DILUCIONES

Realizado por: Araceli Contreras Rodríguez

Laboratorio de Microbiología General/ Depto. Microbiología, ENCB/IPN

OBJETIVO: Aprender a realizar diluciones y manejar volúmenes.

DILUCION: Acción de diluir
DILUIR: Añadir líquido (diluyente) a un soluto o solución
DILUYENTE O DILUENTE: Líquido que diluye
FACTOR DE DILUCION: Total de veces que el soluto, solución o suspensión
bacteriana fue diluida.
DILUCION ACUMULADA: Dilución que se obtiene del producto de las diluciones
individuales.

Las diluciones se expresan siempre: 1: ________

Volumen total

Las bacterias las podemos diluir en cualquier medio.

1 + 9=10
Volumen soluto 1

Dilución 1:10
Volumen diluyente 9

Otros volúmenes que mantienen una dilución 1:10

0.5:5 (0.5 ml + 4.5 ml)
0.1:1 (0.1ml + 0.9 ml) . . . etc.
De esta manera los volúmenes pueden ser variables
adecuándonos a la dilución.

1/7
 Si yo tengo:
2.1ml (soluto)+7.2ml (diluente) =9.3 vol. Total
2.1 : 9.3 (2.1 en un volumen total de 9.3) entonces tenemos una dilución 1: 4.2
2.1 2.1

0.75ml (soluto) + 2.83ml (diluente) = 3.58ml (volumen total)

0.75 : 3.58 (0.75 en un volumen total de 3.58) entonces tenemos una dilución 1:4.7
0.75 0.75

3.6ml (soluto) + 5.1ml (diluente) = 8.7ml (volumen total)

3.6 : 8.7 (3.6 en un volumen total de 8.7) entonces tenemos una dilución 1: 2.42
3.6 3.6
Es posible que el soluto sea más grande que el diluyente, por ejemplo:
5ml (soluto) + 4ml (diluente) = 9ml (volumen total)
5 : 9 (5 en un volumen total de 9) entonces tenemos una dilución 1: 1.8
5 5
Ahora, si tuvieras que preparar 10ml de una dilución 1:15.3,
significa que tengo 1ml + 14.3ml=15.3
1 ---- 15.3 0.65 : 10 = 1:15.3
X------10ml entonces 0.65+9.35=10ml, por lo tanto 0.65 0.65
X=0.65

Ahora, si tuvieras que preparar 8ml de una dilución 1:25,

significa que tengo 1ml + 24ml =25

1 ---- 24 0.32 : 8 = 1:25

X------8ml entonces 0.32+7.68=8ml, por lo tanto 0.32 0.32
X=0.32

2/7
FACTOR DE DILUCIÓN
Una dilución se puede expresar de las
siguientes maneras:

10-1 = 1/10 = 1:10

El inverso de la dilución se expresa:

1 = 1 = 1 = 10
10-1 1:10 1/10

Multiplicamos extremos
1 por extremos y medios
con medios
1
1
10

= 10/1 = 10

Por lo tanto el Factor de dilución= 10

3/7
 PROBLEMA 1. Si Usted tiene una suspensión bacteriana con 6x109 UFC/ml y la diluye
de la siguiente manera:
TUBO 1 2 3
Suspensión 6 ml

Diluyente 9 ml 12ml 12ml

Vol. transferencia --- 3ml 3ml
Dil. Individual 1:2.5 1:5 1:5
Dil. Acumulada 1:2.5 1:12.5 1:62.5
Dil. final 1:62.5

Volumen de transferencia

6ml 3 ml 3 ml

Volumen
9ml 12ml 12ml diluyente

Suspensión
bacteriana
6ml 3ml 3ml
15 15 15 Volumen
9ml 12ml 12ml total

6:15 3:15 3:15

6 6 3 3 3 3
= = =
Dilución individual 1 : 2.5 1: 5 1: 5
multiplicar multiplicar

Dilución Dil. final

acumulada
1 : 2.5 1 : 12.5 1 :62.5

Factor de dilución 62.5

4/7
Para calcular las UFC en cada tubo, se divide la concentración
inicial bacteriana entre la dilución acumulada de cada tubo
6x109=2.4 x 109 UFC/ml tubo 1
2.5
6x109=4.8x108 UFC/ml tubo 2
12.5
6x109= 9.6 x107 UFC/ml tubo 3
62.5

O también puedes dividir la concentración bacteriana de cada

tubo entre la dilución individual:
6x109=2.4 x 109 UFC/ml tubo1
2.5
2.4x109=4.8 x 108 UFC/ml tubo 2
5
4.8x108= 9.6x109 UFC/ml tubo 3
5

Tubo1 tubo 2 tubo 3

5/7
 PROBLEMA 2. Partiendo de una suspensión bacteriana de 9x106 UFC/ml
indique que diluciones en serie haría para obtener un suspensión con 1x102
UFC/ml. No puede exceder diluciones más grandes de 1:5.

9x106 1x102
Para conocer la dilución final:
DILUCIÓN FINAL=CONCENTRACIÓN INICAL= 9X106 = 1:90,000
………………………..CONCENTRACION FINAL 1X102

1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml

Suspensión
bacteriana
4ml 4ml 4ml 4ml 4ml 4ml 4ml 0.15 ml

Dil. Indiv. 1:5 1:5 1:5 1:5 1:5 1:5 1:5 ? 1:1.152 *
Dil. acumulada 1:5 1:125 1:125 1:625 1:3,125 1:15,625 1:78,125 ? 1:90,000

Ahora solo resta conocer la última dilución que debemos hacer para
llegar a la deseada 1:90,000, así que:

Dil. Final =90,000 = 1:1.152

Indiv. 78,125
*

Si necesitaras preparar 5 ml de la dilución final entonces:

1 : 1.152
X : 5
X=4.34, dil. 4.34 : 5

Factor de dilución: 90,000

6/7
PROBLEMA 3. A partir de una muestra de harina de trigo realizó
diluciones de la siguiente manera: 2(1:4), 2(1:3), 2 (1:5). Ud. sembró una
alicuota de 0.1ml de cada dilución en cajas de agar nutritivo por
duplicado y después de la incubación a 37°C durante 24 h contó la
siguientes colonias: en las dos diluciones 1:4 fueron incontables, en la
primera dilución 1:3 se observaron 234 colonias y 240 en el duplicado.
En la segunda dilución de 1:3 se contaron 22 y 20 colonias. Realice una
tabla en donde coloque las diluciones individuales y las acumuladas de
cada tubo. Con base en los resultados de la cuenta viable calcule la
concentración de bacterias en la muestra original. Realice sus cálculos:

No. de tubo 1 2 3 4 5 6
Dil. Individual 1:4 1:4 1:3 1:3 1:5 1:5
Dil. Acumulada 1:4 1:16 1:48 1:144 1:720 1:3600
Cuenta viable Incontables Incontables 234 22 0 0
Duplicado Incontables Incontables 240 20 0 0

UFC/ml= no. de colonias x inverso de la dilución x 1/alicuota

No. de colonias=234+240=474/2=promedio = 237

UFC/gramo= 237 x 48 x 1/0.1

UFC/gramo= 237 x 48 x 10
UFC/gramo= 113,760

7/7