SÍNTESIS DE ESPIONES PARA LA SEPARACIÓN MAGNÉTICA

Nanopartículas de óxido de hierro superparamagnéticas (SPION)

Existen varios métodos para preparar nanopartículas en general. Para aplicaciones médicas, los
MNP generalmente se preparan mediante métodos de coprecipitación, descomposición térmica,
ablación con láser, microemulsión y deposición de vapor químico o descarga por arco. Porque estos
métodos producen MNP esféricas y de dispersión estrecha.

Aunque los metales ferromagnéticos como el hierro, el cobalto y el níquel tienen una mayor
magnetización de saturación, pero son tóxicos, por lo tanto, generalmente se usa óxido de hierro
en forma de magnetita (Fe3O4) o maghemita (γFe2O3).

La separación facilitada del medio bulk por fuerza magnética es la propiedad más atractiva de las
MNP. Para ellos se necesita un separador magnético funciona con un principio simple:

En esta técnica, la mezcla fluida que contiene el material objetivo pasa a través de una región que
tiene un gradiente de campo adecuado que inmoviliza el material etiquetado a través de la fuerza
magnética (Fm) que debe superar la fuerza de arrastre hidrodinámico (Fd) (La fuerza sobre un objeto
por parte de un fluido para resistir su movimiento a través de él)

DIRECT BINDING TECHNIQUE

Las biomoléculas como la albúmina de suero bovino (BSA), la glucosa oxidasa (GOD), la
inmunoglobulina (IG), etc.tienen poca estabilidad frente al pH, el calor u otros factores y son difíciles
de recuperar y reutilizar cuando se les permite reaccionar con otros bioquímicos. En este sentido,
la inmovilización es una herramienta poderosa para recuperar y reutilizar biomoléculas que no han
reaccionado. La inmovilización mediante nanopartículas permite la inmovilización a gran escala sin
utilizar materiales tóxicos. Los métodos desarrollados para la inmovilización de proteínas en
nanopartículas magnéticas de hierro incluyen principalmente inmovilización física, conjugación
covalente e interacciones específicas mediadas biológicamente. Estos métodos son eficientes y
rentables. Por ejemplo

La inmovilización de moléculas de albúmina de suero bovino (BSA) utilizando MNP de magnetita

como soporte se llevó a cabo en presencia de carbodiimida. Se demostró que más del 90% de las
moléculas de BSA se pueden unir a las MNP y se puede retener aproximadamente el 70% de la
actividad de BSA.

Las nanopartículas magnéticas de Fe3O4 o γFe2O3 se sintetizan utilizando el método de

coprecipitación estándar. Este método es sencillo y muy utilizado. Se mezclaron soluciones
estequiométricas de sales ferrosas y férricas con una base alcalina (NH4OH o NaOH) y después de
agitar vigorosamente se obtuvieron precipitados negros que maduraron a aproximadamente 800ºC
a pH básico (~ 10). Las tres dispersiones se mezclaron y se agitaron durante 24 horas. Después de
24 horas, las partículas unidas se eliminaron con la ayuda de un imán.

La unión se confirmó mediante estudios de micrografía electrónica (microscopio electrónico de

transmisión), mediciones magnéticas y espectroscopía FTIR. La absorción de UV a 260 nm se utilizó
para la estimación de proteínas.
Los resultados indican que:

En condiciones óptimas, más del 90% de la proteína se unió a las partículas magnéticas y se retuvo
el 75% de la actividad enzimática.

La unión óptima depende de la relación de concentración de las partículas magnéticas, carbodiimida

y biomoléculas.

Actividad antibacterial:

El desarrollo de agentes antimicrobianos para combatir la resistencia microbiana es un tema de

interés actual [144]. La actividad antibacteriana de las nanopartículas magnéticas de oro (Au) y plata
(Ag) es bien conocida y varios artículos y revisiones interesantes están disponibles en la literatura
abierta.

Las nanopartículas de plata son bien conocidas por su actividad antibacteriana. La plata y los
compuestos a base de plata se han utilizado ampliamente en muchas aplicaciones bactericidas
porque la plata puede tener una ventaja importante sobre los antibióticos convencionales, ya que
mata a todos los microorganismos patógenos, y nunca se ha informado que ningún organismo
desarrolle fácilmente resistencia a ella. Al mismo tiempo, la plata y sus productos terminan en el
medio ambiente durante la eliminación de desechos. Esto plantea riesgos potenciales, ya que se ha
establecido que las nanopartículas de plata tienen el potencial de dar lugar a problemas de salud y
ecotoxicidad que dependen de la concentración [159]. Si se usa un sistema nanomagnético como
núcleo y nanopartículas de plata como caparazón, y se utilizan las nanoestructuras núcleo-
caparazón resultantes para la actividad antimicrobiana en su estado coloidal y, posteriormente, se
eliminan del medio por medio de un campo magnético externo, entonces los problemas pueden ser
evitado.

Las propiedades magnéticas de las nanoparticulas Fe3O4 y las nanoestructuras de Fe3O4 Ag

también se compararon mediante mediciones de magnetización.

La Figura 10 muestra las curvas de magnetización normalizadas en función del campo magnético
externo aplicado. La disminución observada del 69% en la magnetización de saturación de Fe3O4-
Ag con respecto al núcleo de Fe3O4 puro concuerda bien con la proporción de peso inicial (0.3: 1.0)
de Fe3O4 a Ag así como con los resultados obtenidos del análisis AES. Además, no se observaron
histéresis ni remanencia en las curvas de magnetización de Fe3O4 y Fe3O4 Ag, lo que indica que las
partículas son de naturaleza superparamagnética y que la formación de una capa de plata en Fe3O4
no afecta la naturaleza superparamagnética del núcleo. Esto nos lleva además a la conclusión de
que la capa de plata evita la aglomeración de las nanopartículas de Fe3O4 durante la formación de
las nanoestructuras núcleo-capa.

La MIC, o concentración inhibitoria mínima, es la concentración más baja (en μg / mL) de un

antibiótico que inhibe el crecimiento de una cepa determinada de bacterias.
Inmovilización física

Es el método de funcionalización más simple empleado en la inmovilización de proteínas, ya que se

puede llevar a cabo fácilmente sumergiendo el material en una solución que contenga las
biomoléculas diana. Aunque la inmovilización física es simple y suave, este método generalmente
implica interacciones comparativamente débiles, como interacciones electrostáticas, enlaces de
hidrógeno, fuerzas de van der Waals e interacciones hidrofóbicas, y la estabilidad de unión de las
especies adsorbidas se ve muy afectada por las condiciones ambientales (pH, temperatura, fuerza
iónica y concentración de biomoléculas). Por lo tanto, las proteínas inmovilizadas con este método
tienden a desprenderse del soporte y, por lo tanto, conducen a la pérdida de actividad y
contaminación del medio de reacción, lo que afectaría la robustez y reciclabilidad de las proteínas
inmovilizadas, particularmente para aquellas construidas para análisis y detective. utilizar.

 Conjugación covalente

La inmovilización covalente es particularmente atractiva, ya que podría regularse cuidadosamente

con grupos funcionales específicos para unirse a proteínas. El principal problema en el uso práctico
de la inmovilización covalente es la no especificidad, y las proteínas purificadas generalmente están
involucradas en la inmovilización covalente.

Interacción específica mediada biológicamente

Los métodos de inmovilización específicos del sitio basados en reacciones biológicas podrían
lograrse mediante la formación de enlaces entre los grupos activos en los soportes y residuos
específicos en la proteína. Mediante la modificación adecuada de los soportes y la ingeniería de
proteínas, tales uniones podrían realizarse estratégicamente en condiciones suaves, que han
reducido en gran medida el riesgo de degradación o desnaturalización de las proteínas.

Métodos para preparar nanopartículas

 La ablación láser es un método para fabricar varios tipos de nanopartículas donde se

generan por nucleación y crecimiento de especies vaporizadas por láser en un gas de fondo:
produciendo nanopartículas de alta pureza en el rango de tamaño cuántico (<10 nm).
 Método de co-precipitación
Partir de la solución, implica disolver los materiales de partida en un solvente común y luego
agregar un agente de precipitación para formar un sólido inorgánico homogéneo y de una
sola fase.
 El método de microemulsión es una ruta novedosa para la formación de NP. Una
microemulsión es un sistema coloidal turbio de gotitas de tamaño micrométrico de un
líquido inmiscible disperso en otro, en presencia de un tensioactivo adecuado y un
cotensioactivo. Se forma una microemulsión mediante agitación vigorosa. Las partículas de
tamaño nanométrico pueden formarse espontáneamente dentro de las gotas de agua de
tamaño micrométrico como una microemulsión termodinámicamente estable.
 La deposición química de vapor (CVD) es un proceso en el que el sustrato se expone a uno
o más precursores volátiles, que reaccionan y / o se descomponen en la superficie del
sustrato para producir el depósito de película delgada deseado.

Las partículas magnéticas no se agregan al estar juntas?

En casi todas las aplicaciones de MNP se utiliza un gran número de partículas dispersas en un medio
líquido apropiado. Dado que estas partículas tienen un tamaño de un solo dominio o de un
subdominio, funcionan como pequeños imanes. Cuando están muy juntos, forman agregados
debido a las atracciones de van der Waal y dipolo-dipolo. Para evitar la agregación, cada uno de
estos pequeños imanes se recubre con un tensioactivo o se carga eléctricamente para proporcionar
repulsión estérica y de Coulomb.

Vibrating Sample Magnetometer

El magnetómetro de muestra vibrante (VSM) es un método para medir la magnetización de

cualquier muestra de material. En este esquema, la muestra se introduce en un campo magnético
externo uniforme constante que induce una magnetización en la muestra. A medida que se hace
vibrar la muestra magnetizada, se introducen perturbaciones en el campo magnético externo. Se
puede disponer un conjunto de sensores de campo magnético alrededor de la muestra para medir
estas perturbaciones.

"Superparamagnetismo"

Al aplicar un campo magnético externo, los materiales superparamagnéticos se magnetizan hasta

su magnetización de saturación y, al eliminar el campo magnético, ya no exhiben ninguna
interacción magnética residual. Esta propiedad depende del tamaño y generalmente surge cuando
el tamaño de las nanopartículas es tan bajo como 10-20 nm. Con un tamaño tan pequeño, estas
nanopartículas no exhiben dominios múltiples como los que se encuentran en los imanes grandes;
por otro lado, se convierten en un solo dominio magnético y actúan como un “super espín” que
exhibe una alta susceptibilidad magnética.

Carbodimina y mecanismo?

El mecanismo de unión se explicó a continuación. Las partículas sintetizadas por la técnica de co-
precipitación son macro-iones. La carga eléctrica superficial de estos iones se debe a la adsorción
específica del grupo hidroxilo anfótero. Esto conduce a cargas negativas superficiales en medio
alcalino y cargas positivas en medio ácido. el ligando –OH permanecerá en las partículas cuando el
pH esté en el rango de 6–10. Así, en el presente caso, es este grupo hidroxilo libre en la superficie
de las partículas el responsable de la unión de las biomoléculas. La presencia de carbodiimida
modifica el grupo carboxilo de la proteína a un pH ligeramente ácido [45], lo que aumenta el
porcentaje de unión de la proteína del 25% a más del 90%.

¿QUÉ SON LAS ENZIMAS INMOVILIZADAS?

Una enzima inmovilizada es una enzima que se une a un material que es insoluble e inerte. La
inmovilización de una enzima permite una mayor resistencia a variables como la temperatura o el
pH. También permite que las enzimas estén estacionarias durante todo el proceso, lo que facilita su
separación y reutilización.

IMPORTANCIA - La utilización de enzimas inmovilizadas como aceleradores de reacciones químicas

de interés industrial. Purificacion de proteínas recombinantes. Drug delivery.
STABILIDAD - La mayor estabilidad puede ser el resultado del hecho de que la inmovilización limita
el movimiento térmico de la enzima a temperaturas más altas. Como resultado, la desnaturalización
térmica puede no ocurrir a temperaturas más altas con una enzima inmovilizada.

RADIOINMUNOENSAYO (RIA)

Un radioinmunoensayo (RIA) es un inmunoensayo que utiliza moléculas marcadas radiactivamente

en una formación escalonada de inmunocomplejos. Un RIA es una técnica de ensayo in vitro muy
sensible que se utiliza para medir concentraciones de sustancias, por lo general midiendo
concentraciones de antígenos (por ejemplo, niveles de hormonas en sangre) mediante el uso de
anticuerpos.