Clara Martínez Jaromir Kenneth

Ingeniería en biotecnología
3434978 / 74600774
Bioprocesos

La penicilina es hidrolizada y con ello inactivada por la penicilasa, una enzima presente
en algunas bacterias resistentes a la penicilina. El peso de este enzima en Staphylococcus
aureus es de 29.6 kDa. La cantidad de penicilina hidrolizada en un minuto en una
disolución de 10 ml que contiene 10 -9g de penicilasa purificada se midió como función
de la concentración de penicilina. Suponiendo que la concentración de penicilina no
cambia apreciablemente durante el ensayo, representar 1/v frente a 1/[S] a partir de los
siguientes datos:

[Penicilina] moles
hidrolizados/min 0.1 x 10-5M
0.11 x 10-9
0.3 x 10-5M 0.25 x 10-9
0.5 x 10-5M 0.34 x 10-9
1 x 10-5M 0.45 x 10-9
3 x 10-5M 0.58 x 10-9
5 x 10-5M 0.61 x 10-9

¿Sigue la penicilasa una cinética de Michaellis Menten? Si es así ¿cuál es el valor de

Km?;
¿cuál es el valor de Vmax?

1 9
V m ax = 9
=1 X 10
1 X 10
km 7622.5 1
k m= =
V m ax 1 X 109
−6
k m=7.6225 X 10 M

El salicilato inhibe la acción catalítica de la glutamato deshidrogenasa. Determinar el tipo

de inhibición mediante el análisis gráfico de los siguientes datos. Suponer que la
concentración de salicilato se mantiene constante y es de 40 mM. Calcular también la
Km para el sustrato y la Ki (constante de disociación para el complejo enzima- inhibidor).

[S] mM 1,5 2,0 3,0 4,0 8,0 16,0

mg P/min (sin salicilato) 0,21 0,25 0,28 0,33 0,44 0,40
mg P/min (con salicilato) 0,08 0,10 0,12 0,13 0,16 0,18
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14

12
f(x) = 11.109128375077 x + 4.80121005908082
R² = 0.991971255656207
10

4 f(x) = 4.04919355706431 x + 2.04850851992526

R² = 0.965097266811302
2

0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8

1
=
km
( 1
+
1
)
Vo Vmax { S } Vmax
1
k m=4.0492 +2.0485
{S }
1 4.0492
k m= =
{ S } 2.0485
k m=1 .9767 mM

1
=
km
( 1
+
1
)
Vo Vmax { S } Vmax
1
k m=11,109 + 4,8012
{S }
1 11,109
k m= =
{ S } 4,8012
k m=2.3138 mM

A partir de los siguientes datos de una reacción enzimática, determinar el tipo de

inhibición, la Km del sustrato, y la Ki para el complejo enzima-inhibidor.

[S] mM 2.0 3.0 4.0 10.0 15.0

g P/h (sin inhib.) 139 179 213 313 370
g P/h (con inhib. 6mM) 88 121 149 257 313
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400
350
300
250
200
150
100
50
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16

km y ki
0.012
f(x) = 0.0187982700375881 x + 0.00198552195702263
0.01 R² = 0.999912483217282

0.008 f(x) = 0.0104963837911547 x + 0.003227115166767

R² = 0.718008422271859
0.006

0.004

0.002

0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6

1
=
km
( 1
+
1
)
Vo Vmax { S } Vmax
1
k m=0.0188 +0.002
{S }
1 0.0188
k m= =
{ S } 0.002
k m=9.4 mM

1
=
km
( 1
+
1
)
Vo Vmax { S } Vmax
1
k m=0.0105 +0.0032
{S }
1 0.0105
k m= =
{ S } 0.0032
k m=3.2813 mM