UNIVUNIVERSIDAD TÉCNICA DE AMBATO

FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERÍA EN ALIMENTOS

Y BIOTECNOLOGÍA
CARRERA DE BIOTECNOLOGÍA
BIOLOGÍA MOLECULAR
Datos Informativos:

Nivel Cuarto Paralelo “B”

Docente PhD. Helena De la Torre
Ciclo académico Octubre 2021-Febrero 2022
 Cajiao Naomi
 Cazañas Juan
Integrantes
 Romero Nathaly
 Silva Bryan

EXTRACCIÓN DE DNA Y PESO MOLECULAR DE DNA

1. OBJETIVOS
a. Objetivo general
 Analizar las técnicas y reactivos empleados en la extracción genómica de muestras de
células vegetales y células animales a partir de los resultados obtenidos de la práctica
de forma casera con el fin de desarrollar habilidades y conocimiento necesario para
emplearlos en el manejo de laboratorios.
b. Objetivos específicos
 Establecer la función que tiene cada uno de los reactivos e instrumentos utilizados en
la práctica de extracción de ADN.
 Determinar las causas que afectan los resultados durante el método casero para la
extracción de ADN.

2. INTRODUCCIÓN

Los organismos eucariotas tienen características que hacen que sus células posean
similitudes, una de estas es la presencia de núcleo celular en el cual se encuentra conteniendo
el material genético de un organismo, el ADN se considera como la unidad principal de
herencia dando como resultado características tanto fenotípicas como genotípicas a una
determinada especie. El gran desarrollo de la ciencia y la basta tecnología en la actualidad, ha
contribuido al estudio de la composición a nivel microscópico de humanos, plantas y
animales lo que ha permitido el manifiesto de distintas técnicas para la extracción del ADN a
nivel de laboratorio con el fin de ampliar el conocimiento sobre la molécula de la vida
(Martínez, 2010).

Las técnicas de extracción de ADN proporcionan la posibilidad de aislamiento de

moléculas altamente puras, facilitando así su estudio, siendo esto una gran ventaja para el
desarrollo de medicamentos creados a partir del ADN o conocimiento sobre enfermedades
hereditarias o congénitas y sus posibles tratamientos. No obstante, es importante mencionar
que esta técnica es posible desarrollarla también de forma casera, debido a que los productos
de consumo diario como frutas y verduras poseen sus propios genes, mientras que los
productos de uso doméstico como, sal, alcohol, agua, jabón desempeñan las mismas
propiedades que los reactivos usados dentro de un laboratorio. Finalmente, el desarrollo de
extracción casera favorece la comprensión de la morfología del ADN a personas que lo estén
estudiando (Merino et al., 2019).

3. MATERIALES Y MÉTODOS

3.1 Materiales y reactivos

Tabla 1
Materiales, reactivos y equipos usados durante la práctica.
Materiales Reactivos Equipos Cantidades según
la extracción
 Varios vasos  Jabón líquido  Cocina o El agua solo se
(transparente para manos o microondas utiliza para la
s, altos) vajillas.  Licuadora extracción de ADN
 Agua extracción)  Mandil de fruta, media tasa
 Gaza o tela  Sal de mesa  Guantes aproximadamente.
de algodón  Ablandador  Ollas Una cucharada de
 Cedazo de carne (1 jabón para la
 Cuchara pizca, solo extracción de ADN
sopera para la de fruta y dos gotas
 Palillo chino muestra de para la muestra de
saliva) saliva. Una
 Palillo de
 Alcohol (al cucharada de sal
dientes
70% frio o para el
 Tenedor o
industrial al procedimiento en la
pinzas
96%), 200ml fruta y una pizca
 Futas (1 para la saliva.
platano ó de aproximada
4 a 5 fresas) mente.
  Muestra de
saliva (media
tasa)

Fuente: Elaboración Propia

3.2 Procedimiento experimental

Procedimiento para la extracción de ADN en una muestra de fruta

Paso 1: Se preparó una solución de lisis agregando una cucharada de sal y jabón líquido, se
agrega media taza de agua o 150ml aproximadamente, se calienta la solución a baño María
hasta que esta se entibie (2 min) o durante 30seg en el microondas.

Paso 2: Se colocó en la licuadora la fruta seleccionada hasta que se formó un puré.

Paso 3: Se tomó cinco cucharadas (75ml aproximadamente) de la fruta triturada y solución

de lisis en la misma cantidad para colocar todo en un recipiente y mezclar.

Paso 4: Por medio del cedazo y con ayuda de la tela de algodón o gaza se cernió la mezcla
separando la fase líquida.

Paso 5: Se incorporó lentamente por medio de los bordes del recipiente el cual se encontraba
inclinado el alcohol al 70% enfriado previamente, se buscó duplicar la cantidad de muestra en
fase líquida obtenida en el anterior paso.

Paso 6: Después de unos minutos de reposo se evidencia la división en dos fases de la

muestra en donde se extrajo las hebras de ADN presentes en la parte superior del vaso.

Procedimiento para la extracción de ADN en una muestra de saliva

Paso 1: Se tomó una muestra de saliva (medio vaso o 150ml) se añade 2 gotas de jabón
líquido mezclando suavemente hasta que se homogenice la muestra durante 1min.

Paso 2: Se colocó una pizca del ablandador de carne y se procedió a homogenizar.

Paso 3: Se agregó el alcohol previamente enfriado, inclinando el vaso y vertiendo el líquido

lentamente hasta que la muestra duplique su cantidad.

Paso 4: Al Se evidenció la separación en fases en dónde la parte superior contenía las hebras
de ADN y se procedió a la extracción de las mismas.

4. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
4.1. Resultados
Tabla 2
Resultados obtenidos para la extracción de ADN vegetal y animal.

Muestra Fotografía Observaciones

No se logró extraer mucho

ADN de ADN, presentó una textura
fresas grumosa posterior a la
extracción

ADN de Tiene aspecto más líquido y

extraído de no presenta demasiados
la saliva. grumos.

ADN de Se puede observar

perfectamente la separación
banana en dos fases que se produjo
luego de verter el alcohol.

ADN de Fibras de ADN de

extraído de contextura grumosa, aunque
la saliva en muy pequeña cantidad

ADN de
Fibras de ADN débiles y de
fresas
difícil extracción.
 ADN de
Material genético de fácil
extraído de
extracción de aspecto
la saliva
grumoso.

ADN
Material genético en gran
extraído de
cantidad de aspecto grumo
un banano

ADN
extraído de
Material genético escaso y
una
de fibrillas débiles.
muestra de
saliva
Nota: Datos obtenidos durante la práctica procedentes de Silva Bryan, Cazañas Juan,
Romero Nathaly y Cajiao Janis.

Discusión

En general, los resultados obtenidos de la extracción casera de ADN en muestras

vegetales (Tabla 2) y muestras de origen animal (Tabla 2) se vieron influenciados tanto por
los reactivos utilizados como también por los pasos empleados en el transcurso de la práctica.
Entre los principales componentes se encuentra el alcohol, el mismo que mostró ser un
elemento fundamental para la obtención del producto; Suazo et al (2020), menciona que el
etanol actúa como inhibidor durante la extracción de ADN, y que, en dependencia de su
concentración, puede llegar a oxidar el ADN durante el proceso de lisis. A razón de esto,
Lugo (2018), alude que la lisis celular depende significativamente del tipo de muestra a
examinar, puesto que en ejemplares como sangre o saliva se alcanza una eficiente lisis celular
en un tiempo corto, mientras que, en otros tipos de especímenes como tejidos vegetales se
requiere de un tratamiento previo mucho más laborioso y de mayor tiempo. Esto se pudo
comprobar en la práctica casera, debido a que para extraer el ADN de las frutas se tuvo que
licuar, machacar y cernir, lo cual para la muestra de saliva no fue necesario, esto se explica
porque los tejidos vegetales y sobre todo las frutas presentan gran cantidad de polisacáridos y
compuestos polifenólicos que se acumulan durante la maduración o en respuesta a estímulos
ambientales, lo que complica la redisolución del ADN.
 Del mismo modo, el uso de detergente también es indispensable, ya que comprende la
capacidad de romper la bicapa de fosfolípidos de las membranas plasmáticas y la envoltura
nuclear de las células, Alejos et al (2004) afirma que el detergente descompone los lípidos de
la membrana al deshacer las uniones que mantienen la membrana junta, ayudando a que el
ADN sea más sencillo de extraer.

La extracción de ADN de forma casera presenta serias dificultades y sesgos para

extraer de forma efectiva, cantidades significantes de ADN, dada la falta de materiales y
equipos. Como se evidencia en la Tabla 2, la cantidad de ADN rescatado por integrante del
grupo posee variaciones bastante significativas a pesar de utilizar la misma fruta en algunos
casos. La selección de la fruta influye directamente en la cantidad de ADN que se puede
extraer, en el caso de la fresa por poseer 56 cromosomas (ocho copias de cada cromosoma)
posee una mayor cantidad de ADN (Bonet Gigante, 2010) con relación al banano que solo
posee 11 cromosoma (Duenas et al., 2005). Por otro lado, las técnicas comerciales debido a
su carácter profesional ya están estandarizadas y prometen rescatar ADN con mayor cantidad
y calidad, aunque represente un costo superior.

Emplear técnicas caseras resulta muy económico, sin embargo, las muestras no
frescas deben ser mantenerse a una temperatura de -20 °C a 4 °C. Las técnicas de extracción
de ADN en laboratorio comprenden procesos químicos y físicos, que poseen ciertas ventajas
y desventajas. Las técnicas de extracción más utilizadas son fenol-cloroformo, cloruro de
cesio, cromatografía por exclusión de tamaño, salting-out y chelex (Salazar et al., 2013).

La técnica de fenol-cloroformo es la más utilizada, emplea dodecilsulfato sódico

como detergente no iónico para lisar las células y no dañar los ácidos nucleicos, a través de la
aplicación buffer de lisis (detergente, sales y proteinasa K) es liberado el ADN de las
histonas. Para la eliminación de restos celulares se administra Tris-Cl y EDTA seguido de
centrifugación de 200 a 1000 rpm. Luego se aplica los solventes orgánicos como el
cloroformo, fenol y alcohol en proporción 24:25:1 para la desnaturalización y precipitación
de las proteínas. El ARN no deseado es eliminado con ARNasas y se precipita con etanol
helado (Gupta, 2019).

5. CONCLUSIONES
La extracción de ADN de forma casera posee una metodología sencilla y eficaz con
materiales e instrumentos de uso cotidiano, es por ello que existen variables externas que no
se pueden controlar, así como lo son las cantidades precisas de reactivos añadidos o las
diferencias existentes entre la composición química de los mismos, lo cual al extraer el
material genético presenta desventajas, sin embargo, se observó las características físicas que
tiene el ADN fuera de la envoltura celular, en donde principalmente se evidencia diferencias
en los resultados obtenidos según el tipo de muestra analizada, vegetal o animal, la
preparación y procesamiento de las mismas implican diferencias de tratamiento y reactivos,
similitud que también presentan los procesos a nivel de laboratorio.

Los resultados obtenidos durante la práctica evidenciaron la formación de dos fases

después de colocar el alcohol, una semisólida y otra liquida. Esto se debe a que el alcohol
contiene etanol el cual actúa como un inhibidor, permitiendo que el ADN se pliegue sobre sí
mismo y convirtiéndose así en una solución insoluble. También se demostró que el detergente
cumple una función específica durante el desarrollo de la práctica, ya que este permite
romper la bicapa lipídica de la célula además de su envoltura nuclear.

Se estableció la importancia que tiene el tipo de muestra durante la aplicación del

método de extracción de ADN, debido a que las muestras obtenidas de tejidos vegetales
tendrán ciertas variaciones en comparación con las muestras obtenidas de tejidos animales.
Una de las causas de estas variaciones es la lisis celular, la cual se produce en menor tiempo
en comparación con la lisis producida por las células vegetales.

6. CUESTIONARIO
Consultar el protocolo de extracción de ADN con solvente y compararlo con la práctica

Método fenol-cloroformo: Se realiza la ruptura de las macromoléculas de la muestra,

para este proceso se toma en cuenta el material biológico que se está usando (en ciertos cosos
se puede realizar una homogenización por medio de nitrógeno líquido y tampón de lisis), se
añade fenol-cloroformo-alcohol isoamílico, con sus respectivas centrifugaciones, el ADN se
precipita con etanol o acetato de sodio proceso en el que se centrifuga se lava con etanol al
70% y se deja secar a temperatura ambiente, se resuspende la muestra de ADN en una
solución tampón tris-EDTA TE (Fraga et al., 2004). Para este método se usa fenol-
cloroformo-alcohol isoamílico para disolver las moléculas de lípidos y proteínas mientras que
en la extracción casera de ADN el jabón se usa para la lisis de los lípidos presentes en la
membrana celular y la sal permite que existan mayores interacciones hidrofóbicas entre
proteínas para que se dé la coagulación del ADN, en ambos procesos se usa una fase
alcohólica para que se dé la separación del ADN de otros compuestos, el método casero
luego de la lisis de la muestra necesita procesos de homogenización ligeros debido a la
sensibilidad del ADN que tiende a romperse mientras que en procesos de laboratorio como el
antes nombrado es necesario que se realicen reiteradas centrifugaciones para obtener ADN,
este proceso en el laboratorio tiene mayor exactitud y control en cada proceso realizado
(Merino et al., 2019).

7. BIBLIOGRAFÍA
Alejos, L., Aragón, M., & Cornejo, A. (2004). Extracción y purificación de ADN.
www.eoearth.org/view/article/158858.
Bonet Gigante, J., Monfort Vives, A., & Martínez Gómez, C. (2010). Desarrollo y
caracterización de herramientas genómicas en fragaria diploide para la mejora del
cultivo de fresa. TDX (Tesis Doctorals En Xarxa).
http://www.tdx.cat/handle/10803/42009

Duenas, F., Roman, M. I., Xiques, X., & Gonzalez, C. T. (2005). Determinación de la
variabilidad genética en clones y somaclones de bananos y plátanos del género
Musa. https://doi.org/10.3/JQUERY-UI.JS

Fraga Nodarse, Jorge, Rodríguez, Jinnay, Fuentes, Omar, Castex, Mayda, & Fernández-
Calienes, Aymé. (2004). Comparación entre 5 métodos para la extracción de ADN de
Triatomíneos: su utilización en la técnica de ADN polimórfico amplificado al azar
(RAPD). Revista Cubana de Medicina Tropical, 56(3), 203-207. Recuperado en 17 de
noviembre de 2021, de http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0375-
07602004000300010&lng=es&tlng=es.

Gupta, N. (2019). DNA Extraction and Polymerase Chain Reaction. Journal of Cytology,
36(2), 116. https://doi.org/10.4103/JOC.JOC_110_18

Lugo, C. (2018). Desarrollo de Métodos de Extracción de ADN en Saliva, Frotis Bucal y

Sangre Fijada en Papel Filtro Utilizando Detergente Comercial.
http://148.225.114.121/bitstream/unison/1055/1/lugogildulcecarolinal.pdf

Martínez-Frías, M. L. (2010). Estructura y función del ADN y de los genes. I Tipos de

alteraciones de la función del gen por mutaciones. SEMERGEN - Medicina de
Familia, 36(5), 273–277. doi:10.1016/j.semerg.2009.12.014
Merino , J., Gallegos, R., & Gómez, J. (2019). Extracción de ADN con material cotidiano:
desarrollo de una estrategia interdisciplinar a partir de sus fundamentos científicos.
Obtenido de Scielo: http://www.scielo.org.mx/scielo.php?
script=sci_arttext&pid=S0187-893X2019000100058

Salazar, A. Sandoval, A. y Armendáriz, J. (2013). Biología Molecular.

McGrawHillInteramericana.

Suazo, T., Miranda, S., Lacayo, M., & Tenorio, D. (2020). Evaluación de metodologías de
extracción de ADN de plantas recalcitrantes. Torreón Universitario, 9(24), 45–57.
https://lamjol.info/index.php/torreon/article/view/9723/11096