UNIVERSIDAD NACIONAL

SAN LUIS GONZAGA

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA Y PETROQUÍMICA
ESCUELA DE INGENIERÍA QUÍMICA

BIOQUÍMICA Y MICROBIOLOGÍA
INDUSTRIAL
PRÁCTICA
Determinación de cadenas de
fosforilación oxidativa
Determinación de
fosforilación oxidativa
 •NADH y FADH2 formados durante la
glicolisis;degradación de acidos grasos y
aminoácidos y el ciclo del ácido cítrico contienen
electrones de alta energía.
• La fosforilación oxidativa es el proceso
mediante el cual se oxidan estas moléculas
transfiriendo sus electrones al O2 y la energía
resultante es aprovechada en forma de síntesis
de ATP.
• Tiene lugar en la mitocondria
•La fosforilación oxidativa es simple en cuanto a concepto, pero compleja en
cuanto al mecanismo

(1) Cadena de transporte electronica Conjunto de complejos enzimáticos

embebidos en la membrana mitocondrial que oxidan NADH y FADH2
generándose un gradiente de protones
(2) ATP sintasa aprovecha la energía del gradiente de protones para producir
ATP
 Teoria Quimiosmótica
• Propuesta por Peter Mitchell en los años 60 (Premio Nobel 1978)
• Teoria Quimiosmótica:
Un gradiente de concentración de protones sirve como almacen de energía
que dirige la formación de ATP: la fuerza protonmotriz
• La fuerza protonmotriz (p) es la energía almacenada en el gradiente de concentración
de protones
• Los protones que son translocados al espacio intermembrana mitocondrial por la cadena
de transporte electrónico regresan al interior de la matriz mitocontrial via ATP sintasa
•El bombeo de protones a través de la cadena de transporte electrónico crea
una fuerza protonmotriz suma de las contribuciones de un potencial químico y
un potencial eléctrico.
La cadena de transporte electrónico mitocondrial
consiste en una serie de transportadores electrónicos, la mayoría proteínas
integrales de membrana, con grupos prostéticos capaces de aceptar y
ceder uno o dos electrones.
El flujo de electrones a través de estos complejos produce también un
bombeo de protones al espacio intermembranal
•Cada componente de la cadena puede aceptar electrones del
transportador precedente y transferirlos al siguiente en una secuencia
específica.
• Ubiquinona (Q) y citocromo c sirven de puentes móviles entre los
diferentes complejos proteicos de la cadena de transporte electronico .
• El Complejo IV reduce O2 a agua
 Destinos del piruvato
Glucosa

Glucólisis

Piruvato
Transaminación Reducción

Alanina Lactato
Carboxilació Descarboxilación
n oxidativa

Oxalacetato Acetil-CoA

Formación de Acetil-CoA a partir de piruvato

El complejo piruvato deshidrogenasa esta localizado en la

mitocondria.
Se encuentra a altas concentraciones en el músculo cardíaco y el
riñón.
La reacción catalizada por esta enzima es irreversible.
Esta enzima es regulada por:

El Acetil-CoA y NADH , que actúan como inhibidores

Por fosforilación, cuando está fosforilad es inactiva.

 Destinos metabólicos del Acetil-CoA

Piruvato Aminoácidos Ácidos grasos

Acetil-CoA

Ciclo de los ácidos Esteroles

Cuerpos cetónicos
tricarboxílicos Ácidos grasos

Ciclo de los ácidos tricarboxílicos

Es la etapa final de la oxidación de los hidratos de carbono, los

aminoácidos y los ácidos grasos.

Las moléculas oxidables entran en forma de acetil-CoA.

Se generan equivalentes de reducción en forma de NADH y FAH2.

Esta ruta es una ruta anfibólica → una ruta catabólica pero

también genera precursores para las rutas biosintéticas.

Los enzimas del ciclo de los ácidos tricarboxílicos se localizan en la

mitocondria → Fuentes principales para la generación de acetil
CoA están localizadas en el compartimento mitocondrial (piruvato
deshidrogenasa y -oxidación ácidos grasos).
Ciclo de los ácidos tricarboxílicos
Rendimiento energético del TCA

Regulación del TCA

Papel anabólico del TCA
 Respiración celular
El NADH y el FADH2 son moléculas ricas en energía ya que
contienen un par de electrones con alto potencial de
transferencia.

Cuando estos electrones se transfieren al oxígeno molecular, se

libera una gran cantidad de energía, que puede ser utilizada para
generar ATP.

Respiración celular: el flujo de electrones desde el NADH o

FADH2 al O2 a través de complejos proteicos localizados en la
membrana interna mitocondrial

Fosforilación oxidativa : Proceso en el que forma ATP, como

resultado de la transferencia de electrones desde el NADH o el
FADH2 al O2 a través de unos transportadores de electrones.

Mitocondria
 Cadena de transporte electrónico

Está formado por cuatro complejos proteicos, tres de los cuales

son bombas de protones:

a. NADH-Q reductasa → bomba de protones

b. Succinato deshidrogenasa
c. Citocromo c reductasa → bomba de protones
d. Citocromo Oxidasa → bomba de protones

Estas bombas están conectadas por dos transportadores móviles

de electrones:

a. Coenzima Q o Ubiquinona
b. Citocromo c.
 Complejo I: NADH-Q reductasa
Posee varios grupos prostéticos:
a. Flavin mononucleótido (FMN)
b. Complejos hierro azufre( FE-S)

Los electrones son transferidos desde el NADH hasta el FMN que

se reduce a FMNH2

El FMNH2 cede los electrones a los complejos de Fe-S oxidados

los cuales se reducen.
Los complejos Fe.S reducidos transfieren los electrones a un
transportador electrones móvil que es la ubiquinona.

Este flujo de electrones a través de la NADH-Q reductasa

provoca un bombeo de 4 protones espacio intermenbranal

NAD FM Fe-Sreducido Q
H N

NA FMNH2 Fe-Soxidado
QH2
D+
NADH-
Q
 Complejo II: Glicerol 3-P a ubiquinona

Flavoproteína localizada en la cara externa de la membrana

mitocondrial interna.
Canaliza electrones hacia la cadena respiratoria reduciendo a la
ubiquinona.
No es una bomba de protones
 Complejo III: Citocromo c reductasa

Este complejo esta formado por

a. Dos tipos de citocromos
a. Citocromo b
b. Citocromo c1
Estos citocromos posee como grupo prostético
una ferroporfirinas.
b. Complejos hierro azufre (Fe-S)

El flujo de un par de electrones a través de este complejo

provoca el transporte neto de 2 protones hacia el lado
intermembranal.

Q Cit b (+2) QH Fe-S (+2) Cit c1 (+3) Cit c (+2)

.

Cit b QH Fe-S (+3) Cit c1 (+2) Cit c

Q
(+3) 2 (+3)
H.
Citocromo c reductasa
 Complejo IV: Citocromo Oxidasa

Es el último complejo que bombea protones.

Está formado:
a. Dos grupos hemos
a.1 Citocromo a
a.2 Citocromo a3

b. Dos iones cobre diferentes

El flujo de electrones a través de la citocromo oxidasa provoca
la traslocación de cuatro protones al espacio intermembranal

Cit a Cit a3
Cit c (oxidado) (reducido) H2O
(+3)
Cit c (+2) Cit a Cit a3 O
(reducido) (oxidado) 2

Citocromo Oxidasa
 Fosforilación Oxidativa

Es el proceso por el cual se forma ATP como resultado de la

transferencia de electrones desde el NADH o FADH2 al O2

La sintesis de ATP se consigue por medio de un complejo

enzimático denominado ATP sintasa.

La ATP sintasa está formada por:

a. Una unidad hidrofílica F1: Formada por cinco
cadenas polipeptídicas:
3 cadenas 
3 cadenas
1 cadena 
1 cadena 
1 cadena 
En esta particula es donde radica la actividad
ATPasa.

b. Una unidad hidrofóbica F0 : Es el conducto de

protones del complejo
 Hipótesis quimiosmótica

El transporte de electrones a través de la cadena respiratoria

provoca el bombeo de protones desde la matriz hacia el espacio
intermembranal.

El gradiente de protones y el potencial de la membrana interna

constituyen una fuerza protomotriz que se utiliza para la síntesis
de ATP por la ATP sintasa mitocondrial.

NADH Q-Reductasa Citocromo reductasa Citocromo oxidasa

H+ H+ H+

+ + + + + + + + +

NADH+ H2 O
H+ NAD+ +
½ O2 + 2H+

ATP Sintasa
ADP + Pi ATP

H+