UNIDAD N°21:

PRODUCCION DE
VITAMINAS.

BIOTECNOLOGIA
2015
SUAREZ ROMINA
SERVANT JACQUELINE
FLEURY SARA
ORREGO SOLEDAD
BONADONNA FERNANDO
INTRODUCCION
B 12 , su importancia en el
Se desarrolla a continuación la producción de vitamina
mercado tanto económica como social. Cuál es su estructura, como se lleva a cabo su
biosíntesis. Cuáles son los métodos de producción.

Se va a desarrollar el proceso de producción de rivoflavina (vitamina B), comentando su

existencia y significado económico, su estructura y biosíntesis.

También el proceso productivo de b-caroteno. Su existencia y significado económico, su

estructura y biosíntesis.

Se hará un análisis sobre la disponibilidad de materia prima y recursos humanos para la

producción de dichas sustancias en Argentina. Y se hará mención explicándose como
corresponda, a “Producto estratégico”.
Las vitaminas (del latín vita ‘vida’ y el griego ammoniakós que significa ‘amoniaco’, con el
sufijo latino ina ‘sustancia’) son compuestos heterogéneos imprescindibles para la vida,
que al ingerirlos de forma equilibrada y en dosis esenciales promueven el correcto
funcionamiento fisiológico. La mayoría de las vitaminas esenciales no pueden ser
sintetizadas (elaboradas) por el organismo, por lo que éste no puede obtenerlas más que
a través de la ingesta equilibrada de vitaminas contenidas en los alimentos naturales. Las
vitaminas son nutrientes que junto con otros elementos nutricionales actúan como
catalizadoras de todos los procesos fisiológicos

Está demostrado que las vitaminas del grupo B son imprescindibles para el correcto
funcionamiento del cerebro y el metabolismo corporal. Este grupo es hidrosoluble
(solubles en agua) debido a esto son eliminadas principalmente por la orina, lo cual hace
que sea necesaria la ingesta diaria y constante de todas las vitaminas del complejo “B”.

CLASIFICICACION DE LAS VITAMINAS

Vitaminas liposolubles

Las vitaminas liposolubles, A, D, E y K, se consumen junto con alimentos que contienen

grasa.

Son las que se disuelven en grasas y aceites. Se almacenan en el hígado y en los tejidos
grasos, debido a que se pueden almacenar en la grasa del cuerpo no es necesario
tomarlas todos los días por lo que es posible, tras un consumo suficiente, subsistir una
época sin su aporte.

Las vitaminas liposolubles son:

Vitamina A (retinolftalina)

Vitamina D (calciferol)

Vitamina E (tocoferol)

Vitamina K (antihemorrágica)

Estas vitaminas no contienen nitrógeno, son solubles en grasa, y por tanto, son
transportadas en la grasa de los alimentos que la contienen. Por otra parte, son bastante
estables frente al calor (la vitamina C se degrada a 90º en oxalatos tóxicos). Se absorben
en el intestino delgado con la grasa alimentaria y pueden almacenarse en el cuerpo en
mayor o menor grado (no se excretan en la orina). Dada a la capacidad de
almacenamiento que tienen estas vitaminas no se requiere una ingesta diaria.

Vitaminas hidrosolubles

Las vitaminas hidrosolubles son aquellas que se disuelven en agua. Se trata de

coenzimas o precursores de coenzimas, necesarias para muchas reacciones químicas del
metabolismo.
En este grupo de vitaminas, se incluyen las
vitaminas B1 (tiamina), B2 (riboflavina), B3 (niacina o ácido nicotínico), B5 (ácido
pantoténico), B6 (piridoxina), B7/B8 (biotina), B9(ácido fólico), B12 (cobalamina) y vitamina C
(ácido ascórbico).

Estas vitaminas contienen nitrógeno en su molécula (excepto la vitamina C) y no se

B 12 , que lo hace de modo
almacenan en el organismo, a excepción de la vitamina
importante en el hígado. El exceso de vitaminas ingeridas se excreta en la orina, por lo
cual se requiere una ingesta prácticamente diaria, ya que al no almacenarse se depende
de la dieta. Por otro lado, estas vitaminas se disuelven en el agua de cocción de los
alimentos con facilidad, por lo que resulta conveniente aprovechar esa agua para preparar
caldos o sopas.

En esta monografía nos dedicaremos al estudio de la Cobalamina, la Rivoflavina y el beta

caroteno.
VITAMINA B12
B 12
La vitamina (también llamada cobalamina, debido a que contiene cobalto) es
esencial para el funcionamiento normal del cerebro, del sistema nervioso, y para la
formación de la sangre y de varias proteínas. Es una de las ocho vitaminas del grupo B.
Normalmente está implicada en el metabolismo de las células del cuerpo humano,
especialmente en la síntesis y regulación del ADN; también en la metabolización de los
aminoácidos, de los ácidos grasos y de los glúcidos.

Ni los hongos, ni las plantas, ni los animales pueden producir esta vitamina. Solo las
bacterias y las arqueobacterias (grupo de microorganismos unicelulares de morfología
procariota (sin núcleo ni, en general, orgánulos membranosos internos), que forman uno
de los tres grandes dominios de los seres vivos, y que son diferentes de las bacterias)
tienen las enzimas necesarias para su síntesis, no obstante muchos alimentos son fuente
B 12 debido a la simbiosis bacteriana. Estructuralmente hablando, esta es la
natural de
vitamina más compleja y puede ser producida industrialmente únicamente por
fermentación bacteriana.

Está conformada por una clase de compuestos químicamente relacionados (vitámeros)

los cuales actúan como vitaminas. El cobalto, un oligoelemento
(son bioelementos presentes en pequeñas cantidades (menos de un 0,05 %) en los seres
vivos y tanto su ausencia como su exceso puede ser perjudicial para el organismo), está
en el centro del anillo tetrapirrol llamado corrina. La biosíntesis es llevada a cabo solo por
bacterias, que por lo general producen hidroxicobalamina, pero la conversión entre las
diferentes formas de la vitamina se logra en el cuerpo humano. Una forma semisintética
común es la cianocobalamina, la cual es producida a partir de la hidroxicobalamina
bacteriana, que es luego usada en muchos productos farmacéuticos y suplementos
vitamínicos, y como un aditivo alimentario debido a su estabilidad y menor costo de
producción. En el cuerpo humano adquiere la forma de metilcobalamina y 5-
desoxiadenosilcobalamina, dejando tras de sí pequeñas cantidades de cianuro.
La vitamina B12 fue descubierta por su relación con la anemia perniciosa, una enfermedad
autoinmune que destruye las células parietales del estómago, encargadas de la secreción
del factor intrínseco gástrico, estas células además son responsables de la secreción del
ácido estomacal. El factor intrínseco es crucial para la normal absorción de la vitamina B 12,
por lo que la ausencia del factor intrínseco, como se ve en la anemia perniciosa, ocasiona
una deficiencia de vitamina B12.

ESTRUCTURA
Bioquímicamente hablando la vitamina B12 es la más compleja de las vitaminas. La B 12 es
una de estas cobalaminas que resulta de la unión asimétrica de cuatro anillos pirrólicos,
formando un grupo macrocíclico casi planar (núcleo de corrina) en torno a un ion central
de cobalto. El anillo de corrina es similar al anillo porfirínico, que también pude ser
encontrado en el grupo hemo, la clorofila y en los citocromos; y se diferencia de estos por
su asimetría en las uniones entre los grupos pirrólicos. En esta estructura, el cobalto
posee seis valencias, cuatro de las cuales forman un enlace covalente con los átomos
de nitrógeno de los anillos pirrólicos. La quinta valencia de coordinación siempre se
encuentra unida a un pseudonucleótido complejo, el 5,6-dimetilbencimidazol, casi
perpendicular al núcleo y, finalmente, cuando la sexta valencia se une a
diversos radicales produce los diferentes derivados de la cobalamina. Cuando se une un
grupo de cianuro (CN-) forma la cianocobalamina, cuando la unión es con un grupo
hidroxilo compone la hidroxicobalamina, cuando se conecta a un grupo metilo (CH3-) crea
la metilcobalamina o la desoxiadenosilcobalamina; con el grupo de C5 de la
desoxirribosa de esta última, forma el enlace covalente con el Co.

La vitamina B12 es un descriptor genérico de un grupo de moléculas de cobalto y sus

anillos de corrina, que son definidos por su particular función en el cuerpo. Todas las
moléculas de sustrato corrina-cobalto de la B12, solo son sintetizadas por bacterias. Sin
embargo, y excepto en los poco frecuentes casos y después de que esta síntesis está
completa, el cuerpo humano tiene la capacidad de convertir cualquier forma de B 12 en una
forma activa, por medio de la eliminación enzimática de ciertos grupos prostéticos de
químicos desde el átomo de cobalto y su posterior sustitución por otros grupos.

Todas las diversas formas de B12 (vitámeros), cristales y soluciones a base de agua, son
de color rojo muy oscuro debido al complejo de corrina-cobalto.
SINTESIS Y PRODUCCION INDUSTRIAL
La producción industrial de la vitamina B12 es posible gracias a la fermentación de
microorganismos seleccionados. La STREPTOMYCES griseus, una bacteria que fue
considerada una levadura, fue durante muchos años la fuente de B 12 en el medio
comercial. La especie PSEUDOMONAS denitrificans y la PROPIONBACTERIUM
shermanii son las de mayor uso en la actualidad. Dado que un buen número de especies
de propionibacterium no producen exotoxinas o endotoxinas y son consideradas, en
general, como seguras para uso humano según la Administración de alimentos y
medicamentos de Estados Unidos, quien le ha concedido la condición de “Generalmente
reconocido como seguro” para los organismos que son usados para la fermentación,
siendo estas bacterias modificadas las preferidas por esta administración para la
producción de vitamina B12.
 B 12 utilizan glucosa como
La mayor parte de los procesos de fermentación de vitamina
fuente de carbono. Se conocen varias cepas productoras, que se enumeran a
continuación:

BACILLUS megaterium que produce 0,45 mg/l

BUTYRIBACTERIUM rettgeria que produce 5 mg/l

PROPIONBACTERIUM fredenrichii que produce 19 mg/l

PSEUDOMONAS denitrifans que producen 60 mg/l

Actualmente se han mejorado los rendimientos debido al uso de técnicas modernas de

ingeniería genética.

PROCESO CON PROPIONBACTERIAS:

Se utiliza la PROPIONBACTERIUM fredenrichii. El proceso comienza en una fase
anaerobia (2-4 días) en donde se produce el 5-desoxiadenosilcobinamida, luego en una
segunda fase aerobia (3-4 días) tiene lugar la síntesis de 5,6-dimetilbenzimidazol, de
B 12 ).
forma que se produce la 5-desoxianosilcobalamina (coenzima

Ambas etapas pueden llevarse a cabo en dos tanques operados en cascada. Durante el
proceso de recuperación, las cianocobalaminas que están unidas a la célula son llevadas
a la solución por tratamiento con calor (10-30 minutos a 80-120°C, pH 6,5-8,5), entonces
son convertidas químicamente en cianocobalaminas. El producto crudo tiene un 80% de
pureza y etapas adicionales de purificación llevan al producto a un 95-98% de pureza
(utilización médica mayormente).

PROPIONBACTERIUM
El proceso puede ser discontinuo
fredenrichii
en dos etapas en un fermentador o
Anaerobia continuo en dos tanques de
cascada.
5-desoxiadenosile

Aeróbica

5,6-dimetilbenzimidazol

Proceso de recuperación: las cobalamidas son

llevadas a la solución por calor (10-30 minutos, 80-
B 12
Coenzima 120°C, pH 6,5-8,5) y convertidas químicamente en
cianocobalamidas.
(5-desoxiadenosilcobalamina)
PROCESO CON PSEUDOMONAS:
Se ha encontrado que PSEUDOMONAS denitrifans es la especie más productiva entre
B 12 .
las diferentes PSEUDOMONAS que producen vitamina

B 12 se produce durante toda la fermentación.

En este proceso en una etapa, la vitamina
Deben añadirse como suplemento cobalto y 5,6-bendzimidasol.

Se ha encontrado también que la adición del compuesto betaina da lugar a un aumento

del rendimiento, la melaza de remolacha se usa con una fuente de betaina de bajo precio.

PSEUDOMONAS denitrifans. Mantenimiento del inoculo:

MB2436 liofilizado en leche seca

Tubo de agar inclinado con medio

Cultivo de inoculo de incubación: 96 hs 28°C

Matraz, Erlenmeyer de 1 litro con

150 ml de medio b, incubación: 72
Pre inoculo hs 28°C con agitación.
Fermentador de 5 litros con 3,3
litros de medio c, esterilización 75
min 120°C. Inoculo 150 ml de
preinoculo. Incubación 90 hs 29°C,
Cultivo de
agitación a 420 rpm. Aireación
producción
1vvm
Medio a (g/l) Melaza de remolacha 60; extracto de levadura 1; N-Z-Amina 1;
(NH 4 )2 HPO4 2; Mg SO 4 .7 H 2 O Mn SO 4 . H 2 O Zn SO 4 .7 H 2 O
1; 0,2;

Na 2 Mo O4 .2 H 2 O
0,02; 0,005; agar 25; Agua corriente; Ph7, 4.

Medio b (g/l): Medio a sin agar

Medio c (g/l): Melaza de remolacha 100; extracto de levadura 2; ( NH 4 )2 HPO4 5;

NO
Mg SO 4 .7 H 2 O Mn SO 4 . H 2 O Co(¿¿ 3)2 .6 H2O
3; 0,2; 0,118; 5,6-
¿

Zn SO 4 .7 H 2 O ; Na2 Mo O4 .2 H 2 O
dimetilbenzimidazol 0,025; 0,005; agua
corriente; pH 7,4.

DISEÑO DE EXPERIMENTOS
Elección del proceso de producción de la Vitamina V12

 Substrato: Sacarosa proveniente de azúcar comercial con un 99,8% de pureza

Medio de Cultivo:
Para PSEUDOMONAS: composición en g/L:
 Substrato=100
 Extracto de Levadura=2
 (NH4)2 HPO4 = 5
 MgSO4 7H2O = 3
 MnSO4 H2O = 0,2
 CoCl2 6 H2O = 0,02
 ZnSO4 7H2O = 0,02
 Na2MoO4 2 H2O = 0,005
 Betaína = 10
 5,6 DMI = 0,025
 pH=7,4
 T= 29° C
 Agitación 300 rpm
 Aireación 1 VVM

Número de Experimentos a Realizar

N= 2n= 24 =16 (experimentos) donde: n= numero de variables en

estudio

Niveles de las variables:

 BAJO (INFERIOR) = 1
  ALTO (SUPERIOR) = 2

Variables en estudio:

A. Substrato: Sacarosa
B. (NH4)2 HPO4
C. MnSO4 H2O
D. CoCl2 6 H2O

VARIABLES
CORRIDAS A B C D
1 1 1 1 1
2 2 1 1 1
3 1 2 1 1
4 2 2 1 1
5 1 1 2 1
6 2 1 2 1
7 1 2 2 1
8 2 2 2 1
9 1 1 1 2
10 1 2 1 2
11 2 1 1 2
12 2 2 1 2
13 1 1 2 2
14 1 2 2 2
15 2 1 2 2
16 2 2 2 2
 Niveles
Composición de referencia (g/L) Inf Sup
(A) Sacarosa 100 85 115
(B) (NH4)2 HPO4 5 4,25 5,75
( C ) MnSO4 H2O 0,2 0,17 0,37
(D) COCl2 6 H2O 0,02 0,017 0,037

VITAMINA B2
La riboflavina es una vitamina hidrosoluble ampliamente distribuida en el reino vegetal y
animal, habiendo sido obtenida por primera vez a partir del suero de leche por Giorgy y
B2 ,
colaboradores en 1.933 (Arnold L.Demain, Giancarlo Lancini 1.983). La vitamina
pertenece al grupo de pigmentos amarillos fluorescentes llamados flavinas. Es un
micronutriente con un rol clave en el mantenimiento de la salud de hombres y animales.
Es el componente principal de los cofactores FAD y FMN y por ende es requerida por
todas las flavoproteínas, así como para una amplia variedad de procesos celulares. Como
otras vitaminas del complejo B, juega un papel importante en el metabolismo energético y
se requiere en el metabolismo de lípidos, carbohidratos, proteínas y aminoácidos.

Esta vitamina es sensible a la luz solar y a ciertos tratamientos como la pasteurización,

proceso que hace perder el 20% de su contenido. Por ejemplo, la exposición a la luz solar
de un vaso de leche durante dos horas hace perder el 50% del contenido de vitamina.
Algunas fuentes de vitamina B2 son: leche, queso, vegetales de hoja verde, hígado y
legumbres.

Es necesaria para la integridad de la piel, las mucosas y de forma especial para

la córnea, por su actividad oxigenadora, siendo imprescindible para la buena visión. Su
requerimiento se incrementa en función de las calorías consumidas en la dieta: a mayor
consumo calórico, mayor es la necesidad de vitamina B2. Esta vitamina es crucial para la
producción de energía en el organismo.

Otra de sus funciones consiste en desintoxicar el organismo de sustancias nocivas,

además de participar en el metabolismo de otras vitaminas.

La síntesis de riboflavina por microorganismos puede ser dividida según el grado de

acumulación de la vitamina; así, se encuentran sobreproducciones débiles, moderadas y
fuertes, tal como la presentan varias bacterias, algunas levaduras y hongos (Presscott,
Dunn 1.962). Al ser de gran importancia terapéutica y alimenticia es producida
comercialmente por síntesis química. Los procesos fermentativos con el empleo de
microorganismos originan la forma que tiene aplicación como suplemento en los alimentos
concentrados para la alimentación animal, este es un proceso mucho más económico que
la síntesis química y no ha sido explotado a cabalidad.

ESTRUCTURA DE LA RIBOFLAVINA
Constituida por un anillo de isoaloxazina dimetilado al que se une el ribitol, un alcohol
derivado de la ribosa. Los tres anillos forman la isoaloxazina y el ribitol es la cadena de
cinco carbonos en la parte superior

PRODUCCION DE LA RIBOFLAVINA
Para la síntesis de riboflavina a escala industrial, se han desarrollado numerosos
procesos biotecnológicos, utilizando diferentes microorganismos, entre los que se pueden
mencionar hongos filamentosos y levaduras como ASHYBA gossypii, CANDIDA
famata y CANDIDA flaveri, y bacterias como CORYNEBACTERIUM
ammoniagenes o BACILLUS subtilis.

Con el objeto de producir riboflavina se estudia el microorganismo ASHYBA gossypii, el

cual se hace crecer en cultivo sumergido en un fermentador de 10 litros, obteniéndose
0.125 μgs de riboflavina por ml. Al finalizar el tiempo de fermentación, el medio de cultivo
se filtra y el filtrado se seca en estufa a 30°C, la vitamina contenida en el producto seco se
extrae con butanol. La vitamina obtenida en forma bruta se purifica en columna seca de
gel de sílice. En el aislamiento en cromatografía en capa fina se obtiene un Rf de 0.55

Tanto para la muestra control (Merk), como para la muestra obtenida de la purificación. En
el espectro UV-visible las bandas de absorción del control y de la muestra son similares.
La biomasa de ASHYBA gossypii se analiza obteniéndose 21.5 % en proteínas, 2.5 % en
grasas, 5.7 % en cenizas, 0.2 % en calcio y 0.32 % en fósforo.

Materiales y métodos

Microorganismo: Para la realización de este trabajo se utiliza la cepa ASHYBA gossypii

ATCC 10895 productora de vitamina B2, proveniente del cepario de Microbiología. La
cepa utilizada se mantiene en cuñas de agar M-200.

Medio de Producción: Basándonos en los resultados obtenidos a nivel de fiolas se

incrementa la escala en un fermentador LKB de 10 litros, el cual contiene sacarosa 1.5 %,
aceite de maíz 2 %, extracto de malta 0.5 %, extracto de levadura (SACCHAROMYCES
cerevisiae) 0.5 %, fosfato di amónico 0.025 %. El pH del medio de cultivo es de 6.5 este
se esteriliza a 121°C por 20 minutos.

Inóculos: Los inóculos se obtienen transfiriendo el microorganismo, mantenido en cuñas

de agar M-200, primero a 100 ml de medio de producción y después a 1000 ml del mismo
medio. En ambos casos la incubación se realiza a 30°C en un agitador orbital a 200 rpm
durante 24 horas.

Proceso fermentativo: Con los valores óptimos obtenidos en volúmenes de 50 ml se

estudia la producción de la vitamina en un fermentador LKB de 10 litros. La incubación se
realiza a 30°C con aireación (0.4 v.v.m), 7 días de fermentación y sin agitación para evitar
que se rompa el micelio. Cada 24 horas se toman muestras, se llevan a un autoclave y se
filtran. En cada filtrado se determina la concentración de riboflavina que se mide por
espectrofotometría a 445 nm, según método espectrofotométrico reportado por Manzur y
Ul-Haque 1.972. Posteriormente en una curva de calibración se obtiene su concentración.
La concentración de azúcares se mide por el método de Antrona (AOAC 1.980).

Extracción y Purificación: La riboflavina contenida en el producto seco, se extrae con

butanol en embudo de decantación (Sebrell, Harris 1.972), posteriormente se lleva a un
rotavapor bajo vacío a 80°C. La purificación se realiza en una columna seca de silica gel
utilizando una mezcla de solventes formada por butanol/etanol/agua en proporción 7:2:1.
El empleo de la cromatografía en columna con sílica gel, no es el método más adecuado
si se desea obtener la vitamina altamente pura. La aplicación de la riboflavina para usos
terapéuticos requiere de un grado de pureza elevado y de la eliminación de
contaminantes que pudieran actuar como agentes pirogénicos o tóxicos. Aunque se está
consciente de ambas limitaciones, decidimos emplear este método por su sencillez.

Análisis de Identificación: Estos se realizan mediante cromatografía en capa fina,

empleando para ello una placa de sílica gel de 10 cm de ancho por 12 cm de largo; una
muestra de riboflavina marca Merck se utilizada como patrón. Otro método de análisis es
la espectroscopia de absorción ultravioleta visible (Silvertein, R. M; Bassler, G. C and
Morill, T. C 1.991).

Caracterización de la Biomasa: Se determina el porcentaje de proteínas (Boscan, L

1.982), cenizas (AOAC 1.980), calcio según norma COVENIN 1158-82, fósforo según
norma COVENIN 1178-829 y grasa cruda según método gravimétrico reportado por
Boscán, L 1.982.
 Ashbya gossypii

V = 10 l
sacarosa 1.5 % aceite de maíz 2 %
Fermentación 30ºC, 7 días
extracto de malta 0.5 %,
Saccharomyces cerevisiae 0.5 % fosfato di amónico 0.025 %
pH 6.5

Autoclave

Filtración

Espectrofotometría 445nm
Determinación de concentración

Extracción
Utilizando butanol

Purificación Columna de silica gel con

butanol/etanol/agua

Identificación
Por cromatografía
de riboflavina

Caracterización
de biomasa
BETA CAROTENO
El β-caroteno es un caroteno cíclico perteneciente al gran grupo de los terpenoides. Su
fórmula es C40H56 y es un hidrocarburo de origen biológico con una estructura β-ionona
como anillo terminal a cada lado de la cadena de polieno. La preparación de beta
caroteno tiene importancia en métodos terapéuticos para una variedad de cánceres. Se
utiliza como un agente colorante para alimentos, un antioxidante y una fuente de
provitamina importante.

ESTRUCTURA

SINTESIS Y PRODUCCION INDUSTRIAL

El verde unicelular flagelado DUNALIELLA salina es la más rica fuente natural del
carotenoide β-caroteno Cuando se expone a condiciones de estrés como la alta
intensidad de la luz o la falta de nutrientes, dos estereoisómeros de β-caroteno, todo el
trans y el 9-cis β-caroteno acumulado alcanza hasta el 14% de la peso en seco de la
célula. Ahora sabemos que no todas las especies DUNALIELLA producir grandes
cantidades de caroteno y los que pueden hacerlo sólo bajo condiciones adecuadas.

DUNALIELLA salina tiene una muy amplia tolerancia pH que oscila entre pH 1 a pH 11,
es uno de los eucariotas más tolerante con el medio ambiente y pueden hacer frente a
una amplia gama de salinidad agua de mar 3% de NaCl hasta su saturación 31%, y un
intervalo de temperatura de 0ºC a 38ºC. Cuando la luz del sol, los fertilizantes, y la
temperatura del agua son excelentes, la fotosíntesis es a menudo limitada por la
concentración de dióxido de carbono. Con respecto al cultivo a gran escala de D. salina
requiere un buen entendimiento de la fisiología y la ecología del alga:

· Medio de cultivo: Medio Johnsons Modificado

· pH óptimo: 9.

· Temperatura óptima: 20ºC-40ºC

· Fisiología de carotenogénesis

Los sistemas de cultivo cerrados son una opción para el cultivo de DUNALIELLA salina.
Evitan la contaminación y proveen un mayor control en las condiciones de crecimiento, lo
que conduce a mayores densidades celulares y mejor recuperación de β-caroteno. La
recuperación está compuesta por la cosecha, DUNALIELLA salina constituye un reto
para los productores comerciales puesto que es unicelular, no posee pared celular, es
muy pequeña y presenta una densidad celular muy baja en cultivo –lo que obliga a
procesar más volumen-. Además, la centrifugación y filtración podrían conducir a la
oxidación del β-caroteno por lo que se ha buscado implementar métodos variados para
evitarlo, como la filtración hiperbárica usando diatomita. La extracción depende tanto de la
cosecha así como de los requerimientos del mercado, pues aunque el uso de solventes
orgánicos es eficiente podría no contar con la aceptación de los consumidores. Al no tener
pared celular, la disrupción celular no requiere ser muy agresiva.

La purificación está compuesta por la concentración del extracto, donde se sugiere una
segunda extracción en solvente y después una re suspensión en aceite. También, se ha
probado que los aceites vegetales usados como matriz proveen una gran estabilidad para
el β-caroteno. La metodología más extendida para la separación de carotenoides es el
HPLC preparativo de fase reversa. El β-caroteno es el pigmento con mayor presencia en
los concentrados (Fig. 12).

En la etapa de pulimiento, los suplementos nutricionales pueden prepararse por

encapsulamiento de suspensiones oleosas o soluciones, o presentarse en forma de
tabletas.

Cultivo Estanques de crecimiento

Cosecha Hemocitómetro

Biomas
a

Secado en frío

Extracto de beta caroteno Aceite de jojoba

Concentración Centrífuga de flujo continuo

Purificación

Molino

Suspensión vegetal
BIBLIOGRAFIA
Wikipedia

Google Patents

Murthy C (2005) Production of β-carotene from cultured Dunaliella sp. and evaluation of
biological. Ph D Thesis, Plant cell biotechnology Department, University of Mysore,
Mysore, India.

Revista de la Facultad de Farmacia vol.42

Carpeta de monografías de la Biblioteca de Ing. Química

Lara, J., Sánchez C, J., Amaro, J. M. F. Producción de Riboflavina (Vitamina B2) por
Ashbya gossypii ATCC 10895.

Kapralet, F. 1962. The physiology of riboflavin production by Eremothecium ashbyii. J. Gen

Microbiology. 29: 403-419.

Prescott, S. D and Dunn, C. G. 1962. Microbiología industrial. 3a edición. Impreso en

España. Aguilar, S.A.