UNIVERSIDAD NACIONAL

EVANGÉLICA

Sustentante:
Ana Orquídea Veloz Mora

Matricula:
2019-3200442

Asignación:
Cuenta total estándar de mesófilos aerobios. Salmonella y Shigella.

Profesora:
Svetlana Afanasieva

Semestre:
2021-1

Fecha:
5 marzo de 2021
Analizar y presentar en clase la Práctica #1 y la Práctica #2.
Práctica #1: Cuenta total estándar de microorganismos mesófilos aerobios en alimentos
y método del número más probable para el análisis de coliformes fecales en alimentos.
Práctica #2: Salmonella y Shigella. Usar, por favor, el Manual de Lab. de microbiología
(depositado en el folder de clase teoría). Ambos temas subirán como la tarea, después de
presentar en clase.

Medios de cultivos
Los medios de cultivo son compuestos o preparaciones alimenticias elaboradas en los
laboratorios de microbiología con los nutrientes requeridos para cada género en
particular, que juntamente con las condiciones ambientales adecuadas propician su
desarrollo, constituyendo de hecho el micro mundo de los microorganismos en
condiciones de laboratorio.
Para que un medio de cultivo resulte eficaz, sus componentes deben responder a las
exigencias nutricionales de las especies que se pretenden cultivar. Debido a que existen
diferencias en los elementos constitutivos de cada género o especie, así como en sus
actividades metabólicas y los mecanismos para obtener los nutrientes, se comprenderá
que no haya un medio de cultivo standard que posibilite el desarrollo de todas las especies,
existiendo por lo tanto una amplia variedad.
Los objetivos de los Medios de Cultivos
Cuando los microorganismos son colocados en medio de cultivo apropiados, metabolizan
los nutrientes para sintetizar macromoléculas que suplan el desgaste natural de sus
estructuras en cuyo proceso se libera energía que es empleada en el desarrollo de las
actividades fisiológicas, tales como respirar, moverse, reproducirse, etc. Así como para
controlar el paso de los gradientes químicos a través de la actividad osmótica de la
membrana celular. Por lo tanto, la nutrición microbiana cumple dos objetivos
fundamentales: la biosíntesis para la renovación de los compuestos de su estructura
celular y la producción de energía.
CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Los medios de cultivo se clasifican:
1. Atendiendo a su composición
2. Atendiendo a los objetivos de su empleo.
Atendiendo a su composición, se clasifican a su vez en: simples, sintéticos y vivos.
Medios simples. En este tipo de medio no es posible conocer la proporción exacta de sus
componentes nutricionales por ser muy variable. Se utilizan en su forma natural, tal y
como se encuentran en la naturaleza, siendo prácticamente imposible preparar dos lotes
idénticos con productos iguales de distinta procedencia. Ejemplo: la leche, las carnes, la
papa, jugos vegetales, etc.

Medios sintéticos. A diferencia de los medios simples, los sintéticos están compuestos
por un conjunto d nutrientes definidos cuyas proporciones son constantes, lo que permite
reproducir el mismo medio de cualquier otro lote con exactitud. Se puede decir que son
verdaderas fórmulas químicas o recetas de cocina. Cada uno de estos medios responde a
las necesidades específicas de grupos microbianos determinados.
Medios vivos. Los medios vivos están constituidos por animales o capas de tejidos que
son utilizados para el cultivo de virus y rickettsias, que no se desarrollan en los medios
simples o sintéticos por requerir de la presencia de células vivas para reproducirse en su
interior (parásitos intracelulares obligados). Estos medios no tienen utilidad práctica para
el cultivo de las bacterias y los hongos. Ejemplos: hámster (curieles jóvenes), ratones
blancos lactantes, huevos fértiles de gallina de 7 a 10 días, cultivo de tejidos, etc.

Atendiendo a los objetivos de su empleo

Se clasifican a su vez en: medios de enriquecimiento, medios de aislamiento, medios
selectivos y medios diferenciales.
Medios de enriquecimiento. Son medios generalmente líquidos, que se utilizan con el
propósito de favorecer el desarrollo de una especie determinada que por encontrase en
pequeñas cantidades en la muestra, conjuntamente con otras especies que se hayan en
mayor proporción, se encontrarían en desventaja si la colocamos en un medio de cultivo,
donde ambas se puedan desarrollar, ya que las que se encuentran predominando
consumirían prácticamente casi todos los nutrientes lo que traería como resultado un
pobre desarrollo o incluso ningún desarrollo del germen que nos interesa estudiar.
Los medios de enriquecimiento satisfacen los requerimientos nutricionales del germen
objeto de estudio, al mismo tiempo que no favorecen las necesidades esenciales del resto.
Ejemplo: el caldo Selenito utilizado en la investigación del coprocultivo que favorecen el
desarrollo de los géneros Salmonella y Shigella, dificultando al mismo tiempo el de otras
bacterias entéricas predominantes en el bolo fecal.
Medios de aislamiento. Por lo regular resultan específicos para un solo tipo de germen
al no poder desarrollarse en ellos ninguna de las demás especies, por las características
del medio. Ejemplo: el medio "Chapman" denominado también Agar Manitol Salado.
Este medio se caracteriza porque uno de sus componentes, el CI Na, se encuentra a una
elevada concentración, lo que imposibilita el desarrollo de las especies bacterianas con
excepción de los Estafilococos, que puede desarrollarse y multiplicarse en este medio
salino.
Otro ejemplo lo constituye el medio Agar, verde brillante, que se utiliza para el
aislamiento e identificación de la Salmonella sp/ en materiales patológicos. En este caso
se aprovecha la resistencia de esta especie a ciertos agentes químicos, como el colorante
verde brillante, que, sin embargo, inhibe el crecimiento de otras enterobacterias,
especialmente la Escherichia coli, que generalmente se encuentra predominando en las
muestras empleadas.

Medios diferenciales. En este tipo de medio de cultivo se pueden desarrollar sin

dificultad diferentes especies microbianas. Se utiliza para diferenciar la especie
desarrollada por las reacciones bioquímicas que genera su actividad metabólica, lo cual
es determinado por cambios y reacciones evidentes que de manera específica produce
cada especie en el medio de cultivo, cuyas diferencias permiten encaminar la
investigación hacia su identidad. Ejemplo: el medio Kligler, que es utilizado en la
investigación de las enterobacterias. Después de 14 a 16 horas de incubación se puede
observar que el medio de cultivo cambia de color, de rojo a amarillo en la parte inferior
o en todo el medio, así como la presencia o no de manchas de color negro o evidencias o
no de producción de gas.
Consistencia de los medios de cultivos
Atendiendo a su consistencia los medios se clasifican en: líquidos, semisólidos y sólidos.

Líquidos: Los medios líquidos no contienen agar, siendo trabajados en forma de caldo.
Los microorganismos desarrollados en medios líquidos se mueven con libertad y su
desarrollo provoca la formación de un enturbamiento difuso o sedimento visible.
Ejemplo: Caldo Selenito, agua, peptonada Alcalina, caldo lactosado, etc.
Semisólidos: Estos medios contienen un % de agar menor que el empleado para los
medios sólidos, lo que facilita una mayor migración de sustancias y la movilidad de los
gérmenes. Ejemplo: medio de "Cary - Blair" y agar semisólido para motilidad.
Solidos: Son medios de cultivo que contienen en su composición alrededor de 1,5 % de
agar, cantidad suficiente para la gelificación del medio. La solidez proporcionada por el
agar impide a los microorganismos su migración en el cultivo por lo que se multiplican
en un mismo sitio dando lugar a un cúmulo de millones de descendientes que forman
sobre el cultivo estructuras macroscópicas denominadas colonias de diferentes formas,
aspectos y tamaños. Cada género y especie producirá un tipo de colonia con caracteres
culturales diferentes, que permitirán al investigador orientarse hacia la identificación
ulterior de la especie. Teóricamente cada colonia se genera a partir una o varias bacterias
de la misma especie, aunque ocasionalmente pueden desarrollarse a partir de dos especies
distintas, lo que da lugar a la formación de colonias atípicas. Ejemplo: Agar Saboreaud
Dextrosa, Agar Violeta Rojo Bilis, Agar Sangre, etc.

Métodos de determinación de Microorganismo

• Siembra en profundidad.
La siembra en profundidad en un medio sólido en tubo se realiza con una aguja
de siembra y consiste en tomar parte del cultivo de la placa o tubo de partida e
introducir la aguja de siembra de forma vertical en el agar del tubo que queremos
sembrar.
• Siembra por extensión.
Se extiende el inóculo uniformemente con una varilla acodada estéril por la
superficie del medio de cultivo. Las células diseminadas sobre la superficie
formarán colonias aisladas.
• Métodos del número más probable (NMP).
El método del número más probable (NMP) se aplica para recuento de coliformes,
coliformes fecales y de cepas gasógenos (aerógenas) de Escherichia coli. El
método no sirve para aislar ni contar serotipos de E. coli asociados a
enfermedades humanas, Tales cepas no dan positiva la reacción de los coliformes
fecales y por tanto ni pueden detectarse ni contarse con este método. Por tanto, el
método no se aplicará a la búsqueda del serotipo O157:H7 de E. coli.
• Método por filtración.
Se basa en el crecimiento, la identificación y el recuento de las colonias de los
microorganismos retenidos en la superficie de un filtro, a través del cual se
ha filtrado un volumen conocido de muestra de agua. Incubada en un medio
de cultivo durante un tiempo y a una temperatura adecuadas.
• Impedancia
La microbiología de impedancia es una técnica microbiológica que se utiliza para
medir la densidad del número microbiano (principalmente bacterias, pero también
levaduras) de una muestra mediante el seguimiento de los parámetros eléctricos
del medio de cultivo.
• Biología molecular
La agricultura molecular consiste en la modificación de genes de plantas con la
finalidad de que éstos sean capaces de producir ciertas proteínas determinadas que
podrán ser empleadas como medicinas o vacunas.

Practica #1: Cuenta total estándar de microorganismos mesófilos aerobios en

alimentos y método del número más probable para el análisis de coliformes
fecales en alimentos.
En este grupo se incluyen todos los microorganismos, capaces de desarrollar en
presencia de oxígeno a una temperatura comprendida entre 20°C y 45°C con una
óptima entre 30ºC y 40ºC. El recuento de microorganismos aerobios mesófilos, en
condiciones establecidas, estima la microflora total sin especificar tipos de
microorganismos. Refleja la calidad sanitaria de los productos analizados, indicando
además de las condiciones higiénicas de la materia prima, la forma como fueron
manipulados durante su elaboración. Un recuento bajo de aerobios mesófilos no
implica o no asegura la ausencia de patógenos o sus toxinas, de la misma manera un
recuento elevado no significa presencia de flora patógena. Ahora bien, salvo en
alimentos obtenidos por fermentación, no son recomendables recuentos elevados. Un
recuento elevado puede significar:
- Excesiva contaminación de la materia prima.
- Deficiente manipulación durante el proceso de elaboración.
- La posibilidad de que existan patógenos, pues estos son mesófilos.
- La inmediata alteración del producto.
En el uso o la interpretación del recuento de microorganismo aerobios mesófilos hay
ciertos factores que deben ser tenidos en cuenta: Este recuento es sólo de
microorganismos vivos.
- La utilidad del indicador depende de la historia del producto y el momento de la
toma de muestra. En alimentos perecederos manipulados correctamente pueden
desarrollar recuentos elevados y perder calidad si son almacenados por un período de
tiempo prolongado. En este caso, el recuento no se encontraría elevado por la
condición de higiene del producto, sino por la vida útil del mismo.
- Los procedimientos que sufre el alimento en su elaboración, por ejemplo, un proceso
térmico, pueden enmascarar productos con altos recuentos o condiciones deficientes
de higiene. Además, el almacenamiento prolongado en congelación o con pH bajo
puede producir una disminución del recuento. - El recuento de mesófilos nos indica
las condiciones higiénico-sanitarias de algunos alimentos, pero no tiene significado
sanitario.
- En otros productos que han sido madurados con bacterias (por ejemplo, quesos) o
alimentos que dentro de su formulación tienen conservadores.
en siembra en profundidad
en siembra en superficie
Siembra en superficie
en alimentos
Determinación de Coliformes Totales y Fecales. Método de recuento
por dilución en tubo: NMP (Numero Mas Probable)
Existen diversos métodos para cuantificar el número de microorganismos presentes en
muestras líquidas y sólidas. Dentro de las técnicas más comunes se encuentra el recuento
directo por microscopia de fluorescencia, así como los procedimientos basados en
diluciones en serie, haciendo crecer microorganismos en medios de cultivo sintéticos
sólidos o líquidos, como el recuento en placa de Unidades Formadoras de Colonias
(UFC) o la estimación por el método del Número Más Probable (NMP).
El método del número más probable fue descrito por McCrady en 1915 y actualmente
sigue siendo ampliamente utilizado. En un principio este método fue empleado para
estimar el número de microorganismos en muestras de alimentos y aguas. Sin embargo,
se ha demostrado que también puede ser aplicado para la determinación de
microorganismos aerobios y anaerobios en lodos, sedimentos marinos
y suelos contaminados, por tanto este método es aplicable para estimar el número de
microorganismos en muestras de suelo y agua, tanto para bacterias aerobias como
anaerobias.
Los Coliformes Fecales son un subgrupo de los Coliformes totales, capaces de fermentar
la lactosa a 44º C en vez de 37 ºC como lo hacen los totales.
Aproximadamente el 95% del grupo de los Coliformes presentes en heces están formados
por Escherichia coli y ciertas especies de Klebsiella. Ya que los Coliformes Fecales se
encuentran casi exclusivamente en las heces de los animales de sangre caliente, se
considera que reflejan mejor la presencia de contaminación fecal. Éstos últimos se
denominan termo tolerantes por su capacidad de soportar temperaturas más elevadas. Esta
es la característica que diferencia a Coliformes Totales y Fecales. La capacidad de los
Coliformes fecales de reproducirse fuera del intestino de los animales homeotérmicos es
favorecida por la existencia de condiciones adecuadas de materia orgánica, pH, humedad.
Desde hace mucho tiempo se han utilizado como indicador ideal de contaminación fecal.
Su presencia se interpreta como una indicación de que los organismos patógenos pueden
estar presentes y su ausencia indica que el agua o el alimento estudiado se hallan exentos
de organismos productores de enfermedades.
Objetivos:
• Familiarizarse con los métodos de recuento, especialmente con el de NMP.
• Detectar bacterias coliformes totales y fecales.
• Detectar si la muestra traída es apta para el consumo humano.
Materiales
• Muestra: Leche
• Medios de cultivo: Caldo Brilla (presuntivo), agar MacConkey, agar Endo, EMB,
CB.
• Caldo EC
 • Tubos de dilución
• Pipetas
• Bombilla de aspiración
• Placas de Petri
• Mechero Bunsen
• Baño María
• Estufa
• Gradillas
• Anzas microbiológicas calibradas
Procedimiento
• a. Método para coliformes totales:
• Preparamos diluciones hasta 10-3.
• Sembramos dos, tres o cinco tubos por cada dilución, según sea el caso.

o Los resultados se dan en por gr o mL

o En el caso de agua se sigue de la otra forma:
o Cuando se trate de aguas, los resultados se darán por 100 mL.
o Luego, incubar a 35 ºC ± 1 por 24 h.
o Realizar la 1ra lectura (determinar la presencia de gas). Ésta se observa en
las campanas.
o Los tubos que no sean positivos se incuban por otras 24 h más.
o b. Métodos para coliformes fecales:
o Para coliformes fecales se utilizan dos métodos:
o En el Primer Método se cogen los tubos positivos del caldo Lauril Sulfato
Triptosa y se lleva una asada al caldo EC utilizando un asa que tenga 3
mm de diámetro.
o Luego, estos tubos se incuban a 45.5 ºC ± 0.2, en baño María con agitación
constante por 24 h.
o Si hay gas a las 24 o 48 h. es positivo para coliformes fecales.
o El Segundo Método es la llamada prueba de Mackenzie.
o En esta se usa el caldo Brilla más agua Peptonada.
o Se parte del caldo MacConkey, los tubos positivos de la prueba de
coliformes totales se siembran en este caldo, si aquí vuelve a salir positivo
se le realizan las dos pruebas sgtes:

▪ Sólo se tomará esta prueba como positiva si los dos tubos (caldo
Brilla y caldo Peptonado) resultan positivos.
▪ Al tubo con caldo peptonado se le agrega el reactivo de Kovacs
para hacer la prueba de Indol.
▪ Para ver coliformes termorresistentes, de los tubos que hayan
salido positivos se siembra una asada en agar MacConkey y se
aíslan las colonias características.
▪ De los tubos positivos se los siembra en otros tubos en caldo EC
con campana de Durham.
Resultados
▪ De los tubos sembrados en el caldo Brilla (prueba presuntiva), se
obtuvo los sgtes. resultados (a las 24 horas) para coliformes totales:
▪ Para realizar la prueba confirmativa se sembró en agar
MacConkey, luego de la incubación por 24 horas, se obtuvo los
sgtes. resultados:
 ▪ Por lo tanto, se puede decir que el resultado del número más
probable es: 2–2–2.
▪ Para este resultado las tabla de NMP con un límite de confianza de
95% para la prueba de fermentación utilizando 3 diluciones con
dos repeticiones (2 tubos), nos da un valor de >1100
bacterias/mL de leche.
Conclusiones
▪ Los valores mínimos permisibles usados en México, por ejemplo,
nos dan los sgtes. valores de referencia para diversos alimentos:
Especificaciones microbiológicas establecidas para diversos alimentos.
*NOM-093-SSA1-1994 ; ** NOM-121-SSA1-1994; *** Límites microbiológicos de la
ICMSF (International Commission on Microbiological Specifications for Foods).
▪ La muestra traída por nuestro grupo fue de leche cruda. Al hacer
un comparativo de nuestros resultados vemos, por ejemplo, que
"La Norma Venezolana para Lácteos" da como valores límites los
sgtes. valores:

▪ Vemos que el límite dado para Coliformes Totales en leche cruda

está dado en UFC/ml, entonces, comparando nuestra muestra de
leche, traída de un puesto lechero del sector Santa Rosa – Chiclayo
con las muestras dadas en el cuadro, la podemos calificar como
una leche DE TERCERA.
RESULTADOS COLIFORMES FECALES
▪ Para la prueba de coliformes fecales se utilizó como método la
prueba de Mackenzie, aunque, al no tener todos los medios
necesarios, se hicieron algunas modificaciones.
▪ De los tubos positivos del Caldo Brilla si inoculó, de cada uno, a
tubos con Caldo E-C.
▪ Luego se incubó los tubos a 44 ºC ± 0.1 por 24 h.
▪ Pasado el tiempo se leyó los resultados.
▪ De los tubos positivos se pasó a placas con agar MacConkey, estas
se incubaron por 24 h a 37 ºC (se debió pasar a dos tubos uno con
caldo peptona y otro con caldo Brilla).
▪ Pasado el tiempo, se leen las placas y se realizan las pruebas
bioquímicas para las colonias lactosa positivas (L+).
RESULTADOS:
▪ Como todos los tubos del caldo Brilla salieron positivos, se
sembraron en tubos con caldo EC (seis tubos).
▪ Después de la incubación de los tubos con caldo EC se obtuvieron
los sgtes. resultados:
▪ De los tubos positivos se sembró en agar MacConkey, de ellas
todas salieron lactosas positivas:

▪ De las colonias lactosa positivas se escogió una y se le realizó las

sgtes. pruebas bioquímicas: IMViC + descarboxilación de la lisina
(LIA) + prueba de fermentación de carbohidratos (TSI).
▪ Se obtuvieron los sgtes. resultados:
 ▪ De los resultados obtenidos se puedo identificar a Klebsiella
azaenae.
▪ Entonces, como Klebsiella pertenece al grupo de las coliformes
fecales, podemos decir que la muestra tratada (leche cruda) tenia
presencia de estas en un número de (resultado NMP 2-2-0):

NMP de coliformes fecales = 210 bacterias/ mL.

Algunas sp. del género Klebsiella junto con otras de los
géneros Citrobacter y Enterobarter se cree que son las causantes de enfermedades
gastrointestinales agudas y crónicas. Estos microorganismos pueden ser recolectados de
ambientes naturales tales como los bosques, el agua fresca así como también de
los productos provenientes de la agricultura (vegetales) donde residen normalmente
como microflora.
También pueden ser recolectados de las heces de individuos saludables que no presentan
síntomas de la enfermedad. También pueden ser recolectadas a partir de los productos
lácteos, los mariscos crudos y los vegetales frescos y crudos. Estos organismos al
contaminar las aguas pueden estar presentes en el suelo usado para la producción de
cultivos y en las aguas de pesca de mariscos; como resultado éstos pueden constituir un
peligro para la salud.
Preguntas
▪ ¿Cuáles son los diferentes métodos para coliformes totales?
▪ Para el conteo de coliformes totales se tienen tres métodos
principalmente.
▪ El primero se basa en la técnica del número más probable (NMP),
utilizando caldo Lauril Sulfato Triptosa seguido de la
confirmación de los tubos positivos de formación de gas en caldo
Lactosa Bilis Verde Brillante. La incubación es a 35 ºC.
▪ El segundo método emplea únicamente el caldo MacConkey. La
incubación es a 37 ºC.
▪ El tercer método usa el caldo Lactosa Bilis Verde Brillante a 35 –
37 ºC, seguido de confirmación en agar Bilis Rojo-Violeta o en
agar Endo.
▪ ¿Qué características tienen las colonias de coliformes en agar Endo
y en agar Eosina Azul de Metileno?
▪ El medio Eosina Azul de Metileno (EMB) es un medio de plaqueo
diferencial que puede usarse en lugar del agar MacConkey en el
aislamiento y detección de Enterobacteriácea o de bacilos
coliformes de muestras con bacterias mixtas. Los colorantes
anilínicos (eosina y azul de metileno) inhiben a las bacterias Gram
positivas y a las Gram negativas exigentes. Se combinan para
formar un precipitado a pH ácido y, de este modo, sirven también
como indicadores de la producción de ácido. Las colonias lactosa
(+) dan colonias de color violeta, las de E. coli presentan un
característico brillo verde metálico, las de Enterobacter presentan
un color violeta sin brillo metálico (ojo de buey). Las colonias
de Klebsiella son siempre mucosas, grande y ligeramente rosadas.
▪ El medio Endo es un medio selectivo para demostración de E.
coli fecal y coliformes en los más diversos materiales. El sodio
sulfito y la fucsina inhiben a las bacterias Gram (+). E. coli y
 coliformes utilizan lactosa con formación de aldehído y ácido. Por
otra parte, el aldehído libera fucsina a partir de la combinación:
fucsina sulfito, lo que da lugar a la coloración roja de las colonias.
En este medio las colonias lactosa (+) presentan una coloración
roja, p.ej. E. coli es de color rojo con brillo metálico
estable. Enterobacter aerógenes y otros presentan colonias rojas
hasta rojizas, semiesféricas y mucosas.

TABLA NÚMERO MÁS PROBABLE PARA COMBINACIONES DE 2 TUBOS

Número de tubos positivos

Índice NMP
con el inóculo indicado

0 0 0 <3,0

0 0 1 7

0 1 0 11

0 1 1 14

0 2 0 16

1 0 0 9

1 0 1 14

1 0 2 20

1 1 0 21

1 1 1 35

1 2 0 29

1 2 1 36

2 0 0 23

2 0 1 38

2 0 2 75

2 1 0 43

2 1 1 150
 2 1 2 240

2 2 0 210

2 2 1 470

2 2 2 >1100

Adaptado de Ortiz, 2003 y Fuentes, 2005.

Practica #2: Salmonella y Shigella. Usar, por favor, el Manual de Lab.
de microbiología (depositado en el folder de clase teoría). Ambos temas
subirán como la tarea, después de presentar en clase.
Shigella

B. Medios de cultivo
• Caldo de cultivo pH 8
• Agar Salmonella-Shigella (S-S)
• Agar Xilosa-Lisina-Desoxicolato (Xylose Lysine Desoxycholate: XLD)
• Agar MacConkey
• Agar lisina hierro (Lysine Iron Agar: LIA)
• Agar TSI ó Kligler
• Caldo Urea
• Galerías API 20E

C. Fases del aislamiento e identificación de Shigella

1. Enriquecimiento selectivo en medio líquido.
2. Aislamiento diferencial sobre medios sólidos selectivos.
3. Confirmación bioquímica de las colonias sospechosas.
Bibliografía
Libro del laboratorio de Microbiología. Métodos de Cultivos (pag.208).
http://coli.usal.es/web/demos/demo_fundacua/Shigella/shigella.html#b
https://www.monografias.com/trabajos89/determinacion-coliformes-totales-
fecales/determinacion-coliformes-totales-
fecales.shtml#:~:text=Los%20Coliformes%20Fecales%20son%20un,y%20ciertas%20e
species%20de%20Klebsiella.
http://www.anmat.gov.ar/renaloa/docs/analisis_microbiologico_de_los_alimentos_vol_i
.pdf
http://www.anmat.gov.ar/renaloa/docs/analisis_microbiologico_de_los_alimentos_vol_i
ii.pdf
file:///C:/Users/Orlin%20Germosen/Downloads/Clase%202%20M%C3%A9todos%20fi
sicoqu%C3%ADmicos%20y%20microbiol%C3%B3gicos%20para%20garantizar%20la
%20calidad%20del%20agua.pdf
https://es.slideshare.net/leo-canis-lupus/mtodos-de-siembra-y-
aislamiento#:~:text=5.,superficie%20del%20medio%20de%20cultivo.&text=REPIQUE
S%EF%82%A2%20Objetivo%3A%20hacer%20crecer,de%20pigmentos%20o%20simp
lemente%20conservarlo.
https://docplayer.es/14627227-Tema-10-cultivo-y-aislamiento-de-patogenos-
viables.html
https://libroslaboratorio.files.wordpress.com/2012/09/medios-de-cultivo-en-un-
laboratorio-de-microbiologc3ada.pdf