B), Clase 10.000 (grado C) y Clase 100.000 (grado D).
 3. Fabricación de preparaciones estériles

▪ Las operaciones de producción se dividen en tres categorías:

❖1ra: La preparación se sella en su envase final y se somete a

una esterilización terminal

❖2da: La preparación se esteriliza por filtración

❖3ra: La preparación no puede esterilizarse ni por filtración ni

en forma terminal y, por consiguiente, debe producirse con
materias primas estériles y en una forma aséptica.
 3. Fabricación de preparaciones estériles

3.1. Productos esterilizados en forma terminal

▪ Las soluciones pueden prepararse en un ambiente grado D, con el

objeto de obtener recuentos microbianos y de partículas bajos,
aptos para filtración y esterilización inmediatas.

▪ Para preparaciones parenterales, el llenado debe efectuarse en

una estación de trabajo de corriente de aire laminar (grado A), en
un ambiente de grado D, antes de la esterilización terminal.

▪ Para productos estériles no parenterales como ungüentos, cremas,

suspensiones y emulsiones, el llenado de los recipientes puede
hacerse en un ambiente de grado C antes de la esterilización
terminal.
 3. Fabricación de preparaciones estériles

3.2. Productos esterilizados por filtración

▪ La manipulación de las materias primas y la

preparación de soluciones deben efectuarse en un
ambiente de grado C. Estas operaciones pueden
efectuarse en un ambiente grado D, siempre que se
hayan adoptado medidas adicionales para reducir al
mínimo la contaminación, como por ejemplo el uso
de sistemas cerrados antes de la filtración.

▪ Luego de la filtración estéril, el producto debe

manipularse y cargarse en recipientes bajo
condiciones estériles en un área de grado A o B, con
ambiente de grado B o C, respectivamente.
VIDEO: Esterilización por filtración

https://www.youtube.com/watch?v=ggpzNduZz_4
3. Fabricación de preparaciones estériles

3.3. Otros productos estériles preparados con materias primas en forma aséptica

▪ La manipulación de materias primas y

todo proceso posterior debe
efectuarse en un área de grado A o B y
en ambientes de grado B o C,
respectivamente.

Central de mezclas para

medicamentos oncológicos
4. Personal
• Sólo el número mínimo necesario de personal debe estar
presente en las áreas limpias; esto es especialmente
importante durante los procesos asépticos. De ser posible,
las inspecciones y los controles deben efectuarse desde
afuera de las áreas respectivas.

• Todos los empleados (incluyendo el personal de limpieza y

mantenimiento) que trabajan en dichas áreas deben
someterse regularmente a programas de capacitación en
disciplinas relacionadas con la correcta fabricación de
productos estériles, incluyendo la higiene y conocimientos
básicos de microbiología.

• En caso de que sea necesario el ingreso a las áreas de

personas que no hayan recibido dicha capacitación (por
ejemplo, personal de mantenimiento contratado), deben ser
supervisadas cuidadosamente.
 4. Personal

• Deben mantenerse elevados niveles de higiene y limpieza

personal y los empleados involucrados en la Fabricación de
preparaciones estériles deben ser instruidos para que
informen cualquier situación que pueda causar la liberación
de cantidades o tipos anormales de contaminantes; es
conveniente que se efectúen exámenes periódicos para
determinar si existen dichas condiciones.

• El tipo de ropas y la calidad de las mismas dependen del tipo

de proceso de fabricación y del lugar de trabajo y las ropas
deben vestirse de tal forma que los productos estén
protegidos de la contaminación.

• En salas de grado B es posible que sea necesario utilizar ropas

descartables.
 4. Personal
El tipo de ropa y la calidad de las áreas limpias estará de acuerdo con el tipo de proceso de producción y clasificación
del área de trabajo:

Clase D: El cabello, y cuando corresponda la barba y/o bigote se cubrirán. Se usarán ropas de protección y calzados o
cubre calzados adecuados. Se adoptarán medidas apropiadas a fin de evitar la contaminación proveniente del exterior
de las áreas limpias. Esta ropa se proveerá limpia e higienizada.

Clase C: El cabello, y cuando corresponda la barba y/o bigote se cubrirán. Se usarán trajes de una o dos piezas,
cerrados en las muñecas y con cuello alto, y calzados o cubre calzados adecuados. Esta ropa no liberará virtualmente
fibra o partícula alguna. La misma se proveerá limpia e higienizada.

Clase A/B: El cabello, y cuando corresponda la barba y/o bigote, quedarán cubiertos por un tocado que se introducirá
en el cuello del traje; se utilizará una máscara facial para evitar que la cara desprenda gotas de sudor. Se usarán
guantes, adecuadamente esterilizados de caucho u otro material plástico que no estén recubiertos de talco y calzado
esterilizado o desinfectado. La parte inferior de los pantalones se introducirá dentro del calzado y las mangas dentro de
los guantes. La ropa protectora no liberará partícula alguna y retendrá las emitidas por el cuerpo. La misma se proveerá
limpia y esterilizada.
 5. Instalaciones

➢ Todas las instalaciones deben diseñarse de tal forma que

se evite el ingreso innecesario de personal de
supervisión o control. El diseño de las áreas de grado B
debe permitir que todas las operaciones puedan ser
observadas desde el exterior.

➢ En las áreas limpias, todas las superficies expuestas

deben ser lisas, impermeables y sin grietas, para reducir
al mínimo el desprendimiento o la acumulación de
partículas o microorganismos y permitir la aplicación
constante de sustancias limpiadoras y desinfectantes,
donde sea apropiado.

➢ Las esclusas de aire no deben abrirse simultáneamente.

Se debe contar con un sistema de cierre interbloqueado
y con un sistema de alarma visual y/o auditivo para
prevenir la apertura de más de una puerta a la vez.
 6. Equipos

➢ Debe demostrarse que los patrones de corriente de aire no

presenten riesgo de contaminación. Se debe asegurar que
las corrientes de aire no distribuyan partículas,
provenientes de personas, máquinas u operaciones, hacia
un área de mayor riesgo para los productos.

➢ Para el procesado de productos estériles deben escogerse

equipos que puedan ser eficientemente esterilizados por
medio de vapor, calor seco u otros métodos.

➢ Todos los equipos (esterilizadores, sistemas de filtración de

aire y sistema de tratamiento de agua, destiladores) deben
ser sometidos a un plan de mantenimiento y validación;
debe registrarse la autorización de uso otorgada después
del mantenimiento de los mismos.
 7. Limpieza e higienización
✓ Las áreas limpias se deben limpiar en forma completa, frecuentemente,
y de conformidad con un plan escrito aprobado por el departamento de
control de calidad. En caso de que se empleen desinfectantes, debe
usarse más de un tipo, cambiándolos periódicamente.

✓ Los sanitizantes y detergentes que se utilicen, deben someterse a

control en cuanto a su contaminación microbiana; las diluciones se
deben mantener en recipientes limpios e identificados conservándose
durante un periodo definido.

✓ La fumigación de las áreas limpias puede ser útil para reducir la

contaminación microbiológica en los lugares inaccesibles.

✓ Durante las operaciones, las áreas limpias deben controlarse a

intervalos preestablecidos, mediante el recuento microbiano del aire y
de las superficies
 8. Proceso

▪ Durante todo el proceso de producción deben tomarse

precauciones para minimizar la contaminación, incluidas
las fases previas a la esterilización.

▪ Las actividades efectuadas en las áreas limpias deben

reducirse al mínimo, especialmente cuando se están
efectuando operaciones asépticas, y el movimiento de
personal debe ser controlado y metódico, para evitar la
liberación excesiva de partículas y microorganismos.

▪ Debe reducirse al mínimo la presencia de envases y

materiales que puedan desprender fibras en áreas
limpias y evitarse completamente cuando se está
efectuando un proceso aséptico.
 8. Proceso

▪ No deben fabricarse preparaciones que contengan

microorganismos vivos en áreas usadas para el
procesamiento de otros productos farmacéuticos.

▪ Todas las soluciones, especialmente las destinadas a

parenterales de gran volumen, deben pasar a través de un
filtro de esterilización inmediatamente antes del proceso de
llenado.

▪ Toda contaminación debe ser investigada. Los llenados con

medios estériles deben repetirse a intervalos regulares y
siempre que tenga que efectuarse una validación como
resultado de alguna alteración significativa en la
producción, instalaciones, equipos u operaciones de
procesado.
9. Esterilización

▪ El método de esterilización adoptado se conformará de acuerdo a lo establecido en el Registro del

medicamento y se prestará una atención especial cuando el método empleado no sea especificado
en la farmacopea

▪ Antes de que se adopte un proceso de esterilización, se demostrará su idoneidad para el producto

y su eficacia para lograr las condiciones deseadas de esterilización en todas las partes de cualquier
tipo de carga que se someta a dicho proceso

▪ La validez del proceso se verificará a intervalos periódicos, al menos anualmente o siempre que se
hayan introducido modificaciones importantes en el equipamiento. Se mantendrán los registros de
los resultados.

▪ Para lograr una esterilización efectiva, todo el material se someterá al tratamiento necesario y el
proceso se diseñará para garantizar que se alcance este objetivo.
9. Esterilización

Resolución Ministerial N° 1472-2002-SA-DM

Aprueban el Manual de Desinfección y

Esterilización Hospitalaria el 13 de
setiembre del 2002
 9. Esterilización
9.1. Esterilización térmica

▪ La temperatura debe registrarse mediante una sonda

colocada en el punto más frío de la carga o de la
cámara cargada, habiéndose determinado este punto
durante la validación

▪ Cada ciclo de esterilización térmica debe ser

registrado mediante equipos apropiados, y con la
debida precisión, como por ejemplo, en una tabla de
tiempo/temperatura

▪ Luego de la etapa de alta temperatura de un ciclo de

esterilización térmica, se deben tomar precauciones
para evitar que una carga esterilizada se contamine
durante el enfriamiento.
 9. Esterilización
9.2. Esterilización con calor húmedo

▪ El proceso se controlará mediante los parámetros temperatura y presión AUTOCLAVE

(altas temperaturas y alta presión generada por el vapor de agua)

▪ Los productos a ser esterilizados, se envolverán en un material que permita

la eliminación del aire y la penetración del vapor, pero que impida a su vez
la recontaminación después de la esterilización, todas las partes de la
cámara estarán en contacto con el agua o vapor saturado a la temperatura
requerida y por el tiempo requerido.

▪ Requiere menos tiempo

▪ Para este método de esterilización terminal empleado fundamentalmente

para soluciones acuosas las condiciones de operación serán al menos 121°C
por 15 minutos.
 VIDEO
Autoclaves: Esterilización con calor húmedo

https://www.youtube.com/watch?v=wnmUGQM7_x8
 9. Esterilización
9.3. Esterilización con calor seco (Despirogenación)

▪ El aire circulará dentro de la cámara manteniéndose una

HORNOS
presión positiva, para impedir la entrada de aire no estéril.
El aire suministrado ha de ser pasado por un filtro que
retenga microorganismos.

▪ Requiere más tiempo y elevadas temperaturas

▪ Si el proceso tiene también por objeto la eliminación de

pirógenos, como parte de la comprobación han de
efectuarse pruebas de impugnación empleando
endotoxinas. La despirogenización de los materiales se
realizará al menos 220° C por 30 minutos (reducción de 3
log de endotoxinas resistentes al calor).

▪ Para este método de esterilización terminal las condiciones

de operación serán al menos 180° C por 2 horas
 VIDEO:
Adecuado procedimiento para preparación
de un paquete para ser esterilizado por
calor seco

https://www.youtube.com/watch?v=6_Ma7E46jyg
 9. Esterilización
9.4. Esterilización por radiación

▪ Se permitirá la esterilización por radiación principalmente

para materiales y productos sensibles al calor.

▪ Debido a que muchos productos farmacéuticos y materiales

de envase son sensibles a la radiación se demostrará
satisfactoriamente que la cantidad o dosis de radiación
ionizante absorbida no tenga efectos perjudiciales para el
producto terminado y por ende para la salud humana

▪ La dosis total de radiación se administrará dentro de un lapso

preestablecido

▪ No se aceptará la radiación ultravioleta como método de

esterilización terminal.
 9. Esterilización
9.5. Esterilización por óxido de etileno
▪ A temperatura ambiental, el óxido de etileno (C2H4O) es un gas incoloro,
inflamable y de olor dulce

▪ El poder del óxido de etileno para dañar el ADN lo convierte en un eficaz

agente para esterilización, pero esa capacidad da cuenta de su actividad como
causante de cáncer.

▪ Debido a su gran toxicidad y el ser explosivo en algunas proporciones con el

aire se establecerán requisitos de seguridad para la manipulación del oxido de
etileno. La concentración máxima que se permitirá por escape a la atmósfera
será entre 10 y 25 ppm.

▪ Este método sólo podrá utilizarse cuando ningún otro método sea viable.

▪ Durante la validación del proceso se demostrará que no se produce ninguna

alteración del producto y que las condiciones y el tiempo asignado a la
desgasificación son suficientes para reducir el gas residual y los productos de
reacción hasta límites aceptables definidos para el tipo de producto o material
 10. Vigilancia ambiental microbiológica

✓ Se realizará la vigilancia ambiental de las áreas limpias durante la producción de acuerdo con la
clasificación y al tipo de operación que se efectúe.

✓ Cuando se realicen operaciones asépticas y el producto esté expuesto al ambiente la vigilancia del
ambiente inmediato se realizará durante la operación que tenga lugar y las superficies críticas una vez
terminada la operación.

✓ Se tendrá en cuenta el muestreo del aire, superficies y el personal, se aceptarán para el muestreo los
métodos volumétricos y por placa expuesta para el aire e hisopado y placa de contacto para el muestreo de
superficies.

✓ Se realizará el muestreo de las superficies y el personal después de las operaciones críticas. También se
establecerá una vigilancia microbiológica adicional para las operaciones que no pertenecen a la producción,
por ejemplo, después de un proceso de limpieza e higienización o una actividad de validación.
 10. Vigilancia ambiental microbiológica

✓ Los resultados de la vigilancia microbiológica serán considerados como información relevante durante la
evaluación de la documentación del lote para liberar el producto.

✓ Se establecerán límites de alerta y acción para efectuar la vigilancia microbiológica de las áreas limpias en
condiciones de operación sobre la base de los estudios de validación y los resultados históricos de la
vigilancia ambiental microbiológica.

✓ Si no se cuenta con condiciones para el establecimiento de los límites mediante un estudio de validación se
adoptarán los siguientes:
 11. Control De Calidad – Pruebas microbiológicas
En la prueba de esterilidad deben incluirse no sólo muestras
representativas de todo el lote, sino también muestras
tomadas de las partes del lote consideradas como más
expuestas al riesgo de contaminación, como por ejemplo: Para productos inyectables y soluciones de infusión de
gran volumen :
a. en el caso de productos que han sido llenados
asépticamente, entre las muestras se deben incluir las - Se considerará el control del agua y de los productos
provenientes de envases llenados al inicio y al final del intermedios y final para verificar si no contienen
lote endotoxinas, empleando un método bien establecido
de la farmacopea que haya sido comprobado para
b. si se trata de productos que han sido esterilizados en cada tipo de producto.
sus envases finales, deben obtenerse muestras de la
parte que potencialmente sea la más fría de la carga. - Cuando una muestra no pasa la prueba, se
investigarán las causas y se adoptarán las medidas
La prueba de esterilidad a la que se somete el producto correctivas necesarias.
final será considerada sólo como la última de una serie de
medidas de control mediante las cuáles se asegura la
esterilidad.
11. Control De Calidad – Pruebas microbiológicas
11. Control De Calidad – Pruebas microbiológicas
11. Control De Calidad – Pruebas microbiológicas
12. Validación
¿Preguntas?
¿qué aprendimos hoy?
 Pruebas de esterilidad
✓ Fabricación de preparaciones estériles
✓ Personal
✓ Instalaciones
✓ Equipos
✓ Limpieza e higienización
✓ Proceso
✓ Esterilización
✓ Vigilancia ambiental microbiológica
✓ Control De Calidad – Pruebas microbiológicas
✓ Validación
APLIQUEMOS lo
aprendido
 ACTIVIDAD VIRTUAL
❖ Luego de terminar esta sesión, continúa afianzando tus
conocimientos en la plataforma virtual.

• Elaborar un resumen científico del artículo:

“FORMAS FARMACEÚTICAS ESTÉRILES: MEZCLAS

INTRAVENOSAS, CITOSTÁTICOS, NUTRICIÓN PARENTERAL”

• El resumen científico no debe superar las 500 palabras y

debe incluir:
✓ Título novedoso, dado por el grupo
✓ 5 palabras clave
✓ Introducción
✓ Materiales y métodos
✓ Resultados y discusión de resultados
✓ Conclusiones

• El trabajo es GRUPAL