UNIVERSIDAD NACIONAL DE ASUNCIÓN

Facultad de Ciencias Químicas

Catedra: Toxicología

Marcha analítica para análisis toxicológico según sean

sustancias volátiles, orgánicas o inorgánicas
Bioq. Eva Coronel, MSc.
SISTEMÁTICAS ANALÍTICAS - TOXICOLÓGICAS

Que hacer cuando no

sabemos el agente
causal de la
intoxicación?
CLASIFICACIÓN DE LOS TÓXICOS CONFORME A LOS
PROCEDIMIENTOS DE ANÁLISIS

• Tóxicos separados en • Sistemática para gases y

forma de gas o de vapor vapores.
(volátiles). SISTEMÁTICAS
• Sistemática para tóxicos
ANALÍTICAS
• Tóxicos inorgánicos. inorgánicos.
TOXICOLÓGICAS
• Tóxicos orgánicos • Sistemática para tóxicos
orgánicos
CLASIFICACIÓN DE LOS TÓXICOS CONFORME A LOS
PROCEDIMIENTOS DE ANÁLISIS
CLASIFICACIÓN DE LOS TÓXICOS CONFORME A LOS
PROCEDIMIENTOS DE ANÁLISIS
SISTEMÁTICAS PARA GASES Y VAPORES
Espacio cabeza
Una parte de la muestra en un
vial, cerrarlo con tapón
perforable, termostatizar el
vial a 60°C y extraer, con
jeringa para gases, una toma
de los vapores de la parte
superior del frasco.
Para: alcohol en sangre o en
bebidas, hidrocarburos en
muestras biológicas, incluso
vísceras.
Micro extracción en
fase sólida (SPME)
Una jeringa cuyo émbolo se
prolonga por una fibra de sílice
cubierta de una resina capaz de
retener a compuestos gaseosos y
volátiles, cuando se hace salir por
la aguja al ambiente donde se
mantiene unos minutos, y
posteriormente se desorbe en el
bloque de inyección de un
cromatógrafo.
Para: anfetaminas y sus
metabolitos por CG o HPLC
SISTEMÁTICAS PARA GASES Y VAPORES

Puede seguirse la siguiente sistemática general para tóxicos separables, en forma gaseosa, concretamente, para los
iones: CN–, S=, As3– , AS5–, P5–, y elementos Aso y Po.
Algodón impregnado con
Primera fase acetato de plomo

Corriente de aire o
nitrógeno Si en la muestra había fósforo
amarillo o arsénico, aparecerá una
mancha oscura en el papel.

Si no apareció coloración alguna, se

aborda la segunda fase.

Papel de filtro bañado en disolución de

sulfato ferroso (para el cianuro), o de
30 min, 60-80°C nitrato de plata o de cloruro mercúrico
(para As y P)
SISTEMÁTICAS PARA GASES Y VAPORES

Segunda fase
Algodón impregnado con
acetato de plomo
Si en la muestra hubiera algún sulfuro,
o materia en putrefacción, el SH 2
Corriente de aire o desprendido será retenido por el
nitrógeno acetato de plomo, que adquirirá color
negro Aparato de Jacob Marsh

ácido sulfúrico diluido

Si hubiera un arseniuro o un fosfuro, los

iones As 3 – o P 3 – oscurecerán el nitrato de
plata (la mancha del As3– puede ser rojiza).

En tal caso se retirarían el

Papel de filtro bañado en disolución de papel o el líquido colector
sulfato ferroso (para el cianuro), o de
30 min, 60-80°C nitrato de plata o de cloruro mercúrico para los ensayos
(para As y P) específicos.
SISTEMÁTICAS PARA GASES Y VAPORES
Puede efectuarse determinación
Segunda fase colorimétrica cuantitativa si se recoge el gas
en disolución de barbitúrico en piridina o
Hidróxido sódico cloroformo.

Corriente de aire o Secar

nitrógeno

Azul Turnbull de ferrocianuro ferroso

ácido sulfúrico diluido

Se deja secar

Papel de filtro bañado en disolución de
sulfato ferroso para el cianuro
30 min, 60-80°C
Si en ninguno de los
ensayos anteriores se obtuvo
resultado, o si de todas
formas se desea, se pasa a la
tercera fase.
SISTEMÁTICAS PARA GASES Y VAPORES

Tercera fase

Corriente de aire o
nitrógeno Éste reducirá a As3–o P3– cualquier
arseniato o fosfato

ácido sulfúrico diluido

Granallas de zinc Si hubiera un arseniuro o un fosfuro, los

iones As 3 – o P 3 – oscurecerán el nitrato de
H2 plata (la mancha del As3– puede ser rojiza).

30 min, 60-80°C
SISTEMÁTICAS PARA TÓXICOS INORGÁNICOS

• Vía seca
Mineralización
• Vía húmeda

• Marcha de cationes
Fraccionamiento • Marcha de aniones
• Contramuestra
SISTEMÁTICAS PARA TÓXICOS INORGÁNICOS

Vía seca Vía húmeda

Drástica oxidación de la materia orgánica, bien a presión atmosférica
o a sobrepresión, en vasija cerrada. Repetir hasta
obtener liquido
Hasta casi amarillento
sequedad y
mas HNO3
HNO3:H2O
1:1 Iones se H2SO4 hasta
oxidan a As3- casi
Cubre con HNO3
o P3- sequedad
Tto ácido

Agua oxigenada o de ácido

Adolece de la posibilidad de pérdidas de
elementos volátiles (As, Hg, Pb) a las altas
temperaturas que se alcanzan.
En ocasiones no es necesario mineralizar, sino que es suficiente
perclórico termina la
con desproteinizar, lo que se consigue con un ácido fuerte como
decoloración y permite
clorhídrico, tricloroacético o nítrico y posterior separación de
los restos por centrifugación o por ultrafiltración con
disponer de un líquido
claro después de filtrar.
membranas con poros de tamaño apropiado.
SISTEMÁTICAS PARA TÓXICOS INORGÁNICOS

Las disoluciones referidas, la orina o las aguas de distinta procedencia suelen presentar aún dos
inconvenientes que es preciso subsanar para tener éxito en el análisis:
- En primer lugar, frecuentemente contienen impurezas que interfieren la determinación
- Segundo lugar, la concentración de los metales es tan baja en ocasiones, que no alcanza los
límites de detección o de cuantificación de las técnicas instrumentales.

- Preconcentración -Especiación -Técnicas instrumentales

 SISTEMÁTICAS PARA TÓXICOS INORGÁNICOS

Se forman quelatos con reactivos orgánicos como

ditizona, dietilditiocarbamato,
dibenzilditiocarbamato, pirrolidinditiocarbamato

Son extraíbles por disolventes orgánicos como

cloroformo, diclorometano, metilisobutilcetona, etc.

El extracto orgánico se evapora hasta sequedad, y el

residuo se redisuelve en etanol.
Pre concentración
Permite incrementar la proporción del analito en la
muestra o en el extracto.
Esta nueva disolución concentrada puede ser
redigerida con ácido nítrico, seguido de agua
oxigenada, antes de someterla al análisis instrumental
 SISTEMÁTICAS PARA TÓXICOS INORGÁNICOS

Especiación

Al final de los procesos mencionados el metal estará libre, y en la forma iónica de grado
de oxidación más alto (mayor valencia).
Sabemos que, en general, los metales y metaloides (no-metales) en su forma metálica o
elemental son poco tóxicos, ya que la toxicidad es cualidad variable entre sus distintas
formas o especies químicas; es decir, que más que la cantidad global del elemento
interesa definir la composición de las moléculas (especie química) en que participa el
metal, lo que se denomina especiación.
SISTEMÁTICAS PARA TÓXICOS INORGÁNICOS
Especiación

Para poder
estudiarlos se
utilizan
 SISTEMÁTICAS PARA TÓXICOS ORGÁNICOS

E) Identificación:
• Técnicas instrumentales.
• Confirmación identidad.
D) Ensayos previos
• Cuantificación.
• Detección
C) Fraccionamiento
del extracto, para
B) Purificación del grupos
extracto Hidrólisis y digestiones
• Ácidos
• Básicos
En las muestras biológicas los xenobióticos y sus metabolitos
A) Extracción pueden encontrarse unidos a las grasas y proteínas celulares, o
• Neutros
• con disolvente apolar en forma de transporte unidos a las proteínas plasmáticas, o
• con etanol bien disueltos en el plasma y líquidos intra y extracelulares,
tanto en forma libre como en forma de conjugados
SISTEMÁTICAS PARA TÓXICOS ORGÁNICOS
Fase A) Extracción
Líquido-
líquido
Muestra líquida: agua,
orina, plasma, suero,
sangre desproteinizada,
etc.
Se agita en un embudo de
decantación,o se trata en
un extractor continuo
líquido-líquido, en
caliente, con el disolvente
orgánico apropiado
Líquido- Sólido-
sólido líquido
Muestra liquida: agua,
orina, plasma, suero, Muestra sólida: alimentos,
sangre desproteinizada, vísceras, etc.
etc.
L a m u e s t r a Se somete a la acción
prolongada del disolvente,
homogeneizada líquida, al
generalmente a la
pH conveniente, por una
temperatura de ebullición,
columna cromatográfica
por calentamiento a
con relleno sólido, y
reflujo o en un extractor
después de lavar, se
de Sohxlet
reextrae con el disolvente
SISTEMÁTICAS PARA TÓXICOS ORGÁNICOS
Fase A) Extracción

“Lo similar disuelve

a lo similar”
 SISTEMÁTICAS PARA TÓXICOS ORGÁNICOS
Fase A) Extracción

- Con disolvente apolar: para hidrocarburos, organohalogenados, órgano-

fosforados, sustancias cannábicas, ect.
- Con disolventes polar: principalmente con alcohol con reflujo y previa
acidificación.
- Extracción con columnas: distintas técnicas cromatográficas como de
padsorción, de partición,intercambio ionico, selectiva molecular, quirales.
 SISTEMÁTICAS PARA TÓXICOS ORGÁNICOS
Fase B) Purificación del extracto

- De origen animal (vísceras, cerebro, hígado): elevado contenido

de grasas, proteínas como albumina y pigmentos.
- De origen vegetal: pigmentos y grasas

Para subsanarlas se utilizan técnicas

como:

- Precipitación de albuminas - Coagulación de albuminas -Técnicas cromatográficas

- Reparto diferencial -Digestión enzimática
 SISTEMÁTICAS PARA TÓXICOS ORGÁNICOS
Fase B) Purificación del extracto

Precitación Coagulación Cromatografía Reparto diferencial Digestión enzimática

• Sulfato amónico. Disminuye
el rendimiento para tóxicos
ácidos y neutros.
• Tungstato sódico. Disminuye
el rendimiento de bases.
• Ácido tricloroacético, al 10
por 100.
• Cloruro de aluminio. Da
bajos rendimientos con
ácidos
• Con etanol
• Se concentra y luego se
agrega etanol.
• Se refrigera y luego se filtra.
• Al liquido se le vuelve
agregar etanol y se repite
elproceso.
• Por ultimo se redisuelve con
agua y acido sulfurico.
• Cromatografía de columna
de florisil (silicato magnésico
activado), silicagel, alúmina
(óxido alumínico).
• Cromatografía sobre papel o
sobre capa de silicagel.
• Cromatografía gaseosa
preparativa
• Técnicas basadas en el
reparto diferencial en
• mezclas de disolventes,
como agua-hexano,
aguaacetonitrilo- hexano, etc
proteolítica
• El tejido homogeneizado
con de tampón Tris a pH 10,5
se le adicionan con de
tripsina o proteasa
subtilisina
• Luego proteinasa K,.
• se incuba 50°C
• varias horas a
 SISTEMÁTICAS PARA TÓXICOS ORGÁNICOS
Fase C) Fraccionamiento del extracto

Objetivos:

1) Separar tóxicos que estuvieran conjuntamente presentes

2) Identificar al toxico por características grupales si posteriormente detectamos la

presencia de una sustancia en una de las fracciones

 SISTEMÁTICAS PARA TÓXICOS ORGÁNICOS
Fase C) Fraccionamiento del extracto
Procedimiento de Stas, modificado por Otto y Ogier

Ácidas: ácido salicílico,

barbitúricos, pirazolona, Hidróxido amónico o
clordiazepóxido) bicarbonato sódico
Neutras: carbamatos

Básicos: como los alcaloides,

bases de amonio, fenotiazinas,
benzodiazepinas, anfetaminas,
etc.
 SISTEMÁTICAS PARA TÓXICOS ORGÁNICOS
Fases D y E) Detección. Identificación. Confirmación. Cuantificación

Cuantificación
Calculo de la
Confirmación concentración
Comprobación del comparando la
Identificación resultado por otro intensidad de
Comparando las método señal con un
Detección señales con un patrón
Hallazgo de patrón
sustancia extraña
 SISTEMÁTICAS PARA TÓXICOS ORGÁNICOS
Fases D y E) Detección. Identificación. Confirmación. Cuantificación
Las técnicas analíticas disponibles pueden dividirse en dos grupos:

a) Técnicas orientativas, que sirven sólo de tamizado (screening), como son

los inmunoensayos, espectrofotometría ultravioleta-visible, cromatografía
sobre papel o en capa fina, etc. Con los resultados proporcionados por ellas, jamás debería un analista
emitir un informe.

b) Técnicas confirmativas, que comprueban el anterior resultado, o lo

obtienen directamente, pues poseen mayor capacidad de discriminación y seguridad.
Determinaciones mediante instrumentos

• Permiten detectar trazas de elementos, como metales

Espectrométricas pesados, en muestras biológicas
• Ej.: AAS, ICP, MS

• Para determinar AT de naturaleza orgánica

Cromatográficos • Ej. CG/MS; CG/MS/MS; HPLC/MS; HPLC/MS/MS,
CL/ICP-MS.

• Electrogravimetría como electrodeposición (As, Sb, Hg)

Técnicas eléctricas • Conductimetría (iones en agua potable),
o electrométricas • Reacciones sobre electrodos
Características de las principales técnicas analíticas instrumentales
Características de las principales técnicas analíticas instrumentales
Bibliografía