DiaSorin S.p.A.

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Tel. +39.0161.4871

Modificaciones: -
Supresiones: §4;

LIAISON ® Cardiolipin IgG ([REF] 310370)

1. FINALIDAD DEL ENSAYO

El ensayo LIAISON ® Cardiolipin IgG emplea la tecnología de la quimioluminiscencia (CLIA) en un ensayo inmunológico para
la determinación semi-cuantitativa in vitro de los autoanticuerpos de clase IgG dirigidos contra la cardiolipina en muestras
de suero o de plasma humano.
El ensayo debe realizarse en el instrumento LIAISON ® Analyzer.

2. SUMARIO Y EXPLICACIÓN DEL TEST

Los anticuerpos antifosfolípidos (APL) son un grupo de inmunoglobulinas amplio y heterogéneo, cuya presencia define el
síndrome antifosfolípido (APS) en pacientes con trombosis arteriales y venosas y con complicaciones obstétricas.
Este síndrome fue descrito por primera vez en 1983 por Graham Hughes como síndrome anticardiolipina. Luego el término
fue sustituido al verse claro que también anticuerpos antifosfolípidos diferentes de la cardiolipina se asociaban a las
manifestaciones clínicas del síndrome antifosfolípido.
El síndrome antifosfolípido se define primario cuando no se asocian otras enfermedades subyacentes. Se define secundario
cuando se asocia a otras enfermedades autoinmunes, sobre todo el lupus eritematoso sistémico (LES). El síndrome de
oclusión vascular múltiple por todo el organismo se presenta en una minoría de pacientes con anticuerpos anti-cardiolipina
y se define como síndrome antifosfolípido catastrófico.
El ensayo anti-cardiolipina puede ser positivo en varias patologías, incluidas las enfermedades del tejido conectivo y las
enfermedades infecciosas. La práctica clínica sugiere que la presencia múltiple y persistente de anticuerpos antifosfolípidos
se asocia a un proceso clínico más grave. Sin embargo, según los criterios de clasificación que definen el síndrome
antifosfolípido, los anticuerpos anti-cardiolipina tienen significado clínico sólo cuando se asocian a trombosis o a aborto
espontáneo recurrente. En el (1) se suministran informaciones clínicas detalladas.

3. PRINCIPIO DEL ENSAYO

El método para la determinación semi-cuantitativa de los autoanticuerpos de clase IgG anti-cardiolipina es un ensayo
inmunológico indirecto basado en el principio de la quimioluminiscencia (CLIA).
Un complejo entre cardiolipina altamente purificada y β 2-glicoproteína I se emplea para recubrir las partículas magnéticas
(fase sólida) y un anticuerpo monoclonal de ratón anti-IgG humana está enlazado a un derivado del isoluminol (conjugado
anticuerpo-isoluminol). La presencia de β 2 -glicoproteína I como cofactor es indispensable porque los anticuerpos anti-
cardiolipina se dirigen sobre todo contra un complejo entre β 2-glicoproteína I y cardiolipina más que contra la cardiolipina
sola.
Durante la primera incubación, los anticuerpos anti-cardiolipina presentes en los calibradores, en las muestras o en los
controles enlazan la cardiolipina en fase sólida. Durante la segunda incubación, el anticuerpo conjugado reacciona con los
anticuerpos IgG anti-cardiolipina ya enlazados a la fase sólida. Después de cada incubación, se elimina el material no
enlazado mediante un ciclo de lavado.
A continuación, se añaden los reactivos starter que inducen una reacción de quimioluminiscencia. La señal luminosa, y por
lo tanto la cantidad de conjugado anticuerpo-isoluminol, se mide con un fotomultiplicador en unidades relativas de luz
(RLU, relative light units) y es directamente proporcional a la concentración de IgG anti-cardiolipina presente en los
calibradores, en las muestras o en los controles.

4. MATERIALES SUMINISTRADOS

Integral de reactivos
Partículas magnéticas [SORB] Partículas magnéticas recubiertas con cardiolipina altamente purificada y β2-glicoproteína I
(1,3 mL) humana, albúmina sérica bovina, tampón MES, conservantes.
Calibrador 1 [CAL|1] Suero / plasma desfibrinado humano que contiene niveles bajos de IgG anti-cardiolipina,
(4,0 mL) albúmina sérica bovina, tampón fosfato, 0,2% ProClin ® 300 y un colorante amarillo
inactivo. Las concentraciones de los calibradores (GPL U/mL) son calibradas contra una
preparación interna de anticuerpos (2).
Calibrador 2 [CAL|2] Suero / plasma desfibrinado humano que contiene niveles altos de IgG anti-cardiolipina,
(4,0 mL) albúmina sérica bovina, tampón fosfato, 0,2% ProClin ® 300 y un colorante azul inactivo.
La s c o nc e n t ra c i on e s d e l o s c al i br a d or e s ( G PL U / m L) s on c al i br a d a s c o n tr a u n a
preparación interna de anticuerpos (2).
Diluyente de muestras [DIL|SPE] Albúmina sérica bovina, tampón fosfato, 0,2% ProClin ® 300 y un colorante amarillo
(2 x 28 mL) inactivo.
Conjugado [CONJ] Anticuerpos monoclonales de ratón anti-IgG humana conjugados con un derivado del
(13,5 mL) isoluminol, albúmina sérica bovina, tampón fosfato, 0,2% ProClin ® 300, conservantes.
Número de ensayos 50
Todos los reactivos se suministran listos para su uso. El orden de los reactivos refleja el orden con el que se han ensamblado
los contenedores en el integral de reactivos.

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Materiales requeridos, pero no suministrados
LIAISON ® Module ([REF] 319130).
LIAISON ® Starter Kit ([REF] 319102).
LIAISON ® Light Check 12 ([REF] 319150).
LIAISON ® Wash/System Liquid ([REF] 319100).
LIAISON ® Waste Bags ([REF] 450003).
Otros materiales requeridos
Controles LIAISON ® Cardiolipin IgG (negativo y positivo)
([REF] 310371).
LIAISON ® Cleaning Kit ([REF] 310990).

5. ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES
Sólo para uso diagnóstico in vitro.
Todos los materiales utilizados para la fabricación de los componentes de este kit se han analizado y se han encontrado no
reactivos para la presencia de HBsAg, anti-HCV, anti-HIV-1 y anti-HIV-2. Sin embargo, visto que ningún método de análisis
puede asegurar que los agentes patógenos estén ausentes, todo el material de origen humano se deberá considerar
potencialmente infeccioso y manipularlo como tal.

6. NORMAS DE SEGURIDAD
No coma, beba, fume ni se maquille en el laboratorio donde se realiza el ensayo.
No utilice la pipeta con la boca.
Evite el contacto con material potencialmente infectado mediante el uso de vestuario de laboratorio, protectores oculares y
guantes desechables. Lávese cuidadosamente las manos al terminar el ensayo.
Evite las salpicaduras y la formación de aerosoles. Las gotas de reactivo biológico deben eliminarse con una solución de
hipoclorito sódico que contenga un 0,5% de cloro activo, y los materiales empleados deben tratarse igual que los desechos
infectados.
Todas las muestras y los reactivos que contienen materiales biológicos usados en el ensayo deben considerarse posibles
transmisores de agentes infecciosos. Los residuos deben manipularse con cuidado y eliminarse de conformidad con el
protocolo del laboratorio y las disposiciones legales vigentes en cada país. El material que se vaya a reutilizar tendrá que
esterilizarse correctamente de acuerdo con las normas y leyes locales. Compruebe la eficacia del ciclo de esterilización/
descontaminación.
No utilice ningún kit o componente después de la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.
De acuerdo con el Reglamento CE 1272/2008 (CLP), los reactivos peligrosos se han clasificado y etiquetado como sigue:

REACTIVOS: [SORB], [CAL|1], [CAL|2], [CONJ], [DIL|SPE]

CLASIFICACIÓN: Skin sens. 1 H317
PALABRA DE ADVERTENCIA: Advertencia
SÍMBOLOS/PICTOGRAMAS:

GHS07 Signo de exclamación

INDICACIONES DE PELIGRO: H317 Puede provocar una reacción alérgica en la piel.
INDICACIONES DE P261 Evitar respirar el polvo/el humo/el gas/la niebla/ los vapores/el aerosol.
PRECAUCIÓN: P280 Llevar guantes/prendas/gafas/máscara de protección.
P363 Lavar las prendas contaminadas antes de volver a usarlas.

CONTIENE:
(solamente sustancias prescritas
con arreglo al Artículo 18 del
Reglamento CE 1272/2008)
Masa de reacción: 5-cloro-2-metil-4-isotiazolin-3-ona [CE N.º 247-500-7] y
2-metil-2H-isotiazol-3-ona [CE N.º 220-239-6] (en proporción 3:1)
(ProClin® 300)

Para obtener más información, consulte las fichas de datos de seguridad que se encuentran disponibles en el sitio
www.diasorin.com.

7. PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS

INTEGRAL DE REACTIVOS
Antes de quitar la protección de los contenedores, es esencial agitar horizontalmente el integral de reactivos con delicadeza
y sumo cuidado. Evite la formación de espuma. Elimine la protección de los contenedores y gire hacia adelante y hacia atrás
la ruedecilla dentada situada por debajo del contenedor de las partículas magnéticas hasta que la suspensión adopte una
coloración morena. Este procedimiento da inicio a la resuspensión de las partículas magnéticas. Seque con sumo cuidado la
superficie de cada pared para eliminar el líquido residual. Coloque el integral de reactivos en el área de los reactivos del
instrumento con la etiqueta de los códigos de barras situada a la izquierda y déjelo agitar durante 30 minutos antes del uso.
Durante este tiempo las partículas magnéticas serán mantenidas en agitación automáticamente para garantizar una
resuspensión completa. Hágase referencia al manual operativo del instrumento para cargar las muestras e iniciar el ensayo.
CONTROLES
Hágase referencia a las instrucciones del juego de controles LIAISON ® Cardiolipin IgG para preparar y manipular los
controles.

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8. CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD DEL INTEGRAL DE REACTIVOS
– Sellado: Estable a 2-8°C hasta la fecha de caducidad.
– Abierto en el instrumento o a 2-8°C: Estabilidad mínima cuatro semanas.
Después de este intervalo de tiempo, se puede seguir usando el integral de reactivos, siempre que los controles
permanezcan dentro de los límites esperados.
– Use siempre el mismo instrumento LIAISON ® Analyzer para un integral de reactivos ya abierto.
– Use las gradillas suministradas con el instrumento LIAISON ® Analyzer para la conservación del integral de reactivos en
posición vertical.
– No congele.
– Mantenga el integral de reactivos en posición vertical durante la conservación para facilitar la resuspensión de las
partículas magnéticas.
– Mantenga protegido de la luz directa.

9. RECOGIDA Y PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS

El ensayo se puede efectuar en muestras de suero o plasma humano. Se pueden utilizar anticoagulantes como el EDTA y
la heparina.
Recoja la sangre extraída por punción en vena en tubos de ensayo sin aditivos y déjela coagular según los procedimientos
establecidos por el laboratorio, asegurándose de que la muestra se mantenga íntegra. Separe el suero del coágulo lo antes
posible. La presencia de hemólisis puede indicar una manipulación incorrecta de las muestras durante la recogida o la
preparación de las mismas. Si el ensayo se lleva a cabo en las 48 horas siguientes a la recogida, las muestras se pueden
conservar a 2-8°C. En caso contrario, se deben subdividir en alícuotas congeladas a –20°C o a temperaturas inferiores.
Trece muestras se han sometido a cinco ciclos de congelación y descongelación. Los resultados no han presentado
diferencias significativas.
Atención: Las muestras conservadas a 2-8°C durante más de 48 horas pueden presentar resultados superiores
(+ 10% de la dosis) a los de las muestras correspondientes conservadas correctamente.
Se recomienda analizar las muestras inmediatamente después de haberlas colocado en el instrumento.
Un estudio de seis muestras negativas mantenidas en el instrumento ha mostrado los siguientes aumentos de la dosis:
Después de cuatro días en el instrumento (a temperatura ambiente) el valor medio aumentó de 3,0 a 5,2 GPL U/mL
(+ 21% de la señal; + 71% de la dosis; el valor máximo aumentó de 3,9 a 8,2 GPL U/mL).
Después de siete días en el instrumento (a temperatura ambiente) el valor medio aumentó de 3,0 a 9,8 GPL U/mL
(+ 104% de la señal; + 208% de la dosis; el valor máximo aumentó de 3,9 a 18,0 GPL U/mL).
Antes de realizar el ensayo descongele con precaución, agite las muestras descongeladas y elimine las burbujas de aire
que pudiera haber.
No use muestras fuertemente hemolizadas o lipémicas, ni muestras que presenten material suspendido o evidente
contaminación microbiana. No use muestras tratadas mediante calentamiento.
No use muestras coaguladas.
El volumen mínimo de muestra necesario para una determinación es 160 μL (10 μL de muestra + 150 μL de volumen muerto).

10. CALIBRACIÓN
El ensayo de los calibradores contenidos en el integral de reactivos permite ajustar la curva predefinida memorizada por el
fabricante (curva patrón) en el instrumento como se indica en los códigos de barras que aparecen en la etiqueta del integral
de reactivos.
El instrumento se debe calibrar en triplicado cada vez que se verifique una de las siguientes condiciones:
– Se usa un nuevo lote de reactivos starter.
– La calibración anterior fue realizada más de dos semanas antes.
– Se usa un nuevo lote de integral de reactivos.
– El instrumento ha sufrido una intervención de asistencia técnica.
– Los valores de los controles están fuera de los rangos esperados.

11. PROCEDIMIENTO OPERATIVO

Para obtener resultados correctos, es preciso respetar estrictamente las instrucciones proporcionadas en el manual del
analizador. Cada parámetro de la prueba se identifica mediante el código de barras incluido en la etiqueta del integral de
reactivos. Si el instrumento no puede leer el código de barras, el integral no debe utilizarse. No deseche el integral de
reactivos; póngase en contacto con el servicio técnico local de DiaSorin para solicitar instrucciones.
El instrumento realiza las operaciones siguientes:

20 μL Partículas magnéticas recubiertas.

Diluyente de muestras (hasta un volumen final de 450 μL).
+ 240 μL Calibradores, controles o
+ 10 μL muestras.
10,5 minutos Incubación seguida por un ciclo de lavado.
+ 210 μL Conjugado.
10,5 minutos Incubación seguida por un ciclo de lavado.
3 segundos Medición.

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12. CONTROL DE CALIDAD
El control de calidad se debe realizar analizando los controles LIAISON ® Cardiolipin IgG (a) por lo menos una vez por cada
día de trabajo, (b) cuando se usa un nuevo integral de reactivos, (c) cuando se calibra el kit, (d) cuando se usa un nuevo lote
de reactivos starter, (e) cuando se determina la adecuación de las prestaciones del integral de reactivos abierto con más de
cuatro semanas de anterioridad, o según las disposiciones legislativas y las reglamentaciones vigentes en cada país.
Atención: Los controles LIAISON ® se deben analizar individualmente para evaluar las prestaciones del test. Los valores de
los controles tienen que estar comprendidos entre los rangos esperados: cada vez que uno o ambos valores estén fuera de
los rangos esperados habrá que volver a efectuar la calibración y probar de nuevo los controles. Si los valores
experimentales de los controles estén de nuevo fuera de los rangos predefinidos después de la calibración, habrá que
repetir el test usando un frasco de control no abierto. Si los valores de los controles estén fuera de los rangos esperados,
los resultados de las muestras no deben ser notificados.
Las prestaciones de otros controles se deben evaluar para asegurar su compatibilidad con este test antes del uso. Por lo
tanto es indispensable establecer los intervalos de los valores de los materiales usados para el control de calidad.

13. INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

El instrumento calcula automáticamente las concentraciones de IgG anti-cardiolipina de las muestras expresadas en unidades
(GPL U/mL) y clasifica los resultados. Hágase referencia al manual operativo del instrumento para una información más
detallada.
Intervalo de medición. 2-280 GPL U/mL de IgG anti-cardiolipina.
La indicación de los resultados sigue un método semi-cuantitativo sugerido en la literatura (2). El valor límite que permite
diferenciar mejor entre pacientes con o sin síndrome antifosfolípido ha sido definido en el Onceavo Congreso Internacional
sobre los Anticuerpos Antifosfolípidos realizado en Sydney en el año 2006 (1). La concentración que corresponde mejor al
riesgo de manifestaciones clínicas es considerada 40 GPL U/mL, dado que muchas patologías causan resultados positivos
bajos.
Los resultados de las muestras deben ser interpretados como sigue:
Las muestras con concentraciones de IgG anti-cardiolipina por debajo de 20,0 GPL U/mL se deben clasificar negativas.
Las muestras con concentraciones de IgG anti-cardiolipina entre 20,0 y 39,9 GPL U/mL se deben clasificar positivas bajas.
Las muestras con concentraciones de IgG anti-cardiolipina entre 40,0 y 79,9 GPL U/mL se deben clasificar positivas
moderadas.
Las muestras con concentraciones de IgG anti-cardiolipina iguales o por encima de 80,0 GPL U/mL se deben clasificar
positivas altas.
Un resultado negativo indica generalmente que los anticuerpos IgG anti-cardiolipina no están presentes en la circulación del
paciente.
En pacientes con lupus eritematoso sistémico y otras enfermedades autoinmunes, no asociadas a trombosis ni a aborto
espontáneo, se pueden observar bajas concentraciones de IgG anti-cardiolipina. Estudios retrospectivos demuestran que
concentraciones variables entre moderadas y altas de anticuerpos IgG anti-cardiolipina se correlacionan más estrechamente
con las manifestaciones clínicas del síndrome antifosfolípido (3).
Atención: Los resultados obtenidos con el ensayo LIAISON ® Cardiolipin IgG no deben utilizarse de forma intercambiable con
los valores obtenidos con ensayos de otros fabricantes.

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14. ESTANDARDIZACIÓN CONTRA EL ESTÁNDAR DE SAPPORO IgG HCAL
Después del Onceavo Congreso Internacional sobre los Anticuerpos Antifosfolípidos (1), el estándar de Sapporo (HCAL) se
recomienda como estándar internacional para el control de calidad de los anticuerpos IgG anti-cardiolipina. El estándar de
Sapporo, constituido por IgG monoclonal quimérica de ratón producida por una línea celular proliferante, está disponible en
el comercio y el valor de la concentración suministrada aparece indicado en la etiqueta del frasco, expresado en μg/mL.
El estudio siguiente ha sido realizado para comparar las concentraciones de LIAISON ® en GPL U/mL con las del estándar de
Sapporo en μg/mL. El estándar HCAL ha sido tratado como una muestra y diluido mediante diluciones en serie de 1:2 a 1:256.
Los replicados de la muestra no diluida y de cada dilución han sido analizados con diferentes lotes de integral de reactivos.
Los resultados que siguen se suministran sólo para brindar más información sobre las prestaciones del ensayo y deben
considerarse exclusivamente indicativos. Ésta no es una tabla de conversión entre los valores expresados en GPL U/mL y los
valores del estándar de Sapporo expresados en μg/mL.
Estándar de Estándar de Unidades relativas
GPL U/mL Dilución
Sapporo, μg/mL Sapporo, μg/mL de luz medias (RLU)
5 0,014 no diluido 20,40 769.894
10 0,027 1:2 10,20 491.466
15 0,040 1:4 5,10 299.140
20 0,055 1:8 2,55 162.250
30 0,106 1:16 1,28 81.781
40 0,171 1:32 0,64 42.004
60 0,441 1:64 0,32 21.366
80 0,642 1:128 0,16 10.963
100 0,809 1:256 0,08 5.702
150 1,422
200 2,106
280 3,111

15. LIMITACIONES DEL ENSAYO

– Los reactivos del kit deben usarse sólo en el sistema LIAISON ®.
– Los componentes individuales del integral de reactivos no deben ser separados del integral.
– El kit no debe usarse después de la fecha de caducidad que figura en la etiqueta externa.
– Para obtener resultados fiables es necesario atenerse estrictamente a las instrucciones de uso y poseer una adecuada
técnica manual.
– La contaminación bacteriana de las muestras o la inactivación mediante calentamiento pueden modificar los resultados
del análisis.
– En caso de recogida y conservación inadecuadas de las muestras se pueden verificar resultados incongruentes.
– El diagnóstico del síndrome antifosfolípido no debe realizarse sólo teniendo en cuenta la presencia de los
autoanticuerpos anti-cardiolipina. En efecto, también pueden observarse resultados positivos bajos en pacientes con
lupus eritematoso sistémico y con enfermedades autoinmunes, así como también en pacientes con otras patologías,
no asociadas a trombosis o a aborto espontáneo. El ensayo para anticoagulantes del lupus o la detección de anticuerpos
anti-β 2-glicoproteína I son otros criterios fiables de laboratorio. Además, los resultados de laboratorio siempre deben ser
evaluados con otras pruebas clínicas, procedimientos diagnósticos y con la opinión del médico.
– La presencia del síndrome antifosfolípido es incierta si un resultado positivo para antifosfolípidos es seguido por
manifestaciones clínicas después de menos de doce semanas o más de cinco años (1).
– La presencia secundaria y transitoria de anticuerpos antifosfolípidos, no rara en la práctica clínica, puede ser causa de
clasificación errónea de los resultados. Resultados positivos persistentes en los test de laboratorio son esenciales:
en caso de resultado positivo para IgG anti-cardiolipina, es necesario recoger y analizar una segunda muestra después
de un intervalo de tiempo adecuado.
– Los pacientes con infección de sífilis en curso o seropositivos pueden presentar niveles altos de IgG anti-cardiolipina.
Se recomienda realizar procedimientos de confirmación para excluir la presencia de una infección sifilítica.

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16. VALORES ESPERADOS

16.1. Población negativa

Se han analizado 120 muestras de donantes no seleccionados con LIAISON ® Cardiolipin IgG. Los resultados han demostrado
el 99° percentil a 10,4 GPL U/mL y el resultado más elevado a 16,6 GPL U/mL (véase el gráfico más abajo). Estos resultados
se refieren a los grupos de pacientes tomados en consideración; no se trata de indicaciones garantizadas, sino de datos
indicativos. Cada laboratorio debe establecer sus propios intervalos de referencia para la población tomada en consideración
según los procedimientos establecidos, las técnicas, los instrumentos y los controles utilizados.
60%

50%
48%
% de donantes de sangre

40%
%blood donors

30%

22%
20% 18%

10%
7%
3%
2% 1%
0%
<2 2-3 3-4 4-5 5-6 6-12 12-15 15-20
GPL
GPL U/mL
U/mL

16.2. Población clínica

Estudio 1. Primero la sensibilidad diagnóstica ha sido evaluada analizando 35 muestras recogidas en pacientes con
síndrome antifosfolípido primaria y 35 muestras recogidas en pacientes con síndrome antifosfolípido secundaria y lupus
eritematoso sistémico. Las muestras han sido analizadas con el kit LIAISON ® Cardiolipin IgG en paralelo con un método
ELISA para IgG anti-ACA disponible en el comercio.
En la población estudiada con síndrome antifosfolípido se observaron cuatro resultados negativos y 66 resultados positivos
con el kit LIAISON ® Cardiolipin IgG. En contraste, en la misma población se observaron ocho resultados negativos, tres
resultados dudosos y 59 resultados positivos con un método ELISA para IgG anti-ACA disponible en el comercio.
La sensibilidad diagnóstica fue de 94,3% (intervalo de confianza al 95%: 86,0-98,4%).
Número de Método ELISA Número de
LIAISON ® Cardiolipin IgG 95% CI 95% CI
sujetos (%) para IgG anti-ACA sujetos (%)
Resultados negativos Resultados negativos
4 / 70 (5,7%) 1,6-14,0 8 / 70 (11,4%) 5,1-21,3
(< 20 GPL U/mL) (< 15 GPL U/mL)
Resultados positivos Resultados dudosos
66 / 70 (94,3%) 86,0-98,4 3 / 70 (4,3%) 8,9-12,0
(≥ 20 GPL U/mL) (15-20 GPL U/mL)
Resultados positivos
59 / 70 (84,3%) 73,6-91,9
(> 20 GPL U/mL)
Intervalo de los resultados Intervalo de los resultados
0-20 GPL U/mL 4 / 70 (5,7%) 1,6-14,0 0-20 GPL U/mL 11 / 70 (15,7%) 1,2-32,8
20-40 GPL U/mL 2 / 70 (2,9%) 20-40 GPL U/mL 15 / 70 (21,4%) 12,5-32,9
40-80 GPL U/mL 0 / 70 (0%) 0,4-10,0 40-80 GPL U/mL 20 / 70 (28,6%) 18,4-40,6
> 80 GPL U/mL 64 / 70 (91,4%) 82,2-96,8 > 80 GPL U/mL 24 / 70 (34,3%) 23,4-46,6
95% CI = intervalo de confianza al 95%.

Estudio 2. Una primera población no seleccionada formada por 200 muestras de un centro reumatológico de referencia;
incluye pacientes con sospecha de síndrome antifosfolípido y ha sido analizada en los laboratorios en donde se ha
desarrollado el kit con el kit LIAISON ® Cardiolipin IgG en paralelo con un método ELISA para IgG anti-ACA disponible en el
comercio.
Los resultados iniciales, utilizando 20 GPL U/mL como valor límite entre pacientes con y sin anticuerpos IgG anti-
cardiolipina se indican en la Tabla I. El acuerdo para resolver 12 resultados discrepantes ha sido definido como resultados
concordantes obtenidos con dos de tres métodos ELISA con marca CE (6,0%; intervalo de confianza al 95%: 3,1-10,2%).
Los resultados finales están listados a continuación e indicados en la Tabla II.

Cardiolipin-G-es.fm LIAISON® Cardiolipin IgG ([REF] 310370)

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– De las siete muestras clasificadas negativas con Liaison y bajas positivas con el método ELISA, dos muestras han sido
clasificadas negativas; cuatro muestras han sido clasificadas positivas y una muestra ha quedado sin clasificación.
– De las siete muestras clasificadas negativas con Liaison y dudosas con el método ELISA, cinco muestras han sido
clasificadas negativas y dos muestras han quedado sin clasificación.
– De las dos muestras clasificadas positivas con Liaison y negativas con el método ELISA, una muestra ha sido clasificada
negativa y una muestra ha quedado sin clasificación.
Por lo tanto, cuatro muestras no han sido clasificadas después de la resolución de los resultados discrepantes y por ende
han sido excluidas del análisis de los resultados.
Tabla I Tabla II

Método ELISA Método ELISA para IgG anti-

ACA después del análisis de los
para IgG anti-ACA resultados discrepantes
– ± + Total – ± + Total
Liaison – 169 7 7 183 Liaison – 176 3 4 183
CL IgG + 2 0 15 17 CL IgG + 1 1 15 17
Total 171 7 22 200 Total 177 4 19 200

Resultados iniciales Resultados después del análisis de los resultados discrepantes

Acuerdo Nr. % 95% CI Acuerdo Nr. % 95% CI
Acuerdo para los resultados Acuerdo para los resultados
169 / 171 98,8 95,8-99,9 176 / 177 99,4 96,9-100,0
negativos negativos
Acuerdo para los resultados Acuerdo para los resultados
15 / 22 68,2 45,2-86,1 15 / 19 78,9 54,4-94,0
positivos positivos
Acuerdo general 184 / 200 92,0 87,4-95,4 Acuerdo general 191 / 196 97,4 94,1-99,2

Estudio 3. Una segunda población no seleccionada formada por 260 muestras de un gran laboratorio de análisis; incluye
pacientes con sospecha de síndrome antifosfolípido y ha sido analizada en un sitio externo con el kit LIAISON ® Cardiolipin
IgG en paralelo con un método ELISA para IgG anti-ACA disponible en el comercio.
Los resultados iniciales, utilizando 20 GPL U/mL como valor límite entre pacientes con y sin anticuerpos IgG anti-cardiolipina
se indican en la Tabla III. El acuerdo para resolver cinco resultados discrepantes ha sido definido como resultados
concordantes obtenidos con dos de tres métodos ELISA con marca CE (1,9%; intervalo de confianza al 95%: 0,6-4,4%).
Los resultados finales están listados a continuación e indicados en la Tabla IV.
– De las tres muestras clasificadas negativas con Liaison y dudosas con el método ELISA, una muestra ha sido clasificada
positiva y dos muestras han quedado sin clasificación.
– Una muestra clasificada positiva con Liaison y negativa con el método ELISA ha sido clasificada positiva.
– Una muestra clasificada positiva con Liaison y dudosa con el método ELISA ha quedado sin clasificación.
Por lo tanto, tres muestras no han sido clasificadas después de la resolución de los resultados discrepantes y por ende han
sido excluidas del análisis de los resultados.
Tabla III Tabla IV

Método ELISA Método ELISA para IgG anti-

ACA después del análisis de los
para IgG anti-ACA resultados discrepantes
– ± + Total – ± + Total
Liaison – 252 3 0 255 Liaison – 252 2 1 255
CL IgG + 1 1 3 5 CL IgG + 0 1 4 5
Total 253 4 3 260 Total 252 3 5 260

Resultados iniciales Resultados después del análisis de los resultados discrepantes

Acuerdo Nr. % 95% CI Acuerdo Nr. % 95% CI
Acuerdo para los resultados Acuerdo para los resultados
252 / 253 99,6 97,8-100,0 252 / 252 100,0 98,6-100,0
negativos negativos
Acuerdo para los resultados Acuerdo para los resultados
3/3 100,0 29,2-100,0 4/5 80,0 28,4-99,5
positivos positivos
Acuerdo general 255 / 260 98,1 95,6-99,4 Acuerdo general 256 / 257 99,6 97,8-100,0

Estos resultados se refieren a los grupos de pacientes tomados en consideración; no se trata de indicaciones garantizadas,
sino de datos indicativos.

Cardiolipin-G-es.fm LIAISON® Cardiolipin IgG ([REF] 310370)

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17. PRESTACIONES METODOLÓGICAS DEL KIT

17.1. Especificidad analítica

La especificidad analítica se define como la capacidad que tiene el test para detectar exactamente el analito ante la
presencia de factores potencialmente interferentes en la matriz de la muestra (por ejemplo, anticoagulantes, hemolisis,
efectos de tratamientos de la muestra) o de reacciones cruzadas con anticuerpos potencialmente interferentes.
Interferencias. Estudios controlados sobre los factores potencialmente interferentes han demostrado que las prestaciones
del test no están influenciadas por anticoagulantes (EDTA, heparina), hemolisis (hasta 1000 mg/dL de hemoglobina),
lipemia (hasta 3000 mg/dL de triglicéridos), bilirrubinemia (hasta 20 mg/dL de bilirrubina) o por los ciclos de congelación y
descongelación de las muestras. Sin embargo, por razones prácticas, se recomienda no analizar muestras fuertemente
hemolizadas o lipémicas.
Reacciones cruzadas. Por norma, la presencia de anticuerpos potencialmente interferentes no interfiere en el ensayo.
Las muestras estudiadas han sido: (a) 15 muestras positivas para inmunoglobulinas específicas para enfermedades
autoinmunes; (b) 20 muestras recogidas en pacientes con enfermedades reumáticas; (c) 49 muestras positivas para el test
rápido de la Reagina Plasmática (Rapid Plasma Reagin, RPR), con inmunoglobulinas específicas para Treponema pallidum;
(d) 60 muestras positivas para inmunoglobulinas dirigidas contra varios agentes etiológicos – como hCMV, EBV, VZV,
HSV-1/2, virus de la rubeola, Toxoplasma gondii, Borrelia burgdorferi. Todas las muestras potencialmente capaces
de provocar reacciones cruzadas han resultado negativas, excepto una única muestra positiva para el test RPR (1/49, 2%),
que ha resultado positiva baja para el test LIAISON ® Cardiolipin IgG.
17.2. Precisión
La repetibilidad y la reproducibilidad del ensayo (es decir las variaciones intra-ensayo e inter-ensayo) han sido
determinadas utilizando muestras en diferentes concentraciones de analito. Los resultados se refieren a los grupos de
pacientes tomados en consideración; no se trata de prestaciones garantizadas porque pueden existir diferencias entre los
diferentes laboratorios.
Repetibilidad. Para evaluar la repetibilidad se han analizado veinte replicados en la misma sesión analítica en el
laboratorio donde se desarrolló el kit.
Control Control
Repetibilidad A B C D E
negativo positivo
Número de determinaciones 20 20 20 20 20 20 20
Media (GPL U/mL) 3,3 73,2 84,2 151,3 237,8 4,0 75,9
Desviación estándar (GPL U/mL) 0,27 2,29 4,18 4,05 17,98 0,22 5,73
Coeficiente de variación (%) 8,4 3,1 5,0 2,7 7,6 5,4 7,6
Valor mínimo (GPL U/mL) 2,9 65,7 75,8 142,0 167,0 3,5 67,7
Valor máximo (GPL U/mL) 3,9 76,8 91,0 158,0 256,0 4,3 85,0

Reproducibilidad. Para evaluar la reproducibilidad se han analizado veinte replicados en días diferentes (una o dos sesiones
analíticas al día) utilizando tres lotes diferentes de integral. Los ensayos se realizaron en dos sitios, en el laboratorio donde
se desarrolló el kit (sitio 1) y en un laboratorio independiente (sitio 2) utilizando los mismos instrumentos.
Control Control
Reproducibilidad - Sitio 1 F G H I J
negativo positivo
LOTE Nr. 01
Número de determinaciones 20 20 20 20 20 20 20
Media (GPL U/mL) 3,9 4,4 87,7 126,8 199,0 2,6 77,7
Desviación estándar (GPL U/mL) 0,80 1,23 10,85 14,91 40,28 0,51 5,67
Coeficiente de variación (%) 20,5 27,9 12,4 11,8 20,2 20,2 7,3
Valor mínimo (GPL U/mL) 3,0 2,9 67,0 98,9 144,4 1,7 65,5
Valor máximo (GPL U/mL) 5,6 6,6 108,9 153,5 267,0 3,9 86,0
LOTE Nr. 02
Número de determinaciones 20 20 20 20 20 20 20
Media (GPL U/mL) 3,9 4,4 94,6 127,2 209,6 2,6 62,4
Desviación estándar (GPL U/mL) 0,58 1,48 5,91 11,53 26,55 0,70 3,89
Coeficiente de variación (%) 15,0 33,7 6,3 9,1 12,7 26,7 6,2
Valor mínimo (GPL U/mL) 3,2 2,3 83,2 105,8 171,8 1,9 52,9
Valor máximo (GPL U/mL) 5,1 8,0 103,0 151,0 259,0 4,9 68,4
LOTE Nr. 03
Número de determinaciones 20 20 20 20 20 20 20
Media (GPL U/mL) 5,2 5,8 88,2 129,2 222,9 4,4 75,2
Desviación estándar (GPL U/mL) 1,21 1,55 9,33 16,91 39,07 1,51 5,61
Coeficiente de variación (%) 23,0 26,5 10,6 13,1 17,5 34,5 7,5
Valor mínimo (GPL U/mL) 3,3 3,3 71,1 105,0 171,9 3,0 59,0
Valor máximo (GPL U/mL) 7,1 10,0 109,0 160,0 277,0 8,9 84,0
Coeficiente de variación inter-lotes (%) 17,3 16,6 4,3 1,0 5,7 32,5 11,4

Reproducibilidad - Sitio 2 K L M N O
Número de determinaciones 20 19 18 20 20
Media (GPL U/mL) 61,0 127,4 202,2 1,1 61,1
Desviación estándar (GPL U/mL) 7,08 17,46 36,39 0,31 6,94
Coeficiente de variación (%) 11,6 13,7 18,0 28,6 11,4
Valor mínimo (GPL U/mL) 45,3 88,0 147,0 0,5 53,4
Valor máximo (GPL U/mL) 76,9 154,0 277,0 1,8 75,8

Cardiolipin-G-es.fm LIAISON® Cardiolipin IgG ([REF] 310370)

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17.3. Efecto arrastre
El efecto arrastre (carryover) ha sido estudiado analizando cinco muestras negativas tanto antes como después de cuatro
muestras elevadamente positivas, por encima del intervalo de medición. Los resultados obtenidos permiten demostrar que
no se verifica el efecto arrastre utilizando el instrumento LIAISON ® Analyzer.
17.4. Efecto saturación con altas concentraciones
Cuando se ensayen muestras que contengan unas concentraciones de anticuerpos sumamente elevadas, se pueden
obtener unos niveles aparentes de anticuerpo inferiores al nivel real por efecto de la saturación. Sin embargo, un sistema
bien optimizado con dos incubaciones excluye que se obtengan resultados subestimados, porque la señal analítica
permanece siempre elevada (curva a saturación).
La presencia de un efecto saturación ha sido evaluada analizando dos muestras positivas para IgG anti-cardiolipina con alto
título, por encima del intervalo de medición. Todas las muestras han presentado unos valores de concentración por encima
del intervalo de medición, como se espera de las muestras con alto título, indicando que la clasificación de las muestras es
correcta.

Cardiolipin-G-es.fm LIAISON® Cardiolipin IgG ([REF] 310370)

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Modificaciones: -
Supresiones: -

LIAISON ® Control Cardiolipin IgG ([REF] 310371)

1. FINALIDAD DEL ENSAYO

Los controles LIAISON ® Cardiolipin IgG (negativo y positivo) deben ser usados en los ensayos de quimioluminiscencia
(CLIA) LIAISON ® para verificar la fiabilidad de los ensayos. Las prestaciones metodológicas de los controles LIAISON ®
Cardiolipin IgG no son definidas con otros ensayos o instrumentos automáticos.
Atención: Los controles LIAISON ® Cardiolipin IgG están prediluidos y por consiguiente no deben utilizarse para controlar la
eficacia del procedimiento de dilución.

2. MATERIALES SUMINISTRADOS

Control negativo [CONTROL|-] Suero / plasma desfibrinado humano que no contiene anticuerpos IgG anti-cardiolipina,
(2 x 2,8 mL) estabilizado en tampón TRIS, 0,2% ProClin ® 300 y conservantes.

Control positivo [CONTROL|+] Suero / plasma desfibrinado humano que contiene anticuerpos IgG anti-cardiolipina,
(2 x 2,8 mL) estabilizado en tampón TRIS, 0,2% ProClin ® 300, conservantes y un colorante amarillo
inactivo.
Todos los reactivos se suministran listos para su uso. El intervalo de las concentraciones para cada control está impreso en
el certificado de análisis e indica los límites definidos por DiaSorin para los valores de los controles obtenidos con test
fiables. Cada laboratorio es responsable de adoptar límites diferentes para cumplir exigencias específicas.

3. ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES
– Sólo para uso diagnóstico in vitro.
– Los controles no son específicos para lote de kit. Se pueden intercambiar también con lotes diferentes de integral de
reactivos.
– Todos los materiales utilizados para la fabricación de los componentes de este kit se han analizado y se han encontrado
no reactivos para la presencia de HBsAg, anti-HCV, anti-HIV-1 y anti-HIV-2. Sin embargo, visto que ningún método de
análisis puede asegurar que los agentes patógenos estén ausentes, todo el material de origen humano se deberá
considerar potencialmente infeccioso y manipularlo como tal.
– Observe las precauciones necesarias para la manipulación de los reactivos de laboratorio.
– Los residuos deben eliminarse de acuerdo con la reglamentación local.

4. NORMAS DE SEGURIDAD
No coma, beba, fume ni se maquille en el laboratorio donde se realiza el ensayo.
No utilice la pipeta con la boca.
Evite el contacto con material potencialmente infectado mediante el uso de vestuario de laboratorio, protectores oculares y
guantes desechables. Lávese cuidadosamente las manos al terminar el ensayo.
Evite las salpicaduras y la formación de aerosoles. Las gotas de reactivo biológico deben eliminarse con una solución de
hipoclorito sódico que contenga un 0,5% de cloro activo, y los materiales empleados deben tratarse igual que los desechos
infectados.
Todas las muestras y los reactivos que contienen materiales biológicos usados en el ensayo deben considerarse posibles
transmisores de agentes infecciosos. Los residuos deben manipularse con cuidado y eliminarse de conformidad con el
protocolo del laboratorio y las disposiciones legales vigentes en cada país. El material que se vaya a reutilizar tendrá que
esterilizarse correctamente de acuerdo con las normas y leyes locales. Compruebe la eficacia del ciclo de esterilización/
descontaminación.
No utilice ningún kit o componente después de la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.

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De acuerdo con el Reglamento CE 1272/2008 (CLP), los reactivos peligrosos se han clasificado y etiquetado como sigue:

REACTIVOS: [CONTROL|-], [CONTROL|+]

CLASIFICACIÓN: Skin sens. 1 H317
PALABRA DE ADVERTENCIA: Advertencia
SÍMBOLOS/PICTOGRAMAS:

GHS07 Signo de exclamación

INDICACIONES DE PELIGRO:
INDICACIONES DE
PRECAUCIÓN:
CONTIENE:
(solamente sustancias prescritas
con arreglo al Artículo 18 del
Reglamento CE 1272/2008)
H317 Puede provocar una reacción alérgica en la piel.
P261 Evitar respirar el polvo/el humo/el gas/la niebla/ los vapores/el aerosol.
P280 Llevar guantes/prendas/gafas/máscara de protección.
P363 Lavar las prendas contaminadas antes de volver a usarlas.
Masa de reacción: 5-cloro-2-metil-4-isotiazolin-3-ona [CE N.º 247-500-7] y
2-metil-2H-isotiazol-3-ona [CE N.º 220-239-6] (en proporción 3:1)
(ProClin® 300)

Para obtener más información, consulte las fichas de datos de seguridad que se encuentran disponibles en el sitio
www.diasorin.com.

5. CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD
En el momento de su llegada, los controles se deben mantener a 2-8°C en posición vertical para evitar el contacto de la
solución con la tapa del frasco. No congele. Si los controles se conservan sellados y en posición vertical, ellos son estables
a 2-8°C hasta la fecha de caducidad. Después de la apertura, los controles son estables durante dos semanas si se
conservan refrigerados a 2-8°C entre dos usos sucesivos. Evite la contaminación bacteriana de los controles. Los controles
no se deben usar pasada la fecha de caducidad indicada en las etiquetas de los frascos.

6. PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS

– Coloque los frascos de los controles en las gradillas C del instrumento LIAISON ® Analyzer. Con una solución de control
es posible realizar por lo menos diez test.
– El volumen mínimo de control necesario es 640 μL (240 μL de control + 400 μL de volumen muerto).
– En el momento del uso, acondicione los controles a temperatura ambiente (20-25°C) antes de la apertura de los frascos
y déjelos en el área de las muestras del instrumento sólo durante el tiempo requerido para realizar el test de control de
calidad.
– Después del uso, tape los frascos lo antes posible y manténgalos a 2-8°C en posición vertical.
– Durante la manipulación de los controles, adopte las precauciones necesarias para evitar la contaminación microbiana.

7. MANIPULACIÓN
– Asegúrese de que no se coloquen uno tras otro en las gradillas del instrumento ni que se analizan en secuencia dos
controles idénticos (negativos o positivos).
– Hágase referencia al manual operativo del instrumento LIAISON ® para una información más detallada.

8. VALORES ESPERADOS
Los intervalos de las concentraciones de IgG anti-cardiolipina de los controles están indicados en el certificado de análisis.
Estos se han establecido considerando la variabilidad de las sesiones analíticas respecto a la curva predefinida
memorizada por el fabricante, a fines de garantizar la precisión de los resultados analíticos y obtener indicaciones sobre la
estabilidad y el deterioro de los reactivos. Si los valores experimentales de los controles están repetidamente fuera de los
intervalos predefinidos, con mucha probabilidad, el ensayo se ha llevado a cabo de forma incorrecta.

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1. REFERENCES

1. The international consensus statement on an update of the classification criteria for definite antiphospholipid syndrome (APS).
J. Thromb. Haemost., 4 : 295-306 (2006).
2. E.N. HARRIS, S.S. PIERANGELI
Revisiting the anticardiolipin test and its standardization.
L.upus, 11 : 269-275 (2002).
3. S.R. LEVINE et al.
IgG anticardiolipin antibody titer greater than 40 GPL and the risk of subsequent thrombo-occlusive events and death.
Stroke, 28 : 1660-1665 (1997).

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