MICROSCOPIO

El microscopio nos permite observar estructuras complejas de dimensión muy

pequeña.

Hay diferentes microscopios, dependiendo de la muestra y lo que queramos observar

elegiremos el microscopio.

Microscopio de campo claro.

Este microscopio es el más usado en histotecnología. Nos permite aumentar la imagen

de la muestras hasta 100 veces (objetivo 100x).

Podemos dividir el microscopio en componentes.

Componentes

Óptico Lumínicos Mecánicos

Ópticos.

Aquí podremos encontrar 2 compontes, los objetivos insertados en el revólver y

el o los oculares dependiendo si son monocular (1 ocular) o binocular (2 oculares).

Objetivos

Revolver

Se observa 4x (rojo) ,10x (amarillo) ,60x (azul)

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El objetivo 4x nos deja tener una imagen panorámica de la muestra, este
aumento se multiplica por 10 al pasar por el ocular.

Observaremos una imagen real, aumenta he invertida de la muestra.

Los objetivo en su interior constan de lentes alienadas en serie y el tubo está

revestido de un material antirreflejo. Generalmente no toda la luz que capta la lente
es transmitida, parte de ella se refleja, lo que resta luminosidad a la imagen. Para
corregir este defecto se utiliza el sistema antirreflejo.

Estructura interna de las lentes

En la parte externa encontraremos toda la información relacionada con el

objetivo.

Distancia focal o longitud focal: Distancia que hay entre el centro de la lente y
el objeto o foco.

Aberraciones: Las aberraciones o desviaciones son los errores que presentan la

lente. Las aberraciones no se deben a defectos de construcción, sino que son una
consecuencia de las leyes de la refracción-reflexión de la luz. Hay de varios tipos.
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Pueden distinguirse el aumento de cada objetivo por la banda de color que se
aprecia en su exterior. También nos indica el medio de inmersión.

Los medios de inmersión aumentan el ángulo de apertura del objetivo y

permite mayor resolución. La apertura numérica es la capacidad de recolectar luz de
una lente. Estos siempre son los objetivos de mayor aumento.
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Oculares

Brazo

Platina

El ocular debe conducir la mayor cantidad de luz al ojo observador.

Es por esto que debe ser de pequeño tamaño acorde a la pupila para que la luz
no se disperse antes de llegar al ojo.

En general los objetivos y oculares suelen estar compuestos por varias lentes
superpuestas de manera tal que mejoran ampliamente la imagen en relación a los que
solo presentan una.

Condensador y Diafragma

El condensador funciona como lente que atrapa la mayor cantidad de luz para
dirigirla a la muestra iluminándola mejor, lo encontramos en la parte inferior de la
platina. Específicamente concentra la luz de la lámpara en un punto de la preparación.
Con el condensador encontramos el diafragma o iris que colecta los rayos luminosos
eliminando aquellos rayos muy desviados.

Condensador

Lámpara de luz
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Componentes Mecánicos

Platina

La platina es donde colocamos el preparado histológico. Esta tiene un

desplazamiento vertical que podemos regular con el micrométrico y macrométrico
para permitirnos enfocar el preparado.

También se desplaza de forma horizontal para poder recorrer la muestra.

Tubo
Brazo

Revolver

Desplazamiento horizontal

Pie
Macrométrico

Micrométrico

Poder resolución

El poder de resolución de un microscopio refiere a la distancia mínima que

puede existir entre dos puntos pequeños y cercanos.

El poder de resolución aumenta a medida que disminuye la distancia que

separa dichos puntos.
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El ojo humano tiene un poder de resolución de 0,2 milímetros, es decir puede
observar dos puntos que tengan la distancia mencionada entre ellos.

El microscopio tiene un poder de resolución de 0,2 μm (micrómetros), distancia

mínima que puede discriminar entre dos puntos muy próximos.

Entonces el microscopio es 1000 veces más potente que el ojo humano, puede
observar imágenes 1000 veces más pequeñas.

Para ello existe el límite de resolución, que es la distancia mínima que debe
existir entre dos puntos muy cercanos y que como acabamos de mencionar en el
microscopio es de 0,2 μm.

Es importante resaltar que el microscopio óptico compuesto solo permite

observar imágenes en dos dimensiones y que las muestras que observamos al
microscopio son representativas del órgano al que pertenece.

Otros tipos de microscopio

Podemos encontrar una variedad de microscopios.

Microscópico óptico compuesto.

Microscopio de fluorescencia.

Microscopio de campo oscuro.

Microscopio electrónico de transmisión y de barrido.

Microscopio de luz polarizada.

Microscopio de contraste de fase.

Solo nos concentraremos en el microscopio de óptico compuesto que ya

mencionamos, el microscopio de fluorescencia y el microscopio electrónico de
transmisión de barrido.

Microscopio de fluorescencia.

Este es de gran sensibilidad y especificidad. A través de este podemos observar

una sola especie de moléculas, su cantidad o ubicación dentro de la célula.

Este tipo de microscopio se compone de varios filtros insertos en un

microscopio óptico compuesto.

Para este tipo de microscopios la muestra será coloreada con un fluorocromo,

una molécula colorante fluorescente. Es un fenómeno de luminiscencia donde uno de
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los filtros del microscopio genera una excitación del fluorocromo dentro de la muestra
provocando la emisión de luminiscencia.

En general las muestras para este tipo de microscopio son tratadas con técnicas
de inmunohistoquimica(IHQ) y FISH (hibridación insitus con fluorescencia) a través de
la utilización de anticuerpos marcados con un fluorocromo.

Microscopio electrónico

El microscopio electrónico puede ser de barrido o de transmisión.

Ambos permiten observar detalles ínfimos como organelos, membranas etc.,

pero en este caso se observan en blanco y negro.

En ambos casos se utilizan una emisión de electrones sobre la muestra que son
excitados por una diferencia de potencial de voltios. Con este tipo de microscopio se
puede conseguir un poder de resolución de 0,1nm (1 A)
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En el caso del microscopio electrónico de transmisión se pueden observar

imágenes en 2D y en el de barrido 3D. Este último no se usa con frecuencia para
diagnostico si no para ciencia.

Imágenes obtenidas por los diferentes microscopios

A) Glomérulo renal en microscopio óptico) Neurona en microscopio de fluorescencia) Mitocondria en

microscopio electrónico de transmisión) Eritrocito en microscopio electrónico de barrido.
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https://www.fing.edu.uy/if/cursos/intr_optica/Material/optica_3.PDF

https://fido.palermo.edu/servicios_dyc/blog/docentes/trabajos/48048_191298
.p

https://www.leica-microsystems.com/es/aplicaciones/ciencias-
biologicas/fluorescencia/

https://www.bioindicacion.com/blog/que-es-microscopio-fluorescencia/

https://upcommons.upc.edu/bitstream/handle/2099/6074/Article03.pdf