manuscrito aceptado

Los efectos de la densidad de población sobre la hematología, el perfil de proteínas

plasmáticas y la producción de inmunoglobulinas de tambaqui juvenil (Colossoma
macropomum) cultivado en Brasil

Oscar Tadeu Ferreira da Costa, Lucas Castanhola Dias, Cacilda Satomy Yano
Malmann, César Augusto de Lima Ferreira, Iracimar Batista do Carmo, Andrew
Georg Wischneski, Rafael Luckwu de Sousa, Bruno Adan Sagratzki Cavero,
Juliana Luiza Varjão Lameiras, Maria Cristina Dos-Santos

PII: S0044-8486 (18) 31136-0

DOI: doi: 10.1016 / j.aquaculture.2018.09.040
Referencia: AQUA 633564

Aparecer en: acuicultura

Fecha recibida: 29 de mayo de 2018

Fecha revisada: 2 de septiembre de 2018

Fecha de aceptación: 20 de septiembre de 2018

Por favor, cite este artículo como: Oscar Tadeu Ferreira da Costa, Lucas Castanhola Dias, Cacilda Satomy Yano
Malmann, César Augusto de Lima Ferreira, Iracimar Batista do Carmo, Andrew Georg Wischneski, Rafael Luckwu
de Sousa, Bruno Adan Sagratzki Cavero, Juliana Luiza Varjão Lameiras , Maria Cristina Dos-Santos, Los efectos de
la densidad de población sobre la hematología, el perfil de proteínas plasmáticas y la producción de
inmunoglobulinas de tambaquí juvenil (Colossoma macropomum) cultivado en Brasil. Aqua (2018), doi: 10.1016 /

j.acuicultura.2018.09.040

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 MANUSCRITO ACEPTADO

Los efectos de la densidad de población sobre la hematología, el perfil de proteínas plasmáticas y

producción de inmunoglobulina de tambaqui juvenil ( Colossoma macropomum) cultivado en Brasil

Oscar Tadeu Ferreira da Costa 15, Lucas Castanhola Dias 2, Cacilda Satomy Yano Malmann 1,

César Augusto de Lima Ferreira 3, Iracimar Batista do Carmo 1, Andrew Georg Wischneski 1,

Rafael Luckwu de Sousa 5, Bruno Adan Sagratzki Cavero 4, Juliana Luiza Varjão Lameiras 7,

María Cristina Dos-Santos 5, 6.

DO
1 Laboratorio de Microscopía Cuantitativa, Departamento de Morfología, Instituto de Biología
TA
Ciencias, Universidad Federal de Amazonas, Manaus, AM, Brasil.
EP

2 Laboratorio de Microscopía Óptica y Electrónica, Instituto Nacional de Investigaciones Amazónicas,

Manaus, AM, Brasil.

AC

3 Programa de Postgrado en Ciencias de la Pesca Tropical, Facultad de Ciencias Agrícolas,

TO

Universidad Federal de Amazonas, Manaus, AM, Brasil.

4 Departamento de Ciencias Pesqueras, Facultad de Ciencias Agrícolas, Universidad Federal de

RI
SC

Amazonas, Manaus, AM, Brasil.

5 Programa de Postgrado en Inmunología Básica y Aplicada, Instituto de Ciencias Biológicas,

NU

Universidad Federal de Amazonas, Manaus, AM, Brasil.

MA

6 Laboratorio de Inmunoquímica, Departamento de Parasitología, Instituto de Ciencias Biológicas,

Universidad Federal de Amazonas, Manaus, AM, Brasil.

7 Programa de Posgrado Multiinstitucional en Biotecnología, Instituto de Ciencias Biológicas,

Universidad Federal de Amazonas, Manaus, AM, Brasil.

Autor para correspondencia: Tel .: +55 92 3305-4277, E-mail: oscarcostaufam@gmail.com

 MANUSCRITO ACEPTADO

Abstracto

El cultivo de especies de peces nativos de la Amazonía es muy prometedor. Una especie cuyo

características que lo hacen apto para cultivo intensivo es tambaqui ( Colossoma macropomum).

Sin embargo, existe una falta de consenso sobre la densidad de población (DE) más adecuada para

agricultura intensiva. Por tanto, se ofrece más información sobre la fisiología de los peces en los sistemas de cultivo.

requerido, ya que esto aumentaría nuestra comprensión de los efectos del estrés en estos peces. los

El objetivo de este estudio fue, por tanto, evaluar el efecto de diferentes DE en la hematología y

DO
perfil de proteínas plasmáticas de tambaqui. Para ello, se expuso a los tambaqui juveniles a la

siguiendo diferentes DE (kg / m 3) durante 96 h: SD1 = 2,11; SD2 = 8,31; SD3 = 16,34; y SD4 = 27,40.
TA
Se controló la calidad del agua y se extrajo sangre para análisis hematológico y
EP

electroforesis (SDS-PAGE) para analizar perfiles de proteínas e inmunoglobulinas plasmáticas. Branquia

AC

Se retiraron los filamentos y se contó el número de parásitos (monogenoides).

El análisis de PCA multivariado reveló una fuerte asociación positiva entre las DE más altas
TO

(SD3 y SD4) y recuento de parásitos, células inmunes (eosinófilos, trombocitos, monocitos y

RI

linfocitos) y niveles de amoníaco y nitrito en agua. Por el contrario, las DE más altas fueron
SC

asociado negativamente con variables de calidad del agua (pH, turbidez, conductividad y O 2 contenido)
NU

y hematocrito en sangre. Los resultados muestran que las DE más altas contribuyeron a un deterioro en
MA

calidad del agua, lo que conduce a un aumento de los niveles de MetHb, parasitismo de las branquias, un aumento en el número de

células de defensa, perfil proteico alterado y estimulación de la producción de inmunoglobulinas. Estas

Los cambios sugieren que el bienestar del tambaqui se ve afectado negativamente por las altas desviaciones

nuestra comprensión de los efectos del estrés por hacinamiento en la fisiología de la especie.
 MANUSCRITO ACEPTADO

Palabras llave: densidad de población; tambaqui; hematología; agricultura intensiva; electroforesis;

parásitos.

DO
TA
EP
AC
TO
RI
SC
NU
MA
 MANUSCRITO ACEPTADO

1. Introducción

Se espera que la producción mundial de pescado alcance los 191 millones de toneladas en 2024 según

Datos de la FAO (OCDE / FAO, 2015). Acuicultura, que se espera que contribuya con 96 millones de toneladas

al sector, podría ser el principal motor de este proceso. Peces del mundo de la OCDE y

Las proyecciones de productos del mar indican que para 2023 la producción acuícola en miles de toneladas

han superado la producción extractiva (OCDE / FAO, 2015). Aliado a esto, mundial per cápita

Se prevé que el consumo de pescado alcance los 21,5 kg alrededor de 2024. Estos datos muestran que

DO
está creciendo el interés en este sector, lo que puede explicarse por la alta rentabilidad, rápida rentabilidad
TA
en inversiones y pequeña superficie necesaria para la producción.

Brasil fue el segundo productor acuícola más grande de América Latina en 2011, cuando
EP

producido medio millón de toneladas, y las perspectivas para los próximos años son excelentes (OCDE / FAO,
AC

2015). Brasil también cuenta con recursos hídricos inigualables y con las mejoras constantes en
TO

técnicas de manejo de peces de cultivo, la tasa de crecimiento en la piscicultura brasileña

sector ha superado constantemente el promedio mundial. Aunque los resultados en algunas áreas de
RI
SC

La investigación sigue sin ser concluyente, actualmente existe un consenso de que la producción de proteína animal

debe estar asociado con prácticas de manejo y reproducción que minimicen los factores de estrés para
NU

animales y asegurar su bienestar (Turnbull et al., 2008). El bienestar animal se entiende como un
MA

estado mental y físico en relación con el entorno del animal que indica salud, calidad

de vida y ausencia de sufrimiento (North et al., 2006a; North et al., 2006b). Adecuado

densidad de población (DE) de peces de cultivo (es decir, biomasa de peces por m 3 de agua) es uno de los más

factores importantes que afectan el bienestar de estos animales (North et al., 2006b). Algunos autores

han enfatizado la importancia de determinar la densidad de población óptima para reducir

 MANUSCRITO ACEPTADO

alteraciones en la fisiología de los peces y mejora su rendimiento de crecimiento en la acuicultura

sistemas (Fatima et al., 2018).

Los estudios han demostrado que la agricultura de alta densidad puede reducir el consumo de alimentos y

supresión del crecimiento (Li et al., 2012), que parecen estar asociados con cambios en

competencia intraespecífica y comportamiento social, (Papoutsoglou et al., 2006), aumento de aletas

erosión (North et al., 2006b), liberación de hormonas del estrés (Rotllant et al., 1997), alteración

función inmune (Mazur e Iwama, 1993), cambios en la proteína plasmática total (Tan et al., 2018)

y parámetros metabólicos y hematológicos alterados (Fazio et al., 2014; Fazio et al., 2017;

DO
Lupatsch et al., 2010; Tolussi y col., 2010; Yarahmadi et al., 2015).

La hematología es una herramienta valiosa para controlar la salud de los peces sometidos a hacinamiento
TA
estrés. Trucha arcoiris ( Oncorhynchus mykiss) Los alevines mostraron valores incrementados para
EP

recuento de hemoglobina (Hb), hematocrito (Ht) y glóbulos rojos (RBC) después de la exposición a la media
AC

densidades de 25 kg / m 3 y 35 kg / m 3 durante ocho semanas (Eagderi et al., 2016). Según estos

autores, esta puede ser una estrategia para aumentar la capacidad de transporte de oxígeno de la sangre bajo
TO

estrés de hacinamiento. Cuando se expone a una densidad de 45 kg / m 3 durante un mes, la misma especie
RI

no mostró cambios en la proteína plasmática total y el perfil de globulina y albúmina (Yarahmadi et al.
SC

al., 2015). Cuando los peces están expuestos al estrés, necesitan más energía y plasma.
NU

la movilización de proteínas aumenta de acuerdo con la intensidad del estrés para satisfacer la demanda de energía,
MA

mantener la osmorregulación y mejorar la respuesta inmunitaria. Cambios en los niveles de proteínas plasmáticas.

como la albúmina y la globulina en el pescado se pueden analizar para predecir trastornos hepáticos y renales

(Javed y Usmani, 2015). El otro parámetro importante que se utiliza para evaluar el estrés en los peces es

análisis cuantitativo de leucocitos y trombocitos circulantes. Los estudios han demostrado que los peces

expuestos crónicamente a SD altas exhiben inmunosupresión (Pickering y Pottinger, 1987).

 MANUSCRITO ACEPTADO

La reducción de la calidad del agua es uno de los cambios más importantes asociados con

aumento de la DE en la piscicultura (North et al., 2006a) y puede afectar negativamente a la homeostasis en peces

así como introducir nuevas variables que hagan análisis de los efectos directos del aumento de densidad

mas complejo. Varios estudios han demostrado que el uso de múltiples (bioquímicos,

indicadores fisiológicos y morfológicos) del bienestar animal conducen a un mejor análisis de

los efectos de la DS y producen resultados más concluyentes para el estrés impuesto a los peces de cultivo

(North et al., 2006a; North et al., 2006b).

Tambaqui Colossoma macropomum, Cuvier, 1818) es el pez más criado en el

DO
Amazonia, principalmente debido a la rápida disponibilidad de juveniles y al buen estado de la especie.

potencial de crecimiento, alta productividad y resistencia (Brandão et al., 2004; Saint-Paul, 2017). Eso
TA
es muy apreciado por la población local y existe una gran demanda por su carne. Como un
EP

Como resultado, muchos investigadores y productores han incrementado sus esfuerzos para encontrar tecnologías
AC

soluciones que permitirán la cría de la especie en cautividad. Sin embargo, hay desacuerdo

sobre las condiciones ideales de almacenamiento de esta especie. En un estudio de Silva y Fujimoto (2015),
TO

el crecimiento de tambaqui y el aumento de peso se correlacionaron negativamente con un aumento de la DE, y el

RI

DE fue de 20 peces / m 3. En contraste, una alta desviación estándar era más apropiada para la conversión alimenticia en
SC

juveniles de tambaqui (Sousa et al., 2016). Hasta donde sabemos, no hay información sobre el
NU

efectos fisiológicos de la SD en esta especie. Por tanto, el presente estudio buscó evaluar la

efectos de diferentes DE sobre la hematología y el perfil de proteínas plasmáticas (proteínas totales y

MA

inmunoglobulinas) de tambaqui. Los parámetros fisicoquímicos del agua y la

Las características fisiológicas de los peces se combinaron en un análisis multivariado (PCA) para

Identificar de forma más objetiva los efectos de diferentes DE sobre estos parámetros.

2. Materiales y métodos
 MANUSCRITO ACEPTADO

2.1 Zona de recogida y animales utilizados en el experimento.

El estudio se realizó en la estación de crianza Fazenda Ecology Pescados SA (Rio

Preto da Eva, Amazonas, Brasil, 2 ° 46'56.26 "S; 59 ° 21'46.06" W) y cumplió con las

y directrices institucionales para la protección del bienestar humano y animal. Tambaqui

Las muestras (n = 700), todas clínicamente sanas, se recolectaron en estanques y

colocado en tanques de hormigón con un volumen interno de 1 m 3 durante cuatro días para la aclimatación.

Durante este período, la DE se mantuvo en 25 peces / m 3 en cada tanque, agua aireada (parcial

presión de oxígeno, pags O 2> 130 mmHg) se introdujo continuamente en los tanques y los peces se

DO
alimentados con piensos comerciales con un 28% de proteína cruda. El suministro de alimento se detuvo durante dos días antes

el inicio de los experimentos. Se mantuvo un ciclo constante de luz / oscuridad de 12 h / 12 h. La calidad

TA
del agua se evaluó con un medidor multiparamétrico HI 9829 (Hanna Instruments, EE. UU.),
EP

y la concentración de nitrito se determinó por espectrofotometría (Strickland y Parsons,

AC

1972).
TO

2.2 Protocolo experimental

RI

Después de la aclimatación, se aumentó la SD en los tanques para dar lo siguiente

SC

tratamientos: SD1 (25 peces / m 3 = 2,11 kg / m 3), SD2 (125 peces / m 3 = 8,31 kg / m 3), SD3 (225 peces / m 3
NU

= 16,34 kg / m 3) y SD4 (325 peces / m 3 = 27,40 kg / m 3). Los tratamientos se replicaron tres

veces en un diseño completamente al azar, y las muestras (n = 6) se recolectaron al azar. UN

MA

Se mantuvo un flujo continuo de agua al sistema, y los peces se mantuvieron bajo estos

condiciones durante 96 horas, tiempo durante el cual la composición fisicoquímica del agua fue

monitoreado dos veces al día. No se observó mortalidad durante la aclimatación ni durante la

período experimental.
 MANUSCRITO ACEPTADO

2.3 Muestra de sangre y hematología

Después del período experimental, los animales fueron anestesiados con benzocaína al 0,5%.

(Benzocaine®, Sigma-Aldrich, EE. UU.), Medido y pesado. La sangre fue recolectada por caudal

punción venosa con jeringas heparinizadas y se almacena inmediatamente a baja temperatura (Faggio

et al., 2013), y el plasma se separó en una centrífuga 6-15 (Sigma-Aldrich, EE. UU.) y se almacenó

en nitrógeno líquido hasta su uso.

La Ht se determinó por centrifugación de la sangre en tubos capilares en un 1-15

centrifugar (Sigma-Aldrich, EE.UU.) durante 6 min. a 12.000 rpm. Se determinó la concentración de Hb

DO
por el método de la cianometahemoglobina con un espectrofotómetro SP-22 (BioSpectro, Brasil).

El recuento de glóbulos rojos se estimó con una cámara de Neubauer. Volumen corpuscular medio (MCV), medio
TA
hemoglobina corpuscular (MCH) y concentración media de hemoglobina corpuscular (MCHC)
EP

se calcularon utilizando las ecuaciones propuestas por Brown et al. (1993). Metahemoglobina
AC

La concentración de (MetHb) se determinó en muestras de sangre total mediante el método descrito por

Benesch y col. (1973). Se utilizó tinción de May-Grünwald-Giemsa-Wright para los frotis de sangre,
TO

que se prepararon en portaobjetos de microscopio siguiendo a Tavares-Dias et al. (2003). Indirecto

RI

El recuento de trombocitos y el recuento total de leucocitos se determinaron como se describe en Tavares-Dias.

SC

y Moraes (2007).
NU
MA

2.4 Recuento de parásitos

El recuento de parásitos en las branquias se convirtió en un índice de estrés. Para ello, pescado anestesiado

fueron sacrificados por sección espinal y muestras de filamentos branquiales obtenidos de cada animal fueron

fijado inmediatamente por inmersión en glutaraldehído al 2,5% + solución tampón de fosfato de sodio

(pH 7,8; osmolaridad aproximadamente 300 mOsmol) durante al menos 48 h. Muestras aleatorias de

Los filamentos se deshidrataron en etanol al 70% y se tiñeron directamente en tubos Eppendorf con un
 MANUSCRITO ACEPTADO

Solución al 0,5% de azul de toluidina durante un minuto. Luego, los filamentos se colocaron en un portaobjetos.

conteniendo una gota de agua, cubierto con un cubreobjetos y observado y fotografiado en un

Estereomicroscopio EZ4D (Leica, Alemania). Las imágenes fueron procesadas y el número de

parásitos por longitud de filamento determinado con ImageJ (Schneider et al., 2012).

Las microfotografías se realizaron con un microscopio BX-41 (Olympus, Japón) equipado con un

Cámara digital Coolpix-5400 (Nikon, Japón).

2.5 Electroforesis

DO
Las proteínas plasmáticas se separaron mediante gel de poliacrilamida con dodecilsulfato de sodio

electroforesis (SDS-PAGE) siguiendo a Laemmli (1970). Purificación de inmunoglobulinas

TA
siguió el método descrito en Steinbuch y Audran (1969) y modificado por Dos-Santos
EP

et al. (1989) y Dias et al. (2015). Las imágenes de gel se procesaron con ImageJ (Schneider et
AC

al., 2012) y la densitometría expresada en píxeles.

TO

2.8 Análisis estadístico

RI

PAST versión 3.14, el paquete de software de estadísticas paleontológicas (Hammer et al., 2001),
SC

se utilizó para el análisis estadístico y gráficos asociados. Todos los valores se expresaron como media
NU

± desviación estándar. Los resultados se analizaron mediante análisis de varianza unidireccional (ANOVA).
MA

En los casos en que ANOVA indicó una diferencia, la prueba de comparaciones múltiples de Tukey (un

prueba paramétrica) para comparar los valores medios entre tratamientos. Alternativamente, el

Se utilizó la prueba de Mann-Whitney cuando fue apropiado. Normalidad y homogeneidad de distribución

se estimaron mediante la prueba de bondad de ajuste de Kolmogorov-Smirnov y la prueba F de Bartlett-Box.

Se utilizó un nivel de significancia del 5% para las pruebas. Se aplicó PCA a las 21 variables,

incluyendo la calidad del agua y los parámetros hematológicos, para investigar las relaciones
 MANUSCRITO ACEPTADO

entre estas variables y las diferentes DE y definir las variables con mayor

influencia en el modelo experimental. Se aplicó un análisis de conglomerados jerárquico para identificar

similitudes entre tratamientos.

3. Resultados

3.1 Análisis de agua

La Tabla 1 muestra los resultados del análisis fisicoquímico del agua en el experimento.

tanques. El oxígeno y la conductividad fueron más bajos en las densidades más altas (SD3 y SD4) que en el

DO
densidades más bajas (SD1 y SD2). No hubo diferencias en estos parámetros entre SD1

y SD2; El pH fue más bajo en SD2, SD3 y SD4 que en SD1, siendo los valores más bajos para SD3
TA
y SD4; el amoníaco se elevó en SD3 y SD4 (sin diferencia entre SD1 y SD2),
EP

mientras que el nitrito solo se elevó a SD4. No se observaron cambios significativos en la temperatura.
AC

y turbidez, aunque en esta última se observó una tendencia a la baja.

TO

3.2 Hematología y recuento de parásitos

RI

Los índices RBC para C. macropomum se resumen en la Tabla 2. No se realizaron cambios

SC

detectado en Ht, Hb, recuento de glóbulos rojos o MCHC. MCV y MCH aumentaron en SD2 y
NU

permaneció casi constante durante todo el experimento. Los niveles de MetHb se elevaron a SD4.

Recuento total y diferencial de glóbulos blancos (WBC) y recuento de trombocitos para C.

MA

macropomum se resumen en la Tabla 3. Las DE más altas se asociaron con

trombocitosis (SD4) y leucocitosis (SD3 y SD4) pero la leucocitosis fue más frecuente.

Los monocitos fueron las células de defensa más frecuentes encontradas en los peces en todas las SD, lo que representa

65-66% de leucocitos circulantes, seguidos de linfocitos (32%), neutrófilos (0,2-2,0%) y

eosinófilos (0-0,4%). El número de linfocitos se elevó en SD4, mientras que los monocitos y
 MANUSCRITO ACEPTADO

Los recuentos de eosinófilos se elevaron en SD3 y SD4. No se observaron cambios significativos en

recuentos de neutrófilos (Tabla 3).

La carga parasitaria branquial, definida como el número de parásitos monogénicos por cm de filamento, fue

significativamente elevado en los peces expuestos a tratamientos SD3 y SD4 (Fig. 1).

La figura 2 muestra leucocitos y trombocitos en C. macropomum May-Grünwald-Giemsa-

Frotis de sangre teñidos de Wright. Los monocitos eran grandes, generalmente redondos con abundantes basófilos

citoplasma que a menudo contiene vacuolas y tiene núcleos excéntricos y de forma irregular o lobulada

(Figura 2A). Los linfocitos eran esféricos o irregularmente esféricos con una ligera irregularidad

DO
núcleo basófilo que ocupa la mayor parte del citoplasma (Fig. 2B). Los trombocitos fueron

predominantemente elíptica con un núcleo elíptico y citoplasma acidófilo (Fig. 2B).

TA
Los neutrófilos eran grandes y redondos con abundante citoplasma predominantemente acidófilo y un
EP

núcleo excéntrico, de forma irregular o lobulado (Fig. 2C). Finalmente, los eosinófilos eran redondos o
AC

casi redondo con un núcleo excéntrico que se tiñó de púrpura oscuro, y el citoplasma estaba lleno de

gránulos grandes, esféricos y teñidos de color pálido (Fig. 2D).

TO
RI

3.3 Electroforesis de proteínas plasmáticas e inmunoglobulinas

SC

El perfil de proteínas plasmáticas (SDS-PAGE) se muestra en la Fig. 3A. Plasma de C. macropomum

NU

separados en aproximadamente 15 bandas. Cinco grandes bandas correspondientes a molecular relativa

masas de 6-17, 27-34, 46, 73 y 202 kDa se tiñeron más intensamente. La banda de 6-17 kDa fue
MA

menos intenso en muestras de peces mantenidos en SD más altos. Figs. 3B y 3C muestran el

bandas de inmunoglobulina después de la purificación con ácido caprílico con y sin reducción,

respectivamente. Cuatro bandas eran visibles en los geles (Fig. 3C): 27-34, 34-46, 46-73 y 73-113

kDa. Se reveló una banda de proteína intensa de entre 34 y 46 kDa en muestras mantenidas
 MANUSCRITO ACEPTADO

en SD3 y SD4. La Tabla 4 muestra los valores de densitometría para las bandas de gel y confirma la

observaciones visuales de los geles.

3.4 Análisis multivariado (PCA)

Los biplots de PCA que representan proyecciones de los componentes principales extraídos (PC) y

Se utilizaron las cargas de las variables originales (mostradas como líneas proyectadas sobre los ejes principales).

interpretar relaciones entre parámetros biológicos, calidad del agua y diferentes DE. Dos

Las PC representaron más del 93% de la variabilidad general de los datos originales (PC1 = 70,64%

DO
y PC2 = 22,40%). Los valores propios fueron 14,83 y 4,70 para PC1 y PC2, respectivamente. Era

decidió, por tanto, no incluir los otros componentes en el estudio. En el eje PC1, pesca
TA
cultivados a densidades más bajas (SD1 y SD2) podrían distinguirse claramente de los expuestos
EP

a densidades más altas (SD3 y SD4); SD3 y SD4 estaban cerca uno del otro y lejos del SD1
AC

y SD2. Se observó una fuerte asociación positiva entre las DE más altas y el parásito

índices, recuentos de células inmunes (eosinófilos, trombocitos, monocitos y linfocitos) y

TO

niveles de amoniaco y nitrito en agua. Por el contrario, las densidades más altas se asociaron negativamente
RI

con muchas variables de calidad del agua (pH, turbidez, conductividad y O 2) y Ht (Fig. 4). Sobre el
SC

Eje PC2, SD4 tuvo una fuerte asociación negativa con el recuento de glóbulos rojos y un fuerte positivo
NU

asociación con MCH y Hb. El análisis de conglomerados se utilizó como técnica de reconocimiento de patrones para

determinar las relaciones entre las muestras y reveló dos grupos: SD1-SD2 y SD3-SD4
MA

(Figura 5).

4. Discusión

Cualquier decisión para aumentar la producción de biomasa en la acuicultura aumentando la densidad de peces

debe considerar el estrés fisiológico al que están sometidos los peces y cualquier factor que pueda
 MANUSCRITO ACEPTADO

afectar negativamente a su salud. Este estudio ha demostrado que en condiciones experimentales

el aumento de la DE afecta la calidad del agua y los niveles de MetHb, recuento de trombocitos, recuento total de leucocitos,

Recuento diferencial de leucocitos, perfil de proteínas plasmáticas y expresión de inmunoglobulinas en tambaqui.

Además, el aumento de la proliferación de parásitos en las DE más altas investigadas indica una

ruptura de la homeostasis, probablemente debido al estrés causado por estas condiciones de almacenamiento.

El análisis multivariado (PCA) y el análisis de conglomerados posterior revelaron dos conglomerados distintos:

SD1-SD2 y SD3-SD4. Las variables que caracterizaron el estrés fisiológico experimentado

por los peces en este estudio se concentraron en el último grupo. Estos resultados corroboran

DO
hallazgos anteriores de cambios en los parámetros hematológicos y el estado inmunológico de los peces expuestos

a DE altas (Eagderi et al., 2016; Montero et al., 1999; Yarahmadi et al., 2015). A pesar de que
TA
varios estudios han investigado el efecto de la DS en tambaqui, los canales de riego más utilizados
EP

(Silva et al., 2013) o jaulas, que favorecen SD altas porque los desechos metabólicos son rápidamente
AC

eliminado (Santos et al., 2014; Silva y Fujimoto, 2015). Solo unos pocos estudios han investigado

los efectos de SD altas en sistemas basados en tanques o estanques (Oliveira et al., 2007).
TO

La respuesta de los peces al aumento de la DE dependerá del efecto combinado de la

RI

parámetros fisicoquímicos del agua, cuya calidad se ve afectada negativamente por una alta desviación estándar,
SC

cambios en los procesos fisiológicos de los peces y cambios de comportamiento debido a la reducción
NU

espacio físico disponible para sus actividades basales. En el presente estudio, la significativa

reducciones en O 2 niveles, pH y conductividad y mayores niveles de amoníaco y nitrito en el

MA

las DE más altas contribuyeron a una reducción de la calidad del agua en estas DE. En general, estos

las condiciones están asociadas con una mayor mortalidad en la piscicultura (Ellis et al., 2002).

Sin embargo, esto no se observó en el presente estudio. Tambaqui también fue más resistente a

aglomeración en términos de mortalidad que otras especies. Mientras que en el estudio de Lockwood et al.

(1983), caballa ( Scomber scombrus L.) tuvo una mortalidad del 50% después de 48 h cuando se almacenó a
 MANUSCRITO ACEPTADO

densidad de 6,5 kg / m 3, in the present study there was no mortality even at the highest density

(27 kg/m 3).

Although reduced O 2 levels adversely affect fish farming (Saint-Paul, 2017), we

observed only minimal changes in hematology (red cell indices) in C. macropomum in the

present study. This finding is not surprising for this species as its hematology has been shown

to remain stable under various experimental conditions, including variations in pH (Silva et

al., 2013), hypoxia (Alves et al., 1999), high SD (Silva et al., 2013) and the presence of toxic

substances (Affonso et al., 2002). In our study, the O 2 level decreased from 8 mg L- 1 for SD1

DO
to 5 mg L- 1 for SD4. However, this variation was not sufficient to induce stress responses in

C. macropomum as this species is highly resistant to changes in the O 2 content of water

TA
(Saint-Paul, 1984). Una explicación razonable para esta resistencia puede estar relacionada con el bajo nivel de gas.
EP

capacidad de difusión y pérdidas iónicas limitadas en esta especie a pesar de su gran superficie branquial
AC

(Wood et al., 1998). Por tanto, nuestros resultados pueden considerarse indicativos de una especie

respuesta. Aparte de MCH, todos los índices de RBC estaban dentro de los límites normales observados para
TO

otros peces teleósteos (McDonald y Milligan, 1997). En el estudio de Ruane et al. (2002), el
RI

carpa común, Cyprinus carpio, mostró una respuesta de estrés leve al aumento de la densidad de población
SC

(de 28 a 113 kg / m 3), y no se observaron cambios en Hb y Ht después de 87 h de exposición.

NU

La acidez del agua observada en el presente estudio puede estar relacionada con aumentos en la
MA

frecuencia respiratoria de los peces con DE más altas, lo que conduce a una mayor excreción de CO 2 en el ambiente,

posterior formación de ácido carbónico y reducción del pH del agua. Esto es un

hallazgo común con DE altas (Wedemeyer, 1996). En el presente estudio, el pH del agua

se redujo en aproximadamente un 9% en las DE más altas, una variación demasiado pequeña para tener algún efecto en los peces,

como C. macropomum es capaz de regular las pérdidas iónicas y la entrada de ácido en las branquias y es

considerado un pez “resistente a los ácidos” (Wood et al., 1998). Esta característica le permite migrar
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entre cuerpos de agua en la cuenca del Amazonas con una amplia variación en el pH (7.0 a 3.5) sin

exhibiendo importantes cambios fisiológicos (Araújo-Lima y Goulding, 1998). Del mismo modo, el

conductividad más baja en SD más altos (probablemente asociado con la reducción en la cantidad de

materia orgánica disuelta, lo que también explica la turbidez reducida) no parece tener

cualquier importancia fisiológica para las especies comúnmente utilizadas en la piscicultura (Copp, 2003).

El aumento de la producción y la acumulación de amoníaco se encuentran entre las principales limitaciones de

piscicultura intensiva (Wedemeyer, 1996). El estrés provoca un aumento de los niveles de cortisol,

la promoción de la gluconeogénesis, aumento del catabolismo de proteínas y excreción de no ionizados

DO
amoniaco (NH 3) ( Randall y Tsui, 2002). En nuestro estudio, el amoníaco se correlacionó positivamente

con las SD más altas pero correlacionadas inversamente con el pH del agua, lo que sugiere que la menor
TA
forma tóxica e ionizada de este compuesto, el ion amonio (NH + 4), predominó en el
EP

medio ambiente. En general, se acepta que las membranas biológicas son relativamente impermeables a
AC

NH +4, lo que explicaría su baja toxicidad (Randall y Tsui, 2002). En un estudio de Ismiño-

Orbe y col. (2003), el principal residuo nitrogenado excretado por C. macropomum era amoniaco
TO

(93,7%), que se excretó a razón de 0,35 mg L- 1 día- 1. En su entorno natural, el ion-

RI

aguas pobres del río Negro en la región amazónica, Brasil, esta especie excreta amoníaco
SC

a una tasa del 85%, principalmente a través de las branquias (Wood et al., 2017). Según estos autores, la
NU

Las especies no pueden tolerar altos niveles de amoníaco en el medio ambiente y no pueden excretar.
MA

cantidades suficientes de esta sustancia química, lo que indica que el efecto combinado de mayor SD y un

La variación en los parámetros fisicoquímicos puede aumentar la sensibilidad de la especie a

amoníaco.

El aumento significativo del nitrito ambiental, un ion altamente tóxico y

bioacumulativo en peces, puede haber jugado un papel significativo en el aumento de MetHb plasmático

niveles en el presente estudio. Está bien establecido que el nitrito se absorbe activamente a través del
 MANUSCRITO ACEPTADO

branquias y se acumula rápidamente en la sangre y los tejidos de los peces (Costa et al., 2017; Jensen et al.,

2015). En los glóbulos rojos, el nitrito promueve la conversión de Hb en MetHb, que no puede

suelte O 2 a los tejidos (Jensen et al., 2015). También induce la salida de K + de los glóbulos rojos al plasma,

que conduce a la hemodilución y una reducción en el volumen de estas células (Jensen et al., 2015).

Estos eventos pueden explicar las variaciones menores en la hematología de los peces en nuestro estudio como

su gravedad es función de los niveles plasmáticos de nitrito. Cambios hematológicos significativos en

tambaqui fueron reportados por Costa et al. (2004) después de 96 horas de exposición al nitrito.

Los recuentos diferenciales de leucocitos en nuestro estudio concuerdan con las descripciones anteriores para este

DO
especies (Tavares-Dias et al., 2001). La presencia de células de defensa con importantes factores fagocíticos.

El potencial está fuertemente correlacionado con la infestación parasitaria branquial según la PCA,
TA
lo que indica que una SD más alta conduce a estrés, pérdida de homeostasis y activación del sistema inmunológico
EP

sistema. Las células de defensa son muy importantes porque contienen muchas enzimas lisosomales y
AC

especies reactivas de oxígeno producidas durante la fagocitosis. Aunque participan en la

sistema de coagulación, los trombocitos actúan como una conexión entre la inmunidad innata y adaptativa,
TO

y estudios previos han demostrado que participan directamente en la fagocitosis de patógenos

RI

(Tavares ‐ Dias et al., 2007). El estrés de hacinamiento provocó leucopenia en la carpa común,
SC

Cyprinus carpio Ruane et al., 2002) y aumento de la actividad secretora de cortisol de interrrenal
NU

células en la dorada, Sparus aurata, durante una exposición prolongada (Rotllant et al.,

2000). La leucocitosis, que se observó en nuestro estudio, indica la activación de inmuno

MA

defensa en esta fase inicial de estrés; Sin embargo, es posible que con una mayor exposición a

La depresión inmune alta de SD se convierte en el principal evento fisiológico. En el estudio de Sun et al.

(2017), Larimichthys crocea expuesto al hacinamiento durante 96 h mostró un aumento inicial

expresión de genes implicados en la respuesta inmune y la migración de leucocitos, seguida de

inmunosupresión después de una exposición prolongada a altas DE.

 MANUSCRITO ACEPTADO

El fraccionamiento por SDS-PAGE de proteínas plasmáticas se ha estudiado ampliamente en diferentes

especies de peces (Andreeva, 2010). Un patrón de banda similar al encontrado en el presente estudio fue

informado por Dias et al. (2015) para las principales proteínas plasmáticas en tambaqui. En nuestro estudio, el

La banda de proteína plasmática más grande (~ 67 kDa) está dentro del rango de pesos moleculares de muchos

albúminas (65-74 kDa) en vertebrados (Andreeva, 2010). La función principal de esta proteína es

relacionados con la regulación de la presión oncótica sanguínea y el transporte de numerosos endógenos y

compuestos exógenos. Aunque las globulinas y la albúmina representan aproximadamente el 60-97%

de las proteínas plasmáticas totales (Andreeva, 2010), otras proteínas de masa molecular baja presentes en

DO
Las concentraciones también juegan un papel importante en la homeostasis animal. En el presente estudio, el

Las bandas correspondientes a la fracción 27-34 kDa fueron más intensas en las muestras de peces mantenidos en
TA
las densidades más altas (SD3 y SD4). A la inversa, en el plasma de peces mantenidos en SD2, SD3 y
EP

SD4 las bandas correspondientes a la fracción de 6-17 kDa fueron menos intensas. En muchos estudios
AC

Se ha demostrado que estas bandas corresponden a las apolipoproteínas ApoA-I y ApoA-II de

lipoproteína HDL, una proteína involucrada en el transporte inverso de colesterol y lípidos

TO

metabolismo que se ha demostrado más recientemente que es un importante efector de

RI

inmunidad en peces teleósteos (Villarroel et al., 2007). La masa molecular relativa de ApoA-I y
SC

ApoA-II en Cyprinus carpio carpa) era de 27 y 12 kDa, respectivamente (Villarroel et al., 2007).
NU

En Piaractus mesopotamicus ( pacu), una especie estrechamente relacionada con el tambaqui, el HDL está compuesto

de cuatro componentes proteicos, apoHDL-I ( ∼ 45 kDa), apoHDL-II ( ∼ 38 kDa), apoHDL-III ( ∼ 25

MA

kDa, AI) y apoHDL-IV ( ∼ 12,5 kDa, AII) (Folly et al., 2001). Como no tenemos información

sobre el papel de estas lipoproteínas en la inmunidad tambaqui, solo podemos especular que la

Los cambios observados en el perfil de proteínas pueden estar relacionados con cambios metabólicos y

respuesta promovida por el aumento de la DS. El estrés y los cambios en el perfil de lipoproteínas no son
 MANUSCRITO ACEPTADO

poco común en los peces (Babin y Vernier, 1989) ya que, a diferencia de los humanos, estos vertebrados usan lípidos

con preferencia a los carbohidratos como fuente de energía.

En el presente estudio, la alta concentración de inmunoglobulinas reflejada en las bandas

entre 34 y 46 kDa puede deberse al mayor número de parásitos presentes. A pesar de que

las clases de inmunoglobulinas en tambaqui en este estudio no fueron caracterizadas, la proteína

los perfiles corresponden a los de los teleósteos (Choi et al., 2002). La banda entre 34 y 46 kDa

puede corresponder a la cadena pesada de IgT (~ 45 kDa), como se describe para Epinephelus itaira ( Ayunarse,

1971), mientras que entre 27 y 34 kD puede corresponder a las IgM e IgT observadas en otros

DO
teleósteos (Choi et al., 2002). IgM e IgT son las clases de inmunoglobulinas más comunes en peces

suero (Sunyer, 2013); posibles aumentos en los niveles de estos en los peces mantenidos en las
TA
Las DE en nuestro estudio pueden estar relacionadas con una mayor infestación de parásitos.
EP

SD más altas condujeron a cambios en la calidad del agua y la hematología de C. macropomum,

AC

SD3 (16,34 kg / m 3) y SD4 (27,40 kg / m 3) siendo las densidades que resultaron en la mayor

cambios. Es razonable suponer que el deterioro de la calidad del agua, particularmente en términos de
TO

Los desechos nitrogenados, junto con el aumento de la DE, jugaron un papel importante en el
RI

cambios observados y que la respuesta específica de la especie de tambaqui a ácidos e hipóxicos

SC

el agua fue un factor importante en los cambios relativamente pequeños en los índices de glóbulos rojos. los
NU

leucocitosis y trombocitosis observadas aquí se correlacionaron fuertemente con el número de

MA

parásitos branquiales, lo que indica una respuesta innata del huésped, y los cambios en el perfil de proteínas plasmáticas pueden

ser considerado un indicador de cambios metabólicos y la respuesta innata de esta especie a

estrés de hacinamiento. En la piscicultura intensiva, una alta desviación estándar también puede favorecer un aumento

parasitismo en tambaqui. En conclusión, una alta desviación estándar afecta negativamente al bienestar de los peces y

puede comprometer su productividad.

 MANUSCRITO ACEPTADO

Agradecimientos

Este trabajo fue apoyado por CNPq y CAPES. Agradecemos al personal de la

Criadero Fazenda Ecology Pescados SA por su asistencia y por brindar la

pescado, y FAPEAM (Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas) por proporcionar

asistencia financiera (subvención no. 062.00821 / 2014 / PAPAC). JLVL, CALF y RLS son destinatarios

de una beca de posgrado de CAPES, y MCS ha recibido una beca CNPq-PQ (no.

303032 / 2016–2). También nos gustaría agradecer a Erilene Carmo dos Santos por proporcionar

asistencia técnica durante el análisis de laboratorio.

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A., Val, AL, 1998. Respuestas de un teleósteo amazónico, el tambaqui ( Colossoma macropomum),
SC

a pH bajo en agua extremadamente blanda. Zoología fisiológica. 71, 658-670.

NU

Yarahmadi, P., Miandare, HK, Hoseinifar, SH, Gheysvandi, N., Akbarzadeh, A.,
2015. Los efectos de la densidad de población en los parámetros hematoinmunológicos y bioquímicos
séricos de la trucha arco iris ( Oncorhynchus mykiss). Aquaculture International. 23, 55-63.
MA
 MANUSCRITO ACEPTADO

Leyendas de figuras

Figura 1. (A) Carga de parásitos branquiales en tambaqui ( C. macropomum) después de la exposición a diferentes SD

durante 96 h. BD. Imagen microscópica de filamentos branquiales y parásitos en las laminillas y

filamentos. Las diferencias significativas (p <0.05, prueba de Tukey) en las comparaciones por pares son

indicado por la misma letra.

Figura 2. Tambaqui ( Colossoma macropomum) leucocitos: (A) monocitos, metro ; (SEGUNDO)

linfocitos, l y trombocitos, t ; (C) neutrófilos, norte ; (D) eosinófilos, mi . La barra negra

corresponde a 10 • metro. Mancha: MGGW.

DO
Figura 3. Perfil de proteína de electroforesis SDS-PAGE de C. macropomum después de la exposición a
TA
diferentes SD (SD1 a SD4). (A) proteínas plasmáticas totales; (B) inmunoglobulinas obtenidas por
EP

precipitación con ácido caprílico sin reducción; (C) inmunoglobulinas obtenidas por
AC

precipitación con ácido caprílico con reducción. MW, peso molecular en kDa.

Figura 4. Variables fisiológicas y fisicoquímicas después del análisis de componentes principales.

TO

Los tratamientos están representados por los símbolos negros con las respectivas densidades de población (SD).
RI

Figura 5. Dendrograma jerárquico para 12 variables obtenidas por agrupamiento pareado (el
SC

las distancias reflejan el grado de correlación entre diferentes tratamientos). El dendrograma

NU

segrega claramente los clusters SD1-SD2 y SD3-SD4 y muestra que hay una gran
MA

Distancia euclidiana entre ellos.

 MANUSCRITO ACEPTADO

Tabla 1. Características del agua en experimentos de densidad de población (SD) de peces con C.

macropomum después de 96 horas expuestas a diferentes densidades (SD1 = 2,11 kg / m 3; SD2 = 8,31 kg / m 3;

SD3 = 16,34 kg / m 3; SD4 = 27,40 kg / m 3). Media ± desviación estándar (n = 6). Significativo

las diferencias (p <0,05) entre la comparación por pares se indican con letras diferentes.

Parámetro SD1 SD2 SD3 SD4

O 2(ppm) 7,85 • 0,44 un 6,85 • 0,34 a, b 4.13 • 0,25 discos compactos 4.87 • 0,32 C

Conductividad ( • S) 91,36 • 4.57 un 77,44 • 4.15 a, b ••••••• 3,15 discos compactos

••••••• 3,67 C

DO
pH 7.38 • 0,07 un 7.03 • 0,07 segundo
TA 6,68 • 0,06 discos compactos 6,74 • 0,06 re

Temperatura (ºC) 27,31 • 0,25 un 27,34 • 0,18 un 27,47 • 0,14 un 27,41 • 0,15 un
EP

Turbidez (NTU) 7,65 • 0,70 un 6,84 • 0,70 un 6.18 • 0,78 un 6.15 • 0,61 un
AC

Amoniaco (mg / L) 0,20 • 0,02 un 0.47 • 0,06 a, b 1.07 • 0,14 discos compactos 0,94 • 0,17 re

Nitrito (mg / L) 0,00 • 0,00 un 0,02 • 0,01 a, b 0,01 • 0,00 a, b 0,08 • 0,02 segundo
TO
RI
SC
NU
MA
 MANUSCRITO ACEPTADO

Cuadro 2. Peso, talla e índices de glóbulos rojos de peces en experimentos de densidad de población (DE) de peces

con C. macropomum después de 96 horas expuestas a diferentes densidades (SD1 = 2,11 kg / m 3; SD2 = 8,31

kg / m 3; SD3 = 16,34 kg / m 3; SD4 = 27,40 kg / m 3). Media ± desviación estándar (n = 6). Significativo

las diferencias (p <0,05) entre la comparación por pares se indican con letras diferentes.

Parámetro SD1 SD2 SD3 SD4

Peso (gramos) 84,30 ± 11,35 un 66,50 ± 4,07 un 72,60 ± 7,78 un 84,30 ± 9,23 un

Longitud estándar (cm) 14,86 ± 0,55 un 14,61 ± 0,35 un 13,29 ± 0,61 un 13,65 ± 0,47 un

DO
Longitud total (cm) 16,94 ± 0,57 un 15,82 ± 0,35 un
TA 16,29 ± 0,58 un 17,10 ± 0,57 un

Altura (%) 39,97 ± 0,93 un 38,94 ± 1,06 un 37,36 ± 0,95 un 36,72 ± 1,57 un
EP

Hb (g / dl) 5,97 ± 0,31 un 6,46 ± 0,18 un 6,10 ± 0,27 un 5,91 ± 0,10 un

AC

RBC (x 10 6 / mm 3) 2,00 ± 0,10 un 1,80 ± 0,03 un 1,87 ± 0,09 un 1,95 ± 0,04 un

MCV (mm 3) 203,44 ± 9,19 a, b 216,61 ± 4,70 un 201,56 ± 6,32 a, b 188,08 ± 7,45 segundo
TO

MCH (pág) 30,46 ± 1,93 un 35,94 ± 0,80 segundo 32,80 ± 1,39 a, b 30,29 ± 0,47 a, b
RI

MCHC (%) 15,05 ± 0,90 un 16,62 ± 0,36 un 16,33 ± 0,58 un 16,40 ± 0,89 un
SC

MetHb (%) 0,25 ± 0,04 un 0,34 ± 0,07 a, b 0,33 ± 0,03 a, b 0,36 ± 0,02 segundo
NU
MA
 MANUSCRITO ACEPTADO

Cuadro 3. Recuento total de trombocitos y leucocitos evaluados en densidades de población de peces (DE)

experimentos con C. macropomum después de 96 horas expuestas a diferentes densidades (SD1 = 2,11 kg / m 3;

Parámetro SD1 SD2 SD3 SD4

Trombocitos 14.581,00 ± 13,155.00 ± 15,410.00 ± 21.419,00 ±

(por μL) 3.995,21 un 3.253,49 a, b 5.234,44 a, b 3.148,82 segundo

52.533,00 ± 85,630.00 ± 171.172,00 ± 205.272,00 ±

WBC (por μL)
10.328,65 un 13.508,31 a, b 45.630,80 a, b 48.586,54 segundo

DO
Linfocitos 16,707.09 ± 30.810,99 ±
TA 65.802,91 ± 56.974,83 ±

(por μL) 3.122,94 un 8.585,70 a, b 25691.41 a, b 15.676,82 segundo

Monocitos (por 34.955,44 ± 54.387,37 ± 103,914.44 ± 147.297,14 ±

EP

32.837,20 segundo
μL) 7.575,45 un 12.974,56 a, b 47.164,26 segundo
AC

Neutrófilos (por 283,06 ± 147,46

855,70 ± 184,70 un 380,01 ± 212,31 un 500,47 ± 355,86 un
TO

μL) un

Eosinófilos (por 716,95 ± 338,80

RI

0,10 ± 0,00 un 51,61 ± 25,20 a, b 406,58 ± 180,37 segundo

SC

μL) segundo

SD2 = 8,31 kg / m 3; SD3 = 16,34 kg / m 3; SD4 = 27,40 kg / m 3). Media ± desviación estándar
NU

(n = 6). Las diferencias significativas (p <0.05) entre la comparación por pares se indican mediante diferentes
MA

letras.
 MANUSCRITO ACEPTADO

Tabla 4. Densitometría de proteínas totales e inmunoglobulinas separadas del plasma de C.

macropomum después de 96 horas expuestas a diferentes densidades (SD1 = 2,11 kg / m 3; SD2 = 8,31 kg / m 3;

SD3 = 16,34 kg / m 3; SD4 = 27,40 kg / m 3). Media ± desviación estándar (n = 6). Significativo

las diferencias (p <0,05) entre la comparación por pares se indican con letras diferentes.

Densitometria
SD1 SD2 SD3 SD4
(valores de píxeles)

Proteínas plasmáticas

DO
6-17 kDa 34,242 ± 15,44 un 23,102 ± 16,28 a, b 11,493 ± 3,70 segundo 10,469 ± 4,45 segundo

27-34 kDa 30,422 ± 11,84 un 23,920 ± 14,82 un 22,995 ± 8,82 un 20,404 ± 12,39 un
TA
46 kDa 38,086 ± 10,38 un 25,396 ± 14,29 un 29,332 ± 10,38 un 26,528 ± 11,44 un
EP

73 kDa 33.522 ± 8.100 un 29,004 ± 9,45 un 27,414 ± 7,94 un 27,699 ± 7,46 un

AC

220 kDa 40,119 ± 9,61 un 37,783 ± 16,35 un 37 376 ± 7,04 un 39,663 ± 8,61 un
TO

Inmunoglobulinas

27-34 kDa 22,820 ± 6,74 un 29,648 ± 10,98 un 24,528 ± 7,81 un 25.992 ± 10,23 un
RI

34-46 kDa 11,970 ± 1,03 un 13.510 ± 50 a, b

SC

21,779 ± 2,00 discos compactos 18,017 ± 1,15 re

46-73 kDa 20,706 ± 6,24 un 17,542 ± 3,93 un 23,924 ± 5,14 un 25,911 ± 86 un

NU

73-113 kDa 16.735 ± 1,85 un 13,240 ± 2,66 un 12,676 ± 3,32 un 13,447 ± 1,23 un
MA
 MANUSCRITO ACEPTADO

Los efectos de la densidad de población sobre la hematología, el perfil de proteínas plasmáticas y

producción de inmunoglobulina de tambaqui juvenil ( Colossoma macropomum) cultivado en Brasil

Nota corta

La densidad de población (DE) adecuada de peces de cultivo es uno de los factores más importantes que afectan

el bienestar de estos animales. Tambaqui Colossoma macropomum) es el más criado

pescado en la región amazónica. No hay información sobre los efectos fisiológicos de la SD en

esta especie. Encontramos que un aumento de la DE conduce a cambios en la calidad del agua y la hematología de

DO
C. macropomum, SD3 (16,34 kg / m 3) y SD4 (27,40 kg / m 3) siendo las densidades que resultaron
TA
en los mayores cambios. El efecto combinado de un deterioro de la calidad del agua, particularmente en
EP

términos de residuos nitrogenados, y el aumento de SD debe haber jugado un papel importante en la

cambios fisiológicos observados. Las densidades más altas están muy estrechamente asociadas con
AC

inducción de inmunidad celular en los peces. En estas circunstancias, la proteína plasmática

TO

cambios de perfil, produciendo efectos que probablemente sean perjudiciales para el bienestar de
RI

pescado de piscifactoría.
SC
NU
MA
 MANUSCRITO ACEPTADO

Destacar

• Pescado amazónico, Colossoma macropomum, estuvo expuesto a diferentes niveles de

La densidad de población (SD) y la sangre completa y el plasma se analizaron para detectar cambios en

hematología y perfil de proteínas plasmáticas (proteínas totales e inmunoglobulinas) y

Se retiraron los filamentos branquiales para el análisis de parasitismo.

• Los parámetros fisicoquímicos del agua y las características fisiológicas

de los peces se combinaron en un análisis multivariado (PCA) para identificar más

objetivamente los efectos de diferentes DE sobre estos parámetros.

DO
• El análisis de PCA multivariado reveló una fuerte asociación positiva entre el
TA
SD más alto (SD3 y SD4) y recuento de parásitos, células inmunes (eosinófilos,
EP

trombocitos, monocitos y linfocitos) y niveles de amoniaco y nitrito en agua.

Por el contrario, las DE más altas se asociaron negativamente con las variables de calidad del agua.
AC

(pH, turbidez, conductividad y O 2 contenido) y hematocrito en sangre.

TO

• Los resultados mostraron que las DE más altas contribuyeron al deterioro del agua.
RI

calidad, lo que resulta en un aumento de los niveles de MetHb, parasitismo branquial, proliferación de defensas
SC

células, perfil proteico alterado y estimulación de la producción de inmunoglobulinas.

• Estos cambios sugieren que el bienestar del tambaqui se ve afectado negativamente por la alta
NU

densidades de población.
MA
Figura 1
Figura 2
figura 3
Figura 4
Figura 5