La penicilina se hidroliza, y con ello se inactiva, por la penicilinasa (también conocida como beta

lactamasa), un enzima presente en algunas bacterias resistentes al antibiótico. La masa de esta

enzima en Staphylococcus aureus es de 29.6 kDa. La cantidad de penicilina hidrolizada por minuto
en una disolución de 10 ml que contiene 10 -9g de penicilinasa purificada se midió en función de la
concentración de penicilina.

[Penicilina] uM Cantidad hidrolizada (nanomoles)

1 0.11
3 0.25
5 0.34
10 0.45
30 0.58
50 0.61

(a) Representa V0 frente [S], y 1/V0 frente a 1/[S], a partir de los datos de la tabla.

M [s] M [Vo] 1/s 1/Vo

1.00E-06 1.10E-10 1.00E+06 9.09E+09

3.00E-06 2.50E-10 3.33E+05 4.00E+09

5.00E-06 3.40E-10 2.00E+05 2.94E+09

1.00E-05 4.50E-10 1.00E+05 2.22E+09

3.00E-05 5.80E-10 3.33E+04 1.72E+09

5.00E-05 6.10E-10 2.00E+04 1.64E+09

Para nm a M
 10−9 M 10−9 M
0.11 nm ( 1 nm )=1.10E-1 0 M 0. 45 nm
1 nm ( )
=1.10E-1 0 M

10−9 M 10−9 M
0. 25 nm ( 1 nm )=1.10E-10 M 0.58 nm
1 nm ( )
=1.10E-1 0 M

10−9 M 10−9 M
0. 34 nm ( 1 nm )
=1.10E-1 0 M 0. 62 nm
1 nm ( )
=1.10E-10 M

Para μM a M

10−6 M 10−6 M
1 μm (
1 μm )
=1E−6 M 1 0 μm
1 μm
=1E−5 M ( )
10−6 M 10−6 M
3 μm ( 1 μm )
=3 E−6 M 30 μm
1 μm (
=3 E−5 M )
10−6 M 10−6 M
5 μm ( 1 μm )
=5 E−6 M 50 μm
1 μm (
=1E−5 M )

Michealis-Menten
7.00E-10

6.00E-10

5.00E-10

4.00E-10
Vo M

3.00E-10

2.00E-10

1.00E-10

0.00E+00
0.00E+00 1.00E-05 2.00E-05 3.00E-05 4.00E-05 5.00E-05 6.00E-05
[s M]
 Linealizacion
1.00E+10
9.00E+09
f(x) = 7622.51 x + 1460192678.32
8.00E+09 R² = 1

7.00E+09
6.00E+09
1/[Vo]

5.00E+09
4.00E+09
3.00E+09
2.00E+09
1.00E+09
0.00E+00
0.00E+00 2.00E+05 4.00E+05 6.00E+05 8.00E+05 1.00E+06 1.20E+06
1/[s]
(b) ¿Te parece que la penicilinasa obedece a una cinética de Michaelis-Menten? Si

(c) Si es así ¿cuál es el valor de V max ?

km
∗1
1 Vmax 1
= + se utiliza la ecuacionde linealizacion
Vo [S] Vmax

1 1
=1E-9 =1E9 Vmax
Vmax 1E-9

(d) ¿Cuál es el valor de k m?

km
=Vmax km=(1E9)(Vmax)
Vmax

km= (7622.5 )( 1E9 )=7,6225E12

(e) ¿Cuál es el número de recambio de la penicilinasa (K cat) en estas condiciones

experimentales? Considera que haya un centro activo por molécula de enzima.

g
2,96E4 Dalton
( )
1
mol
1 Da
=2,96 0000 g /mol

Vmax 1E9
Kcat = = =3448.27
[ Et ] 2,960000

kcat=10e9 gx 2,90000 g/m

 (f) Calcule cuanto tiempo le toma a la enzima transformar un mol de sustrato en producto.

Ayudas: 1 Da = 1g/mol
trabajar con moles desde el principio