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Universidad Técnica de Manabí
Facultad de Ciencias de la Salud

Carrera de Laboratorio Clínico
Instrumentación de laboratorio
Unidad 1. Introducción al análisis instrumental
Tema 1. Tipo de análisis, métodos químicos y

definiciones técnicas
Docente: Alberto Campos García

Periodo: octubre 2021-febrero 2021
Semana 2: 25-30 de octubre de 2021
Resultado de aprendizaje
Valorar la importancia del uso de la instrumentación analítica

en el laboratorio clínico.
Temática:
• Tipo de análisis y métodos químicos.
• Definición de términos básicos: muestra, analito,
muestreo, análisis, proceso analítico, técnica, método,
procedimiento, protocolo.
Química analítica
Ciencia que se dedica a la medición, la cual está

basada sobre un conjunto de ideas y métodos que
son útiles en todos los campos de la ciencia, de la
ingeniería y de la medicina.
Skoog, D., Holler, J., & West, H. (2015). Fundamentos de química analítica (Novena edición). México: CENGAGE Learning.
Pág. 1
Análisis
Distinción y separación de las partes de algo para conocer su

composición.
Examen cualitativo y cuantitativo de los componentes o

sustancias del organismo según métodos especializados, con
un fin diagnóstico.
https://dle.rae.es/an%C3%A1lisis
Química analítica
• Análisis cualitativo:
Establece la identidad química de las especies
químicas en una muestra.
Pág. 2
Química analítica
• Análisis cuantitativo:
Determina las cantidades relativas de estas
especies, o analitos, en términos numéricos.
Pág. 2
Instrumentación
de Laboratorio
Clínico
Figura 1. La química analítica y su relación con otras áreas de la ciencia.

Skoog, D., Holler, J., & West, H. (2015). Fundamentos de química analítica (Novena edición). México: CENGAGE Learning. Pág. 3
Muestra
Material que se va a muestrear puede ser sólido,

líquido o gaseoso; suele ser homogéneo o
heterogéneo en su composición.
Christian, G. (2009). Química Analítica (Sexta edición). México: McGrawHill. Pág. 8
Analito
Compuestos o especies cuya presencia o

concentración que debe conocerse.
Pueden ser de naturaleza orgánica o inorgánica y

estar presente como macroconstituyentes,
microconstituyentes o trazas.
Cámara, C. (2002). Toma y tratamiento de muestras. España: Editorial Síntesis. Pág. 42
Requerimiento general para la determinación del analito
• Técnicas de medición clásicas o instrumentales.
• Tratamiento de muestras (mineralización, extracción,

separación, preconcentración, dilución, entre otras).
• Función del binomio analito-matriz y el tipo de técnica de

medición a utilizar.

Muestreo
Proceso de selección de una porción de muestra

de forma que esta sea representativa .
El procedimiento de muestreo debe comprobar

que la porción de muestra es representativa o se
ajusta a los propósitos del análisis.
Consideraciones del muestreo en el Laboratorio
Clínico
La colecta de especímenes a partir de fuentes biológicas representa

un problema para el muestreo.
Algunas consideraciones del muestreo en el
laboratorio clínico
Ejemplo:
Muestrear sangre humana para determinar la cantidad de gases disueltos en
ella, ilustra la dificultad para adquirir muestras representativas a partir de un
sistema biológico complejo.
La concentración de oxígeno y dióxido de carbono en la sangre depende de

una gran cantidad de variables fisiológicas y ambientales.
Utilizar incorrectamente un torniquete o flexionar la mano puede provocar

fluctuaciones en la concentración de oxígeno en la sangre de un paciente.
• Dado que los médicos toman decisiones importantes basándose

en los resultados de los análisis de laboratorio, existen
procedimientos y protocolos estrictos para muestrear y
transportar dichas muestras al laboratorio clínico.
• Estos procedimientos aseguran que la muestra representa el

estado del paciente en el momento en que fue recolectada y
preservar la integridad de la muestra hasta el momento en que
se analiza.
Aunque el muestreo sea simple o sea complejo, el analista debe

siempre asegurarse de que la muestra que llega al laboratorio
sea representativa de la entidad muestreada antes de llevar a
cabo el análisis.
El muestreo es a menudo el paso más difícil en un análisis y

es la mayor fuente de errores analíticos.
Técnica analítica
Principio científico que se ha mostrado útil para

proporcionar información sobre la composición
de la materia.
Tabla 1. Principales técnicas analíticas*.
Categoría Propiedad física medida Técnica

Ópticas Emisión de radiación por átomos Fluorescencia atómica
Espectroscopia de emisión (rayos γ, rayos X, UV-
visible
Emisión de radiación por moléculas Fluorescencia de rayos X, UV-visible
Espectroscopia RAMAN
Absorción de radiación por átomos Espectrofotometría de absorción atómica
Absorción de rayos X
Absorción de radiación por moléculas Espectrofotometría UV-visible
Espectrofotometría infrarroja
Resonancia magnética nuclear
Resonancia magnética de espín electrónico
Dispersión de radiación Turbidimetría
Nefelometría
Refracción de radiación Refractometría
Interferometría
Difracción de radiación Difracción de rayos X y de electrones
*Cámara, C. (2002). Toma y tratamiento de muestras. España: Editorial Síntesis. Pág. 40

Tabla 1. Principales técnicas analíticas*. (continuación)
Categoría Propiedad física medida Técnica

Eléctricas Potencial Potenciometría
Intensidad Amperometría, polarografía, voltamperometría
Carga Coulombimetría
Conductividad Conductimetría
Varios Relación masa/carga Espectrometría de masas

Velocidad de reacción Cinéticos
Térmicos Métodos de entalpía, conductividad térmica
Clásicas Volumen Volumetría

Masa Gravimetría
*Cámara, C. (2002). Toma y tratamiento de muestras. España: Editorial Síntesis. Pág. 40

Método analítico
Aplicación efectiva de una técnica analítica en el

proceso analítico concreto.
Método analítico cuantitativo
Los resultados de un análisis cuantitativo se calculan a partir de dos

medidas:
1. Medición de la masa o el volumen de la muestra que se está

analizando.
2. Medición de una cantidad proporcional a la del analito en la

muestra que puede ser: su masa, volumen, intensidad luminosa o
carga eléctrica, entre otras.
Skoog, D., Holler, J., & West, H. (2015). Fundamentos de química analítica (Novena edición). México: CENGAGE Learning. Pág. 4.
La naturaleza de la medida se emplea para clasificar los métodos

analíticos en:
• Métodos espectroscópicos
• Métodos cromatográficos
• Métodos potenciométricos
• Métodos electroforéticos, entre otros.
Skoog, D., Holler, J., & West, H. (2015). Fundamentos de química analítica (Novena edición). México: CENGAGE Learning. Pág. 4.
Actividad complementaria:
Interpretar la Figura 1.2 (Diagrama de flujo de un análisis
cuantitativo) ubicada en la página 5 del texto de Skoog, D., Holler, J.,
& West, H. (2015). Fundamentos de química analítica (Novena
edición). México: CENGAGE Learning.
Procedimiento analítico
Grupo de instrucciones concretas que se deben seguir

para aplicar un método a la determinación de uno o
varios analitos.
Protocolo
Grupo de instrucciones definidas que deben ser

seguidas sin excepción si el resultado analítico ha de
ser aceptado para un propósito dado.
Resumen
• Química Analítica y su relación con la Instrumentación de

laboratorio.
• Muestra
• Analito
• Muestreo
• Análisis cualitativo y cuantitativo
• Proceso analítico
• Técnicas analíticas
• Método analítico
• Procedimiento
• Protocolo
Tema 2. Componentes básicos de un

instrumento de medición

Periodo: octubre 2021-marzo 2022
Noviembre, 2021

Temática:
• Componentes principales de un equipo de medición.
• Fuente de luz
• Monocromador
• Cubeta
• Detector
• Registrador
Instrumentos de medición
Los espectrofotómetros son los instrumentos que se utilizan

para medir la absorción de luz por las disoluciones.
Principales componentes:
• Fuente de luz
• Sistema de selección de la longitud de onda
• Cubeta para el espécimen
• Detector de luz
• Dispositivo de lectura.
González, J. (2010). Técnicas y métodos de laboratorio clínico. España: ELSEVIER. Pág. 133
Principales componentes de un espectrofotómetro
Fuente de luz
• Las lámparas incandescentes y los láseres son los tipos de

fuentes de luz que se emplean en los espectrofotómetros.
• La fuente de luz que más se ha utilizado para las medidas en la

región visible del espectro (360-950 nm) ha sido la lámpara de
wolframio (tungsteno).
Fuente de luz
• Otra fuente de luz que utilizada para las medidas en la región visible
del espectro (360-950 nm) ha sido la lámpara xenón.
• En la actualidad, se usan lámparas de halógenos que proporcionan

energía radiante más intensa y son más duraderas.
Fuente de luz
• Para las medidas en la región ultravioleta (220-360 nm), se

utilizan las lámparas de descarga de hidrógeno o de deuterio.
• Algunos de los espectrofotómetros más modernos emplean

láseres.
Sistema de selección de la longitud de onda
Monocromador
• En la actualidad se utilizan monocromadores; los

principales son los prismas y las rejillas de difracción.
• En los prismas y las rejillas, la radiación procedente de la

lámpara se dispersa en un espectro, a partir del cual se
aísla la longitud de onda deseada por medio de una
rendija.
Monocromador
Prisma de refracción
• Separan por refracción la radiación emitida por las fuentes

de luz en un espectro continuo.
• La refracción tiene lugar debido a que la radiación de

diferentes longitudes de onda viaja por diferentes rutas en
el medio más denso del material del prisma.
Monocromador
Rejilla de difracción
• Consisten en una placa metálica con un gran número

de surcos equidistantes.
• Las mejores rejillas de difracción contienen entre 1000

y 2000 surcos por milímetro.
Monocromador
Rejilla de difracción
• Cuando se ilumina la rejilla, cada surco da lugar a un

pequeño espectro.
• El resultado neto es un espectro continuo lineal

uniforme.
Monocromador
Fenómeno de difracción
• Tiene lugar debido a que la radiación de diferentes

longitudes de onda viaja por diferentes rutas.
Cubeta
• Recipiente donde se coloca la disolución para medir la

absorbancia.
• Puede ser cuadrada, redonda o rectangular
• Se construye de vidrio, plástico o cuarzo y suelen tener un

paso de 1 cm.
Cubeta
• Las cubetas de vidrio son útiles para las medidas entre 340 y
1.000 nm.
• Las cubetas de plástico son útiles para las medidas que están
entre 310 y 1.000 nm.
• Para lecturas por debajo de 310 nm se precisan cubetas de

cuarzo, ya que, por debajo de esa longitud de onda, el vidrio y
el plástico absorben.
Detector de luz
Tubo fotomultiplicador
• El detector de los espectrofotómetros convierte la luz que le

llega en energía eléctrica.
• Los detectores más utilizados para medir la intensidad de la luz

en las regiones ultravioleta y visible son los tubos
fotomultiplicadores y los dispositivos de estado sólido.
Detector de luz
• Son tubos electrónicos que, además de detectar

la señal luminosa, la amplifican.
• Estos sistemas se construyen usando como

cátodos metales sensibles a la luz, capaces de
emitir electrones en proporción directa a la
energía luminosa que les llegue.
Detector de luz
• Los electrones producidos son dirigidos a una

segunda superficie del mismo metal que produce
más electrones, estos a otra y así sucesivamente.
• Cada electrón que llega al cátodo produce

cascadas en el tubo fotomultiplicador.
Detector de luz
• El resultado es una corriente de electrones que

puede ser hasta un millón de veces superior a la
inicial.
Detector de luz
Dispositivo de lectura
• La energía eléctrica procedente del detector se

presenta mediante diversos dispositivos de lectura.
• En la actualidad, la mayoría de los

espectrofotómetros son controlados por ordenador,
con programas que permiten procesar las señales,
realizar curvas de calibrado, almacenarlas y
transformar los datos.
Espectrofotómetro UV-Visible
Resumen
• Componentes principales de un equipo de medición.
• Fuente de luz (lámparas de halógeno, wolframio, deuterio).
• Monocromador (Prisma de refracción y rejilla de

difracción).
• Cubeta (plástico, vidrio y cuarzo).
• Detector (Tubo fotomultiplicador).
• Registrador
Tema 3. Clasificación de las técnicas analíticas.

Técnicas electroanalíticas

Noviembre, 2021

Temática:
Clasificación de Técnicas Analíticas:
• Técnicas Electroanalíticas
• Técnicas Ópticas:
-Espectroscópicas
-No espectroscópicas
• Técnicas de Separación

Temática:
Clasificación de Técnicas electroanalíticas:
• Potenciometría
• Amperometría
• Voltametría
• Cuolombimetría
• Conductimetría
Clasificación de técnicas analíticas
Técnicas electroanalíticas Técnicas ópticas Técnicas de separación
Espectroscópicas
No espectroscópicas
Potenciometría
Amperometría
Voltametría
Coulombimetría
Conductimetría
Biosensores
Fenómenos electroquímicos
• Los procesos electroquímicos son reacciones

redox (óxido-reducción) en donde (i) la
energía liberada por una reacción espontánea
se transforma en electricidad, o (ii) la
electricidad se utiliza para inducir una
reacción química no espontanea.
Chang, R., & Goldsby, K. (2013). Química 10a. McGraw Hill Mexico. Pág. 837
• Miden la corriente o el voltaje generado por

la actividad de especies iónicas específicas.
• Se basan en la relación que existe entre la

electricidad y los cambios químicos que se
producen en las sustancias y miden la
corriente o el voltaje que genera la actividad
de las especies iónicas específicas en
reacciones óxido-reducción en las que se
produce un intercambio de electrones.
Mérida, F. J., y Moreno, E. E. (2015). Manual para técnico superior de laboratorio clínico y biomédico.
Editorial Médica Panamericana. España. Pág. 515
Aplicaciones en el Laboratorio Clínico
• Medida de electrólitos
• Determinación del pH
• Gases en sangre.
Algunas definiciones a
recordar
Algunas definiciones
• Ión
Átomo o grupo de átomos que tiene una carga
neta positiva o negativa.
• Catión
Ión con una carga neta positiva.
• Anión
Ión con carga neta negativa.
Chang, R., & Goldsby, K. (2013). Química 10a. McGraw Hill Mexico.
• Reacción de oxidación
Semirreacción que implica pérdida de electrones.
• Reacción de reducción
Semirreacción que implica ganancia de
electrones.
• Reacción de oxidación-reducción
Reacción que implica la transferencia de
electrones o el cambio en el estado de oxidación
de los reactivos.
• Electrón
Partícula subatómica que tiene una masa muy
pequeña y una carga eléctrica unitaria negativa.
• pH
Logaritmo negativo de la concentración de iones
hidrógeno.
• Electrolito
Sustancia que, al disolverse en agua, da origen a
una disolución que puede conducir la
electricidad.
• Electrodo
Superficie metálica en la que se establece un
equilibrio de oxidación-reducción entre el metal y
las sustancias en disolución.
• Disolución
Producto que resulta de disolver una sustancia
sólida o líquida en un disolvente.
Potenciometría
• Mide la corriente o el voltaje generado por la actividad

de especies iónicas específicas.
Potenciometría
• Técnica analítica que se fundamenta en la relación lineal

que existe entre el logaritmo de la actividad iónica de una
sustancia en disolución y la fuerza electromotriz de una
celda (célula) electroquímica formada por un electrodo
indicador en contacto con esa disolución y el electrodo de
referencia.
Mérida, F. J., y Moreno, E. E. (2015). Manual para técnico superior de laboratorio clínico y biomédico. Editorial Médica
Panamericana. España. Pág. 516
Potenciometría
• Iones totales
• pH
Amperometría
• Mide la intensidad de la corriente que pasa por una celda

electroquímica cuando se aplica un potencial constante
entre los electrodos.
Amperometría
• Técnica que se basa en la medición de las variaciones de

corriente eléctrica (intensidad de corriente) que pasa
entre dos electrodos de una celda (célula)
electroquímica sumergidos en una disolución
electrolítica cuando entre ellos se aplica un potencial
constante.
Amperometría
• Presión parcial de oxígeno (pO2) en la sangre

Voltametría
• Técnica electroquímica en la que se mide la corriente de

la celda (célula) electroquímica cuando se aplica una
diferencia de potencial variable entre el electrodo de
medida y el electrodo de referencia a lo largo del
tiempo.
Voltametría
• Permite determinar simultáneamente varios elementos.

Coulobimetría
• Técnica electroquímica que se basa en la medición de la

carga que pasa entre los electrodos de una celda (célula)
electroquímica sumergidos en una disolución
electrolítica.
Coulombimetría
• Medición de la concentración de iones cloruro (Cl-) en

suero (Se utiliza muy poco en la actualidad).
Conductimetría
• Técnica electroquímica basada en la reacción lineal que

existe entre la concentración de un ión en disolución y
la conductividad eléctrica de esa disolución, y mide flujo
de corriente entre dos electrodos despolarizados entre
los que se ha establecido un potencial eléctrico
conocido.
Conductimetría
• Contar electrónicamente las células sanguíneas en

suspensión. Se fundamenta en que la conductividad de
células sanguíneas es menor que la de la disolución
salina en la que están suspendidas.
Resumen
• Fenómenos electroquímicos
• Definiciones
• Clasificación de las técnicas analíticas
• Técnicas electroanalíticas:
Potenciometría
Amperometría
Voltametría
Coulombimetría
Conductimetría
• Aplicaciones en el Laboratorio Clínico

Técnicas ópticas

Noviembre, 2021

Temática:
• Técnicas Ópticas:
-Espectroscópicas
-No espectroscópicas
Espectroscópicas
Absorción
Fenómenos Técnicas
Fluorescencia
Técnicas ópticas
ópticas**
Fosforecencia
• Técnicas de espectroscopia basados en la
radiación UV, visible e infrarroja, se Dispersión
fundamentan en seis fenómenos.*
Emisión
*Skoog, D., Holler, J., & West, H. (2015). Fundamentos de química analítica (Novena edición). México: CENGAGE Learning. Pág. 655 Quimioluminiscencia
**Skoog, D., Holler, J., & Neiman T. (2001). Principios de análisis instrumental (Quinta edición). España. MacGrawHill. Pág. 155
Espectrometría de
absorción molecular
UV-Visible
Espectrometría de
fluorescencia
espectroscópicas
Técnicas ópticas
Espectrometría de
emisión atómica
Espectrometría de
absorción atómica
Espectrometría de
reflectancia
Espectrometría de
dispersión de partículas Mérida, F. J., y Moreno, E. E. (2015). Manual para técnico superior de laboratorio clínico
y biomédico. Editorial Médica Panamericana. España. Pág. 497.
Componentes de los instrumentos
• Fuente de energía
• Cubeta de muestra
• Dispositivo que separe el espectro para la
medida
• Detector de radiación que convierta la
energía radiante en una señal analítica
• Sistema de procesamiento
Espectrometría de absorción molecular en la región del espectro UV-
Visible
Espectrometría de absorción molecular en la
región del espectro UV-Visible
Fundamento
• Cuando una determinada radiación electromagnética

incide sobre una disolución que contiene un
compuesto capaz de absorber energía de una
longitud de onda determinada, la intensidad de la luz
transmitida es menor que la incidente, puesto que
parte de ella ha sido absorbida por el compuesto en la
disolución.
Panamericana. España. Pág. 497.
Espectrometría de absorción molecular en la
región del espectro UV-Visible
• Las regiones del espectro electromagnético más utilizadas

en el trabajo analítico de rutina en los laboratorios clínicos
son la ultravioleta y la visible.
Panamericana. España.
Espectrometría de fluorescencia
• Se basa en medir la luz fluorescente emitida por una

disolución que contiene una molécula capaz de emitir
fluorescencia tras la estimulación.
Espectrometría de emisión atómica
• La espectroscopia de emisión atómica mide la

luz emitida por los átomos cuando reciben
energía calorífica.
• Hay dos tipos de técnicas de espectroscopia

de emisión atómica: la emisión por llama y la
emisión por plasma.
Editorial Médica Panamericana. España. Pág. 503.
Espectrometría de absorción atómica
• La espectroscopia de absorción atómica mide la luz

de una determinada longitud de onda absorbida
por los átomos de un elemento.
• En su estado fundamental, los átomos en forma de

vapor absorben luz de longitudes de onda muy
estrechas y pasan a estados de excitación.
• El elemento que quiere medirse se vaporiza por

medio de una llama o un método electrotérmico
(horno de grafito).
Mérida, F. J., y Moreno, E. E. (2015). Manual para técnico superior de laboratorio clínico y biomédico. Editorial
Médica Panamericana. España. Pág. 504.
Espectrometría de reflectancia
• Se basa en el color que presenta un elemento

que absorbe una parte de la radiación.
• El color es derivado de las longitudes de onda

que no absorbe (color complementario).
• Sistema de análisis común de análisis

químicos de orina (tiras reactivas).
• Soporte que contiene una serie de reactivos

desecados, preparados para realizar una
determinada reacción colorimétrica. Al colocar
una muestra líquida (suero, orina, plasma,
sangre) el sistema se rehidrata y produce una
reacción colorimétrica, de tal forma que el
soporte adquiere un determinado color en
función de la concentración del analito en la
muestra.
• El sistema utiliza un dispositivo de Ulbricht al cual

llega un haz de luz proveniente de una luz (lámpara
de tungsteno o arco de xenón) y se hace incidir esta
luz sobre la superficie que se va a medir.
• La luz reflejada pasa a través de la esfera hasta que

llega al monocromador que selecciona la longitud de
onda que llega al detector, que recibe la señal y la
amplifica y finalmente llega al dispositivo que la
convierte en un resultado numérico.
Espectrometría de dispersión de
partículas
• Cuando un rayo de luz choca con una partícula

en suspensión, una parte de la luz se absorbe,
otra se refleja y otra se dispersa. La dispersión de
la luz por una partícula depende de su tamaño,
su índice de refracción respecto al del líquido que
la rodea y la longitud de onda de la luz.
Espectrometría de dispersión de
partículas
Turbidimetría
• Mide la turbidez.
• Se basa en la medición de la luz transmitida

través de una solución de partículas.
Espectrometría de dispersión de partículas
Turbidimetría
• A mediada que existen partículas en solución,

dispersan la luz en distintas direcciones según la
longitud de onda y el tamaño de partícula, por lo que
llega menos luz transmitida a medida que aumenta el
número de partículas en solución.
• La luz transmitida es inversamente proporcional al

número de partículas.
Espectrometría de dispersión de partículas
Nefelometría
• Se basa en la medición de la luz dispersada.
• A medida que aumenta el número de partículas, la luz

dispersada aumenta.
• La luz dispersada es directamente proporcional al

número de partículas.
Técnicas espectroscópicas aplicadas en el
• Espectroscopia de absorción molecular para la
determinación de sustratos y enzimas.
• Espectroscopia atómica para la medida de la

concentración de metales.
• Espectroscopia de fluorescencia y la espectroscopia de

luminiscencia para la medida de diversos compuestos
químicos y actividades enzimáticas.
• Espectroscopia de dispersión para determinar

fundamentalmente proteínas específicas.
Resumen
• Técnicas ópticas
• Técnicas ópticas espectrométricas:
-Espectrometría UV-Visible
-Espectrometría de fluorescencia
-Espectrometría de emisión atómica
-Espectrometría de absorción atómica
-Espectrometría de reflectancia
-Espectrometría de dispersión:
Turbidimetría
Nefelometría

Técnicas de Separación
Noviembre, 2021

Temática:
• Técnicas de separación:
-Electroforesis
-Cromatografía
Espectroscópicas
Electroforesis
Gel de almidón
Soportes para Electroforesis

• Transporte de partículas cargadas en un
campo eléctrico (iones o partículas en Gel de
disoluciones coloidales).
poliacrilamida
• Es una técnica de separación en la que
las partículas cargadas se separan Papel
mediante la diferencia de su velocidad
de migración.
Acetato de
• Se usa para separar compuestos con celulosa
carga neta, como aminoácidos, péptidos,
proteínas, nucleótidos y ácidos nucleicos.
Gel de agarosa
Electroforesis zonal
Isotacoforesis
métodos electroforéticos
Clasificación de los
Electroforesis
discontínua
Electroforesis en gel
Inmunoelectroforesis
Microelectroforesis
Electroforesis capilar
Generalidades de la electroforesis en gel
Los geles de agarosa, almidón y poliacrilamida no

son sólo soportes que evitan la difusión, pues,
modificando la concentración de los componentes
que forman el gel, pueden conseguirse diferentes
porosidades y la separación por diferencias de
carga, además se produce también por diferencias
de tamaño.
• Técnica que se realiza en capilares de 75 μm de

diámetro interno y 25 cm de longitud.
• El tubo capilar se conecta a un detector en un

extremo, y a una fuente de corriente a través
de recipientes con un amortiguador.
• Las principales ventajas de que los capilares

tengan un diámetro tan pequeño son que se
logra una mayor disipación del calor, un
menor volumen del espécimen y una anchura
menor de las zonas de separación.
• La gran disipación del calor permite aplicar

grandes voltajes, de unos 5.000 V, que
mejoran la eficacia de la separación y reducen
el tiempo de esta.
Electroforegrama
Cromatografía
• La cromatografía es una técnica física que se

emplea en los laboratorios clínicos para
separar y cuantificar una gran variedad de
sustancias.
Cromatografía en papel
Cromatografía de capa
Técnicas cromatográficas
fina
Cromatografía en
columna
Cromatografía de gases
Cromatografía de
intercambio iónico
Cromatografía de
exclusión por tamaño
Fundamento de la separación cromatográfica
• La cromatografía es un proceso físico en el que los

componentes de una mezcla se separan por la distribución
diferente entre una fase móvil y una fase estacionaria.
• Durante el proceso cromatográfico de separación, la fase

móvil transporta el espécimen a lo largo de le columna que
contiene la fase estacionaria.
• A medida que la fase móvil fluye por la estacionaria, los

solutos se distribuyen entre ambas fases. Los que son más
afines a la fase móvil viajan más rápido que los que no lo
son.
Separación cromatográfica
• La cromatografía de gases es una técnica de

reparto líquido-gas que se realiza en una
columna rellena de un sólido, finamente
dividido, que actúa como soporte.
• La fase estacionaria está formada por un

líquido no volátil que impregna el soporte, y
la fase móvil es un gas inerte nitrógeno,
helio, hidrógeno o argón que fluye por la
columna a velocidad constante.
Cromatograma
Resumen
• Técnicas separación
• Electroforesis
• Técnicas separación electroforéticas:
-Electroforesis zonal
-Electroforesis en gel
-Inmunoelectroforesis
-Electroforesis capilar
• Electroforegrama
• Cromatografía
• Técnicas cromatográficas:
Cromatografía en columna
• Cromatograma
Tema 6. El agua como reactivo principal en el

laboratorio clínico, disoluciones y diluciones

Noviembre, 2021

Temática:
El agua como reactivo principal en el laboratorio clínico:
• Clasificación del agua según la ASTM
• Disoluciones
-Unidades físicas
-Químicas de concentración
• Diluciones
El agua en el laboratorio
• En el laboratorio se requiere agua de óptima calidad y
pureza para eliminar cualquier variable oculta
contaminante que pueda afectar a los resultados de
los análisis.
• La calidad del agua empleada en los laboratorios de análisis
determina la calidad del sus resultados.
• Se evita la presencia de interferencias en los resultados.
• Los análisis de alta sensibilidad dependen en gran medida de la

pureza del agua cuando hay que calcular concentraciones muy
bajas del analito o cuando se dispone de pequeñas cantidades de
muestra y se requiere diluir antes del análisis.
Clasificación del agua según la

Tipo I
Las instituciones u organismos que establecen las Agua ultrapura
normas para medir la pureza y calidad del agua usada
en los laboratorios de análisis son:
Tipo II
• Asociación Americana de Ensayo de Materiales (ASTM), de Más usada en la preparación de
sus siglas en inglés American Society of Testing Materials.
ASTM
reactivos
• Organización Internacional de Normalización (ISO), de sus
siglas en inglés International Organization for Tipo III
Standardization. ISO-3696 para aplicaciones de
laboratorios clínicos. Limpieza de material de vidrio
Sistemas autoclave
• Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorio (CLSI), de
sus siglas en inglés Clinical and laboratory Standard
Institute.
Tipo IV
Lavado de material de vidrio
Mérida, F. J., y Moreno, E. E. (2015). Manual para técnico superior de laboratorio clínico y
biomédico. Editorial Médica Panamericana. España. Pág. 205
Tabla 1. Clasificación del agua según la ASTM
Parámetro fisicoquímico Tipo I Tipo II Tipo III Tipo IV
Conductividad eléctrica, valor máximo a 25 °C (µS/cm) 0,056 1 0,25 5
Resistividad mínima a 25 °C (MΩ cm) 18 1 4 0,2
pH a 25 °C - - - 5-8
Carbono orgánico total, valor máximo (mg/L) 50 50 200 NL*
Sodio, valor máximo (mg/L) 1 5 10 50
Cloruros, valor máximo (mg/L) 1 5 10 50
Sílice total, valor máximo (mg/L) 3 3 500 NL*

*NL: No hay un límite establecido
Mérida, F. J., y Moreno, E. E. (2015). Manual para técnico superior de laboratorio clínico y biomédico. Editorial Médica Panamericana. España. Pág. 205
Parámetros de calidad del agua ultrapura
Potenciómetro
• Conductividad (µS/cm):
Es una medida indirecta del contenido de sales disueltas
en el agua.
• Resistividad (MΩ cm):

Es la magnitud inversa a la conductividad.
El agua químicamente pura tiene una conductividad de

0,056 µS/cm o 18 MΩ cm
Agua ultrapura, tipo I
La de mayor alto grado de pureza usada en los laboratorios

de análisis para aplicaciones muy sensibles a posibles
contaminantes:
-Secuenciación de ADN
-Reacción en cadena polimersas (PCR)
Preparación de disoluciones
-Para cultivos celulares
-Cromatografía líquida de alta resolución.
Agua ultrapura, tipo I
La presencia de elementos y compuestos

cuantificables en concentraciones de partes por
billón (ppb) o inferiores pueden comprometer los
resultados por su interacción con las muestras o los
componentes del sistema de análisis.
Médica Panamericana. España. Pág. 205
Agua tipo II
La más usada en las aplicaciones del laboratorios

para alimentar los analizadores y para la
preparación de la mayoría de los reactivos.
Agua tipo III
Utilizada para enjuagar el material de vidrio, lavar

los autoclaves o alimentar los sitemas que
requieren agua para mejorar la calidad posterior de
los resultados.
Disolución
• Mezcla homogénea en la que se encuentran dos o más

sustancias puras.
Concentración
• Cantidad de soluto disuelta en una cantidad dada de solvente

o solución.
Mérida, F. J., y Moreno, E. E. (2015). Manual para técnico superior de laboratorio clínico y biomédico. Editorial Médica Panamericana.
España. Pág. 205
Tabla 2. Clasificación de las disoluciones según su estado físico.
Naturaleza del Disolvente Disolución Ejemplos

soluto
Sólido Sólido Sólidas Aleaciones metálicas (acero)
Gas Amalgama (Hg+metal)
Líquido Líquidas Hidrógeno ocluido (Pd y Pt)
Sólido Líquido Azúcar en agua
Gas Alcohol en agua
Líquido Amoniaco en agua
Sólido Gas Gas Suspensiones (humo)
Gas Suspensiones (aerosoles)
Líquido Aire
Tabla 3. Clasificación de las disoluciones según la proporción de
soluto respecto al disolvente.
Tipo de Característica
disolución
Diluidas La proporción de soluto respecto a la de disolvente es
muy pequeña.
Concentradas La proporción de soluto respecto a la de disolvente es
muy alta.
Saturadas No admite más cantidad de soluto sin aumentar la
cantidad de disolvente.
Tabla 4. Clasificación de las disoluciones según sus propiedades electroquímicas
Tipo de Característica Ejemplos

disolución
Electrolíticas Se llaman también disoluciones iónicas y Disoluciones acuosas de ácidos,
presentan una apreciable conductividad bases y sales.
eléctrica.
No Su conductividad es prácticamente nula, no Disoluciones de alcohol en agua,
Electrolíticas forma iones y el soluto se disgrega hasta el glicerina en agua, de sacarosa en
estado molecular agua.
Molaridad (M) o Concentración molar
• La concentración molar de la solución de una

especie química determinada es el número de
moles de soluto que está contenido en un litro de
la solución (no en un litro de solvente).
• Unidades:
mol· L-1 o mmol· mL-1
mol/L o mmol/mL
𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜
𝑀=
𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 (𝐿)
𝑚𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜
𝑀=
𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 (𝑚𝐿)
Interconversión de molaridad, moles y volumen

Interconversión de molaridad, moles y volumen
𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜 = 𝑀 𝑥 𝑉𝑜𝑙 𝑆𝑜𝑙 (𝐿)
𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜 = 𝑥 𝑉𝑜𝑙 𝑆𝑜𝑙 (𝐿)
𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜 𝐿
𝑀=
𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 (𝐿)
𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜

𝑉 𝑠𝑙𝑛 𝐿 = 𝑉 𝑠𝑙𝑛 𝐿 =
𝑀 𝑀 (𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝐿)
¿Cómo preparar 250 mL de una disolución acuosa 1,00 M de CuSO4?
Paso 1. Pesar la cantidad Paso 2. Transferir el CuSO4 Paso 3. Agitar para Paso 4. Agregar H2O hasta
de CuSO4 a un balón aforado de 250 disolver completamente llegar al aforo y agitar para
mL y Lavar el embudo con el soluto. homogeneizar la solución.
H2O Tipo I o II, para evitar
pérdidas del soluto.
Aforo
Balanza analítica
Matraz aforado
¿Cómo preparar una dilución?
¿Qué volumen de una solución 1,000 M de CuSO4 se requiere para preparar
250 mL de una solución 0,100 M?
𝑀𝑑𝑖𝑙 𝑥 𝑉𝑑𝑖𝑙
M conc x Vol conc = M dil x C dil 𝑉𝑐𝑜𝑛𝑐 =
𝑀 𝑐𝑜𝑛𝑐
Paso 1. Tomar con una pipeta Paso 3. Agregar H2O

el volumen calculado de destilada hasta la marca
CuSO4 1,000 M de aforo y agitar.
Paso 2. Agregar la solución

de CuSO4 1,000 M medida en
el balón de 250 mL
Molalidad (m) o Concentración molal
• La cantidad de moles de soluto por kilogramo de

solvente.
• Unidades:
mol· kg-1
mol/kg
𝑚=
𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒 (𝑘𝑔)
Normalidad (N) o Concentración Normal
• Indica el número de equivalentes (eq) o

miliequivalentes (meq) de soluto contenidos en
1L o 1mL de solución.
• La N es n veces la M de un reactivo redox, de un

ácido o una base, siendo n el número de
electrones, protones o hidroxilos dados o
aceptados por la especie química.
• Unidades:
eq·L-1 o meq·mL-1
eq/L o meq/L
𝑒𝑞𝑢𝑖𝑣𝑎𝑙𝑒𝑛𝑡𝑒𝑠 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜 𝑚𝑒𝑞𝑢𝑖𝑣𝑎𝑙𝑒𝑛𝑡𝑒𝑠 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜

𝑁= ; 𝑁=
𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 (𝐿) 𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 (𝑚𝐿)
𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜 (𝑔)

𝑒𝑞𝑢𝑖𝑣𝑎𝑙𝑒𝑛𝑡𝑒𝑠 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜 =
𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑒𝑞𝑢𝑖𝑣𝑎𝑙𝑒𝑛𝑡𝑒
• Equivalente de un Cantidad de una sustancia que reacciona para

ácido producir un mol de iones hidronio
• Equivalente de una Cantidad de unas sustancia que reacciona para

base producir un mol de iones hidroxilo
• Equivalente de una Cantidad de sustancia que puede dar o aceptar un
sal mol de electrones.
Masa Equivalente
Ácidos Sales
Bases
𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑐𝑢𝑙𝑎𝑟(𝑔 𝑒𝑞) 𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑐𝑢𝑙𝑎𝑟(𝑔 𝑒𝑞)

𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑒𝑞 = 𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑒𝑞 =
𝑁ú𝑚𝑒𝑟𝑜 𝐻+ 𝑁ú𝑚𝑒𝑟𝑜 𝐶𝑎𝑟𝑔𝑎
𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑐𝑢𝑙𝑎𝑟(𝑔 𝑒𝑞)

𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑒𝑞 =
𝑁ú𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑂𝐻−
Unidades físicas de concentración
𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜
% 𝑚 𝑚= 𝑥 100
𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛
𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜 (𝑔)

%𝑚 𝑣= 𝑥 100
𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 (𝑚𝐿)
𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜
%𝑣 𝑣= 𝑥 100
𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛
Resumen
• El agua en el laboratorio clínico

• Agua ultrapura, tipo I
• Clasificación del agua según la ASTM
• Disoluciones
• Tipos de disoluciones:
Diluidas
Concentradas
Saturadas
Electrolíticas
No electrolíticas
• Unidades químicas de concentración (M, N, m)
• Unidades físicas de concentración (% m/m, m/v, v/v)
Tema 7. Parámetros de control de calidad de

un método analítico

Noviembre, 2021

Temática:
Parámetros de control de calidad de un método analítico
• Exactitud, precisión, sensibilidad, límite de detección,
límite de cuantificación, selectividad, intervalo de trabajo.
• Curva de calibración.
Estandarización y calibración
Los procesos de calibración y de estandarización son una parte
muy importante de todos los procedimientos analíticos.
La calibración determina la relación entre la respuesta analítica y

la concentración del analito. Esta relación se determina
comúnmente mediante el uso de estándares químicos.
Los estándares utilizados se pueden preparar a partir de reactivos

purificados, si están disponibles, o de reactivos estandarizados
por métodos cuantitativos clásicos.
Skoog, D., Holler, J., & West, H. (2015). Fundamentos de química analítica (Novena edición). México: CENGAGE Learning. Pág.
167.
Precisión y Exactitud
Exactitud
• Expresa la proximidad entre el resultado obtenido y el valor
de referencia.
• Es uno de los criterios más importantes para medir la calidad

de un método analítico.
• Actualmente, se considera que engloba tanto a los errores

sistemáticos (determinados) como a los aleatorios
(indeterminados).
Pág. 85.
Cámara, C. (2002). Toma y tratamiento de muestras. España: Editorial Síntesis. Pág. 49.
Error
Es la diferencia entre un valor individual y el valor verdadero de
la propiedad que se mide.

Error aleatorio
Componente del error que se origina durante la realización de
medidas de un mismo mesurando y varía por un camino
impredecible. Sus principales características son:
• No eliminable, pero sí reducible mediante el trabajo cuidadoso y

la repetición de medidas.
• Fuentes de este tipo de error: instrumentación, personal y

metodología.
• Algunos factores que contribuyen a incrementarlos son el ruido

eléctrico, el ruido ambiental y el ruido térmico.

Error sistemático
Componente del error que se origina durante la realización de
medidas de un mismo mesurando, que permanece constante o varía
de forma predecible. Sus principales características son:
• Puede eliminarse parcialmente o incluso totalmente.
• No se reduce mediante la repetición de medidas.
• Posibles fuentes de errores determinados son: instrumentación,

personal, sesgos de la metodología.
Ejemplos representativos: pérdida parcial de un analito durante el

tratamiento de la muestra, influencia no detectada de la matriz en la
señal del analito, instrumento mal calibrado, errores personales.

Precisión
La dispersión de los valores obtenidos alrededor del valor medio,

o bien como la proximidad entre los resultados obtenidos por
aplicación del mismo procedimiento experimental varias veces
bajo condiciones predescritas.
Sensibilidad analítica
La sensibilidad analítica es la proporción de la pendiente

de la curva de calibración con respecto a la desviación
estándar de la señal del analito a una concentración de
analito determinada.
Generalmente la sensibilidad analítica es una función de

la concentración.
Pág. 187.
Sensibilidad analítica
La definición de sensibilidad más utilizada es la de

sensibilidad de la calibración, o el cambio en la señal de
respuesta por unidad de cambio en la concentración del
analito.
La sensibilidad de la calibración es entonces la pendiente

de la curva de calibración. Si la curva de calibración es
lineal, la sensibilidad es constante e independiente de la
concentración.
Pág. 187.
Límite de detección
Resultado mas pequeño que puede diferenciarse de un

blanco adecuado.
Blanco:
Contiene todas las especies que conforman la matriz de
la disolución pero sin contener el componente que se
mide.
Skoog, D., Holler, J., & West, H. (2015). Fundamentos de química analítica (Novena edición). México: CENGAGE
Learning. Pág. 187.
Límite de detección (LD)
Es la menor concentración que puede ser reportada a un

cierto nivel de confianza.
Cada técnica analítica tiene un límite de detección.

Pág. 187.
Límite de detección (LD)
Para métodos que requieren una curva de calibración, el límite

de detección es definido en sentido práctico por la siguiente
ecuación como la concentración de analito que produce una
respuesta igual a k veces la desviación estándar de la
determinación del blanco sb:
𝑘𝑠𝑏 3𝑠𝑏
𝐿𝐷 = 𝐿𝐷 =
𝑚 𝑚
donde k, es el llamado factor de confianza y m, es la
sensibilidad de la calibración.
El factor k es seleccionado como 2 o 3. Un valor de k de 2

corresponde a un nivel de confianza del 92,1 %, mientras que
un valor k de 3 corresponde a un nivel de confianza de 98,3 %.
Pág. 187.
Límite de cuantificación (LQ)
Se define como la mínima cantidad de analito capaz de

ser determinada por un método analítico con una
precisión y exactitud aceptable. Por ello, este límite es
siempre mayor que el de detección y se calcula con la
siguiente expresión:
10𝑠𝑏
𝐿𝑄 =
𝑚
donde Sb es la desviación estándar de la concentración del

blanco y m, es la pendiente de la curva de calibración.
Selectividad
• Es una medida del grado de interferencia que producen los

compuestos que acompañan al analito en la muestra.
• La presencia de compuestos interferentes produce errores

sistemáticos o determinados y constituye uno de los
problemas más importantes en un análisis.
Selectividad
Está relacionada con la sensibilidad ya que, cuando un método

es muy sensible para un determinado analito, la muestra puede
diluirse apreciablemente y por lo tanto, aumentará la
selectividad al disminuir la concentración de los interferentes
pudiendo así minimizarse o eliminarse su efecto interferente
sobre el analito.
Intervalo de trabajo (intervalo dinámico)
• El intervalo dinámico lineal de un método analítico

se refiere al intervalo de concentraciones sobre las
cuales un analito puede ser determinado utilizando
una curva de calibración lineal.
Intervalo de trabajo (intervalo dinámico)
• El límite inferior del intervalo dinámico es la

concentración en la cual la señal analítica o la
pendiente de la curva de calibración se desvían por
una cantidad especificada.
• Generalmente una desviación de 5 % de la linealidad

es considerada el límite superior.
• Las desviaciones de la linealidad son comunes a altas

concentraciones debido a las respuestas no ideales
del detector o a efectos químicos.
Curva de calibración
En la calibración estándar externa se preparan una
serie de disoluciones estándar independientes de la
muestra.
Los estándares son utilizados para establecer la función

de calibración del instrumento, la cual es obtenida a
partir del análisis de la respuesta del instrumento como
una función de la concentración del analito.
Idealmente, en el proceso de calibración se utilizan tres o más
disoluciones estándar, aunque en algunas determinaciones
de rutina dos puntos de calibración pueden ser suficientes.
La función de calibración puede obtenerse gráfica o

matemáticamente. Por lo general, se utiliza una grafica de la
respuesta de un instrumento con respecto a las
concentraciones conocidas del analito para producir una
curva de calibración, llamada en ocasiones curva de trabajo.
Disoluciones para la curva de calibración

20 mg V L
Y=𝑚𝑋 + 𝑏
10 mg V L
5 mg V L
0,00; 0,50; 1,00; 5,00; 10,00 y 20,00
mg L-1 1 mg V L
0,5 mg V L
𝑌−𝑏
X=
𝑚
Resumen
Parámetros de control de calidad de un método

analítico
• Exactitud
Error
Error aleatorio
Error sistemático
• Precisión
• Sensibilidad
• Límite de detección
• Límite de cuantificación
• Selectividad
• Intervalo de trabajo.
• Curva de calibración.
Unidad 2. Técnicas Electroquímicas
Tema 1. Potenciometría y electrodos de

referencia

Noviembre, 2021
Aplicar las técnicas electroquímicas para la determinación de

magnitudes bioquímicas relacionadas con la oxigenación tisular
y el equilibrio ácido-base.
Temática:
• Definición de Técnicas Electroanalíticas. Tipos.
• Métodos potenciométricos:
• Clasificación de Electrodos:
Referencia (hidrógeno, plata/cloruro de plata),
Repaso de los fundamentos de las técnicas
electroquímicas
Potenciometría
Amperometría
Voltametría
Coulombimetría
Conductimetría
Biosensores
Fenómenos electroquímicos
Los procesos electroquímicos son reacciones redox

(óxido-reducción) en donde la energía liberada por
una reacción espontanea se transforma en
electricidad, o la electricidad se utiliza para inducir
una reacción química no espontanea.
Chang, R., & Goldsby, K. (2013). Química 10a. McGraw Hill Mexico. Pág. 837
Miden la corriente o el voltaje generado por la

actividad de especies iónicas específicas.
Se basan en la relación que existe entre la

electricidad y los cambios químicos que se producen
en las sustancias y miden la corriente o el voltaje que
genera la actividad de las especies iónicas específicas
en reacciones óxido-reducción en las que se produce
un intercambio de electrones.
• Medida de electrólitos
• Determinación del pH
• Gases en sangre.
Consideraciones de las técnicas
electroquímicas utilizadas en el laboratorio
clínico
Potenciometría
Se basa en la medida del potencial eléctrico entre los dos
electrodos de una célula electroquímica.
Si se conoce la concentración del componente de una de sus

semicélulas, que sirve de referencia (generalmente el cátodo) por
medio de la medida del potencial eléctrico se puede calcular
concentración del componente de la otra semicélula.
Potenciometría
Técnica analítica que se fundamenta en la relación lineal que
existe entre el logaritmo de la actividad iónica de una sustancia en
disolución y la fuerza electromotriz (fem) de una célula
electroquímica formada por un electrodo indicador en contacto
con esa disolución y un electrodo de referencia.
fem: También se llama potencial de celda, es la medida de la fuerza impulsora, o presión

eléctrica, que hace que se efectúe una reacción electroquímica, expresada en V.
Determinación potenciométrica
Las determinaciones se obtienen al comparar el potencial de la
disolución desconocida con el de varias disoluciones calibradoras
de actividad conocida.
Potenciometría indirecta
Cuando se realiza la determinación de iones totales (los libres y los
unidos), el espécimen o analito debe diluirse con un diluyente
adecuado que libere el ión unido.
La dilución establece una fuerza iónica constante, de forma que se

obtiene un coeficiente de actividad también constante e
independiente de la fuerza iónica del espécimen o analito original.
Potenciometría directa
La determinación se realiza sin diluir el espécimen o analito.
Técnicas electroquímicas
Se basan en la relación que existe entre la electricidad y los
cambios químicos que se producen en las sustancias y miden
la corriente o el voltaje que genera la actividad de las
especies iónicas específicas en reacciones de oxido-reducción
en las que se produce un intercambio de electrones.
Técnicas electroquímicas
Reacciones de oxido-reducción en las que se
produce un intercambio de electrones.
Célula electroquímica
Consta de dos semicélulas y cada una contiene un
electrodo generalmente metálico, sumergido en una
disolución electrolítica de sus propios iones.
Ambas semicélulas, están conectadas eléctricamente

mediante un conductor metálico y también mediante
un puente salino que contiene electrolitos inertes que
permite el paso de iones para asegurar la conducción
eléctrica.
Célula electroquímica
Ánodo
Es el electrodo en el que se produce la oxidación.
Cátodo
Es el electrodo en el que se produce la reducción.
Electrodo
Material conductor que, situado en el seno de una
sustancia electrolítica, presenta un cierto potencial
respecto a dicho electrolito.
Uno de los electrodos tiene mayor facilidad para

oxidarse, es decir, para liberar electrones, mientras
que el otro electrodo los captará con mayor facilidad,
lo que da lugar al proceso de reducción.
Tipos de electrodos
Las células electroquímicas se construyen de forma que una de
las semicélulas contiene un electrodo de referencia, con un
potencial de referencia conocido.
La otra semicélula contiene el electrolito cuya concentración se

quiere conocer y su electrodo, el electrodo indicador, debe ser
de una composición que permita que se produzca una
reacción de oxido-reducción en la que participe este electrolito
y así determinar la concentración del compuesto estudiado.
Electrodos de referencia
Funciones:
Proporcionan el potencial de referencia, conocido y estable

que se compara con el de la disolución desconocida que se
desea medir.
La función de los electrodos de referencia es proporcionar un

potencial constante ante el que se han de poder medir las
variaciones del potencial debidas al electrodo indicador.
Criterios para la selección de electrodos
de referencia
• La fuerza iónica del electrolito debe ser muy superior a
la de la muestra que se va a medir.
• No debe reaccionar con la muestra.
• No debe contaminar la muestra, por lo que no debe

contener el ión que se va a medir.
Tipos de electrodos de referencia
• Electrodo de hidrógeno
• Electrodo de calomelanos
• Electrodo de plata/cloruro de plata
Electrodo de hidrógeno
Se emplea para establecer los potenciales del estado
estándar (de referencia).
Es un electrodo de platino (Pt) sumergido en una

disolución con una actividad del ión H+ igual a 1, sobre el
que se burbujea hidrógeno (H2) gaseoso a presión de 1
atmósfera.
La reacción que tiene lugar en el electrodo es:
2𝐻 + + 2𝑒 − ⇋ 𝐻2
Electrodo de calomelanos
Está formado por mercurio metálico (Hg0) recubierto de una
capa constituida por una disolución de cloruro de mercurio
(I), (Hg2Cl2, calomelano) en contacto con una disolución
electrolítica de iones de cloruro (Cl-)
1Τ 𝐻𝑔 𝐶𝑙 (𝑠)+
2 2 2 𝑒 − ⇋ 𝐻𝑔0 𝑚𝑒𝑡á𝑙𝑖𝑐𝑜 + 𝐶𝑙 −
Estos electrodos proporcionan potenciales constantes, por

lo que se emplean frecuentemente como electrodo de
referencia para la medición de pH.
Electrodo de plata/cloruro de plata

Consiste en una varilla de plata (Ag), recubierta con cloruro
de plata (AgCl) e introducida en una disolución de cloruro
(Cl-)
𝐴𝑔𝐶𝑙 (𝑠)+ 𝑒 − ⇋ 𝐴𝑔0 𝑚𝑒𝑡á𝑙𝑖𝑐𝑜 + 𝐶𝑙 −
Estos electrodos proporcionan potenciales muy constantes,

por lo que se emplean frecuentemente como electrodo de
referencia para la medición de pH.
Resumen
• Definición de Técnicas Electroanalíticas.

• Tipos de técnicas electroanalíticas.
• Potenciometría
• Potenciometría indirecta y directa
• Células electroquímicas
• Ánodo, cátado, electrodo.
• Métodos potenciométricos.
• Clasificación de Electrodos:
Referencia (hidrógeno, calomelano, plata/cloruro de
plata),
Tema 2. Potenciometría y electrodos

indicadores

Diciembre, 2021

Temática:
• Clasificación de electrodos indicadores:
Electrodo metálico
Electrodo de membrana o electrodo selectivo de iones.
Electrodo sensible a moléculas
Repaso
Electrodo
Material conductor que, situado en el seno de una
sustancia electrolítica, presenta un cierto potencial
respecto a dicho electrolito.
Uno de los electrodos tiene mayor facilidad para

oxidarse, es decir, para liberar electrones, mientras
que el otro electrodo los captará con mayor facilidad,
lo que da lugar al proceso de reducción.
Tipos de electrodos
Las células electroquímicas se construyen de forma que una de
las semicélulas contiene un electrodo de referencia, con un
potencial de referencia conocido.
La otra semicélula contiene el electrolito cuya concentración se

quiere conocer y su electrodo, el electrodo indicador debe ser
de una composición que permita que se produzca una
reacción de oxido-reducción en la que participe este electrolito
y así determine la concentración del compuesto estudiado.
Funciones:
Proporcionan el potencial de referencia, conocido y estable

que se compara con el de la disolución desconocida que se
desea medir.
La función de los electrodos de referencia es proporcionar un

potencial constante ante el que se han de poder medir las
variaciones del potencial debidas al electrodo indicador.
Criterios para la selección de electrodos
de referencia
• La fuerza iónica del electrolito debe ser muy superior a
la de la muestra que se va a medir.
• No debe reaccionar con la muestra.
• No debe contaminar la muestra, por lo que no debe

contener el ión que se va a medir.
Tipos de electrodos de referencia
• Electrodo de hidrógeno
• Electrodo de calomelanos
• Electrodo de plata/cloruro de plata
Consideraciones de los electrodos
indicadores
Electrodos Indicadores
Junto con el electrodo de referencia, en la células electroquímicas
se utiliza un electrodo indicador, cuya respuesta depende de la
concentración del analito que se quiere conocer.
Los electrodos indicadores para medidas potenciométricas son

principalmente:
Electrodos metálicos
Electrodos de membrana
• Electrodos metálicos
Están formados por un metal inmerso en una disolución que contiene
sus propios iones.
El potencial de un electrodo metálico surge de la tendencia de una

reacción óxido-reducción a producirse en la superficie de un
electrodo.
Electrodos de primera especie

Utilizados para cuantificar el catión proveniente del metal con el
que está construido el electrodo.
Ag, Cu, Hg, Pb, Cd presentan reacciones redox reversibles por lo

que son adecuados para la fabricación de electrodos.
Electrodos de segunda especie

Cuando un electrodo metálico de primera especie se utiliza para
medir la actividad de un anión con el que su ión forma un
precipitado o un complejo estable.
El electrodo de Hg0 se emplea para medir la actividad del anión del

etilendiamitetraacetato (EDTA).
Electrodos de tercera especie

Se utiliza para determinar un catión distinto al suyo.
El electrodo de Hg permite determinar las concentraciones de Ca y

otros iones de metales alacalinotérreos.
• Electrodos de membrana o electrodos selectivos de

iones
Potencial de membrana (Definición)

Diferencias de potencial que se establecen entre los dos lados de
una membrana selectiva para un catión y un anión determinado.
Una membrana selectiva para ciertos iones contiene elementos

químicos que son capaces de enlazar selectivamente con el ión
para el cual la membrana es selectiva.

iones
Está constituido por una membrana que responde selectivamente a

un determinado ión y que está en contacto por una parte, con una
disolución del ión a determinar y por otra parte, generalmente con
una disolución del mismo (a una actividad fija) la cual está a su vez
en contacto con un electrodo de referencia.

iones
Son ideales para la medición por su selectividad hacia unos

determinados iones en disolución, por lo que no contaminan la
muestra y no se ven afectados por la turbidez o color de la
disolución.

iones
La mayor dificultad en algunos casos está en encontrar una

interfase (membrana) cuya composición favorezca selectivamente
un tipo de ión sobre los demás.

iones
Electrodo de membrana de vidrio

Fabricados de vidrio de dióxido de silicio y diversos óxidos metálicos.
Según la composición del vidrio de la membrana, se obtienen

diferentes selectividades catiónicas, por lo que obtienen vidrios
especiales permeables a iones como: H+, Na+, K+, Li+, Cs+, Ag+ y
Amonio (NH4+)

iones
Electrodo de membrana de vidrio

Este proceso de intercambio involucra casi exclusivamente a los
cationes monovalentes del vidrio puesto que los cationes
divalentes y trivalentes están fuertemente enlazados en la
estructura del silicato del vidrio.

iones
Electrodo de membrana sólida

Estos electrodos sustituyen la membrana de vidrio por una
membrana iónicamente conductora que puede ser homogénea, es
decir, formada por cristales simples o bien heterogénea, en la cual
una sustancia activa es precipitada en una matriz polimérica inerte.
Tanto los cristales como la matriz polimérica contienen una sal poco
soluble del anión que se quiere determinar.

iones
Electrodo de membrana sólida

Los más usados en el laboratorio clínico son los electrodos de
cristales homogéneos que pueden medir fluoruro (F-), cristal de
fluoruro de lantano (LaF3), cloruro (Cl-), cristal de cloruro de plata
(AgCl), bromuro (Br-), cristal de bromuro de plata (AgBr), sulfuro
(S2-), cristal de sulfuro de plata (Ag2S) y seleniuro (Se2-), cristal de
seleniuro cúprico (CuSe).
Electrodos de cambio de iones o de membrana líquida
Electrodo de membrana líquida

La membrana líquida de estos electrodos está formada por una
sustancia activa, un transportador selectivo (responsable de la
selectividad de la membrana a un determinado ión), disuelta en un
disolvente inmiscible en agua que evita que sus componentes sean
arrastrado a la muestra.

La disolución se coloca en el interior de una membrana de
naturaleza coloidal o en una matriz porosa.
Estos electrodos contienen un electrodo de referencia interno de

Ag/AgCl una disolución interna habitualmente de KCl y una sal del
ión al cual es selectivo el electrodo

La sensibilidad y selectividad de estos electrodos depende
fundamentalmente de las características del intercambiador de
iones y del disolvente orgánico.
Son utilizados para determinar iones NO3-, Cl- o ClO4- y dureza de

agua.
Electrodos sensibles a las moléculas
Estos electrodos suelen estar compuestos de un electrodo ordinario

y una membrana adicional que aísla o produce la especie que
detecta el electrodo.
Electrodos sensibles a gases
Electrodos de membrana biocatalítica.
Electrodos sensibles a las moléculas

Son dispositivos construidos con un electrodo específico de iones y
uno de referencia sumergido en una disolución interna que está
retenida en una membrana permeable a gases.
Usados para detectar gases como dióxido de carbono (CO2), dióxido

de nitrógeno (NO2), amoniaco (NH3) o dióxido de azufre (SO2).
Resumen
Electrodos indicadores
Clasificación de electrodos indicadores:
Electrodo metálico
Primera, segunda y tercera especie
Electrodo de membrana o electrodo selectivo de iones.
Electrodos con membrana de vidrio
Electrodos de membrana sólida
Electrodo sensible a moléculas
Tema 3. Fundamentos de pH-metría

Diciembre, 2021
Aplicar las técnicas electroquímicas para la determinación

de magnitudes bioquímicas relacionadas con la oxigenación
tisular y el equilibrio ácido-base.
Temática:
• Fundamentos de pH-metría
Electrodo de vidrio para la determinación de pH
Características
Propiedades
Mantenimiento
Precauciones
Equilibrio ácido-base del organismo
Es de vital importancia para la salud de cualquier organismo.
Mantener la homeostasis de la concentración de iones hidronio en

los líquidos corporales.
Una ligera variación de la normalidad causa cambios acentuados

en el ritmo de las reacciones químicas celulares, lo que a su vez
amenaza la supervivencia.
Equilibrio ácido-base del organismo
El equilibrio ácido-base o el grado de acidez o alcalinidad de una

disolución viene definido por el pH.
pH humano: 7,35-7,45
Electrodos de vidrio para la determinación
de pH
Electrodo de vidrio para la determinación de
pH
Las mediciones de pH se realizan con un electrodo de vidrio, el
único capaz de medir la actividad iónica únicamente por medio
de la diferencia de potencial de su membrana.
Es el electrodo indicador de mayor importancia para los iones H+

por su facilidad de uso y presentar pocas interferencias que,
afectan a otros electrodos detectores de pH.
Recordar
Potencial de membrana (Definición)

Diferencias de potencial que se establecen entre los dos lados de
una membrana selectiva para un catión y un anión determinado.
Una membrana selectiva para ciertos iones contiene elementos

químicos que son capaces de enlazar selectivamente el ión para el
cual la membrana es selectiva.
pH
Está conformado por un electrodo indicador de vidrio sensible
al pH y otro electrodo de calomelanos de referencia que, se
encuentran ambos sumergidos en la disolución de pH
desconocido.
pH
Componentes
Electrodo indicador:
Una membrana de vidrio delgada en forma de bulbo fabricado de
silicato o aluminosilicato hidratado, sensible al pH, de
composición química cuidadosamente controlada, que se sella en
el extremo de un tubo de vidrio de pared gruesa.
Contiene un pequeño volumen de HCl, saturado con AgCl
pH
Componentes
-Electrodo de referencia:
Ag/AgCl
-Ambos electrodos están conectados a las terminales de un

potenciómetros (pH-metro).
Electrodo combinado para la determinación
de pH
Electrodo combinado para la determinación de
pH
Propiedades
El funcionamiento del electrodo de vidrio se basa en el intercambio

de los H+ de las disoluciones con los iones monovalentes sobre todo
Na+ y Li+.
Para que el intercambio sea efectivo es fundamental la composición

química del vidrio, que afectará a la especificidad de la membrana
hacía los iones H +.
pH-metría
de pH
Precauciones
Entre los procesos de intercambio que ocurren en ambos lados

de la membrana se produce la difusión interna a través de iones
H+ y Li+.
Estos procesos ocasionan una separación de cargas y una

diferencia de potencial conocida como potencial de asimetría.
pH
Precauciones
El progresivo deterioro de la membrana hace que la difusión de

los iones se modifique en forma diferente aumentando dicho
potencial, pero puede considerarse constante durante la medida
de pH y no se modifica sustancialmente el resultado del pH
obtenido.
pH
Precauciones
El potencial de asimetría cambia lentamente con el uso del

electrodo, a medida que el electrodo se hace más o menos
hidratado o experimenta una progresiva contaminación.
de pH
Mantenimiento
Los electrodos nuevos o almacenados en seco alcanzan sus

potenciales de equilibrio a los pocos minutos de estar
sumergidos en una disolución buffer.
Para obtener resultados más precisos se recomienda un

acondicionamiento de los electrodos previo a la realización de la
medida.
de pH
Mantenimiento
El acondicionamiento consiste en sumergir el electrodo durante

un mínimo de 1 a 2 horas en disolución acuosa, para que alcance
sus condiciones óptimas de funcionamiento.
de pH
Mantenimiento
La limpieza general de los electrodos:

Se debe sumergir el bulbo en una disolución de HCl 0,1 M o
HNO3 0,1 M durante 30 minutos.
de pH
Mantenimiento
Limpieza de impurezas de origen proteico:

Se sumerge el bulbo en una disolución al 1 % de pepsina en HCl
0,1 M durante 15 minutos.
de pH
Mantenimiento
Limpieza de impurezas de origen inorgánico:
Se sumerge el electrodo en una disolución 0,1 M de EDTA

tetrasódico durante 15 minutos.
de pH
Mantenimiento
Limpieza de grasas o aceites:
Se debe enjuagar con un detergente suave o con una disolución

metanólica.
de pH
Mantenimiento
Se debe tener especial cuidad de que la membrana no sufra

rasguños ni rajaduras por el contacto con el recipiente o algún
otro material sólido.
El electrodo se debe secar con papel absorbente, incluso la

punta sensible sin ningún problema.
Resumen
• Fundamentos de pH-metría
Electrodo de vidrio para la determinación de pH
Electrodo de vidrio combinado para la determinación de pH
Características
Propiedades
Mantenimiento
Precauciones
Tema 4. Aplicaciones de la potenciometría

Diciembre, 2021

Temática:
• Definición de pH
• Escala de pH
• Definición operacional de pH: calibrado del potenciómetro
• Errores que afectan a las mediciones de pH con electrodo de vidrio
• Aplicaciones de la potenciometría en el laboratorio clínico
Definición operacional de pH: Calibrado del
potenciómetro
pH definición
La concentración molar de H+(ac) en una disolución acuosa es
por lo común muy pequeña.
Por comodidad, la [H+] se expresa habitualmente en términos

del pH, que es el logaritmo negativo de base 10 de [H+].
𝑝𝐻 = −log[𝐻 + ]
𝑝𝐻 = −log[𝐻3 𝑂+ ]
Brown, T. L., LeMay Jr, H. E., Bursten, B. E., & Burdge, J. R. (2004). Química: la ciencia central. Pearson educación.
Pág. 621
Escala de pH
Ejemplos de pH
potenciómetro
Por las características de los electrodos de vidrio, no es posible
realizar medidas absolutas de pH.
-Instituto Nacional de Estándares y Tecnología NIST (National

Institute of Standrars and Technology).
-Unión Internacional de Química Pura y Aplicada IUPAC

(International Union of Pure and Applied Chemistry).
Recomiendan una definición operativa de pH que se basa en la

calibración directa del potenciómetro.
potenciómetro
Calibración directa
Se emplean disoluciones reguladoras (Buffer) patrones o
estándares.
Se mide el pH de la disolución problema o muestra.
Es necesario calibrar el instrumento de medida con una o dos

disoluciones estándar que poseen un pH conocido y constante,
llamadas disoluciones buffer, tampón o amortiguadoras.
potenciómetro
Paso 1
Medida del potencial de celda cuando el electrodo se sumerge
en la disolución patrón o estándar, Ecelda (patrón).
Esta medida viene dada por la siguiente ecuación:
𝐸𝑐𝑒𝑙𝑑𝑎 𝑝𝑎𝑡𝑟ó𝑛 = 𝐾 − 0,0592𝑉 𝑥 𝑝𝐻 (𝑝𝑎𝑡𝑟ó𝑛)
potenciómetro
Paso 2
Medida del potencial de celda cuando el electrodo se sumerge
en la disolución problema o muestra, Ecelda (muestra).
Esta medida viene dada por la siguiente ecuación:
𝐸𝑐𝑒𝑙𝑑𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 = 𝐾 − 0,0592𝑉 𝑥 𝑝𝐻 (𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎)
potenciómetro
Paso 3
Reordenando ambas ecuaciones, suponiendo que durante las
mediciones tanto K como la pendiente (0,0592V) permanecen
constantes, se obtiene el valor de pH (muestra) mediante la
ecuación que se adopta como definición operacional de pH a
25 °C:
𝐸𝑐𝑒𝑙𝑑𝑎 𝑝𝑎𝑡𝑟ó𝑛 − 𝐸𝑐𝑒𝑙𝑑𝑎 (𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎)
𝑝𝐻 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 = 𝑝𝐻 𝑝𝑎𝑡𝑟ó𝑛 +
0,0592𝑉
potenciómetro
En los equipos actuales los procedimientos se realizan de forma
automática y se puede elegir si la calibración se hace con una o
dos disoluciones buffer.
Cuando se sumerge el electrodo en la disolución buffer el

equipo los reconoce y determina automáticamente los
parámetros de la ecuación de la recta de calibración.
potenciómetro
En la determinación del pH es la temperatura puede modificar la
pendiente del electrodo de forma apreciable.
Para corregir esto se realiza la compensación automática de

temperatura que los instrumentos realizan de manera
automática.
Consiste en informar al analizador de pH, la temperatura a la que

se realizará la medición y el instrumento realiza automáticamente
la corrección de los valores medidos para compensar ese efecto.
Errores que afectan a las mediciones de pH
con electrodo de vidrio
El funcionamiento del electrodo de vidrio depende del
intercambio de los iones Li+ con los H+, por lo tanto lo que en
situaciones de actividades muy elevadas del ión H+ (pH bajo) o
muy bajas (pH alto) se producen errores de funcionamiento.
Error alcalino
Se produce por la elevada concentración de iones oxidrilo [-OH]
en la disolución, los cuales compiten por los sitios activos de la
membrana con los iones hidronio [H3O+] generando una pérdida
de la respuesta.
Aplicaciones de la potenciometría en el laboratorio clínico.
Analizadores automáticos de pH y gases sanguíneos
Aplicaciones de la potenciometría
Analizadores automáticos de pH y gases

sanguíneos
Son equipos que miden el pH, pCO2 y pO2 mediante electrodos
específicos y, a partir de las medidas y con algoritmos
programados, calculan diversos parámetros que son muy útiles
para clasificar y tratar las alteraciones del equilibrio ácido-base
de la sangre.

sanguíneos
Se dispone de dos clases principales de analizadores:
1. Emplean reactivos de un solo uso casetes o packs completos.
2. Emplean sistemas de cartuchos de reactivo de uso múltiple.

sanguíneos
Sistemas de cartuchos de reactivos de un solo uso
Contienen la disolución de calibración y los sensores
electroquímicos miniaturizados necesarios para las medidas
normales establecidas.
Los sensores se autocalibran, no necesitan mantenimiento y los

problemas de cóagulos quedan localizados en el casete de
reactivos.

sanguíneos
Sistemas de cartuchos de reactivos de un solo uso
https://www.siemens-healthineers.com/mx/point-of-
care/blood-gas/rapidpoint-500-systems

sanguíneos
Sistemas de cartuchos de uso múltiple
Presentan los electrodos y los reactivos en contenedores
individuales, que se sustituyen cuando se ha consumido el
reactivo o si el sensor presenta algún problema de
funcionamiento.

sanguíneos
Funcionamiento
Usar muestras con el tratamiento preanalítico adecuado.
Volumen de muestra 50-150 µL a 37 °C.

sanguíneos
Funcionamiento
Analizarlas las muestras lo antes posible evita:
Contaminación de la muestra con el aire dado que los gases

sanguíneos se equilibran con los ambientales, lo que conlleva a la
alteración de los resultados.

sanguíneos
Funcionamiento (continuación)
Analizarlas las muestras lo antes posible evita:
La producción de reacciones de oxidorreducción en la muestra

sanguínea, que origina una disminución del pO2 y un incremento
del pCO2.

sanguíneos
Calibración
La calibración de los electrodos es el proceso que ajusta su
respuesta a la de un estándar de referencia.
Los analizadores de pH y gases se calibran a 1 o 2 puntos a

intervalos frecuentes, que son programados por el usuario.

sanguíneos
Calibración de los analizadores de pH
Se calibran con disoluciones amortiguadoras de pH alto y bajo,
con cuyos valores el analizador determina la linealidad de la
medición.

sanguíneos
Calibración de los gasómetros
Los pCO2 y pO2 se calibran con gases de calibración con una
fracción volumétrica constante de O2 y CO2 y un sistema de
humidificación.

sanguíneos
A partir de las determinaciones de pH, pCO2 y pO2 se calculan
diversas magnitudes derivadas, útiles para determinar el estado
del equilibrio ácido-base de un paciente y sus alteraciones.

sanguíneos
• Concentración de bicarbonato (HCO3-, mmol/L) plasmático.
• Concentración total de CO2 en sangre.
• Exceso de base (BE). Concentración de ácido o base necesarios

para llevar la sangre a un pH de 7,40, con una pCO2 de 40 mm
Hg a 37 °C.

sanguíneos
• Exceso de base (BE-ecf) del líquido extracelular.
• Bicarbonato estándar (CO3H- st, mmol/L) para una pCO2 de 40
mm Hg.
• pH estándar (pH st) para una pCO2 de 40 mm Hg.
• Saturación de oxígeno (O2 sat., %)
• Contenido total de oxígeno (O2 cont., mmol/L)
Causas de error en las medidas de pH y
gases sanguíneos
Causas de error en las medidas de pH y gases
sanguíneos
• Problemas con la integridad de la muestra

• Alteraciones de los electrodos de medida
• Fallas en el control de la temperatura de los sistemas
sanguíneos
Alteraciones de los electrodos de medida de pH,

pCO2 y pO2
Electrodo de vidrio
En la determinación de pH el electrodo puede deshidratarse y
contaminarse con frecuencia con las proteínas de la sangre, lo que
provoca que la respuesta sea lenta y los resultados sean más bajos.
Para evitar esto, el electrodo debe limpiarse frecuentemente con

una disolución desproteinizante.
sanguíneos
Membrana del electrodo de pCO2

Se debe cambiar periódicamente, ya que con el uso se altera, se
contamina con proteínas y se hace permeable al H+.
Se debe comprobar periódicamente la disolución de electrolitos

que contiene el electrodo, por si es necesario rellenar dicha
disolución.
sanguíneos
Alteraciones de los electrodos de pO2

Presenta problemas con la membrana como consecuencia del
uso y la contaminación con proteínas.
Se debe cambiar de membrana de forma periódica.
Puede presentar pérdida de O2 por difusión cuando el

instrumento se calibra con un pO2 muy diferente a la de las
muestras, para evitar esto se debe calibrar con mezclas de gases
con presiones parciales de O2 cercanas a las de la sangre.
sanguíneos
Alteraciones de los electrodos de pO2

Puede haber formación de depósitos de plata en el cátodo, lo
que produce resultados erróneos.
Para evitar esto el electrodo de platino se debe limpiar

frecuentemente con una sustancia adecuada.
sanguíneos
Control de la temperatura
Problemas relacionados con el control de la temperatura de la
cámara de medida.
A temperaturas inferiores a 37 °C, los valores de pH serán

menores y los de pCO2 se eleven, mientras que a temperaturas
superiores a 37 °C, ocurre lo contrario.
Resumen
• Definición de pH
• Escala de pH
• Definición operacional de pH: calibrado del
potenciómetro
• Errores que afectan a las mediciones de pH con
electrodo de vidrio
• Aplicaciones de la potenciometría en el
laboratorio clínico (pH, pCO2 y PO2).

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Universidad Técnica de Manabí

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