Anticuerpos de clase IgE contra Alergenos Específicos

Instrucción de la Prueba EUROLINE Pediátrico

Nº ORDEN ANTICUERPOS CLASE IgG SUSTRATO FORMATO

CONTRA
DP 3110-1601E Alergenos IgE Tiras de Prueba
Pediátricos cubiertos con 16 x 01 (16)
alergenos

Indicaciones: Reacciones alérgicas.

Principio de la Prueba: El kit de prueba EUROLINE provee un ensayo in vitro

Semicuantitativo para anticuerpos IgE humanos contra alergenos específicos. El equipo de
porueba contiene tiras de prueba cubiertas con lineas paralelas de 27 extractos de diferentes
alergenos. Las tiras de prueba se humedecen con el suero del paciente y se incuban en el
primer paso de la reaccion. Si las muestras son positivas, anticuerpos especificos de clase
IgE se uniran a los alergenos. Para detectar los anticuerpos unidos, una segunda incubacion
es llevada a cabo usando una Anti-IgE humana monoclonal marcada con enzima
(conjugado enzimatico) que es capaz de promover una reaccion de color.

Contenido del kit de Prueba:

- Tiras de prueba cubiertos con los alergenos: 16 tiras de prueba

- Conjugado enzimatico; Anti-IgE humana (raton) marcada con fosfatasa alcalina:
1x20 ml, lista para usar
- Buffer concentrado: 1x100 ml de un concentrado 10x, el que da 1 litro de buffer
universal listo para usar (buffer de muestra y buffer de lavado)
- Solucion Cromogeno / Sustrato: 1x30 ml, listo para usar, Cromogeno: azul de
nitrotetrazoliocloro / 5-bromo-4-cloro-3-indolilfosfato (NBT/BCIP)
- Protocolo de evaluacion
- Lamina de Plastico
- Soporte de Incubacion: 2x8 canales
- Instrucciones de la prueba

Almacenamiento y Estabilidad: El kit de prueba debe ser almacenado a una temperatura

entre +2ºC a +8ºC. No congelar. Sin abrir, todos los componentes del kit de prueba son
estables hasta la fecha de vencimiento indicada.

Notras sobre el uso: Use solo componentes con un numero de lote identico.

Advertencia: Todos los materiales deben tratarse como si fueran de riesgo de infeccion
potencial y deben manejarse con cuidado. Algunos de los reactivos contienen agentes
toxicos. Evite el contacto con la piel. Si ocurriera contacto con la piel, lave con javon y
agua suficiente.
Desecho de los remanentes: los sobrantes del sustrato deben desecharse luego de la
incubacion. Una hoja de seguridad apropiada con las instrucciones de la disposición de
desechos esta disponible en EUROIMMUN.

Preparación de los Reactivos

Nota: Todos los componentes deben haber alcanzado la temperatura ambiente antes de ser
usados.

Tiras de Prueba Cubiertas: Listas para usar. Abrir el embalaje de las tiras de prueba solo
cuando hayan alcanzado temperatura ambiente para prevenir condensación sobre las tiras.

Después retire las tiras requeridas, el embalaje debe sellarse firmemente y el kit de
preraracion del buffer universal, se debe tomar la cantidad requerida de la botella usando
una pipeta limpia y debe prepararse una dilucion 1:10 con agua deionisada o destilada. Por
ejemplo, diluya 1.5 ml de buffer con 13.5 ml para una tira de prueba. El buffer diluido es
estable por un maximo de una semana entre +2ºC a +8ºC. NOTA: Si ocurre cristalizacion
en el buffer concentrado calentarlo a 37ºC y mezclar bien antes de la dilucion.

Conjugado enzimatico: El conjugado anti-IgE humano esta listo para usar. Mezcle bien
antes de usarlo.

Solucion de Cromogeno/Sustrato. Isto para usar. Cerrar la botella inmediatamente después

de su uso, ya que los componentes son sensibles a la luz.

Preparación de Muestras

Las muestras de suero o ploasma para el analisis son usadazas sin diluir.

Alternativamente los sueros pueden ser diluidos 1:11 con el buffer universal (deben
agregarse 100 ul de suero a 1.0 ml de buffer universal) e incubar durante la noche.

Incubacion

Bloqueo: retirar el numero requerido de tiras de prueba del sobre y ponga cada uno en un
acnal. Llene el numero apropiado de canales en el soporte de incubacion, dependiendo del
nuemro de sueros a ser analizados, con 1.0 ml de buffer universal. El numero en la tira de
prueba debe ser visible. Incube durante 5 minutos a temperatura ambiente sobre un
agitador. Después retira aspirando todo el liquido.

Incubacion del Suero (1er paso): llene cada canal con 1.0 ml de muestra de suero e incube a
temperatura ambiente durante 60 minutos en un agitador.
(Alternativamente sueros diluidos 1:11 pueden incubarse durante toda la noche a
temperatura ambiente sobre un agitador. Cubra la bandeja de incubacion para prevenir la
evaporación)

Lavado: Aspire el liquido de cada canal y lave 3 veces por 5 minutos cada vez con 1.0 ml
de buffer universal en un agitador.

Incubacion del conjugado (2do Paso): Pipetear 1.0 ml de conjugado enzimático (Anti-IgE
humano conjugado con fosfatasa alcalina, monoclonal) dentro de cada canal e incubar
durante 60 minutos a temperatura ambiente en un agitador.

Lavado: Aspire el liquido de cada canal y lave 3 veces por 5 minutos cada vez con 1.0 ml
de buffer universal en un agitador.

Incubacion del Cromogeno / Sustrato (3er paso): Pipetear 1.0 ml de la solucion de

cromogeno / sustrato en cada canal. Incubar durante 10 minutos a temperatura ambiente en
un agitador.

Parada: Aspirar el liquido de cada canal y lavar cada tira 3 veces con agua deionisada o
destilada.

Nota: Si se usa un sistema de incubacion automatizado, el volumen de incubacion puede ser

aumentado a 1.5 ml dependiendo del volumen de canal de la bandeja de incubacion usada.

Evaluación e Interpretación de los Resultados del

EUROLINE Pediátrico

Manipulación: Luego de la incubación, colocar las tiras en los espacio indicados de la hoja
del protocolo de evaluación, de manera que las areas de membrana esten alineados con las
tiras impresas en el protocolo de evaluación. Las tiras se unirán a la lámina en el protocolo
y no podran ser retiradas o movidas mas. En la tira de evaluacion impresa cada posición de
banda corresponde a un alergeno y puede compararse a las tiras de prueba incubadas. Los
resultados pueden llenarse en la tabla correspondiente. Para almacenar las tiras por largo
tiempo pueden cubrirse con la lamina de plastico adhesiva provista.

Hay tres bandas indicadoras sobre la tira. La incubacion fue realizada correctamente si las
reacciones de color de grados diferentes son visibles en estas bandas (positivo bajo,
positivo moderado y positivo alto).

Las tiras de prueba incluyen los siguientes alergenos:

 Posicion Abreviatura Alergeno
1 Gx Mezcla de grasses (g6/g12)
2 t3 Abedul (y otros tipos de pino)
3 w6 Artemisa (hierba mala)
4 d1 Dermatophagoides pteronisinus (ácaro)
5 d2 Dermatophagoides farinae (ácaro)
6 e1 Gato
7 e2 Perro
8 e3 Caballo
9 m1 Cladiosporum herbarum
10 m2 Aspergilus fumigatus
11 m2 Alternaria alternata
12 f1 Clara de huevo
13 f75 Yema de huevo
14 f3 Bacalao (y otras carnes de pescado)
15 f2 Leche
16 F76 α-lactoalbúmina
17 F77 β-lactoglobulina
18 F78 Caseína
19 E204 Albúmina sérica bovina
20 f4 Harina de trigo
21 f9 Arroz
22 f14 Soya
23 f13 Maní
24 f17 Avellana
25 f31 Zanahoria
26 f35 Papa
27 f49 Manzana
a ln1 Banda indicadora 1
b ln2 Banda Indicadora 2
c ln3 Banda Indicadora 3

Interpretación de Resultados:

Para evaluar los signos, se debe tener en consideración las posiciones de banda e intensidad
de coloracion. Comparando la tiras de prueba incubadas con las tiras de evaluacion
impresas, se pueden identificar los alergenos conra los cuales hay anticuerpos de tipo IgE
presentes. Algunos sueros producen una coloración de fondo más oscura, si en la posición
del alergeno vemos una banda blanca la prueba tiene que ser interpretada como negativa
(Atención: pueden confundirse bandas blancas sobre un fondo oscuro con bandas usuales
sobre un fondo claro). Una evacuación semi cuantitativa de estas bandas es posible por
comparación de la señal con las bandas indicadoras. La señal puede ser dividida en 6
clases, las cuales pueden ser identificadas con el software EuroLineScan:

Clase Concentración en kU/l Interpretación

0 < 0.35 No se detectaron anticuerpos específicos

1 0.35 - 0.7 Reacción muy débil, sensibilización

existente frecuentemente sin sintomas
clínicos

2 0.7 - 3.5 Reacción débil, sensibilización existente,

pueden existir síntomas clínicos
3 3.5 - 17.5 Reacción definida, los síntomas clínicos
están a menudo presentes

4 17.5 - 50 Reacción fuerte, casi siempre con

síntomas existentes

5 50 - 100 Título de IgE específica muy alto

6 > 100 Título de IgE específica muy alto

Si se utiliza el sistema de Scanner automatizado la intensidad de las bandas son

especificadas en las clases (0-6)

Significado Clinico:

Una alergia es una hipersensibilidad a substancias extrañas que son normalmente utiles
pero que producen una reaccion violenta en el individuo ue sufre la elrgia. De los tipos
diferentes de alergias el mas comun es tipo 1, que se caracteriza por el desarrllo de
anticuerpos IgE especificos. Mas del 15 % de l población en los paises industriales padece
de estos síntomas alergicos de tipo inmediato.

Las reacciones alergicas tipicas son la rinitis, comúnmente llamada fiebre del heno,
conjuntivitis y asma. Con cada exposición subsiguiente al alergeno, las reacciones alergicas
pueden ser cada vez mas severas. Si ocurre una reaccion alergica sistemica, puede ocurrir
una reaccion severa que incluso puede comprometer la vida (anafilaxis). Las alergias de
inhalación pueden ser causadas por los alergenos estacionales (polen de los arboles,
césped o cizañas) o los alergenos perennes (particulas de polvos, esporas, y la saliva y pelo
de animales domesticos.)
La Inmunoterapia ha sido establecida como un tratamiento para las alergiasde tipo 1 sin
provocar un cambio en los niveles de IgE, aunque se puede lograr una reduccion
significante de los síntomas.

Los alergenos conservados en plantas pueden causar que los anticuerpos IgE hagan
reaccion cruzada con los alergenos de plantas cercanamente realacionadas o alimentos
derivados de plantas, por lo que los pacientes sensibilizados al polen desarrollen alergias a
otro tipo de polen o a las comidas.