Métodos de análisis de drogas 105

CAPITULO VI. MÉTODOS DE ANÁLISIS DE

DROGAS.
6.1 INTRODUCCIÓN.

A escala mundial, las drogas y los preparados Fitoterapéuticos obtenidos

a partir de ellas, ocupan un lugar importante dentro del comercio de
medicamentos, y debido a ello, se ha enfatizado en la necesidad de
garantizar su control de calidad con aplicación de técnicas modernas y el
uso de patrones adecuados.

En diversas Farmacopeas se describen métodos de ensayos generales

para evaluar o valorar las drogas oficiales. La Organización Mundial de la
Salud ha recomendado la realización de monografías y la implantación de
normas o especificaciones de calidad, basadas en la experiencia de cada
país, para aquellas drogas no incluidas en las Farmacopeas y que son
ampliamente utilizadas en Medicina Tradicional.

Evaluar o valorar las drogas vegetales significa, identificarlas y determinar

su calidad y pureza, lo cual se traduce en su valor intrínseco, o lo que es
lo mismo, en la cantidad de principios activos presentes en ella.

En este capítulo expondremos los aspectos teóricos de algunos de los

métodos generales empleados en el análisis de droga.

6.2 SELECCIÓN DE LAS MUESTRAS A EVALUAR.

La confiabilidad del resultado obtenido en el análisis de una muestra,

depende de la selección que se haya realizado de la misma.

Debido a las características específicas de las drogas, en particular, su

poca homogeneidad, se requiere de procedimientos especiales de
manipulación relacionados con la toma de muestras.

La toma de la muestra para análisis puede realizarse de la siguiente

forma:

Si el lote de la droga, está integrado por 5 ó menos sacos o paquetes, se

inspeccionan todos. Si éste está formado por más de 5 paquetes (entre 6
y 50), se inspeccionan al azar 5 de ellos. Si fuera mayor de 50 paquetes,
se escogerán aleatoriamente el 10% de ellos.
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Una vez determinado el número de sacos o paquetes a inspeccionar, se

toman tres muestras de cada uno, (de la parte superior, media e inferior),
mezclándose bien todas las muestras para lograr la mayor homogeneidad.

La muestra mezclada se divide en cuatro partes, formando un cuadrado y

se seleccionan las de dos lados opuestos, las cuales se vuelven a mezclar
bien, repitiendo el proceso cuantas veces sea necesario, hasta obtener la
cantidad de muestra para los ensayos. A ésta se le denomina “Muestra
Promedio”, y es representativa del lote a analizar.

Si durante la inspección y toma de muestras se detecta deterioro en algún

saco o paquete, éste debe ser analizado independientemente.

Con la “Muestra Promedio” se llevan a cabo los ensayos de calidad,

dentro de los cuales se encuentran: Métodos de percepción, físico-
químicos y químicos, que pueden llegar hasta el aislamiento y purificación
de los principios activos.

6.3 DETERMINACIÓN DE MATERIAS EXTRAÑAS.

Se entiende por materias extrañas, aquellas partes de la droga que no

corresponden a las exigencias que señala la monografía en cuanto a
color, tamaño, estado y grado de pulverización, mezclas de otras partes
de la planta o de otras plantas, polvo, arena, piedra y otras sustancias
minerales.

Las drogas deben estar libres de organismos patógenos y de

microorganismos, insectos y cualquier otra contaminación animal,
incluyendo excretas. No deben presentar olores anormales,
decoloraciones o algún signo de deterioro.

Durante la cosecha de la droga, deben ser removidas las partículas de

polvo, tierra, arena etc., y después de la recolección, las drogas pueden
ser sometidas a lavado y desinfección.

El almacenamiento debe realizarse en lugares higiénicos para evitar la

contaminación, tomándose especial cuidado ante la presencia de hongos,
ya que ellos pueden ser productores de aflatoxinas.

Los límites para las materias extrañas, se establecen en la monografías o

especificaciones de calidad de cada droga en particular.
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La presencia de cualquier otro contaminante, en especial animal o

microbiano, o el no cumplimiento de los parámetros establecidos para la
droga, hace que la misma sea declarada NO APTA PARA EL CONSUMO.

6.4 DETERMINACIÓN DE MICROORGANISMOS.

Las drogas normalmente transportan bacterias y tierra del suelo. Un gran

número de bacterias y hongos de la naturaleza aparecen en la microflora
de las drogas, siendo predominantes las esporas aeróbicas. La práctica de
cosechas, manipulación y producción son también causas adicionales de
contaminación y crecimiento microbiano.

Adicionalmente la presencia de aflatoxinas provocadas por hongos se

consideran contaminantes altamente peligrosos en una droga.

Los límites establecidos para la contaminación microbiana están de

acuerdo al uso que se le va ha dar al material y al material en si mismo.

a) Contaminación de “drogas crudas” que se emplearán en procesos

posteriores (incluyendo descontaminación adicional por un proceso físico o
químico):

Los límites son dados para drogas no tratadas, cosechados bajo

condiciones higiénicas aceptables.

por gramo máximo 104 Escherichia coli

máximo 105 Tierra vegetal

b) Drogas que serán pretratadas, (elaboración de infusiones y

decocciones), o se usarán en forma tópica.

por gramo máximo 107 bacterias aeróbicas

máximo 103 Sacharomycetes e Hyphomycetes
máximo 102 Escherichia coli
máximo 104 otras enterobacterias
NO SALMONELLA

c) drogas para uso interno

por gramo máximo 105 bacterias aeróbicas

máximo 103 Sacharomycetes e Hyphomycetes
máximo 101 Escherichia coli
máximo 103 otras enterobacterias
NO SALMONELLA
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6.5 EXAMEN VISUAL E INSPECCIÓN MICROSCÓPICA.

Las drogas son categorizadas atendiendo a sus características

sensoriales, macroscópicas y microscópicas. De ahí que la mayor
información acerca de su identidad, pureza y calidad pueden darse de
estas observaciones.

La inspección visual (Características sensoriales y macroscópicas), está

basada en la forma, tamaño, color, características superficiales, texturas y
fracturas. Este no puede considerarse como un ensayo definitorio, ya que
en caso de adulteraciones con otras drogas de características similares
suelen llegarse a resultados erróneos y es necesario la aplicación de los
métodos microscópicos y físico-químicos para poder llegar a resultados
concluyentes.

La evaluación microscópica de las drogas es indispensable para su

identificación pudiendo emplearse reactivos químicos para lograr una
mayor información y visualización de los tejidos. Este ensayo
aisladamente, no puede siempre llegar a una completa identificación,
aunque utilizado en asociación con otros métodos analíticos ofrece un
soporte incalculable.

La comparación con materiales de referencia puede revelar características

no descritas en las especificaciones de las drogas.

6.6 DETERMINACIÓN DE CENIZAS.

Se entiende por cenizas, el residuo que queda después de la ignición de

una droga, y se determina por tres métodos diferentes: Cenizas totales,
ácido-insolubles y solubles en agua.

Las cenizas totales permiten determinar la cantidad de material

remanente después de la ignición: “Cenizas fisiológicas”, Derivados de los
tejidos de la planta y “Cenizas no fisiológicas”, que son el residuo después
de la ignición de la materia extraña (Polvo, arena, tierra, etc.), adherida a
la superficie de la droga.

Las cenizas ácido-insolubles son los residuos después de la ebullición

de las cenizas totales con ácido clorhídrico diluido. Esta determinación
mide la presencia de sílica, especialmente de arena y tierra silícea.

Las cenizas solubles en agua son calculadas por diferencia en peso

entre las cenizas totales y el residuo remanente después del tratamiento
de las cenizas totales con agua.
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Cuando los valores obtenidos para las cenizas totales son elevados
(5%), es necesario conocer si las mismas están compuestas por metales
pesados, lo cual se determina mediante los ensayos de cenizas insolubles,
y si este resultado es elevado hay que someter la droga a otros análisis
antes de aprobar su uso.

6.7 DETERMINACIÓN DE ARSÉNICO Y METALES PESADOS.

La presencia en las drogas de arsénico y metales pesados, puede ser

atribuida a muchas causas, entre las cuales se citan la contaminación
ambiental y los residuos de pesticidas. La contaminación con trazas de
arsénico se debe fundamentalmente, al tratamiento de las plantas con
ciertos pesticidas, estando los límites permisibles en términos de g de
arsénico por gramo de droga.

Para cadmio y plomo, cuya presencia se atribuye fundamentalmente a

contaminación de los suelos por desechos industriales, las cantidades
máximas permitidas están en el orden de 10 ppm y 0,3 ppm,
respectivamente.

6.8 DETERMINACIÓN DE AGUA (HUMEDAD RESIDUAL).

Un exceso de agua en una droga puede provocar el crecimiento

microbiano, la presencia de hongos o insectos y el deterioro, seguido de la
hidrólisis de los principios activos. Este ensayo es especialmente
importante para drogas que absorben humedad fácilmente o se deterioran
rápidamente en presencia de agua.

Los límites de agua establecidos en la Farmacopea para las drogas,

oscila entre un 8 y un 14 % con pocas excepciones, correspondiendo los
valores más altos con la humedad de cortezas, tallos y raíces.

La humedad residual o límite para la cantidad de agua, puede ser

establecida mediante el estudio de secado de la droga.

Para esta determinación puede ser empleados dos métodos:

Método azeotrópico: Mediante el cual debe obtenerse de forma directa

la cantidad de agua presente en la droga cuando ésta es destilada junto
con un solvente inmiscible tal como tolueno o xileno.

Si el solvente es anhidro, el agua puede ser absorbida por el solvente y el

resultado sería falso, por lo que se recomienda saturar el solvente con
agua, antes de usarlo.
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Pérdida por desecación: El cual determina el agua y las sustancias

volátiles ya que el método plantea el calentamiento de la droga a 100 -
105ºC ó, en una desecadora sobre pentóxido de fósforo a presión
atmosférica o reducida a temperatura ambiente por un período de tiempo
específico para cada droga.

Este método no es recomendable cuando la planta contiene aceites

esenciales u otras sustancias volátiles, para evitar el error que
introducirían éstas, en el resultado final.

6.9 DETERMINACIÓN DE SUSTANCIAS EXTRAÍBLES.

Se basa en la extracción de las sustancias solubles en agua, alcohol o

mezclas hidroalcohólicas mediante maceración y evaporación hasta
sequedad de una alícuota del extracto.

Este método determina la cantidad de principios activos en una cantidad

dada de droga, extraíble con un solvente. Se emplea para aquellas drogas
en las cuales no se dispone de un método de ensayo químico o biológico
aprobado, para determinar su composición química cuantitativa.

6.10 DETERMINACIÓN DEL ÍNDICE DE AMARGOR.

Muchas drogas empleadas como medicinales presentan un fuerte sabor

amargo; aspecto éste utilizado en terapéutica como estimulante del
apetito. Los principios amargos estimulan las secreciones del tracto
gastrointestinal y en particular del jugo gástrico.

Las sustancias amargas pueden ser determinadas químicamente, pero al

estar compuestas por dos o más constituyentes con diferentes grados de
amargor, es necesario primeramente medir el total de amargor empleando
un método biológico.

Las propiedades amargas de una droga son determinadas por

comparación del extracto de la droga a diferentes concentraciones con
una solución diluida de hidrocloruro de quinina. El valor de amargor es
expresado en términos de unidades equivalentes a la solución diluida de
quinina que contiene 1 g en 2000 mL.

Como vehículo para la extracción de la droga se emplean generalmente

agua potable, la cual se utiliza también en el lavado bucal después de
cada ensayo; no siendo necesario el uso de agua destilada ya que su
dureza no tiene una influencia marcada sobre el amargor.
 Métodos de análisis de drogas 111

La sensibilidad del amargor varía de persona a persona y en una misma

persona puede variar en diferentes momentos (después de fumar, ingerir
alimentos de sabor fuerte, etc.)

Para llevar a cabo el ensayo, el catador, (persona que está entrenada en

ensayos de este tipo), debe comenzar probando la concentración menor
de la muestra de ensayo, y transcurrido un período corto de tiempo (15
min.), después de haberse enjuagado la boca con agua potable, debe
comparar el amargor contra la concentración menor de la sustancia de
referencia (hidrocloruro de quinina).

La sensación de amargor debe ensayarse en la parte superior de la

lengua, en las partes laterales de la boca y en la parte inferior o base de la
lengua.

Si la persona no es capaz de apreciar la sensación amarga de la

concentración menor, 10,058 mg de la solución de quinina, no se
considera apta para esta determinación.

6.11 DETERMINACIÓN DEL ÍNDICE DE ESPUMA.

Esta determinación se realiza con vista a establecer la capacidad que

presentan algunas drogas de formar espuma persistente cuando una
decocción o solución acuosa se agita vigorosamente en un corto período
de tiempo.

Este ensayo es característico de compuestos de tipo saponina o de otros

que debido a sus características estructurales son capaces de disminuir la
tensión superficial del agua.

6.12 DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD HEMOLÍTICA.

Muchas drogas en especial aquellas derivadas de Caryophyllaceae,

Araliaceae, Sapindaceae, Primulaceae, y Dioscoreaceae, contienen
saponinas. La propiedad más característica de éstos compuestos es la de
causar, la ruptura o lisis de los glóbulos rojos.

La actividad hemolítica de una droga, o de un preparado que contiene

saponinas, se determina por comparación con un material de referencia o
saponina R, la cual tiene una actividad hemolítica de 1000 unidades por
gramos. Una suspensión de glóbulos rojos se mezcla con igual volumen
de una dilución seriada de la droga y se determina la menor concentración
que produce un efecto completo de hemólisis. Este ensayo se lleva a cabo
simultáneamente con el patrón de referencia.
 Métodos de análisis de drogas 112

Todos los procedimientos propuestos para determinar la actividad

hemolítica están basados en el mismo principio, pero presentan algunas
variaciones referidas a: la procedencia de los glóbulos rojos; los métodos
de preparación de la suspensión de los glóbulos rojos y del extracto de la
droga, la actividad hemolítica definida del material de referencia y el
método experimental. Con vista a obtener valores confiables, es esencial
estandarizar las condiciones experimentales y especialmente determinar la
actividad hemolítica por comparación con la saponina de referencia.

6.13 CROMATOGRAFÍA EN CAPAS DELGADAS.

La cromatografía en capa delgada es particularmente útil para la

determinación cualitativa de pequeñas cantidades de impureza. La técnica
es fácil de realizar, efectiva y emplea aparatos no costosos. Se usa con
frecuencia para evaluar drogas y sus preparaciones.

Deben establecerse las siguientes especificaciones para cada

determinación:

a) Tipo de absorbente y método de activación; sí éste último no se

menciona calentar a 110ºC por 30 min.
b) El método de preparación y la concentración de la muestra y la
solución de referencia.
c) El volumen de la solución a aplicarse en la placa.
d) La fase móvil, la temperatura de desarrollo y la distancia de
migración del solvente (fase móvil).
e) El método de secado, la temperatura y el método de detección.
f) Para el resultado obtenido observar las manchas.

- Número y posición aproximada. (o el valor Rf si es

necesario).
- Fluorescencia y/o color.

6.14 DETERMINACIONES CUANTITATIVAS.

6.14.1 DETERMINACIÓN DE ACEITES VOLÁTILES.

Los aceites volátiles son caracterizados por su olor, apariencia oleosa y

facilidad de volatilizarse a temperatura ambiente. Químicamente, están
compuestos por lo general, por mezclas de diversos compuestos, entre los
cuales se encuentran los monoterpenos y sesquiterpenos, tanto los
hidrocarburos como sus derivados oxigenados, así como, algunos
compuestos aromáticos.
 Métodos de análisis de drogas 113

Para estos compuestos se emplean los términos de esencias, aceites

esenciales y aceites volátiles; siendo éste último el preferido por ser el que
mejor describe sus propiedades físicas.

Para determinar el volumen de aceite en una droga, el material es

destilado con agua y el destilado es colectado en un tubo graduado. La
porción acuosa se separa automáticamente por su insolubilidad y se
retorna al frasco de destilación. Si el aceite posee una densidad superior o
cercana a la del agua, o son difíciles de separar de la fase acuosa, dada la
formación de emulsiones, se emplea para su separación un solvente
orgánico de baja densidad y punto de ebullición bajo.

6.14.2 DETERMINACIÓN DE TANINOS.

Los taninos (o sustancias tánicas), son sustancias capaces de cambiar la

piel en cuero por enlazamiento con las proteínas formando sustancias
insolubles en agua, las cuales son resistentes a los enzimas proteolílicas.
Este proceso cuando se aplica a tejidos vivos es conocido como acción
terapéutica de los taninos.

Químicamente son sustancias complejas, usualmente aparecen como

mezcla de polifenoles que son muy difíciles de separar y cristalizar. Son
fácilmente oxidados y polimerizados en solución, y si esto ocurre, se
disminuye su efecto astringente y son de bajo valor terapéutico.

El ensayo se realiza a una solución acuosa o decocción de la droga,

determinando la presencia de estos compuestos por comparación con un
estándar de referencia.

Los análisis de las drogas no están restringidos a los métodos discutidos

en el presente capítulo y pueden ser usados además, otros muchos
métodos y técnicas de alta resolución, para ofrecer mayores detalles sobre
las drogas y sus constituyentes.

BIBLIOGRAFÍA.

1. WHO. “Quality Control Methods of Medicinal Plant Material”.

WHO/Pharm 92 559. USP. XXII, 1990.
2. Ministerio de Salud Pública. NRSP 309, Métodos de análisis de
drogas.1992.