UNIVERSIDAD MILITAR NUEVA GRANADA

RECUENTO Y CARACTERIZACIÓN DE HONGOS DEL SUELO.

MICROORGANISMOS QUE HIDROLIZAN LA MATERIA ORGÁNICA
MICROORGANISMOS SOLUBILIZADORES DE FOSFATO

Identificación:
GL-AA-F-1
Guías de Prácticas de Número de
Páginas:
Revisión No.:
Laboratorio 4
2

Fecha Emisión:
2018/01/31
Laboratorio de:

MICROBIOLOGIA AMBIENTAL
Titulo de la Práctica de Laboratorio:

RECUENTO Y CARACTERIZACIÓN DE HONGOS FILAMENTOSOS DEL

SUELO.
MICROORGANISMOS QUE HIDROLIZAN LA MATERIA ORGÁNICA
(EVALUACIÓN DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA)

Elaborado por: Revisado por: Aprobado por:

Maria Camila Patiño R

Comité de Currículo y
Autoevaluación del
Programa de Ingeniería
Ingeniería Ambiental Director del Programa de Ambiental
Docente Facultad de Ingeniería Ambiental.
Ingeniería (Campus) Campus Nueva Granada

El uso no autorizado de su contenido así como reproducción total o parcial por cualquier persona o entidad, estará en
contra de los derechos de autor
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Control de Cambios

Descripción del Cambio
Cambio de formato
Actualización de título,
objetivo, cantidades de
materiales y criterio de
evaluación.
Fecha de
Justificación del Cambio Elaboración /
Actualización
Se realizó la actualización Julio 30 de 2018
del contenido programático
a la nueva versión del
formato
GL-AA-F-1
Se adiciona la posibilidad
de estudiar muestras de
residuos vegetales. Se
cambia título de la práctica
según el alcance de la
Febrero 1 2022
metodología. Se actualiza
un objetivo y se actualizan
cantidades de materiales.
Se cambia el criterio de
evaluación de la práctica.

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1. FACULTAD O UNIDAD ACADÉMICA: Facultad de Ingeniería (Campus)

2. PROGRAMA: Ingeniería Ambiental

3. ASIGNATURA: Microbiología Ambiental

4. SEMESTRE: Quinto

5. OBJETIVOS:

1.- Determinar el recuento de hongos filamentosos a partir de muestras de suelo agrícola o

residuos vegetales.
2.- Evaluar la actividad enzimática hidrolítica de los hongos filamentosos aislados.

6. MATERIALES, REACTIVOS, INSTRUMENTOS, SOFTWARE, HARDWARE O

EQUIPOS DEL LABORATORIO:

DESCRIPCIÓN (Material,
reactivo, instrumento, software, CANTIDAD UNIDAD DE MEDIDA
hardware, equipo)
Asa micológica 1 Unidad
Asa bacteriológica 1 Unidad
Microscopio óptico 1 Unidad
Placas con PDA +cloranfenicol 4 Unidad
Paños absorbentes 1 Unidad
Alcohol 70% 500 Mililitros
Kit de coloración Gram y azul de
1 Unidad
lactofenol
Asa Drigalsky 4 Unidad
Frasco contenedor con 90 ml de
1 Unidades
solución salina estéril 0,85%
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Tubos con 9ml de ss 0,85% 6 Unidades

Pipetas de 1ml 4 Unidad
Cajas con Agar CMC 4 Cajas
Cajas con Agar Almidón 4 Cajas
Recipiente con 20ml de Lugol
1 Unidad
0,05%
Recipiente con 20ml de rojo
1 Unidad
Congo 1%
Recipiente con 20 ml de
1 Unidad
solución NaCL 0,1M
Cajas con Agar leche 4 Cajas
Pipeteador 1 Unidad
Balanza 1 Unidad

7. MATERIALES, REACTIVOS, INSTRUMENTOS, SOFTWARE, HARDWARE O

EQUIPOS DEL ESTUDIANTE:

DESCRIPCIÓN (Material,
reactivo, instrumento, software, CANTIDAD UNIDAD DE MEDIDA
hardware, equipo)
Colador Doméstico/ tamices 4 Unidad
Láminas 1 Caja
Laminillas 1 Caja

8. PRECAUCIONES CON LOS MATERIALES, REACTIVOS, INSTRUMENTOS

Y EQUIPOS A UTILIZAR:
Entrar al laboratorio en forma ordenada, dejar los bolsos, libros y otros objetos
personales en el lugar que se les indique para tal fin.
• Llevar puesta la bata de laboratorio en todo momento. La misma debe
permanecer completamente cerrada.
• Limpiar y desinfectar las superficies de trabajo, antes de comenzar y al
finalizar la sesión práctica.
• Lavar las manos con agua y jabón antes de realizar las actividades
programadas, antes de salir del laboratorio y siempre después de manejar
materiales que se sabe o se sospecha que son contaminantes.
• Trabajar cerca del mesón, adoptando una buena postura y estando
físicamente cómodo.

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• Llevar un calzado apropiado, preferiblemente cerrado y de suela

antideslizante en las áreas de laboratorio.
• Evitar llevar en el laboratorio accesorios que podrían ser fuente de
contaminación (por ejemplo: joyas).
• Recoger el cabello largo.
• Evitar desplazamientos innecesarios, movimientos bruscos. Hablar sólo lo
indispensable.
• No comer, beber, fumar, almacenar comida, objetos personales o utensilios,
aplicarse cosméticos ni ponerse o quitarse lentes de contacto en ningún área
del laboratorio.
• Conocer el manejo de todos los equipos y reactivos a emplear antes de iniciar
las actividades indicadas en la práctica. Si usted tiene alguna duda, diríjase al
profesor.
• Mantener el área de trabajo ordenada, libre de libros, cuadernos u objetos
personales, exceptuando aquellos equipos y materiales necesarios para la
realización del trabajo práctico.
• Tener cuidado con el alcohol cuando manipule el mechero. Nunca debe dejar
éste desatendido.
• Regresar los reactivos y equipos empleados (microscopio, mechero, etc.),
limpios y de manera ordenada a su respectivo lugar una vez finalizada la
actividad. Reporte cualquier daño de los mismos al profesor.
• Colocar los materiales de vidrio contaminados en los recipientes dispuestos
para tal fin.
• No usar ningún reactivo que no esté debidamente identificado, verificar las
etiquetas de los mismos y estar seguro de cómo emplearlo.
• No devolver sustancias a sus envases originales.
• Emplear la propipeta al medir líquidos. Está rigurosamente prohibido pipetear
con la boca. De igual manera las pipetas tendrán tapones de algodón para
reducir la contaminación de estos dispositivos de pipeteo.
• Realizar solamente aquellas actividades indicadas por el profesor, no llevar a
cabo experimentos no autorizados.
• Reportar inmediatamente cualquier accidente al profesor (derrame de material
contaminado, heridas, quemaduras, etc.), ninguno puede ser catalogado como
menor.

9. PROCEDIMIENTO, MÉTODO O ACTIVIDADES:

9.1. RECUENTO DE HONGOS DEL SUELO POR LA TECNICA DE DILUCIÓN:

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Tome 10g de muestra de suelo y agréguela al frasco que tiene 90ml de solución
salina al 0,85% estéril para generar una dilución de 10 -1, tome 1 ml de esa solución
y agréguela al tubo que tiene 9ml de solución salina al 0,85% estéril para generar
una dilución de 10-2, realice el mismo procedimiento hasta llegar a la dilución 10 -6.
Tome 0,1ml de las diluciones 10 -5 y 10-6 y siembre por duplicado en superficie con
ayuda del asa de Drigalsky o rastrillo en agar PDA suplementado con
cloranfenicol. Incube a 25°C por 7 días. Reporte el recuento de UFC/g de suelo.
Realizar caracterización macroscópica y microscópica de las colonias obtenidas.
Análisis de poblaciones de hongos y bacterias.

9.2 MICROORGANISMOS QUE HIDROLIZAN LA MATERIA ORGÁNICA:

a.- Microorganismos Celuliticos:

Pese 10 g de muestra de suelo agrícola o residuos vegetales y realice diluciones
seriadas hasta 10-5, siembre por superficie 0.1ml de las diluciones 10- 4 y 10-5 por
duplicado en el medio de cultivo agar CMC. Incube a 25ºC por 7 días, luego
realice recuento de las colonias que muestran halos de hidrólisis, para esto
adicione a las cajas el agente revelador solución de rojo congo al 1% durante 15
minutos, luego retire el exceso y adicione solución de NaCl a 0.1M a las cajas
durante otros 15 minutos. Observe las colonias que muestran halos de hidrólisis
que indican la presencia de microorganismos celuliticos y haga el recuento.

b.- Microorganismos Amilolíticos:

Utilizando las diluciones realizadas para los microorganismos celuliticos siembre
las mismas diluciones en el medio de cultivo Agar almidon por duplicado. Incube a
25 ºC por 7 días, luego realice el recuento de las colonias que muestran halos de
hidrólisis, para esto adicione a las cajas el agente revelador que es el lugol al
0.05% durante dos minutos. Observe las colonias que muestran los halos de
hidrólisis que indican la presencia de microrganismos amiloliticos y haga el
recuento.

c.- Microorganismos Proteoliticos:

Utilizando las diluciones realizadas para los microorganismos celuliticos, siembre
las mismas diluciones en el medio de cultivo Agar leche por duplicado. Incube a
25ºC por 7 días, luego realice recuento de las colonias que muestran halos de
hidrolisis, se observaran de color transparente.

10. RESULTADOS ESPERADOS:

Que los estudiantes logren determinar el recuento de hongos filamentosos a partir
de muestras de suelo agrícola.
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MICROORGANISMOS SOLUBILIZADORES DE FOSFATO

Que los estudiantes evidenciar la actividad hidrolítica de hongos filamentosos

aislados a partir de diversas muestras de suelo (celulolítica, amilolítica,
proteolítica).

11. CRITERIO DE EVALUACIÓN A LA PRESENTE PRÁCTICA:

Informe.

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