Taller experimental:

Propiedades eléctricas y mecánicas del corazón de batracio in situ

Objetivos del taller

1. Estudio del comportamiento erétrico del corazón de batracio in situ

2. Estudio del comportamiento mecánico del corazón de batracio in situ
3. Evidenciar el origen de las ondas registradas mediante la formulación de una
hipótesis y su correspondiente corroboración
4. Efectos farmacológicos sobre el sistema nervioso autónomo (simpático y
parasimpático)

El modelo de animal utilizado es la rana toro o también llamada rana catesbeiana, un

anfibio.

Las propiedades eléctricas a tener en cuenta a la hora de evaluar las respuestas

eléctricas son:
➢ Automatismo
➢ Conductividad
➢ Excitabilidad

Las propiedades mecánicas que posee el corazón son:

➢ Contractibilidad
➢ Distensibilidad

La función cardiaca se encuentra regulada por el sistema nervioso autónomo,

mediante sus componentes simpático y parasimpático. Estos emplean diferentes
neurotransmisores en la sinapsis entre la neurona posganglionar y el órgano efector,
causando diferentes efectos sobre este último.

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Simpático
Su neurotransmisor involucrado es la noradrenalina, la cual causa efectos ionotrópicos
y cronotrópicos positivos sobre el miocardio.

Parasimpático
Involucra al neurotransmisor acetilcolina que actúa en el corazón mediante la
activación de receptores muscarínicos tipo Beta 2 y causa efectos ionotrópicos y
cronotrópicos negativos, opuesto al sistema nervioso simpático.

Definiciones:
Por efecto ionotrópico positivo se entiende que hay un aumento de contractibilidad,
aumento de tensión, inducida por una mayor liberación de calcio intracelular y
entrada de calcio extracelular a causa de la fosforilación de los canales de calcio tipo
L y el receptor de radianodinaPor el contrario, los efectos ionotrópicos negativos
causan los efectos opuestos.

El cronotropismo se refiere al tiempo, en este caso, un efecto cronotrópico positivo es

aquel que ocasiona un aumento de frecuencia cardiaca, mientras que un efecto
cronotrópico negativo la disminuye.

Ventajas características del preparado biológico de un anfibio:

➢ Son animales heterotermos, por lo cual son capaces de adaptar su
temperatura al ambiente, esto implica que el experimentador no necesite controlar la
variable de dicha magnitud, facilitando el estudio de la estructura.
➢ Su metabolismo también es capaz de adaptarse al medio en el cual se
encuentra, por lo cual tampoco es necesario controlar otras variables como la
osmolaridad, oxigenación, pH, etc.

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➢ Son animales que poseen respiración pulmonar y cutánea, lo que ocasiona
que el tejido del animal posmortem no se deteriore fácilmente, y pueda mantenerse
en condiciones biológicas por un tiempo de hasta 24 horas a causa de su
oxigenación.

Estrategia de experimentación: hay una destrucción del neuroeje del animal,

destruyendo la medula y el cerebro, constatando la muerte del animal. Se expone el
corazón y vasos principales, tras la disección de la pared anterior del tórax, y se coloca
en decúbito dorsal.
Con una experimentación de tipo “in situ” se estudia una estructura dentro del animal
a estudiar.

Dispositivo experimental

1 – Amplificador (ECG)
2 – Registro del EMG (electromiograma) evalúa la actividad muscular
3 – Transductor de tensión
4 – Amplificador
5 – Conversor
6 – Digitalización mediante la adquisición de la señal y el almacenamiento de la
misma en un dispositivo portátil (PC).

La amplificación sirve para aumentar el tamaño de la señal registrada para una mejor
evaluación de los registros, pero a su vez permite una mejor resolución.

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El conversor análogo digital tiene un rango establecido en el cual tiene un buen
funcionamiento. Si la señal es muy chica o muy grande, no podrá establecer bien los
trazados y en la computadora (digitalización) no quedarán bien.
La digitalización lo que permite es una mejor secuencia temporal de la señal,
permitiendo almacenar la información y estudiarla en cualquier momento luego del
experimento.

Registros
➢ Electrocardiograma. Es un ANALOGO, NO es un electrocardiograma
propiamente dicho pero se compara con el mismo. Al igual que el corazón humano,
se registran señales extracelulares de los diferentes despolarizaciones de los
componentes anatomicos del corazón: ventrículo (único en este caso), aurículas, y
seno venoso que contiene al nodo sinusal y AV. Cabe destacar que hay que tener en
cuenta los ejes eléctricos.
➢ Electromiograma (no invasivo): colocación de placas directamente sobre el
corazón. Está unido al transductor de tensión mediante un hilo.
➢ Traductor de tensión (invasivo, daña el tejido o preparado): se punza el
corazón desde el ápex. Al agregar un peso, el corazón que está agarrado de dicho
transductor la siente, hay un cambio en la resistencia y el voltaje total varía. Esto sirve
para sacar el factor de conversión.

Registro previo a la disección del tórax

Previo a la obtención de registros se necesita establecer una determinada calibración

en el dispositivo experimental, con magnitudes y valores conocidos. En este caso, el
sistema de registro se calibra en la figura q con un pulso de 1 mV y G1 es negativo con
respecto a G2

Al ser G1 negativo con respecto a G2, este último es mayor que el primero, por lo cual
se registra una deflexión negativa que lleva hacia los -1 mV.

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Si G2 fuera negativa con respecto a G1, la deflexión sería positiva.

La calibración brinda tanto información cualitativa como cuantitativa importante a la

hora de estudiar un registro.

Cuantitativa ya que somos capaces de extraer valores casi exactos y controlarlos, y

cuantitativa ya que al ver una deflexión hacia arriba o abajo, podemos deducir la
posición de los electrodos de registro y sus valores aproximados con respecto al otro.

Figura 2: Registro de tensión

➢ El agregado de pesas causa un aumento de tensión, que se ve en el registro

como deflexiones positivas
➢ Al retirar las pesas mencionadas hay una disminución de la tensión aplicada al
tejido miocárdico que causa deflexiones negativas en el registro

Registro electrográfico basal

Los electrodos se colocan en la raíz de los miembros anteriores,

estando G2 a la derecha del animal, pero a la izquierda del
observador.

En el registro se observan ondas características del registro,

señales que podemos clasificar en 3 tipos de ondas que
corresponden al ventrículo, aurículas y al seno venoso, que contiene al nodo sinusal.

En este caso, al comprobarse la existencia de un registro eléctrico obtenido mediante

la colocación de electrodos, se comprueba la excitabilidad del material, uno de los
componentes eléctricos.

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De forma aproximada, podemos ilustrar las ondas obtenidas en el registro y se
representan debajo de forma esquemática.

➢ La onda de mayor amplitud corresponde a la despolarización ventricular. El

ventrículo, al tener más espesor, por su mayor cantidad de masa miocárdica, queda
registrado en forma prominente en la señal eléctrica.
➢ Las aurículas tienen una pared delgada, siendo más pequeñas que el ventrículo
y corresponden a la onda del medio, de menor amplitud que la ventricular pero mayor
que la del nodo Sa
➢ La despolarización del nodo SA es la primera en el registro, de menor amplitud,
debido al tamaño de la cámara en la cual se encuentra (seno venoso).

La polaridad de las ondas varía de acuerdo a la posición de los electrodos de registro.

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La amplitud de la onda depende del tamaño de las cámaras que contengan y del
espesor de la pared, siendo directamente proporcional a las mismas.

Características Onda sinusal Onda auricular Onda ventricular

Amplitud baja media alta
Número de fases Una fase trifásica bifásica
Polaridad negativa Positiva y Predominantemente
negativa positiva

En el caso de que se cambie la posición de los electrodos de

registro, y la configuración quede de la forma esquematizada a la
derecha, HABRÁ UNA INVERSIÓN DE LA POLARIDAD. Por lo tanto,
las ondas esquematizadas arriba quedarán invertidas.

Esto se debe a que G1 es mayor que G2, quedando este último

negativo.

5.g) En este caso, se cambia la disposición de los electrodos de

modo que G2 se mantiene en su lugar, pero G1 se coloca a nivel
de la pelvis del animal.
El eje eléctrico medio se considera que apunta hacia la izquierda
y abajo, por lo tanto, el eje se proyecta de forma digamos
“óptima” sobre DII, que en este caso es la derivación que se
encuentra entre G2 y G1.
Esto ocasionará un aumento de la amplitud de la onda de las
ondas de registro, pero principalmente observaremos una mayor señal registrada en la
onda perteneciente al ventrículo.

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Luego de que se efectuó la disección de la pared anterior del torax, con la
correspondiente disección esternal y pericárdica, se obtienen registros diferentes.
Esto se ocasiona porque:
➢ No hay un gran control de las maniobras
➢ Al retirar el pericardio que es un aislante la señal puede registrarse “mejor”, se
obtendrán registros más amplios
➢ Hay una maniobra invasiva que modifica las características de la conducción
del registro del análogo del ECG, y el corazón ya no está aislado dentro del
tórax.

Entonces, los registros obtenidos tienen las mismas características que el último
esquema, solo que aumenta la amplitud de la señal, principalmente, la ventricular.
Registro mecánico
Que exista un registro mecánico en este caso nos permite comprobar la existencia de
las propiedades mecánicas de la estructura estudiada, siendo estas la distensibiliadad
y contractibilidad.

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En la figura 7 se ilustran los registros eléctricos y mecánicos en forma simultánea, lo que
nos permite corroborar el origen de las ondas.

En el registro eléctrico se ven cambios considerables en cuanto a la señal proveniente

de cada componente anatómico del corazón de batracio.

Para someter a dicho órgano a tensión, se emplea una técnica invasiva, en la cual se
engancha al ápex y se ata, realizando entonces un giro de 180 grados el corazón, es
decir, quedando al revés, con el ápex que iría hacia arriba, para abajo.
➢ Dicha maniobra causa un cambio del eje eléctrico medio por la diferente
morfología El ventrículo queda hacia arriba y la resultante sobre el eje eléctrico
medio es nulo (90 grados) o insignificante.
➢ Los electrodos se colocan directamente sobre las aurículas, lo que causa que la
señal registrada en ellas sea de mayor amplitud

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 Las ondas ilustradas a la derecha corresponden:
➢ 1 es la onda de tensión auricular
➢ 2 es la onda de tensión ventricular

Maniobras farmacológicas
La finalidad de estas es ver la reacción cardiaca ante la administración de diferentes
fármacos capaces de regular la modulación del sistema nervioso autónomo.

En el primer caso, se administra acetilcolina. Como sabemos, la acetilcolina es el

neurotransmisor involucrado en la sinapsis parasimpática, y como se mencionó
anteriormente, causa efectos ionotrópicos y cronotrópicos negativos.

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 ➢ Vemos una disminución de la amplitud de la señal y con una disminución de
frecuencia en el trazado superior.
➢ En el trazado inferior que representa la tensión también hay un efecto, la tensión
disminuye, y la frecuencia en la que se registran estas señales también.

Después de la realización de la maniobra anterior se supone que hay un lavado para

retirar el neurotransmisor involucrado del medio, y luego se administra noradrenalina,
que se encuentra presente en la sinapsis simpática con el órgano efector.

Se explicó en clase que en realidad se trabajó con un único preparado y no fue

posible retirar la acetilcolina totalmente del medio, por lo tanto, los trazados ilustrados
superiormente no son en concreto una respuesta registrada exclusivamente por la
presencia de noradrenalina.
Pese a esto, tenemos que saber que la noradrenalina causa, como se dijo, efectos
ionotropicos y cronotrópicos positivos, aumenta la frecuencia cardiaca, la tensión pico
desarrollada, la cantidad de calcio que ingresa a la célula y sale del retículo
sarcoplásmico del miocito, etc.

La última maniobra farmacológica consistió en la aplicación de atropina

La atropina es un bloqueante de acetilcolina, ya que bloquea los receptores
muscarínicos tipo 2 sobre los que actúa.

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Entonces, si hay acetilcolina en el medio, la atropina causa efectos positivos en la
señal, ya que eliminará la acción parasimpática. Esto lleva a un aumento de tensión,
de frecuencia, de amplitud, etc.

Claramente en el registro podemos evidenciar que había presente acetilcolina, cosa

que no debió pasar pero se utilizó un único animal de experimentación. Luego de la
aplicación de atropina, se observan cambios significativos que nos llevan a dicha
conclusión.

➢ Los aumentos de tensión aluden a una mayor contractibilidad y relajación

muscular.

Ligaduras de Stannius

En el órgano de experimentación se aplican ligaduras en lugares específicos para asi

evidenciar la capacidad de conducción del mismo.

Stannius clasificó tres tipos de ligaduras

➢ 1er ligadura: entre el seno coronario y la aurícula

➢ 2da ligadura: entre la aurícula y el ventrículo
➢ 3er ligadura: ambas ligaduras anteriores juntas

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Se obtuvo un registro que ilustra las señales producidas por el corazón del batracio
antes y después de que se lo sometiera a las maniobras mencionadas.

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Posligadura vemos
Una disminución de la amplitud en la señal eléctrica
Una disminución de tensión
Una disminución de frecuencia
En el electrocardiograma se pierde la onda de mayor amplitud, correspondiente a la
onda ventricular (1er ligadura).

En la tercer ligadura (1era + 2da) se pierde la onda auricular y ventricular, quedando

en el electro solamente la señal proveniente del seno venoso (nodo SA) y en el
registro de tensión únicamente la tensión causada por dicha estructura.

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Se compruieba entonces que si se suprime la conducción por parte de las ligaduras,
va a haber un cese de la contratibilidad miocárdica.
➢ Dependiendo de la ligadura aplicada se verán afectados distintos
componentes.

10- Registro electromiográfico in vitro

Se procede a la extracción del corazón del tórax de la rana y se coloca en una caja
de Petri con contenido de suero fisiológico.
Al sacar al órgano de su cavidad y realizar un registro electromiográfico esperamos
que haya algún tipo de señal registrada debido a que una de nuestras hipótesis es
que el corazón presenta automatismo, esto implica que tenga la capacidad de
producir potenciales espontáneos.

Efectivamente, en el registro comprobamos la existencia de actividad eléctrica

cardiaca pese a que se extirpó el corazón. Las señales son de amplitud baja y de
poca frecuencia, pero igualmente hay actividad.

➢ Con estas maniobras lo que se comprobó entonces es una de las propiedades

eléctricas, que el corazón presenta automatismo

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