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Capitulo 4 Metodologia Diagnostica y Tecnica de Necropsia en Aves
Capitulo 4 Metodologia Diagnostica y Tecnica de Necropsia en Aves
Metodología diagnóstica y
técnica de necropsia en aves
METODOLOGÍA DIAGNÓSTICA Y TÉCNICA DE NECROPSIA EN AVES
Introducción
Historia clínica
Inspección clínica
Serología
Bacteriología y micología
Virología
Histopatología
Biología molecular
Literatura citada
INTRODUCCIÓN
diagnóstico.
HISTORIA CLÍNICA
INSPECCIÓN CLÍNICA
sonidos extraños, revisión de la cama, equipo, medio ambiente de la caseta (figura 1).
Estado de hidratación.
traspatio y puede llevarse a cabo en aves de compañía y ornato tomado en cuenta las
cinco a diez aves enfermas, elegidas por presentar los signos clínicos representativos
del padecimiento actual. La necropsia tiene como finalidad observar los cambios
La eutanasia debe ser lo menos traumatizante posible para no hacer sufrir a las
MATERIAL Y MÉTODOS
granja también puede llevarse a cabo siempre y cuando haya manera de evitar la
contaminación del sitio en el que se realiza, colocando los cadáveres por ejemplo en
una charola o bolsas de material adsorbente con objeto de poder desechar la totalidad
MATERIAL
Se puede utilizar una charola grande de acero inoxidable o bien realizar la necropsia
en una mesa de material que sea lavable y puedan trabajarse y recolectarse los
órganos, sobre ésta mesa se pueden colocar periódicos o bolsas de alimento los
cuales sirven para absorber los líquidos y sangre que se liberen. Son igualmente
necesarios jeringas y tubos para tomar muestras de sangre, un par de tijeras para
descuartizar aves, unas tijeras de disección de punta roma, 2 pinzas unas con dientes
y unas sin dientes, hilo resistente para ligar los diferentes segmentos del intestino.
Frascos estériles para recolectar muestras para otros laboratorios, frascos con
de ectoparásitos.
2. Posición del animal
Colocar el ave en decúbito-dorsal, después realizar una incisión en cada uno de los
coxo-femorales (Figura 4)
Estado general
• Caquexia u obesidad
Cabeza
Coriza, Pasteurelosis,
Sinusitis
• Secreción nasal (coanas): Serosa en irritación por gases (cama con amoniaco),
rhinotracheale.
Plumaje
Estado de la Piel
éstos.
adultos.
3. Incisión
de plumas y plumones. Con las tijeras de punta roma se introducen en el pico para
lesiones:
etc.).
estado.
• Canales o carcasas muy rojas, por congestión en las septicemias por tifoidea aviar,
la tuberculosis aviar.
• Timos, 5 a 7 lóbulos muy aparentes en ambos lados del cuello en aves jóvenes. La
(figura 5).
muslos, los músculos pectorales se seccionan con las tijeras de descuartizar aves
• Sacos aéreos y serosas con depósito blancuzco de aspecto de talco: uratosis (en
gota visceral)
4. Evisceración
orofaringe. Todo los órganos abdominales son retraídos hacía la cola del ave, la
porción distal del recto es ligada y seccionada para a continuación colocar el aparato
dorsal de la cloaca, tiene forma de un pequeño saco con pliegues hacia su interior y es
de color blanco cremoso. Para su extracción de toma la bolsa de un extremo con unas
pinzas sin dientes y con unas tijeras de punta roma se secciona el tejido conectivo que
Corazón
tijeras de punta roma, hasta los pulmones para examinar el contenido y el aspecto de
pavo, ERCC.
singamosis.
Pulmones
Hígado
coligranulomas.
enfermedad de Marek.
mucosas y la ingesta.
(peritonitis asociada).
Se continua con la exploración del intestino que será abierto a todo lo largo de todo
raspado de la mucosa.
aviar.
coligranulomas, leucosis.
Los testículos son internos en las aves, además su tamaño está sujeto a las
variaciones estacionales. Ciertas aves como los palmípedos y los avestruces están
Hembra
racimo ovárico esta sujeto a la influencia hormonal por lo que, en la época de postura
pasteurelosis, tuberculosis.
• Huevos blandos, sin cascarón: coronavirosis de las ponedoras, infección del útero,
deficiencias de Ca.
Los riñones se examinan en su sitio. Si van a ser extraídos para tomar muestras ésta
debe realizarse en forma delicada, es decir, con las pinzas sin dientes se toma el
paquete vascular se realiza una pequeña tracción al mismo tiempo que se corta con
tijeras romas el tejido conectivo los nervios y otros vasos sanguíneos para que se
puedan desprender los lóbulos. En las aves el catabolismo de las proteínas culmina
con la formación de ácido úrico, sustancia insoluble la cual es eliminada por los
infecciosa (BI).
micotoxicosis agudas.
8. Órganos Hemo-Linfáticos
Timo
Se revisa su volumen
Bazo
Hipertrofia más color rojo oscuro: septicemias pero sobre todo en las salmonelosis.
Guinea.
Bolsa de Fabricio
Médula ósea
Es necesario seccionar los huesos largos en forma longitudinal para revisar la médula
ósea.
masivas como la coccidiosis o bien infestación por corucos como los Dermanyssus
9. Encéfalo
El encéfalo se extrae realizando un corte triangular con las tijeras de punta roma para
17 semanas) se utiliza una segueta , iniciando los dos primeros cortes a ambos lados
de los cóndilos occipitales dirigidos hacia los huesos periorbitales, se realiza un tercer
corte para unir los cortes anteriores; una vez hecho el corte se retira la bóveda
craneana se expone el encéfalo y con las tijeras de punta romas se cortan los nervios
El sistema nervioso debe ser sumergido lo más pronto posible en el líquido fijador
brutal en la caseta.
• Hipertrofia de los nervios periféricos: sobre todo los nervios ciáticos, lombo-sacros
causa. Este diagnóstico debe ser corroborado por lo que se requiere del diagnóstico
presenten una semiología o lesiones similares a las propias del proceso patológico
LABORATORIO
y se determine el estudio que se debe realizar así como considerar los alcances y
patológico que aqueja a la parvada, para que la información que se obtenga resulte
a las 24 horas.
II. Muestras para estudios histológicos. Al igual que en el caso anterior las
horas para evitar los cambios posmortem en los tejidos. El manejo de los
tejidos debe ser delicado y ser sumergidos en una solución de formalina al 10%
deben tener un espesor mayor de 3 mm y el volumen del fijador debe ser diez
III. Muestras para estudios virológicos. Se requiere asepsia del mismo modo que
refrigeración a 4º C.
partir de heces, cama, raspado de piel, sangre completa y suero. Las muestras
VI. Muestras para estudios toxicológicos. Las muestras que se remiten son
o descartar un diagnóstico clínico. Para que las pruebas puedan auxiliar al diagnóstico
realmente lo sea.
pasos.
estructural o funcional.
SEROLOGÍA
aves a través del estudio del suero, lo que se busca es determinar los títulos de
anticuerpos contra agentes infecciosos, vacunales o de campo. La mayoría de las
estériles, resulta conveniente que los tubos de ensayo sean colocados en posición
horizontal hasta que la sangre coagule y después desprender el coagulo sin romperlo,
el suero es liberado después de 10 minutos y debe ser tomado con otra jeringa o
jeringa, pero no deben transcurrir mas de dos horas sin procesar las muestras.
vías de aplicación de las vacunas así como las cepas empleadas. Se requiere por lo
menos de dos muestras tomadas con 1 o dos semanas de diferencia, ya que un solo
aves son:
a) Inhibición de la hemoalgutinación.
b) Aglutinación en placa.
c) ELISA.
dobles seriadas de modo que los resultados pueden expresarse como diluciones, es
decir el laboratorio reporta 1:2, 1:16, 1:256, por ejemplo, o bien pude reportar como
logaritmos 3-6 log2 . Dado que se emplean varios sueros, conviene calcular la media
Aglutinación en placa
vista. Esta prueba es muy sencilla y se utiliza como tamiz, para las parvadas, si se
ELISA
como en la ELISA competitiva no cambia de color porque los anticuerpos del suero
han ocupado los sitios con antígeno y el anticuerpo secundario esta dirigido contra otro
compañías que distribuyen las pruebas de ELISA, ambas son muy buenas, pero debe
tomarse en cuenta que cada una tiene sus escalas para la interpretación de
(ya que la intensidad de la coloración se realiza mediante este método) para cada
suero, calcula además la media geométrica, el valor máximo y mínimo así como el
coeficiente de variación (que en forma ideal no debe ser mayor de 30%) que nos
indica que tan homogéneos son lo resultados, además proporciona una gráfica en la
cual los valores obtenidos son agrupados en perfiles y la observación de esta gráfica
cuando son mezclados con anticuerpos pierden esa capacidad para infectar es decir
neutraliza una cantidad conocida de virus y por lo tanto no produce efecto citopático,
anfígeno son depositados en una matriz de gel de agar, en la cual tanto anticuerpos
como antígeno difunden, esta prueba también es conocida como doble difusión y es
Bacteriología y micología
tomados de aves recién sacrificadas que estén en las primeras fases de enfermedad y
deben ser tomados en la forma más aséptica posible. Se envían en bolsas de plástico
órganos cuya superficie fue quemada con una espátula caliente, las pinza y tijeras que
se utilizan deben ser flameadas con alcohol. También es posible el empleo de hisopos
paredes y piso son rapadas con el hisopo, lo mismo que los conductos de ventilación y
Virología
Para este tipo de estudios, las muestras tienen las mismas características que para
mientras que se prefiere el cultivo celular para adenovirus, virus de IBF, virus de
anemia infecciosa y reovirus. El embrión comercial puede ser empleado para ENC, IA,
patógenos específicos demora hasta tres semanas, por lo que en estos casos la
Histopatología
acuerdo a las lesiones que se observan se puede proponer el resto de los exámenes
de laboratorio. La muestra ideal para histopatología debe tener una parte de tejido
amortiguado, con una relación muestra: fijador de 1:10. Después de la fijación por 24
horas las muestras son tratadas con diferentes alcoholes e incluidas en bloques de
parafina a partir de los cuales se llevan a cabo cortes de 4 micras que son teñidos con
lesión, ubicación, curso y grado) y descripción de las lesiones, así como los probables
Biología molecular
caso de clínica de las aves es de particular importancia sobre todo en aquellos casos
en los que aislar o demostrar el agente es difícil o lleva mucho tiempo. Las técnicas
más utilizadas son la reacción en cadena de la polimerasa (PCR por sus siglas en
PCR
aislamiento del agente, sino que demuestra que su ácido nucleico esta en la muestra.
Virus como el de anemia infecciosa del cual ya han mencionado las dificultades de
fases:
cuales e requieren unos cuantos gramos, líquido alantoideo, sangre e inclusive heces
aislado (que servirá de molde para la amplificación), los iniciadores (que son
una enzima la Taq polimerasa (que sintetiza ADN uniendo nucleótidos a partir de los
sitios en los cuales los iniciadores han de unirse para dar inicio a la síntesis de nuevas
cadenas de ADN, los iniciadores entre otras propiedades se unen a su sitio homólogo,
es decir encuentran la secuencia del agente que se esta buscando si este esta
presente. Una vez que se han desnaturalizado las cadenas de ADN se inician 25 a 30
ciclos térmicos de tres pasos, en el primero la muestra se calienta otra vez a 94º C por
30 segundos para que las cadenas se separen, después, bajando la temperatura entre
paso, la muestra es calentada a 72º C por uno o dos minutos, temperatura en la cual
la enzima incorpora los nucleótidos a la cadena de ADN para formar nuevas cadenas.
modo que las cadenas nuevas también sirven de molde para formar mas cadenas de
interés.
Al final del proceso, a partir de una sola cadena se pueden producir millones de
copias del fragmento amplificado. Por ultimo, la visualización de los productos de PCR
se lleva a cabo cuando una pequeña parte (entre 3 y 5 microlitros) es corrida mediante
RT-PCR
La técnica de PCR amplifica fragmentos de ADN a partir del material genético aislado
pero solo puede hacerlo a partir de ADN, En el caso de los virus ARN se requiere
como molde la secuencia de ARN para sintetizar ADNc el proceso es conocido como
RT-PCR. El ADNc así obtenido puede ser amplificado en el PCR como cualquier otro
ADN.
los empleados para el ADN, existen además en el mercado soluciones de fenol que
Los virus aviares que pueden ser identificados mediante esta técnica incluyen el de la
de Fabricio.
RFLP
ingles como RFLP, esta técnica emplea las enzimas de restricción y se le conoce
también como patrones de restricción. El ADN resultado del PCR puede ser cortado
mayoría de los laboratorios permite la mejor prueba de que dos cepas son diferentes.
Para emitir un diagnóstico definitivo del proceso patológico que afecta a las aves de
una parvada, se tiene que realizar un análisis crítico de los resultados de las diferentes
clínica, los signos y los hallazgos a la necropsia. Por tanto, los conocimientos de los
aspectos clínicos y zootécnicos de las aves así como los alcances y limitaciones de las
1. Chairman HG, Arp LH, Domermuth CH and Pearson JE, editors. A laboratory
manual for the isolation and identification of avian pathogens. 2nd ed. Pensylvania:
Pathologist, 1996.
4. Saif YM, Barnes HN, Glisson Jr editors. Diseases of poultry 11th ed. Ames Iowa: