EFECTO DEL TIEMPO DE COSECHA SOBRE LA PRODUCCIÓN

DE COLORANTES EN Indigofera suffruticosa MILL.

EFFECT OF HARVEST TIME ON DYE PRODUCTION IN Indigofera suffruticosa MILL.

Fabiola Sandoval-Salas1, Anne Gschaedler-Mathis1, Gerard Vilarem2 y Carlos Méndez-Carreto3

1
Laboratorio de Biotransformación Microbiana. Centro de Investigación y Asistencia en Tecnología
y Diseño del Estado de Jalisco A. C. (CIATEJ AC). Avenida Normalista 800 Colinas de la Normal
44270, Guadalajara, Jalisco, México. (fsandoval@ciatej.net.mx) 2Laboratoire de Chimie
Agroindustrielle UMR-1010-INRA/INP-ENSIACET 118, Route de Narbone-31077 Toulouse Cedex
04, France. 3Laboratorio de Patología y Biotecnología Ambiental. CIATEJ AC.

RESUMEN
El desconocimiento de los factores que afectan la producción y la
extracción de índigo en cultivos de añil (Indigofera suffruticosa
Mill) ha limitado su explotación comercial. El objetivo de este
trabajo fue caracterizar el crecimiento vegetal y la producción
de colorante azul en esta especie y determinar el tiempo de cose-
cha que permita obtener los mejores rendimientos. Para ello se
establecieron cultivos de añil en el Estado de Veracruz, México,
y se evaluó su desarrollo en talla y peso, y la producción de
colorante azul en polvo y de índigo por HPTLC-densitometría.
Los cultivos de añil crecieron exponencialmente a partir de 45 d
después de la siembra (dds). Al principio se observó desarrollo
en altura y posteriormente desarrollo foliar. Las concentracio-
nes más altas de colorante azul en la hoja de añil se presentaron
entre 136 a 170 dds (p≤ ≤0.05). La acumulación de índigo en las
hojas se mantuvo cercana a 1g 100 g−1 en base seca desde 118
hasta 164 dds. En las condiciones de la región de estudio se
estableció que los rendimientos por hectárea más altos de colo-
rante azul en polvo e índigo se obtienen a los 150 dds.
Palabras clave: Añil, crecimiento, HPTLC-densitometría, índigo.
INTRODUCCIÓN
ABSTRACT
Ignorance of the factors that affect production and extraction of
indigo from añil (Indigofera suffruticosa Mill.) has limited its
commercial exploitation. The objective of this study was to
characterize the vegetative growth and production of blue dye in
this species and determine the harvest time that would produce
the highest yields. Añil crops were established in the state of
Veracruz, México, and their growth in size and weight were
evaluated, and powdered blue colorant and indigo production
were assessed by HPTLC-densitometry. The añil crops grew
exponentially as of 45 d after sowing (das). Initially, growth in
height was observed and later foliage developed. The highest
concentrations of dye in the añil leaf were found between 136
and 170 dds (p≤ ≤0.05). Accumulation of indigo in the leaves
remained close to 1 g 100 g−1 dry base from 118 up to 164 das. In
the conditions of the study region, it was established that the
highest yields per hectare of blue dye powder and indigo are
obtained 150 das.
Key words: Añil, growth, HPTLC-densitometry, indigo.
INTRODUCTION

B
lue indigo dye has great economic importance

E
l colorante azul índigo tiene gran importancia
económica y se usa como colorante textil dese
el 2000 a. C. (Clark et al., 1993; Murdock,
1994; Oberthür et al., 2004). Stoker et al. (1998) se-
ñalaron que el mercado mundial del índigo en 1998
equivalía a 4176 millones de dólares, de los cuales
Europa demandaba 10%. Los mismos autores reporta-
ron que 5% de los usuarios prefería índigo natural, un
mercado potencial de 21 millones de dólares que au-
mentará al triple para el 2008. Este colorante se pro-
duce a partir de las especies vegetales de los géneros
Isatis (Cruciferae), Polygonum (Polygonaceae) e
Indigofera (Leguminosae; Maier et al., 1990). En la
Europa medieval se formó un gran industria basada en
Recibido: Mayo, 2005. Aprobado: Julio, 2006.
Publicado como ARTÍCULO en Agrociencia 40: 585-591. 2006.
and it has been used as a dye in textiles
since 2000 B.C. (Clark et al., 1993; Murdock,
1994; Oberthür et al., 2004). Stoker et al. (1998)
comment that the world indigo market in 1998 was
equivalent to 4176 million dollars; Europe demanded
10%. The same authors reported that 5% of the users
preferred natural indigo, a market potential of 21 million
dollars, which will triple by 2008. This dye is produced
from the plant species of the genera Isatis (Cruciferae),
Polygonum (Polygonaceae) and Indigofera
(Luguminosae; Maier et al., 1990). In medieval Europe,
a large industry based on Isatis tinctoria was formed,
declining in the early XVII century because of the
importation of the dye obtained from the Indigofera
tinctoria species cultivated in the American colonies.
This dye was known by the name “añil” and had higher
yield and better quality (Kokubun et al., 1998).

585
AGROCIENCIA, SEPTIEMBRE-OCTUBRE 2006
Isatis tinctoria, la que declinó a principios del siglo XVII
por las importaciones del colorante obtenido de la espe-
cie Indigofera tinctoria, cultivada en las colonias ameri-
canas. Este colorante se conocía como añil y tenía ma-
yor rendimiento y mejor calidad (Kokubun et al., 1998).
El colorante natural se comercializó hasta que en
1883 Adolfo Von Baeyer determinó la estructua quí-
mica del índigo (Clark et al., 1993; Oberthür et al.,
2004). Después se desarrolló el primer proceso co-
mercial de producción de índigo sintético con tolueno,
desplazando casi totalmente la producción de índigo
natural (Xia y Zenk, 1992; Clark et al., 1993).
Ahora ha resurgido el interés por los colorantes
naturales para aplicaciones alimenticias, cosmetológicas
y textiles, debido a que se consideran más saludables y
sus procesos de producción dañan menos al ambiente.
El proceso químico comercial de manufactura de índi-
go genera cantidades significativas de productos tóxi-
cos de desecho, por ejemplo cianuro de sodio (Murdock,
1994). Los extractos de la especie Indigofera suffruticosa
Mill no presentan actividad genotóxica en ratones
albinos (Betancourt et al., 1998). Según Ariizumi
(2004), los textiles teñidos con índigo tienen actividad
bactericida, la cual fue mayor (43% de inhibición)
cuando se utilizó índigo natural extraído de plantas
respecto al índigo sintético (26% de inhibición).
Hay poca información sobre los factores que influ-
yen en la producción de índigo usando plantas (Bechtold
et al., 2002). La producción del colorante está restrin-
gida a pequeñas regiones rurales donde la mayoría de
las operaciones de cultivo y de procesamiento son
artesanales, con operaciones muy laboriosas y en pe-
riodos muy largos. Además se conoce poco acerca de
los factores físicos, fisiológicos y bioquímicos que in-
fluyen en la producción del colorante. Todo esto re-
percute en bajos rendimientos en campo y durante el
procesamiento, lo cual causa bajas ganancias para los
productores. Asimismo, las variaciones en concentra-
ción final de índigo y en la calidad del colorante difi-
cultan su comercialización.
Por tanto, el objetivo de este trabajo fue caracteri-
zar el crecimiento y la producción de colorante azul en
plantas de añil durante un ciclo de cultivo, así como
establecer el efecto de la edad de la cosecha sobre los
rendimientos de biomasa, la cantidad de colorante ob-
tenido y la pureza del producto con base en concentra-
ción de índigo presente en los extractos.
MATERIALES Y MÉTODOS
Establecimiento de cultivos
Las semillas de la especia Indigofera suffruticosa Mill se reco-
lectaron durante el invierno del 2002 en la cabecera municipal del
586 VOLUMEN 40, NÚMERO 5
The natural dye was commercialized until 1883,
when Adolfo Von Baeyer determined the chemical
structure of indigo (Clark et al., 1993; Oberthür et al.,
2004). Later, the first commercial process of synthetic
indigo production was developed with toluene, almost
entirely replacing the production of natural indigo (Xia
and Zenk, 1992; Clark et al., 1993).
Today, interest in natural dyes has been revived for
application in food, cosmetics and textiles since they
are considered healthier and their production processes
are less harmful for the environment. The chemical
commercial manufacturing process of indigo generates
significant quantities of toxic waste products, such as
sodium cyanide (Murdock, 1994). Extracts from
Indigofera sufruticosa Mill do not have genotoxic
activity in white mice (Betancourt et al., 1998).
According to Ariizumi (2004), textiles dyed with indigo
have bactericidal activity, which was greater (43%
inhibition) with natural indigo extracted from plants
than with synthetic indigo (26% inhibition).
There is little information on the factors that affect
the production of indigo from plants (Bechtold et al.,
2002). Dye production is limited to small rural regions
where most of the cultivation and processing operations
are cottage industries, which are labor- and time-
consuming. Moreover, little is know about physical,
physiological and bio-chemical factors that affect the
production of the dye. All of this has repercussions in
the low production in the field and during processing,
causing low incomes for the producers. Also, the
variations in the final concentration of indigo and in
the quality of the dye make commercialization difficult.
Thus, the objectives of this study were to characterize
growth and production of blue dye in añil plants during
one growing cycle and establish the effect of age at
harvest on biomass yields, quantity of colorant obtained
and purity of the product based on the concentration of
indigo present in the extracts.
MATERIALS AND METHODS
Establishment of the crops
Seeds of the species Indigofera suffruticosa Mill were collected
during the winter of 2002 in the municipal seat of La Huerta, Jalisco,
México, located at 19° 29’ N and 104° 39’ W. Seeds were dried in
the sun and the husk was removed with a mortar. The study was
conducted from May to November 2004 in crops established in a
plot with a sandy-clay structure soil, located in the Municipality of
Naolinco, Veracruz, located at 19° 25’ N and 96° 45’ W, at an
altitude of approximately 800 m, with average annual temperature
of 22.2 °C and total yearly precipitation of 980 mm.
The plot was plowed twice, rows formed and irrigated once.
Approximately 10 seeds were deposited in the middle of the row at
 EFECTO DEL TIEMPO DE COSECHA SOBRE LA PRODUCCIÓN DE COLORANTES EN Indigofera suffruticosa MILL.
municipio de La Huerta, Jalisco, México, ubicado a 19° 29’ N y
104° 39’ O. Las semillas se secaron al sol y se eliminó la cascarilla
con un mortero. El estudio se hizo de mayo a noviembre del 2004 en
cultivos establecidos en una parcela con suelo de estructura arcillo-
arenosa, ubicada en el Municipio de Naolinco, Veracruz, situada a
19° 25’ N y 96° 45’ O, a aproximadamente 800 m, con temperatura
promedio anual de 22.2 °C y precipitación total anual de 980 mm.
En el terreno se hicieron dos barbechos, un surcado y un riego.
En la parte media del surco se depositaron aproximadamente 10
semillas a una profundidad de 1 a 2 cm y distancia entre plantas de
25 cm (50 000 plantas ha−1). El cultivo estuvo en temporal y los
deshierbes fueron manuales. Durante el ciclo de cultivo se monitoreó
la temperatura, la humedad relativa y se obtuvieron los registros de
precipitación de la estación meteorológica 00030007 localizada en
Almolonga Naolinco, Veracruz (19° 35’ N, 96° 48’ O; a 710 m).
Muestreos
Para evaluar el crecimiento y la producción de índigo se reali-
zaron muestreos semanales. En cada muestreo se seleccionaron 10
plantas en forma aleatoria y se midió su altura (cm); en las plántulas
de 45 d se midió la longitud de raíz. Las hojas de estas plantas se
cosecharon y se transportaron inmediatamente al laboratorio en bol-
sas de polietileno, marcadas con la fecha y el número de muestra.
En el laboratorio las muestras se secaron en estufa a 70 °C por 24 h
y se determinó su peso seco. Se usaron tres muestras aleatorias
(50 g) de hojas frescas en la extracción. En cada muestra se deter-
minó el contenido de humedad por peso seco y los resultados se
calcularon en base seca.
Extracción del colorante azul en polvo
Muestras (20-50 g) de hojas frescas enteras se colocaron en
matraces Erlenmeyer (1L) y se adicionó agua en proporción 1:5 P/V;
las muestras se extrajeron por maceración a 25 °C por 12 h. El
extracto se separó de las hojas por decantación y se burbujeo con aire
durante 15 min para favorecer la oxidación de los precusores del
color. Los extractos oxidados se mantuvieron a 4 °C por 24 h hasta
observar la precipitación de partículas en los matraces. Después de
decantar el sobrenadante la suspensión concentrada se centrifugó a
3000 rpm. Los sólidos se secaron en estufa a 70 °C por 24 h y se
pesaron para deteminar el rendimiento de colorante azul en polvo.
Determinación de índigo
La concentración de índigo en los extractos de colorante azul en
polvo se determinó por cromatografía en capa fina de alta resolu-
ción-densitometría (HPTLC-densitometría) según Sandoval-Salas
(2005). Se utilizaron placas de sílica gel de HPTLC de vidrio 60
F264 de 10×10 cm (MERCK, VWR Internacional, Francia). El sol-
vente usado para el desarrollo de las placas fue una mezcla de tolueno
y acetato de etilo en proporción 3:2 (Fluka-Seelze, Alemania). Las
muestras de colorante se molieron en un mortero, se pesaron 10 mg
y se disolvieron en 20 mL de N, N-dimetilformamida (Fluka-Seelze,
a depth of 1 to 2 cm at a distance of 25 cm between plants (50 000
plants ha−1). Cultivation was under rainfed conditions and weeding
was done manually. During the crop cycle temperature and relative
humidity were monitored, and records of precipitation were obtained
from the meteorological station 00030007 located in Almolonga
Naolinco, Veracruz (19° 35’ N, 96° 48’ W; 710 m above sea level).
Sampling
To evaluate the growth and production of indigo, weekly samples
were taken. In each sampling, 10 plants were selected at random
and measured for height (cm). In 45 d-old seedlings, root length was
determined. The leaves of these plants were harvested and immediately
transported to the laboratory in polyethylene bags marked with the
date and sample number. In the laboratory, the samples were dried
in an oven at 70 °C for 24 h and their dry weight was determined.
Three random samples (50 g) of fresh leaves were taken for extraction.
In each sample, moisture content by dry weight was determined and
the results were calculated on dry base.
Extraction of blue dye powder
Samples (20-50 g) of complete fresh leaves were placed in 1-L
Erlenmeyer flasks and water was added in a 1:5 W/V proportion.
Samples were extracted by maceration at 25 °C for 12 h. The extract
was separated from the leaves by decanting, and oxygenated with air
bubbles for 15 min to favor oxidation of the color precursors. The
oxygenated extracts were kept at 4 °C for 24 h until precipitation of
particles was observed in the flasks. After decanting the supernatant,
the concentrated suspension was centrifuged at 3000 rpm. The solids
were dried in an oven at 70 °C for 24 h and weighed to determine
yield of blue dye powder.
Determination of indigo
Concentration of indigo in the blue dye powder was determined
by high performance thin layer chromatography-densitometry
(HPTLC-densitometry), following Sandoval-Salas (2005). Glass 60
F264 10×10 cm plates of HPTLC silica gel (MERCK, VWR
International, France) were used. The solvent used for developing
the plates was a 3:2 mixture of toluene and ethyl acetate (Fluka-
Seelze, Germany). The dye samples were ground with a mortar, and
10 mg were weighed and dissolved in 20 mL of N, N-
dimetylformamide (Fluka-Seelze, Germany). The solutions were
sonicated for 1 min and filtered with Watman No. 1 filter paper. On
each plate were placed two 10 µL samples of dye and 4 samples of
indigo standard (SIGMA-Aldrich, France) dissolved in N, N-
dimetylformamide at concentrations of 0.04, 0.08, 0.12, and 0.16 g
L−1, for a total of six spots (5 mm long and 1 mm wide) at distances
of 1.5 cm between spots. Samples were applied on the plates with an
automatic doser (DESAGA AS 30, Heidelberg, Germany). Before
initiating plate development, the spots were dried completely with a
dryer and the chamber was saturated with the mobile phase. The
development of the plates was completed when the front of the solvent
SANDOVAL-SALAS et al. 587
AGROCIENCIA, SEPTIEMBRE-OCTUBRE 2006
Alemania). Las soluciones se trataron con ultrasonido durante 1 min
y se filtraron con papel filtro Watman No. 1. En cada placa se
aplicaron dos muestras de 10 µL de colorante y 4 muestras de estándar
de índigo (SIFMA-Aldrich, Francia) disuelto en N, N,
dimetilformamida a concentraciones de 0.04, 0.08, 0.12 y 0.16 g L−1,
para un total de seis manchas (5 mm longitud y 1 mm anchura) a
distancias de 1.5 cm entre cada mancha. Las muestras en las placas
se aplicaron con un dosificador automático (DESAGA AS 30,
Heidelberg, Alemania). Antes de iniciar el desarrollo de las placas,
las manchas se secaron completamente con una secadora y la cáma-
ra se saturó con la fase móvil. El desarrollo de las placas se comple-
tó cuando el frente del solvente alcanzó 8 cm de altura (aproximada-
mente 10 min). Las placas se sacaron de la cámara cromatográfica y
se secaron. La densidad de las bandas de color azul correspondien-
tes al índigo se determinó a 610 nm en un densitómetro CD60
DESAGA (Heidelberg, Alemania). El programa del equipo generó
un cromatograma para cada banda, el cual posteriormente se inte-
gró. El área bajo la curva se interpoló automáticamente en la curva
de calibración correspondiente a los estándares, para obtener la con-
centración de índigo (mg L−1). Durante toda la determinación las
muestras se protegieron de la luz para evitar su descomposición.
Análisis estadístico de resultados
Para determinar las diferencias entre los rendimientos de colo-
rante azul en polvo e índigo a diferentes tiempos de cultivo se reali-
zó un análisis de varianza y una comparación de medias con la
prueba de Tukey (Steel y Torrie, 1993), utilizando el programa JMP
(Statistics Made Visual, Versión 3. 1999. SAS Institute Inc).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
La germinación de las semillas de añil se inició una
semana después de la siembra; durante los primeros 45 d
de cultivo se observaron únicamente plántulas con
cotiledones y eventualmente algunos brotes de hojas.
La altura promedio de las plantas a los 45 d fue 3.65 cm.
El crecimiento radicular durante esta etapa fue mayor
que el crecimiento de la zona aérea de la planta (aproxi-
madamente 20 cm). Después hubo una fase de creci-
miento acelerado de las plantas (Figura 1). Los datos
de altura entre los días 45 a 136 mostraron una tenden-
cia de crecimiento exponencial donde Y=1.965e0.0271X.
Esta ecuación puede expresarse como:
Ln Y=0.027 X+Ln 1.196
que corresponde a la forma: Y=mx+b
donde m=pendiente=0.027; X=tiempo (d); Y=cre-
cimiento en altura (cm).
La etapa exponencial de crecimiento en biomasa
(peso seco), fue entre 45 y 150 d después de la siembra
588 VOLUMEN 40, NÚMERO 5
reached 8 cm in height (approximately 10 min). The plates were
removed from the chromatographic chamber and dried. Density of
the blue bands corresponding to indigo was determined at 610 nm in
a densitometer CD60 DESAGA (Heidelberg, Germany). The
equipment program generated a chromatogram for each band, which
was later integrated. The area under the curve was interpolated
automatically into the calibration curve corresponding to the standards
to obtain the indigo concentration (mg L−1). During the entire process
of determination, the samples were protected from light to prevent
their disintegration.
Statistical analysis of results
To determine the differences among yields of blue dye powder
and indigo at different harvest times, an analysis of variance and the
Tukey comparison of means (Steel and Torrie, 1993) were performed
using JMP software (Statistics Made Visual, Version 3, 1999, SAS
Institute Inc.).
RESULTS AND DISCUSSION
Añil seeds initiated germination one week after
sowing. During the first 45 d of growth, only seedlings
with cotyledons were observed and occasionally some
leaf buds. The average height of the plants at 45 d was
3.65 cm. Root growth during this stage was greater
than growth of the aerial part of the plant (approximately
20 cm). Afterwards, there was a period of accelerated
growth of the plants (Figure 1). The data on height
between day 45 and day 136 showed an exponential
growth trend where Y= 1.965e0.0271X. This equation
can be expressed as
Ln Y=0.0271 X + Ln 1.1965
which corresponds to the form: Y=mx+b
where m=slope=0.0271; X=time (d); Y=growth in
height (cm).
The exponential stage of biomass growth (dry
weight) occurred between 45 and 150 days after sowing
(das). The values of the slope in both cases correspond
to rate of growth in this stage (Table 1).
After 100 das, growth in height and leaf weight
stopped for a period (Figure 1); this coincided with a
reduction in rainfall in the study region (Figure 2);
after this period the values normalized. This event did
not affect the exponential trend in growth.
During the first 130 d, when the plant reached 60%
of its final height, it grew mainly vertically, and
ramification and foliage development were incipient
(Figure 1). After this, there was greater horizontal
development; this was reflected in the harvested
 EFECTO DEL TIEMPO DE COSECHA SOBRE LA PRODUCCIÓN DE COLORANTES EN Indigofera suffruticosa MILL.

(dds). Los valores de la pendiente en ambos casos co- 80 40

Altura
rresponden a la tasa de crecimiento en esta etapa (Cua- Peso Fase
dro 1). exponencial

Crecimiento en altura (cm)

Después de 100 d de cultivo se detuvo el creci- 60 30

Peso seco de hojas (g)

Inicio de la
miento en altura y peso seco de las hojas (Figura 1), floración
período que coincidió con una reducción en la precipi- Y=1.965e
0.0271x

tación en la región de estudio (Figura 2); después los 40 R2 =0.98 20

Germinación
valores se regularizaron. Este evento no afectó la ten-
dencia exponencial del crecimiento.

Brotes
Durante los primeros 130 d la planta creció princi- 20 10
palmente en forma vertical y alcanzó 60% de su altura Y=0.106e
0.0326x

final; pero las ramificaciones y el desarrollo foliar fue- 2

R =0.97
ron incipientes (Figura 1). Después hubo un mayor 0 0
0 50 100 150 200
desarrollo horizontal, que se reflejó en la biomasa co- Tiempo (d)
sechada que se duplicó en sólo 20 d. El desarrollo en
altura disminuyó al inicio de la floración. Figura 1. Crecimiento en altura y acumulación de biomasa de-
terminada como peso seco de hojas de plantas de añil
Para tener material suficiente para los análisis de
durante el ciclo de cultivo. Medias±DE, para n=10.
colorante azul en polvo, las primeras determinaciones Figure 1. Growth in height and accumulation of biomass
de producción de colorante en plantas de añil se hicie- determined as dry weight of leaves of añil plants during
ron después que las plantas alcanzaron una producción the crop cycle. Means±DE, for n=10.
de biomasa superior a 10 g planta−1, 118 dds (Figura
1). Se observó un aumento en el contenido del colo- biomass, which duplicated in only 20 d. Development
rante azul en las hojas a los 136 dds (Figura 3). Apa- in height diminished at initiation of flowering.
rentemente, los rendimientos más altos se presentan To have sufficient material for the analysis of blue
entre los días 136 a 150 (3.4 g colorante azul 100 g−1 colorant powder, the first determinations of dye
hoja seca). El contenido de colorante en las hojas se production in añil plant were performed after the plants
mantuvo constante hasta 170 dds (p≤0.05) abarcando reached a biomass production above 10 g plant−1, 118 das
una parte de la etapa de crecimiento y parte de la etapa (Figure 1). An increase in blue colorant content in the
estacionaria. Después disminuyó hasta 2% al final de leaves was observed as of 136 das (Figure 3).
los muestreos. Apparently, the highest yields occurred between days
La pureza del colorante alcanzó su máximo unos 136 and 150 (3.4 g blue dye 100 g−1 dry leaves). The
días antes de la floración (43%) y disminuyó paulati- colorant content in the leaves remained constant until
namente hasta 17% al final del ciclo de cultivo (Cua- 170 das (p≤0.05), including part of the growth stage
dro 2). La pureza del colorante disminuyó 6% cuando and part of the stationary stage. Afterwards, it
el cultivo dejó de crecer. diminished to 2% at the end of the sampling.
La concentración máxima de índigo en las hojas Dye purity reached maximum a few days before
(media=1.12 g 100 g−1 hoja seca), coincidió con el flowering (43%) and diminished gradually to 17% at
inicio de la floración, se mantuvo mientras continuó the end of the crop cycle (Table 2). Dye purity decreased
crecimiento y disminuyó durante la fase estacionaria 6% when the crop stopped growing.
(Figuras 1 y 3). Estos resultados concuerdan con los The maximum concentration of indigo in leaves
de Gilbert y Cooke (2001), en relación a que los (mean=1.12 g 100 g−1 dry leaves) coincided with the
metabolitos secundarios del tipo indole se producen en
la mayoría de las plantas durante el crecimiento.
Cuadro 1. Velocidades de crecimiento de añil en campo.
Es importante la información de la dependencia del Table 1. Growth rates of añil in the field.
tiempo de cultivo de las plantas productoras de índigo
como base para optimizar la cosecha, el almacena- Etapa de
Altura (cm) Peso de hojas (g)
miento del material vegetal y la extracción y forma- cultivo
Velocidad de Velocidad de
ción de precursores de índigo (Bechtold et al., 2002). Días crecimiento Días crecimiento
Los productores creen que hay una relación entre la (d−1) (d−1)
secreción de un líquido blanquecino al cortar los bro-
tes y el momento adecuado para la cosecha, porque la Inicial 0-45 ND 0-45 ND
Exponencial 45-136 0.027 45-150 0.033
concentración de colorante es más alta en ese momen- Estacionaria 136-185 0.007 150-178 0.007
to. Sin embargo, los resultados del presente trabajo
mostraron la presencia de colorante desde etapas ND: Valores no determinados.

SANDOVAL-SALAS et al. 589

 AGROCIENCIA, SEPTIEMBRE-OCTUBRE 2006

250 30 5 2.5
Crecimiento exponencial Fase estacionaria
25
Precipitación mensual (mm)

CAP (g 100 g−1 hoja seca)

Indigo (g 100 g−1 hoja seca)

200 4 Floración 2.0

Temperatura (°C)
20 R2 =0.94
150 3 1.5
15
100 2 1.0
10 2
R =0.93

50 1 0.5
5
Colorante
Indigo
0 0 0 0.0
0 50 100 150 200 0 120 140 160 180
Tiempo (d) Tiempo (d)

Figura 2. Condiciones climáticas durante el ciclo de cultivo de Figura 3. Concentración de colorante azul en polvo (CAP) y de
añil. índigo en hojas de añil durante el ciclo de cultivo.
Figure 2. Climate conditions during the añil crop cycle. Medias±DE, para n=3.
Figure 3. Concentration of blue colorant powder (CAP) and
indigo in añil leaves during the crop cycle. Means±DE,
for n=3.
tempranas del desarrollo y en ninguna cosecha se detec-
tó la secreción blanca mencionada por los productores.
Con base en los resultados y considerando la densi- beginning of flowering and remained constant while
dad de siembra de los cultivos, se calculó la produc- growing continued, decreasing during the stationary
ción de colorante y de índigo por hectárea durante el phase (Figures 1 and 3). These results coincide with
ciclo de cultivo para el periodo y las condiciones de la those of Gilbert and Cooke (2001), relative to the fact
región de estudio (Figura 4). Los rendimientos máxi- that indole-type secondary metabolites are produced in
mos de colorante azul en polvo se alcanzaron aproxi- most plants during growth.
madamente 150 dds (Figura 4), al inicio de la fase Information on time-dependence is important in the
estacionaria de crecimiento (octubre) y se mantuvieron cultivation of indigo-producing plants as the basis for
aproximadamente un mes. Los rendimientos de índigo optimizing harvest, storage of plant material and
también alcanzaron su máximo en este periodo pero se extraction and formation of indigo precursors (Bechtold
mantuvieron por menos tiempo. Esto indica que aun- et al., 2002). Growers believe that there is a relationship
que a partir de 164 dds se siguen extrayendo cantida- between the white liquid secreted when shoots are cut
des similares de colorante azul en polvo, las concen- and the suitable moment for harvesting because the
traciones de índigo son menores. concentration of colorant is higher at that time.
However, the results of this study showed the presence
CONCLUSIONES of colorant from the early stages of development and
the white secretion mentioned by the growers was not
Para el periodo y las condiciones de la región de detected in any of the harvests.
estudio la concentración máxima de colorante azul en
polvo en las hojas de añil se obtuvo al final del creci- Cuadro 2. Pureza del colorante durante el ciclo de añil.
Table 2. Colorant purity during the añil crop cycle.
miento. La pureza del colorante azul osciló entre 17 y
43% durante el ciclo de crecimiento, siendo mayor 7 d Pureza del colorante
antes de la floración. La acumulación de este metabolito Fase Tiempo (d) (g índigo 100 g−1
en las hojas de la planta está ligada al crecimiento. Los colorante)
rendimientos máximos por hectárea de colorante azul Crecimiento 118 33.10 ± 2.0
y de índigo se obtuvieron a los 150 dds. 122 41.87 ± 1.4
129 43.40 ± 2.3
AGRADECIMIENTOS 135 34.33 ± 2.2
150 34.84 ± 2.8
Estacionaria 164 28.97 ± 2.7
Esta investigación se realizó con el apoyo de CONACYT Méxi- 170 28.59 ± 0.7
co dentro del Programa de Cooperación al Postgrado México-Fran- 178 17.31 ± 0.1
cia (PCP). 180 17.66 ± 0.1

590 VOLUMEN 40, NÚMERO 5

 EFECTO DEL TIEMPO DE COSECHA SOBRE LA PRODUCCIÓN DE COLORANTES EN Indigofera suffruticosa MILL.

LITERATURA CITADA 40 14
Crecimiento exponencial Fase estacionaria
35 12
Ariizumi, C. 2004. Efecto benéfico en la salud a través del uso de
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Colorante azul (kg ha−1)

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Indigo (kg ha−1)

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Floración
25 8
20 6
15 4
Colorante
10 Indigo 2
5 0
120 140 160 180
Tiempo (d)
Figura 4. Rendimiento por hectárea de CAP y de índigo en plantas
de añil durante las etapas de crecimiento. Medias, n=3.
Figure 4. CAP and indigo yields per hectare of añil plants during
the stages of growth. Means, n=3.
Based on these results and considering sowing
density for the crops, production of colorant and indigo
per hectare during the crop cycle was calculated for
the period and conditions of the study region (Figure
4). The maximum yields of blue colorant powder were
reached approximately 150 das (Figure 4), at the
beginning of the stationary growth phase (October) and
remained constant for approximately one month. Yields
of indigo also reached maximum in this period, but
remained constant for less time. This indicates that,
although as of 164 das similar quantities of blue colorant
powder continue to be extracted, concentrations of
indigo are lower.
CONCLUSIONS
For the period and conditions of the study region,
the maximum concentration of blue colorant powder
in añil leaves was obtained at the end of the growth
period. Purity of blue colorant oscillated between 17
and 43% during the growing cycle, the highest found
7 d before flowering. The accumulation of this
metabolite in the plant leaves is linked to growth. The
maximum yields per hectare of blue colorant and indigo
were obtained at 150 das.

SANDOVAL-SALAS et al. 591