1.

Los métodos bioquímicos permiten determinar las características metabólicas de las bacterias objeto de
identificación. Algunas de estas pruebas son técnicas rápidas, ya que evalúan la presencia de una enzima
preformada y su lectura varía entre unos segundos hasta unas pocas horas. Otras pruebas requieren para su
lectura el crecimiento del microorganismo con una incubación previa de 18 a 48h; a este grupo pertenecen
la mayoría de las pruebas que detectan componentes metabólicos o aquellas que determinan la sensibilidad
de un microorganismo a una sustancia dada tras cultivo en medios de identificación que contienen el
sustrato a metabolizar. No obstante, algunas de estas pruebas pueden realizarse de forma rápida tras
incubación de unas 2-6h; en general, se trata de reacciones enzimáticas cromogénicas o pruebas
convencionales modificadas (hay discos o tabletas comercializados con substratos cromogénicos para uso
individualizado).

2. leucina aminopeptidasa (LAP)

3. Descarboxilasas
Reducción de nitratos
Catalasa
Hidrolisis de la esculina

4.

 Catalasa

es un enzima presente en la mayoría de los microorganismos que poseen citocromos. Las bacterias que sintetizan
catalasa hidrolizan el peróxido de hidrógeno en agua y oxigeno gaseoso que se libera en forma de burbujas. El
principal objetivo de esta prueba es separar Micrococacceae (positiva) de Streptococcus spp. y Enterococcus spp.
(negativa).

Procedimiento: Se coloca una gota de H2O2 al 3% sobre un portaobjetos y luego se transfiere una porción de colonia
sobre el H2O2 realizándose una emulsión. En lo posible debe tomarse la colonia a partir de un medio sin sangre ya
que los eritrocitos tienen actividad de catalasa y pueden falsear los resultados.

 Oxidasa

Esta prueba sirve para determinar la presencia de enzimas oxidasas. La reacción de la oxidasa se debe a la presencia
de un sistema citocromooxidasa que activa la oxidación del citocromo el cual es reducido por el oxígeno molecular
produciéndose agua o peróxido de hidrogeno según la especie bacteriana. El oxígeno actúa por tanto como aceptor
final de electrones en la cadena transportadora de electrones. Por lo general, el sistema citocromooxidasa solo se
encuentra en las bacterias aerobias, algunas anaerobias facultativas y, excepcionalmente, en alguna microaerufila
(Vibrio fetus), pero las bacterias anaerobias estrictas carecen de actividad oxidasa.

 Prueba de CAMP

Se basa en que los estreptococos del grupo B producen un factor llamado CAMP (factor de monofosfato de adenina
cíclica) que aumenta la zona de hemólisis producida por un estafilococo productor de ßlisina.

Procedimiento: Se realiza estriando un cultivo de estreptococo ß-hemolítico en forma perpendicular a una estría de
un estafilococo productor de ß-lisina en agar sangre. Se incuba 18-24 horas a 37ºC.
  Voges-ProskauerIndol

El IMViC es una prueba utilizada en microbiología para la identificación de bacterias. Se compone de cuatro pruebas:
Indol, Rojo de metilo, Voges-Proskauer y Citrato. El resultado de este test se expresa mediante símbolos de positivo
o negativo (+ o -) según el resultado de cada prueba, siguiendo siempre el orden establecido por las iniciales del
método.

 Hierro tres azucare

Esta prueba se recomienda para la identificación de patógenos entéricos gram negativos. Se emplea para
detectar la fermentación de lactosa, sacarosa y glucosa, con formación de ácido y gas, y también para
detectar producción de ácido sulfhídrico.
PROCEDIMIENTO
Realice una punción en el taco y una estría en el bisel. Incube a 35°C. Observar a las 18-24 horas, ni menos ni
más.
MEDIO DE CULTIVO
Agar TSI (Triple Sugar Iron)

 Hierro lisina
El agar LIA (Lisina Hierro) es una prueba bioquímica utilizada para la identificación de bacterias de la familia
Enterobacteriaceae. Originalmente esta prueba era un caldo que contenía peptonas, extracto de levadura,
glucosa, L-lisina, púrpura de bromocresol y agua destilada. Edwards y Fife le agregaron agar-agar, citrato
férrico de amonio y tiosulfato sódico.
La prueba consiste básicamente en demostrar la presencia de la enzima lisina descarboxilasa, capaz de
reaccionar con el grupo carboxilo del aminoácido L-lisina. También puede ocurrir una desaminación del
aminoácido por la presencia de la enzima lisina desaminasa.
Adicionalmente, la composición del medio permite evidenciar la capacidad de algunos géneros bacterianos
de producir sulfuro de hidrógeno. Finalmente, también es posible observar la generación o no de gas en el
medio.
 Oxido-Fermentacion
Es una prueba que indica del tipo de metabolismo energético: respiratorio (O) o fermentador (F). Se suele
utilizar glucosa como sustrato. Se detecta la acumulación de ácidos con un indicador ácido-base (azul de
bromotimol). La bacteria se inocula con el hilo recto (por picadura ) y se incuba en condiciones de aerobiosis
(sin parafina) y de anaerobiosis (con parafina, tubo cerrado), simultáneamente.

Las bacterias que respiran aerobiamente crecen en la superficie del medio del tubo abierto. Transforman la
glucosa en CO2, la superficie del medio se verá ligeramente amarilla (por la formación de ácido carbónico
originado al reaccionar el CO2 con el agua del medio). En el tubo cerrado el cultivo se mantiene azul-
verdoso. Las bacterias fermentadoras producen ácidos a partir de la glucosa. Viran el cultivo del tubo
cerrado a amarillo; en el tubo abierto se inicia el viraje en el fondo, pero transcurridas 24 horas los ácidos
pueden difundir por todo el medio virándolo a amarillo.
Se utiliza Parafina estéril y Medio de Hugh-Leifson con glucosa(1% )