2.

Materiales y métodos
2.1. Microorganismos
Para este estudio enfocado en la producción de la enzima xilanasa se escogieron dos
hongos filamentosos del genero Trichoderma, estos hongos T. piluliferum y T. viride
los cuales se obtuvieron del suelo de pantanal en Brasil.
2.2. Inóculo
La preparación de este se llevó a cabo en matraces Erlenmeyer de 250 ml el cual
contenía 40 ml del agar dextrosa Sabouraud los cuales se incubaron durante un tiempo
de 72 hr a 28°C. Para la obtención de una suspensión microbiana uniforme se le agrego
50 ml de una solución nutritiva la cual contenía porcentajes al 0.1% de elementos como
nitrato de amonio, sulfato de amonio, heptahidrato de sulfato de amonio y una muestra
de la superficie del medio. Este microorganismo se inoculo agregándole 5 ml de la
suspensión mencionada donde se encontraban los residuos agroindustriales.
2.3. Cultivo en estado sólido para la producción de xilanasa
Para el cultivo de este hongo filamentoso con el fin de producción de xilanasa se
manejó un estudio para determinar un sustrato óptimo para un medio de cultivo en
estado sólido se evaluaron distintos residuos agroindustriales como bagazo de caña,
salvado de trigo entre otros; los cuales se acondicionaron mediante un lavado
dejándolos secar a 50 °C durante 48 hr; en el cultivo del hongo se debe manejar una
cantidad de 5 gr de residuos humedecidos en solución nutritiva manteniendo una
humedad del 70% durante 96 hr a 28 °C, estos se desarrollaron por triplicado.
2.4. Extracción de enzimas
Para esta extracción se le agrega agua destilada en cantidad de 50 ml al Erlenmeyer con
los residuos agroindustriales fermentados para luego centrifugarlos durante 1 hr a 150
rpm.
2.5. Determinación de actividades enzimáticas
Para determinar la actividad enzimática de esta xilanasa utilizaron como prueba un
sustrato de papel de filtro en el cual se desarrolló la libración de azucares reductores
utilizando 3% decarboximetil celulosa (CMC - C5678; Sigma-Aldrich) y 1% de xilano
(Beechwood,Sigma-Aldrich); la liberación de estos azucares fueron calculados por el
método DNS (Miller, 1959). Las actividades deLa β-glucosidasa y la β-xilosidasa se
midieron con los respectivossustratos sintéticos (4 mM; p-NP-β- D -glucopiranosido y 4
mM p-NP-β- D- oxilopiranosido) (Sigma-Aldrich) según lo descrito por Pereira et al.
(2015).
2.6. Efecto de pH de T° sobre actividad xilanolítica
Manejaron pH optimos los cuales calcularon mediante actividades enzimáticas
presentes en distintos valores de pH usando 0.1 Mtampón citrato-fosfato
respectivamente a una temperatura de 50°C. La temperatura óptima fue determinada
por medio de la actividad enzimática de 30 ° C a 70 ° C al pH óptimo para la actividad
enzimática. La estabilidad del pH se determinó incubando la enzima para 24 valores de
pH diferentes a 25 ° C usando 0.1 M de citratotampones de fosfato (3.0–8.0) y glicina-
NaOH 0.1M (8.5–10.5). La termoestabilidad se evaluó incubando la enzima durante
1hatdiferentes temperaturas de 30 ° C a 50 ° C. Estas actividades residuales obtenidas
luego del tratamiento se consideraban 100% de actividad (Costa et al, 2016).
2.7. Cromatografía en capa fina (TLC) de productos de hidrólisis

2.8. Digestibilidad en vitro utilizando xilanasa como suplemento enzimático