1.

Recuento de aerobios mesófilos (NMP)

Procedimiento de generación de dilución madre y diluciones hijas:

Se pesan 1g de la muestra de celulosa y se coloca en 9mL en agua

peptonada (caldo nutritivo). Se debe agitar brevemente con el objetivo de
liberar contenido bacteriano en el fluido. Dejar reposar 2 minutos.

Posteriormente, se obtendrá 1mL de esta solución y se agregarán a 9mL de

agua peptonada nuevamente, con el objetivo de generar una dilución 1/100.
Repetir esta operación con la nueva solución para obtener la última dilución,
1/1000.

Procedimiento de siembra:

Se deposita 1mL de la muestra en placas Petri estériles vacías y se agrega

15 – 20 mL de medio de cultivo.

Para el recuento de aerobios mesófilos se utiliza el medio de cultivo

agar-levadura-glucosa.

Se agita moviendo la placa tapada sobre la superficie de la mesa con

movimientos circulares para mezclar la muestra con el agar.
Se deja solidificar el agar a temperatura ambiente (al menos 30 minutos) y
se llevan las placas a incubar.

Para el recuento de mesófilos aerobios, se deben dejar incubar por 48

horas a 35°C.

Para realizar el conteo se hace uso de un cuenta-colonias; se coloca la

placa Petri con la base hacia arriba y, si es necesario, se divide en sectores
marcando mediante un lápiz los diámetros.

Número de UFC/g = Número de colonias x factor de dilución.

2. Recuento de mohos y levaduras

Procedimiento de generación de dilución madre y diluciones hijas:

Se pesan 1g de la muestra de celulosa y se coloca en 9mL en agua

peptonada (caldo nutritivo). Se debe agitar brevemente con el objetivo de
liberar contenido bacteriano en el fluido. Dejar reposar 2 minutos.

Posteriormente, se obtendrá 1mL de esta solución y se agregarán a 9mL de

agua peptonada nuevamente, con el objetivo de generar una dilución 1/100.
 Repetir esta operación con la nueva solución para obtener la última dilución,
1/1000.

Procedimiento de siembra:

Para el recuento se utiliza el medio de cultivo agar-papa-dextrosa.

Extender cuidadosamente el inóculo (la muestra) sobre la superficie de la

placa con la ayuda de una varilla de vidrio acodada y estéril.

Incubar a las placas de agar a 22-25 ºC durante 5 días. Las placas se

incuban en posición normal (no invertida) porque las colonias de
levaduras y hongos filamentosos crecen mejor de esta manera.

Para realizar el conteo se hace uso de un cuenta-colonias; se coloca la

placa Petri con la base hacia arriba y, si es necesario, se divide en sectores
marcando mediante un lápiz los diámetros.

Número de UFC/g = Número de colonias x factor de dilución.

Colonias típicas de Hongos filamentosos: colonias de aspecto

algodonoso de diverso tamaño y color.

Colonias típicas de levaduras: colonias convexas, suelen ser brillantes

y de color crema o rosa pálido.

3. Presencia de coliformes totales

Procedimiento de generación de dilución madre y diluciones hijas:

Se pesan 1g de la muestra de celulosa y se coloca en 9mL en agua

peptonada (caldo nutritivo). Se debe agitar brevemente con el objetivo de
liberar contenido bacteriano en el fluido. Dejar reposar 2 minutos.

Posteriormente, se obtendrá 1mL de esta solución y se agregarán a 9mL de

agua peptonada nuevamente, con el objetivo de generar una dilución 1/100.
Repetir esta operación con la nueva solución para obtener la última dilución,
1/1000.

Procedimiento de preparado de muestra:

Para el análisis de coliformes totales y fecales se utiliza el medio de

cultivo Fluorocult.
 Se toma una alícuota de las soluciones preparadas anteriormente con una
micropipeta (4μL – 5μL) y se añaden a los tubos de ensayo con el medio de
cultivo y campana de Durhams.

Para el recuento de coliformes totales se utiliza el medio de cultivo

Cromocult.

Extender cuidadosamente el inóculo (la muestra) sobre la superficie de la

placa con la ayuda de una varilla de vidrio acodada y estéril.

Incubar a las placas de agar y tubos de ensayo a 37 ºC durante 24 a 48

horas.

Para realizar las pruebas, se debe revisar si la campana de Durhams

tiene burbuja de gas formada en su interior, o bien, adicionar el
reactivo de Kovaks y verificar la formación de un anillo rojo en la
superficie (resultado positivo en ambos casos).

Para las placas, el análisis se realiza visual, siendo las bacterias de

color celeste indicadoras de presencia de diferentes a la E. Coli,
mientras que las de color morado son E. Coli

4. Presencia de Salmonella spp

Procedimiento de generación de dilución madre y diluciones hijas:

Se pesan 1g de la muestra de celulosa y se coloca en 9mL en agua

peptonada (caldo nutritivo). Se debe agitar brevemente con el objetivo de
liberar contenido bacteriano en el fluido. Dejar reposar 2 minutos.

Posteriormente, se obtendrá 1mL de esta solución y se agregarán a 9mL de

agua peptonada nuevamente, con el objetivo de generar una dilución 1/100.
Repetir esta operación con la nueva solución para obtener la última dilución,
1/1000.

Procedimiento de preparado de muestra:

Para la determinación de Salmonella SPP se utiliza el medio de cultivo

Agar SS.

Se deposita 1mL de la muestra en placas Petri estériles vacías y se agrega

15 – 20 mL de medio de cultivo.
 Incubar a las placas de agar a 35°C durante 24 a 48 horas.

Para realizar las pruebas, se debe observar formación de colonias de color

negro dentro del medio de cultivo y la presencia de colonias con formas
redondas.
Las colonias fermentadoras de lactosa son rojas

5. Presencia de Staphylococcus aureus

Procedimiento de generación de dilución madre y diluciones hijas:

Se pesan 1g de la muestra de celulosa y se coloca en 9mL en agua

peptonada (caldo nutritivo). Se debe agitar brevemente con el objetivo de
liberar contenido bacteriano en el fluido. Dejar reposar 2 minutos.

Posteriormente, se obtendrá 1mL de esta solución y se agregarán a 9mL de

agua peptonada nuevamente, con el objetivo de generar una dilución 1/100.
Repetir esta operación con la nueva solución para obtener la última dilución,
1/1000.

Procedimiento de preparado de muestra:

Para la determinación de Staphylococcus aureus se utiliza el medio de

cultivo Agar Manitol Sal.

Se deposita 1mL de la muestra en placas Petri estériles vacías y se agrega

15 – 20 mL de medio de cultivo.

Incubar a las placas de agar a 35°C durante 24 a 48 horas.

Para realizar las pruebas, se debe observar formación de colonias de color

rojo.