TRABAJO DE LABORATORIO N º 8

EXTRACCION Y CUANTIFICACIÓN DE COLESTEROL

 OBJETIVOS

Extraer esteroles de muestras de tejido animal o vegetal.

Cuantificar colesterol y compuestos derivados en distintos tejidos.

 INTRODUCCION TEORICA

El colesterol es un alcohol cíclico de alto peso molecular que se encuentra en todos los

eucariontes. Es un compuesto sólido, blanco, cristalizable y es el menos polar de todos los

lípidos, completamente insoluble en agua y soluble en solventes orgánicos.

El colesterol en los organismos proviene de la alimentación o por síntesis endógena, se

sintetiza en todas las células animales en especial en células hepáticas, de la corteza

suprarenal y en el tejido nervioso. Forma parte de las membranas celulares, de la mielina

del cerebro, es precursor de hormonas esteroideas tales como progesterona, andrógenos,

estradiol y cortisol; da origen a los ácidos biliares, se encuentra como componente de

lipoproteínas del plasma. En el plasma existe también en forma libre

o esterificado con ácidos grasos debido a la presencia de un grupo-OH en su molécula.

Los Fitoesteroles son compuestos que se encuentran generalmente en los granos de trigo

y maíz. Constituyen la base de la síntesis de la vitamina D, siendo el principal

constituyente el ergosterol. El organismo sintetiza Vitamina D a partir de estos precursores

y por acción de la radiación UV del sol.

 MATERIALES Y METODOS

Cloroformo, Sulfato de cobre anhidro, Anhídrido acético, Ac. Sulfúrico concentrado,

Solución estándar de colesterol 2g/l en cloroformo.

Papel de filtro, varilla de vidrio, mortero, vasos de precipitados, probetas, tubos de

ensayo, pipetas.

Fundamento de la reacción de Lieberman- Burchard:

A temperatura ambiente el colesterol se combina con anhídrido acético y ácido sulfúrico

concentrado, para dar una solución color verde pardusco intenso.

El método usado en este práctico de laboratorio se basa en la extracción del colesterol del

material biológico por medio de cloroformo en presencia de CuSO 4 anhídro, que posee la

particularidad de producir la deshidratación inmediata del medio y facilita la solubilidad del

colesterol en cloroformo.

Reactivos Peligrosos

o Cloroformo. TÓXICO, VENENOSO, INFLAMABLE Y EXPLOSIVO. En caso de

derrame, evacuar la zona, recoger el líquido en recipientes herméticos, absorber el
líquido restante en arena o absorbente inerte y trasladarlo a un lugar seguro. En
caso de inhalación, trasladar a la persona al aire libre; en contacto con la piel lavar
con abundante agua y quitar la ropa contaminada. En contacto con los ojos lavar
con abundante agua durante 15 minutos con los párpados abiertos y pedir
atención médica. Por ingestión, beber abundante agua y pedir atención médica.
o Anhídrido acético. INFLAMABLE. En caso de incendio se desprenden humos tóxicos
e irritantes, por encima de 49 ºC pueden formarse mezclas explosivas con vapor o
aire. Por inhalación llevar a la persona al aire libre, dejar en reposo, semi-
incorporado y proporcionar asistencia médica. En contacto con la piel, quitar las
ropas contaminadas, lavar con abundante agua y llamar al médico. En contacto
con los ojos lavar con abundante agua durante 15 minutos con los párpados
abiertos y pedir atención médica. Por ingestión, beber abundante agua, evitar el
vómito, pedir atención médica.
o Ácido Sulfúrico concentrado. CORROSIVO. Provoca quemaduras graves. No
neutralizar, en caso de derrame no inhalar los vapores, recoger con material
absorbente, arena o tierra seca, depositar en contenedores para su eliminación de
acuerdo a las normativas. Limpiar los restos con agua y neutralizar con NaOH
 diluido. Por inhalación llevar a la persona al aire libre, dejar en reposo y
proporcionar asistencia médica. En contacto con la piel, quitar las ropas
contaminadas, lavar con abundante agua y llamar al médico. Por contacto con los
ojos lavar con abundante agua durante 15 minutos con los párpados abiertos y
pedir atención médica. Por ingestión, beber abundante agua, evitar el vómito,
pedir atención médica.

 ACTIVIDADES

Pesar 0,5 g de material biológico. Si se realiza con huevo, pesar el huevo entero (clara y

yema) y luego aparte la yema.

Triturar en mortero y colocar en un vaso de precipitado que contenga CuSO 4 anhídro,

humedecido en cloroformo (cada 0,5 g de material usar 4,0 g de CuSO 4 anhídro).

Agitar con varilla de vidrio 15 minutos e ir agregando pequeñas cantidades de cloroformo

hasta llegar a un volumen final aproximado de 20 ml.

Filtrar por papel de filtro, recibir el filtrado en una probeta. Medir el volumen.

Realizar la curva de calibración que se indica a continuación:

Anh. Acético H2SO4 Colesterol Cloroformo Mezclar, dejar 10 minutos en la

Tubo
(ml) (ml) 2g/l (ml) (ml) oscuridad, leer a 530 nm.

Bco 0,76 0,04

----------- 1,00
1 0,76 0,04 0,02
0,98
2 0,76 0,04 0,04
0,96
3 0,76 0,04 0,06
0,94
4 0,76 0,04 0,08
0,92
5 0,76 0,04 0,1
0,9
X1 0,76
0,04
X2 0,76
0,04
X3 0,76
0,04
  GUIA PARA CONCLUSIONES

Graficar la curva de calibración Abs vs. gr de colesterol.

Calcular la concentración del colesterol de la muestra y referir la misma en gr de

colesterol/100 gr de muestra (%).

Comparar los valores obtenidos con los de tablas.