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Eliu Sánchez
Universidad Juárez Autónoma de Tabasco
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MANUAL DE BIOTECNOLOGÍAS
REPRODUCTIVAS Y CONSERVACIÓN
DE GERMOPLASMA
Integrantes:
*Rosa I. Domínguez Vidal
*Francisco E. Sánchez Hernández
*Jesús J. López Gómez
Manual de biotecnologías reproductivas y conservación de germoplasma
ÍNDICE
5.2 Oviducto................................................................ 10
5.3 Cuernos uterinos. ............................................. 10
Introducción. ........................................................................ 1
5.4 Cuerpo uterino. .................................................. 10
Objetivos................................................................................ 2
5.5 Cérvix...................................................................... 10
Objetivo general............................................................ 2
5.6 Vagina. ................................................................... 11
Objetivos específicos ................................................. 2
5.7 Vestíbulo. .............................................................. 11
1. Reproducción animal. ........................................... 3
5.8 Vulva........................................................................ 11
2. Estrategias de biotecnología reproductiva.
3 5.9 Vejiga. ..................................................................... 11
12.3 Habilidad Materna. ........................................ 30 15.3 Métodos para la recolección del semen.
............................................................................................ 36
12.4 Circunferencia Escrotal y Tamaño de los
Testículos. ..................................................................... 30 15.3.1 Método de la vagina artificial.......... 36
12.5 Tamaño de los Animales. ........................... 30 15.3.3 Método de masaje transrectal. ..... 37
16.3.3. Protocolo para Fertilización in vitro. 17.4 Aplicaciones del clonado. ......................... 46
....................................................................................... 44 18. Células madre embrionarias..................... 46
17. Clonación. ........................................................... 44 18.1 Origen e importancia. .................................. 46
17.1 Tipos de Clonación. ...................................... 45 18.2 Características. ............................................... 46
17.2 Técnicas de Clonación. .............................. 45 Conclusión......................................................................... 47
17.3 Equipo utilizado en Clonación................. 45 Referencias bibliográficas. ........................................ 48
Manual de biotecnologías reproductivas y conservación de germoplasma
Introducción.
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Manual de biotecnologías reproductivas y conservación de germoplasma
Objetivos.
Objetivo general
• Aplicar protocolos de las diferentes biotecnologías para la reproducción en animales,
así como conservación de la variedad de animales.
Objetivos específicos
• Explicar concepto de reproducción animal.
• Explicar las características anatómicas de los órganos reproductores del macho y la
hembra.
• Explicar las características fisiológicas de los órganos reproductores del macho y la
hembra.
• Describir los conceptos y protocolos de las diferentes biotecnologías reproductivas.
• Describir los retos científicos y éticos que surgen a partir de las variedades de
biotecnologías.
• Explicar cuáles son los factores que afectan a la reproducción.
• Describir protocolos de sincronización del celo, así como las hormonas involucradas en
estos mismos.
• Describir proceso del ciclo estral, así como las fases involucradas en este mismo.
• Explicar DEPS de interés económico, y concepto para mejora he incremento de esas
características genotípicas y fenotípicas.
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Manual de biotecnologías reproductivas y conservación de germoplasma
1. Reproducción animal.
La reproducción es el conjunto de procesos biológicos con que los seres vivos producen
nuevos individuos, miembros de su especie. Puede darse a partir de uno o dos individuos
progenitores.
la reproducción de los animales se rige por el principio de la autoperpetuación de las especies,
o sea, que los integrantes de una especie producen nueva descendencia para conservar su
material genético y perpetuar el ciclo de la vida
La reproducción tiene tres propósitos importantes: la perpetuación de la especie, el
mejoramiento genético y garantizar el alimento para el ser humano.
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Manual de biotecnologías reproductivas y conservación de germoplasma
El nivel nutricional es probablemente el factor más importante se debe tener en cuenta que tanto
la subalimentación como la sobrealimentación traen efectos perjudiciales.
El efecto de la nutrición sobre algunos parámetros reproductivos es ampliamente reconocido,
aunque ello no está exento de polémica y algunos puntos a aclarar.
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Manual de biotecnologías reproductivas y conservación de germoplasma
La metodología que se utiliza para evaluar el normal desplazamiento del reproductor debe verse
en estación y en movimiento, idealmente sobre una superficie pareja, a efectos de determinar la
presencia de anormalidades a este nivel, tanto de conformación como por lesiones adquiridas.
Los animales con rengueras tienen afectada su capacidad de desplazamiento y por lo tanto
están disminuidos como reproductores, y sumado a ello el lugar topográfico en el cual se
encuentran.
Con dolor se tiene una menor expresión de celo y el toro no quiere montar a la vaca.
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Manual de biotecnologías reproductivas y conservación de germoplasma
La falta de fotoperiodicidad estacional. La inalterable duración del día altera la pauta endocrina
de los animales que cambian su pelaje en las zonas templadas. Las altas temperaturas
incrementan el área de superficie en pliegues de la piel en el ganado brahman. Los ciclos
reproductores o el metabolismo han sido vinculados a normas de la luz estacional.
En el ganado a través de las altas temperaturas atmosféricas diarias que se desarrollan
principalmente debido a la falta de protección por nubes.
3.5 Enfermedades
Las enfermedades pueden causar un deterioro de la salud o una alteración más o menos grave
en el normal funcionamiento del organismo.
Existen diferentes tipos de enfermedades. Así, las enfermedades infecciosas son causadas por
agentes patógenos específicos: virus, bacterias, hongos. Algunas de éstas, son a su vez
contagiosas, o sea que pueden ser trasmitidas a otros animales, directa o indirectamente. Las
enfermedades parasitarias son causadas por parásitos externos, internos o protozoos. Ciertas
enfermedades infecciosas y parasitarias, a su vez, pueden ser transmisibles, esto es, comunes
al hombre y a los animales, encontrándose entre éstas las zoonosis, que son las que se
transmiten de los animales vertebrados al hombre. (brucelosis, tuberculosis, leptospirosis,
hidatidosis, triquinosis).
Las enfermedades no infecciosas, por su parte, se refieren a las causadas por ciertas anomalías
genéticas (hermafroditismo, síndrome de stress porcino), deficiencias alimentarias
(hipocalcemia, hipofosfatemia, hipocuprosis), enfermedades metabólicas (toxemia de la
preñez), o tóxicas, por ingestión de determinados agentes tóxicos inorgánicos y/u orgánicos
(envenenamiento por plomo, ácido cianhídrico, etc.
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4. Parámetros Reproductivos.
Los índices reproductivos son indicadores del desempeño reproductivo del hato. Los Índices se
calculan cuando los eventos reproductivos del hato han sido registrados adecuadamente. Estos
Índices nos permiten identificar las áreas de mejoramiento, establecer metas reproductivas
realistas, monitorear los progresos e identificar los problemas en estadios tempranos. Los
índices reproductivos sirven para investigar la historia de los problemas (de fertilidad y otros).
La mayoría de los Índices para un nato son calculados como el promedio del desempeño
individual.
La eficiencia reproductiva es el parámetro de producción alcanzado por el animal considerado
como óptimo para su especie, en el caso de los bovinos, es la producción de una cría al año.
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Manual de biotecnologías reproductivas y conservación de germoplasma
por las que se alarga son las infecciones 4.8 Días de servicio. (DS).
uterinas que ocasionan retraso en la Es el intervalo que transcurre entre el
involución uterina y por la mala detección
primer servicio y el servicio efectivo. El
del estro. Se recomienda iniciar la monta alargamiento de los días en servicio
después de los 45 días del parto y lo ideal indica la existencia de problemas de
sería lograr la preñez 80 días después infertilidad, este parámetro está
del parto para que sumados a los 285 influenciado por la raza, la nutrición, el
días que en promedio dura la gestación,
clima, el tipo de empadre y la técnica de
se tengan períodos de intervalos entre inseminación, entre otros factores. Los
partos de 365 días. días en servicio influyen sobre la edad a
la primera concepción en vaquillas y
4.6 Intervalo Parto-Concepción. (IPC). sobre el intervalo entre el parto y la
Se denomina días abiertos, es el tiempo concepción en vacas adultas.
en que las vacas permanecen vacías, es
el periodo que transcurre entre el parto y 4.9 Porcentaje de Concepción. (PC).
la nueva gestación. Lo ideal es que este Se calcula dividiendo el número de
indicador no exceda más de 100 días, gestaciones entre el número total de
influyen en los días interparto por lo que servicios que se han realizado, es una
debe ser lo menos largo posible, medida importante para evaluar la
evitando que la vaca permanece fertilidad del hato; se considera que del
improductiva por largo tiempo. 55 al 60% de concepción es adecuado.
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1. Ovario
2. Oviducto
3. Cuerno
4. Cuerpo
5. Cérvix
6. Vagina
7. Vestíbulo
8. Vulva
9. Vejiga
10.Clítoris
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1.Testículos
2.Escroto
3.Epidídimo
4.Conductos
eferentes
5.Vesículas seminales
6.Próstata
7.Pene
8.Prepucio
Imagen 2. Aparato reproductor bovino del macho
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Anatomía Función
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Anatomía Función
Vejiga
• Almacena líquidos para excretarlos.
7.1.1 Poliéstricas
Presentan ciclos consecutivos como el caso de la vaca, cerda y cuy, aparecen ciclos
estrales durante todo el año, interrumpiendo solo en la preñez.
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7.1.3 Monoéstricas.
Presentan un solo ciclo estral e inician un periodo de anestro, puede presentarse de 2
hasta 3 veces por año como en el caso de la perra.
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7.2.1.1 Proestro
La duración de esta fase es de tres días y los síntomas que se observan son:
● Olfatea a las vacas vecinas y ordeñadores.
● Se separa del rebaño y observa a sus alrededores.
● Hay edematización de la vulva y congestión de la mucosa.
● Liberación del mucus semidenso y opalescente grisáceo.
7.2.1.2 Estro
La duración de esta fase es de 1-2 días los síntomas que se observan son:
● Muge con frecuencia.
● Pérdida del apetito.
● Monta y se deja montar.
● Encorvamiento del dorso.
● Reflejos de abrazamiento y fricción.
● Edematización de la vulva.
● Hiperemia y humedad de la mucosa vestibular.
● Movimientos rítmicos del ano.
● Movimientos enérgicos de la cola,
● Flujo mucoso transparente.
7.2.2.1 Metaestro
Esta fase dura cuatro días y los síntomas que se observan son:
● Tranquilidad sexual con posible duración del reflejo del abrazamiento.
● La vulva se torna plegada.
● El flujo sanguinolento es más o menos oscuro en las vaquillas que en las vacas.
7.2.2.2 Diestro
La fase dura 12 días los síntomas que se manifiestan son:
● Silencio sexual.
● Vulva plegada.
● Mucosa vestibular de color rosado pálido.
● Desaparición del brillo de la superficie y la humedad.
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El ciclo estral está regulado por la interacción de varios órganos; entre ellos el eje
hipotálamo-hipófisis, el ovario y el útero.
Entre las hormonas que producen los ovarios están los estrógenos, que tienen un efecto
de retroalimentación positiva sobre el hipotálamo produciendo la liberación de GnRH; la
Progesterona, producida en el cuerpo lúteo por acción de la LH y responsable de la
preparación del útero para permitir la implantación del embrión y de mantener la
gestación, que provoca un efecto de retroalimentación negativa sobre el hipotálamo; y la
Inhibina generada en el folículo y que interviene en el mecanismo de regulación de la
secreción de FSH y tiene un efecto de retroalimentación negativa sobre la hipófisis
anterior originando una menor secreción de FSH.
8.1 Proestro
Es la etapa del ciclo estral donde los folículos (ovocitos) del ovario comienzan a crecer
por estímulo de la FSH. Estos folículos comienzan a producir Estradiol. Comprende los
días 17, 20 y 21 del ciclo.
• Hormonas predominantes: FSH
● Hormonas que estás bajas: La Progesterona comienza a disminuir.
8.2 Estro
Es la fase del ciclo que se caracteriza por los niveles más altos de estradiol (que se vienen
incrementando desde el Proestro), y que ahora son secretados en mayor cantidad por el
Folículo que se ha hecho Dominante. Esta hormona se encarga de la aparición de los
signos del celo o calor: como aparición de moco, receptividad sexual del macho,
inquietud, vulva hiperémica, monta y se deja montar, entre otros.
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Manual de biotecnologías reproductivas y conservación de germoplasma
8.3 Metaestro
El día 0 del ciclo marca el comienzo del metaestro. Se caracteriza porque todas las
circunstancias hormonales de la fase anterior (Estro) comienzan a cambiar. Por lo tanto,
la Progesterona empieza a aumentar y las gonadotropinas a disminuir. Esto sucede
porque el Pico de LH acaba de causar la ovulación, con lo que el folículo no producirá
más Estrógeno (que tampoco estimule más a la LH). De igual forma, al darse la ovulación,
queda un cuerpo hemorrágico que se convertirá en cuerpo lúteo y comenzará con la
producción creciente de Progesterona(P4), hasta ser máxima al día 7.
Comprende los días 2 y 3.
8.4 Diestro
Es la fase del ciclo donde el cuerpo lúteo haya terminado de desarrollarse al máximo
desde que ocurrió la ovulación, por lo tanto, los niveles de Progesterona son los más
altos. El aumento de esta hormona provoca una disminución de las gonadotropinas FSH
y LH, al inhibir a la GnRh en el hipotálamo.
Va del día 4 al día 16 del ciclo.
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Hormona Función
Glucocorticoides. Parto.
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9. Detección de Celo.
Monta estática.
Una vaca que permanece quieta mientras es montada es el signo primario evidente e
inequívoco de que está en estro. La “monta estática” es el periodo de máxima intensidad
sexual durante el ciclo estral, y durante el mismo la vaca permanece inmóvil para ser
montada por otras vacas o se mueve suavemente hacia atrás con el peso de la vaca que
la está montando.
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Manual de biotecnologías reproductivas y conservación de germoplasma
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Manual de biotecnologías reproductivas y conservación de germoplasma
Calendarios de 21 días.
Calendarios de establo. Marcan a partir de la fecha del celo los
Es un sistema ampliamente usado en días en los cuales esa vaca es
algunas ganaderías, que consiste en un susceptible de repetir calor y así poderla
tablero grande montado en la pared, detectar con mayor eficiencia.
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Existen dos métodos básicos para la sincronización de los ciclos estrales, los cuales
dependen de la inhibición de secreción de LH o de acortar el tiempo de la vida del cuerpo
lúteo y del inicio subsecuente del estro y la ovulación.
La sincronización del celo es un método hormonal que agrupa la presentación del estro
y la ovulación en un corto periodo de modo que permite la utilización frecuente de la (IA)
con el objetivo de lograr el mayor número de hembras gestantes.
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Manual de biotecnologías reproductivas y conservación de germoplasma
Uno de los protocolos más utilizados para la sincronización del celo es el protocolo
OVSYNCH, podemos encontrar variaciones de los protocolos, estos pueden aumentar o
disminuir tiempos de colocación de hormonas, cantidad de esta misma y cambiar el
dispositivo para inserción, algunas variaciones que podemos encontrar del protocolo
OVSYNCH son:
● CO-SYNCH
● SELECT-SYNCH
Las diferencias entre estos tres protocolos son las cantidades y tiempos de inyecciones
a utilizar en la sincronización. La descripción de los protocolos los podemos encontrar en
la tabla anterior.
11. Gametogenesis.
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11.1 Ovogénesis.
11.1.1 Proliferación.
Se inicia durante el desarrollo embrionario y fetal cuando las ovogonias que se originan
probablemente del endodermo comienzan a producirse al dividirse mitóticamente.
Después de la fase proliferativa es posible observar un período de degeneración que
afecta tanto a una parte de las ovogonias en el proceso mitótico, como a los ovocitos en
el estado de paquiteno o diploteno de la fase meiótica.
11.1.2 Crecimiento.
Se caracteriza por el aumento del tamaño ovular, la formación de la zona pelúcida y la
multiplicación de las células epiteliales.
Dicho período tiene 2 fases: la primera, es típica por el crecimiento ovular máximo y la
multiplicación epitelial mínima, la segunda, se caracteriza por el crecimiento ovular
mínimo y la multiplicación epitelial máxima.
La fase de crecimiento termina antes de la formación de la cavidad folicular y su inicio
está bajo control del sistema director intra ovárico.
11.1.3 Maduración.
La fase de maduración del ovocito, que sucede periódicamente hasta después de la
maduración sexual en relación con la segregación de las hormonas gonadotrópicas, se
caracteriza no sólo por la maduración nuclear, sino también por la maduración
citoplasmática. El núcleo ovular se acerca a la superficie celular, pierde su membrana y
forma el filamento cromático.
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11. 2. Espermatogénesis.
La base del proceso espermatogénico es la aparición de un nuevo tipo celular que resulta
de numerosas divisiones mitóticas de gonocitos y se presentan en los túbulos seminíferos
del testículo inmediatamente antes de la pubertad. Se trata de las espermatogonias de
tipo A, de la cual se derivan todas las células de la línea espermatogénica
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Manual de biotecnologías reproductivas y conservación de germoplasma
Además de la consistencia genética que poseen los animales, es necesario observar una
serie de características fenotípicas con cierto índice de heredabilidad, que son de
importancia práctica para que la selección de los reproductores sea exitosa y conduzca
a obtener un animal productivo, funcional y sobre todo de características raciales
definidas.
Las distintas razas poseen en sus rodeos de pedigree y puros controlados una
reconocida variabilidad genética que hoy en día puede ser expresada en una amplia
gama de DEPs para cada característica de interés económico, a los fines de que todo
interesado encuentre el reproductor adecuado para su establecimiento.
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Manual de biotecnologías reproductivas y conservación de germoplasma
Este puede considerarse como el aspecto más importante dentro de la selección, porque
su impacto económico es cinco veces mayor que los otros parámetros productivos.
La evaluación de un reproductor bovino debe iniciar de abajo hacia arriba, porque de nada
sirve seleccionar un reproductor que produzca la mejor canal y que tenga muy buena
profundidad y longitud, si no tiene capacidad para movilizarse muy bien en los potreros y
darles servicio a las hembras con alto grado de seguridad.
En función del desempeño de las crías se debe evaluar la habilidad materna de estas
razas productoras de carne, seleccionando a las vacas que producen terneros
saludables, con los mayores pesos al nacimiento y el destete.
Si somos capaces de identificar a las hembras que con una secuencia determinada se
reproducen y que destetan terneros con pesos altos, vamos a tener la base que permita
obtener el tamaño adecuado a la venta para el destace.
Un DEP (Diferencia Esperada entre Progenies) nos indica cómo será el comportamiento
general de los descendientes del toro elegido en comparación con los descendientes de
los otros toros listados en la misma Evaluación de Genética a Nivel Nacional, para cada
una de las características de interés económico evaluadas (peso nacer, al destete,
etc.).Los valores DEPs pueden ser positivos, negativos 0 (cero), y se expresan en la
misma unidad de medida que la característica evaluada ("kilos" las de desarrollo o "cm"
para la circunferencia escrotal).
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de ojo de bife (AOB) y el espesor de grasa dorsal (EGD). Predice la diferencia en kilos de
cortes minoristas que daría, en promedio, la progenie de un toro padre en particular, con
respecto a otro.
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VENTAJAS DESVENTAJAS
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Manual de biotecnologías reproductivas y conservación de germoplasma
La transferencia de embriones es una técnica por la cual los embriones son colectados
de una hembra donante y transferidos a una hembra receptora que gesta y pare a los
productos. Este proceso requiere el uso de gonadotropinas para inducir superovulación
en la donadora y sincronizar el ciclo estral de estas con el de las receptoras para que
manifiesten celo al mismo tiempo.
VENTAJAS DESVENTAJAS
• Coste de
• Incrementar la producción de hembras operaciones.
genéticamente superiores. • Coste de las
• Recuperación genética de animales receptoras.
accidentados, o enfermos permanentemente • Entrenamiento de los
de los que pudieran obtenerse embriones técnicos e
antes de que el animal muera. instalaciones.
• Diagnóstico, tratamiento y recuperación de • Falta de predicción
las funciones reproductivas de hembras con de los resultados:
infertilidad de origen no genético. a. Número de
• Control y prevención de enfermedades embriones
infecciosas. transferibles
• Importación y exportación. por vaca.
• Maximizar el uso de semen de alto valor. b. Número de
• o Ayudar a la aclimatación de ciertas razas a gestaciones.
distintos medios ambientes.
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Manual de biotecnologías reproductivas y conservación de germoplasma
El procedimiento de la TE involucra una serie de pasos que deben ser llevados a cabo
eficientemente para lograr resultados óptimos, los cuales son:
• Recolección de Ovocitos.
• Maduración de Ovocitos.
• Fertilización in vitro.
El transporte de los ovarios se lleva a cabo en un termo que contiene una solución PBS
o en una solución salina a temperatura ambiente pudiéndose conservar entre 20-25 °C
durante 6-7 horas sin que afecte la capacidad de desarrollo posterior. En el laboratorio
los ovocitos son obtenidos junto a su líquido folicular.
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Manual de biotecnologías reproductivas y conservación de germoplasma
• Se seleccionan los óvulos por grado de calidad. Debido a las células de cúmulo
que presentan
• Se realiza el empaque.
• Se introducen a la transportadora a una temperatura entre los 37.5 y 38 grados.
• Se mandan al laboratorio para ser fecundados.
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Manual de biotecnologías reproductivas y conservación de germoplasma
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Manual de biotecnologías reproductivas y conservación de germoplasma
En el tiempo de cocultivo corto, el medio B.O. se suplementa con 3.88 mg/ml de cafeína-
benzoato de sodio, 0.02 mg/ml de heparina sal sódica, 20 mg/ml de BSA (libre de ácidos
grasos), 0.2 mg/ml de piruvato de sodio, y 1.8 mg/ml de lactato de calcio.
En tiempo de cocultivo largo, se emplean tres medios TALP diferentes según el momento
en el que se utilicen.
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• Los CCOs previamente madurados fueron lavados tres veces con medio TL-
Hepes suplementado con 0.3% (W/V) de BSA y 0.2 mm de ácido pirúvico.
• Posteriormente fueron depositados en gotas de 44 μl de medio de fertilización
basado en solución.
• Después de la transferencia de los CCOs se adicionaron a cada gota 2 μl de
heparina.
• Una pajilla de semen fue descongelada en baño maría a 35 °C/1 min y los
espermatozoides móviles fueron obtenidos por centrifugación a 700 x g /10
min/temperatura ambiente.
• El condensado celular fue removido, suspendido en TL-Hepesy centrifugado a
250 x g/5 min/temperatura ambiente.
• Después de remover el sobrenadante los espermatozoides fueron suspendidos
en medio de fertilización.
• La concentración espermática fue determinada usando cámara de Neubauer.
• Se le adicionaron 2 μl de suspensión espermática a cada gota de fertilización a
una concentración final de 1 x 106 espermatozoides/ml.
• Después de 18 horas de fertilización los presuntos cigotos fueron llevados a medio
de desarrollo.
17. Clonación.
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Clonación Natural.
Este tipo de clonación hace referencia al proceso mitótico. Este proceso ocurre en la
formación de cualquier organismo, se remonta al hecho donde los microorganismos
comenzaron a hacer copias idénticas de ellos mismos. De esta manera se tiene una
clonación sin necesidad de una manipulación, utilizando un mecanismo natural.
Clonación Artificial.
Este tipo de clonación hace referencia a que si existe una manipulación o intervención
para generar copias iguales de las células madre. Esta utiliza diversas técnicas para
lograr sus objetivos. Estas técnicas de manipulación pueden lograr el desarrollo
embrionario temprano hasta obtener crías saludables. Existen dos alternativas para estas
células a desarrollar:
• Clonación reproductiva.
• Clonación terapéutica.
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18.2 Características.
• Son células indiferenciadas.
• Inmaduras.
• Autorrenovables.
• Capaces de generar uno o más tipos de células diferenciadas.
• Tienen inmunogenicidad.
• Tienen autorrenovación
• Cuentan con estrategias citoprotectores.
• Pluripotencialidad.
• División celular simétrica y asimétrica.
46 | P á g i n a
Manual de biotecnologías reproductivas y conservación de germoplasma
Conclusión.
También nos permite tener un control hormonal de las hembras para poder tener una
mejor gestación y también saber en tiempo cuando es adecuado preñar a la hembra,
también es importante tener conocimiento del aparato reproductor de las especies en
este caso de los bovinos y que hormonas están presentes en todos los procesos.
Con todo lo mencionado en este manual podemos entender que las biotecnologías
reproductivas son una muy buen a alternativa y que cada vez se van perfeccionando y
mejorando para que haya un beneficio significativo en su uso y que también sea más fácil
la aplicación de estas biotecnologías.
47 | P á g i n a
Manual de biotecnologías reproductivas y conservación de germoplasma
Referencias bibliográficas.
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