UNAD

ECBTI-BIOTECNOLOGÍA-305689

ECBTI

BIOTECNOLOGÍA_305689
PRODUCCIÓN DEENZIMAS DEINTERÉSINDUSTRIAL
FEDRALORENAORTIZB.
Directora de curso
 Propósitos de formación
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Qué el estudiante aplique los conocimientos de la

unidad 1, en la resolución de un problema específico

Qué el estudiante argumente científicamente la

solución al problema planteado.

Qué el estudiante indague los temas de la Unidad 1,

con el fin de ponerlos a consideración en la resolución
de un problema.
 Observaciones generales
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Con el fin de que los estudiantes cumplan con los

propósitos de formación es necesario que estudien
los siguientes temas:

Biotecnología de las fermentaciones

Sistemas de Fermentación
Biocatalisis.

Recursos Didácticos.
Ova Sobre fermentación
Laboratorio virtual 2.
Artículos del tema.
 Qué son las enzimas? son moléculas proteicas, que actúan como
catalizadores de una reacción bioquímica, es decir aumentan la
velocidad catalítica de dicha reacción sin alterar los productos que se
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generen al final de dicho proceso.

 CARACTERÍSTICAS DE LAS ENZIMAS

•Son catalizadores muy activos en medios

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acuosos y cada enzima actúa bajo

condiciones específicas de temperatura,
pH, entre otros .
•Son catalizadores muy específicos:
pueden modificar un único substrato en
una mezcla de substratos muy similares.
•Son catalizadores muy selectivos:
pueden modificar un único enlace o un
único grupo funcional en una moléculas
que tenga varias posiciones modificables.
 ENZIMAS COMO PRODUCTOS BIOTECNOLÓGICOS
VENTAJAS:

Transforman rápidamente los sustratos a temperaturas moderadas y

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a valores de pH cercanos a la neutralidad.

Alta especificada respecto al sustrato que distingue una mezcla

compleja así como respecto a la transformación química que lleva
acabo.

Suactividad puede ser fácilmente controlada mediante un ajuste en

las condiciones de la reacción (Inmovilización de la enzima)

Mejora las características de un proceso y su aceleración.

Mejora el producto: Sepuede utilizar un proceso enzimáticopara

cambiar el sabor o la textura de un alimento.
 FUENTES DE ENZIMAS

Lasenzimas pueden ser de origen vegetal, animal y

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microbiana

Entre las enzimas de tipo vegetal, se encuentran las proteasas,

carbohidrasas ( las cuales descomponen residuos de azúcares
de carbohidratos superiores, a-amilasas y b-amilasa)

Entre las enzimas de tipo animal están la esterasa ( Lipasa se

produce en la mucosa gástrica, el páncreas; fosfotasas, que se
obtiene de tejidos animales óseo, muscular, tripsina, y la
quimotripsina que se produce en el páncreas )

Las enzimas del tipo microbiano provienen debacterias,

arqueas y de hongos.
 ENZIMAS DE ORIGEN MICROBIANO, DE INTERÉS INDUSTRIAL
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Bacterias productoras
de alfa amilasa

La alfa amilasa es una enzima que se utiliza en la

industria del almidón, el alcohol y el papel, por lo
tanto tiene una alta importancia a nivel comercial, lo
que ha llevado a realizar diversas investigaciones en
Biotecnología que permita optimizar su producción.
 Los microorganismos que utilizan el almidón comúnmente
denominados amilo líticos, pueden utilizar este polímero
porque tienen enzimas como la alfa amilasa la cual se
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encarga de degradar el almidón hasta las moléculas de

glucosa. El yodo se utiliza como indicador de presencia de
almidón, por lo tanto al colorearse de color oscuro, indica la
presencia del polisacárido.

En la caja petri, se puede observar las

colonias de bacterias, cuyo halo no esta
coloreado por el yodo, es decir no detecta
presencia de almidón y que por lo tanto se
puede decir que éstas bacterias degradaron
el almidón a compuestos más sencillos
 Los procesos de producción de enzimas
microbianas se realizan mediante
cultivos aeróbicos.
En general las enzimas se producen en
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pequeñas cantidades durante la fase de

crecimiento activo, pero se acumulan en
grandes cantidades en la fase
estacionaria del crecimiento.
Las enzimas inducibles como la alfa
amilasa se producen sólo cuando en el
medio se encuentra el inductor
(sustrato)

LaAmilasa, se produce mediante fermentación de sustratos.

Durante la producción es importantes el control de la temperatura , pH y la
presencia de compuestos químicos inactivantes.
 Laalfaamilasa.
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Puede clasificarse según su origen:

 amilasa bacteriana o fúngica Es
una enzima termoestable, es decir
funciona mejor y resiste altas
temperaturas, el promedio de
temperatura operativo es de entre
55 y 800C, además trabaja con un pH
menor de 6 y con una concentración
de calcio de entre 50 ppm y 100
ppm para su mejor rendimiento.
 PROBLEMA A RESOLVER
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La búsqueda continua de microorganismos más eficientes en la

producción de alfa amilasa es una alternativa, para optimizar la
producción de esta enzima de importancia comercial.

Se realizó un estudio comparativo de Cepas nativas

amiloliticas aisladas de suelo de diferentes lugares del
Departamento de Nariño, de las cuales se aislaron un número
significativo de cepas productoras de amilasa.
 PROBLEMA .
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Con el fin de escoger las cepas promisorias, se realizaron las

fermentaciones en series de tres matraces Erlenmeyer de 250
ml. Contenido. 75 ml medio de cultivo y se sembró en agar-
almidón Los medios una vez inoculados, se incubaron en
agitación contantes en diferentes temperaturas. A las 24 horas
se procedió a medir la zona de inhibición producida por alfa-
amilasa. Igualmente, se tomo en tiempo en minutos, necesario
para que el almidón presente en la mezcla de reacción sea
totalmente hidrolizado por el extracto enzimático a pH 6 y una
temperatura de 40 0C.
A continuación se presentan los resultados obtenidos :
 PROBLEMA 2. LOS RESULTADOS SE INDICAN EN LA
SIGUIENTE TABLA.
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CEPA Zona de Tiempo de decolaración

hidrolisis (mm (Minutos)/ Tem. de
de diámetro) incubación

350C 450C 550C

B-3 0,9 40 40 *
B-7 1,5 15 8 *
B-8 2,6 10 6 5
B-16 1,4 25 6 *
B-19 1,1 40 40 *

B-30 2,4 12 6 5
B-55 2,4 14 5 6
 PROBLEMA Para continuar con los experimentos e identificar
el comportamiento de las cepas se escogieron las siguientes:
Cepa B-8, Cepa, B-30 y Cepa B-55.
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Argumenté por qué se escogieron dichas cepas.

Para medir el efecto de la Temperatura de incubación en la
producción de alfa amilasa ,se realizó la incubación de las tres
cepas variando la Temperatura a 35, 45, 55 , con una agitación de
125 rpm. Los que se indican a continuación constituye la media de
las tres replicas en cada una de las cepas.

TEMPERATU TIEMPO CEPAS NATIVAS /ACTIVIDAD

RA DE HORAS (U/ML)
INCUBACIÓN Cepa B-8 Cepa B-32 Cepa B-56
oC

35 0 0 0 0

24 1142 0 37
48 3970 4000 1278
72 2571 3330 1133
45 0 0 0 0
24 1368 1425 548
48 1250 316 1857
72 210 195 158
55 0 0 0 0
24 0 0 0
48 222 111 338
72 115 57 134
 PROBLEMA 2.
En los siguientes experimentos se buscó establecer la influencia
del pH en la producción de alfa amilasa en el medio de cultivo
antes mencionado e incubado a 35 C y 125 rpm, las muestras se
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tomaron a 24 y 48 horas. A continuación se indican los resultados:

pH de TIEMPO CEPAS NATIVAS /ACTIVIDAD (U/ML)

incubación HORAS
Cepa B-8 Cepa B-30 Cepa B-55

6 0 0 0 0

24 1668 0 250
48 2970 28 157
7 0 0 0 0
24 1921 0 250
48 3970 78 338
8 0 0 0 0
24 1605 416 0
48 3970 287 210
 PROBLEMA 2.
Para comprobar el comportamiento de producción de alfa amilasa
en las cepas en relación al nivel de agitación del cultivo durante la
incubación, se comprobaron las siguientes velocidades de
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agitación: 125 rpm y 225 rpm. Manteniendo constantes el inoculo,

medio de cultivo y temperatura de incubación se presentaron los
siguientes resultados.

VELOCIDAD TIEMPO CEPAS NATIVAS /ACTIVIDAD

DE HORAS (U/ML)
AGITACIÓN Cepa B-8 Cepa B-30 Cepa B-
(RPM) 55
125 0 0 0 0
24 3117 3820 2571
150 0 0 0 0
24 2400 2571 314
 PROBLEMA 2

De acuerdo a los resultados anteriores,

realice una ponencia científica, dónde
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sustente la elección de la cepa amilolítica que

Ud escogería para realizar un escalamiento a
planta piloto, considerando los diferentes
factores de producción de amilasa.

Para ello debe basarse en los resultados de

los diferentes experimentos, además en su
ponencia debe considerar otros experimentos
que se propondrían para asegurar el éxito del
escalamiento.

Recuerde que además debe consultar otros

artículos científicos que le permitan comparar
los resultado.
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MUCHOS ÉXITOS