Universidad Nacional de Ingeniería

Facultad de Ingeniería Química y Textil

Departamento Académico de Ingeniería Química

Laboratorio de Bioquímica y Microbiología (PI 721 A)

Informe N°08

MEDIOS DE CULTIVO

Streptococcus termophilus y Cladosporium

Integrantes:

Huerta Maslucán Manuel Iván 20151234E

Inglés Machaca Edith 20160499H

Pezua Lujan, Nelson Joel 20160409I

Vilca Landeo Wendy Ruth 20151235A

Profesores:

- Ing. Janet Rojas Orozco (responsable del laboratorio)

- Dra. Jessica Ivana Nieto Juarez

Fecha de realización de la práctica: 26/08/20

Fecha de Presentación del informe: 02/09/20

2020-I

ÍNDICE
FUNDAMENTO TEÓRICO 3

Streptococcus Thermophilus 4

Cladosporium 5

DIAGRAMA DE FLUJO 6

MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS 7

MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS 7

SEGURIDAD EN EL LABORATORIO 8

PROCEDIMIENTO 8

RESULTADOS ESPERADOS 9

Aplicación 12

Streptococcus Thermophilus 12

Producción de Yogurt 12

Producción de Queso 12

Cladosporium 14

Combustible y lubricantes 14

Biodeterioro de cosméticos y productos farmacéuticos 15

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 15
 MEDIOS DE CULTIVO
1. FUNDAMENTO TEÓRICO

Un medio de cultivo es un sustrato o solución de nutrientes en los que crece y se multiplican los
microorganismos en el laboratorio, con el objeto de aislar diferentes especies bacterianas, con el fin de
identificarlas y realizar estudios complementarios.

Un medio de cultivo es un sustrato o solución de nutrientes en los que crece y se multiplican los
microorganismos en el laboratorio, con el objeto de aislar diferentes especies bacterianas, con el fin de
identificarlas y realizar estudios complementarios.

Se clasifican de acuerdo a:

● Origen: natural y sintéticos

● Medio físico: líquidos, semisólidos y sólidos
● Composición:
○ Generales: Permiten el crecimiento de diversos microorganismos
○ Enriquecidos: Medios con nutrientes que permiten el mayor crecimiento de otros
microorganismos con respecto al total
○ Selectivos: Medios en los cuales se prioriza el crecimiento de un determinado
microorganismo inhibiendo a los demás presentes
○ Diferencial: Medio en el cual se le agrega un indicador para diferenciar a los
microorganismos mediante su tinción

Agar de sangre

Es una combinación de un agar base (agar nutritivo) con el agregado de 5 % de sangre ovina. El agar
sangre aporta muchos factores de enriquecimiento. Se usa también para ver la capacidad hemolítica de
los microorganismos patógenos (que es un factor de Virulencia). Observando los halos hemolíticos
alrededor de las colonias se determina el tipo de hemólisis que posee:

● alfa: halos verdosos (oxidación de la hemoglobina de los glóbulos rojos a metahemoglobina

en el medio)
● beta: halos incoloros (hemólisis total)
● gamma: inexistencia de halos (sin hemólisis)

Placa de agar de sangre

APD

El agar de papa y dextrosa (APD) es un medio común de cultivo microbiológico que se prepara a
partir de infusión de patata y dextrosa. El agar de patata y dextrosa es el medio más utilizado para el
crecimiento de hongos y levaduras que atacan a las plantas vivas o materia vegetal muerta en
descomposición.
El agar de patata y dextrosa puede ser suplementado con antibióticos o ácidos para inhibir el
crecimiento bacteriano. Este medio es recomendado para realizar el recuento colonial. También puede
ser utilizado para promover el crecimiento de hongos y levaduras de importancia clínica. La base del
medio es altamente nutritiva y permite la esporulación y la producción de pigmentos en algunos
dermatofitos. Algunos procedimientos señalan bajar el pH del medio a 3.5 ± 0.1 con ácido tartárico al
10 %, para inhibir el crecimiento bacteriano. La infusión de patata promueve un crecimiento
abundante de los hongos y levaduras y el agar es adicionado como agente solidificante

Placa de Agar papa dextrosa (APD)

Streptococcus Thermophilus

Bacteria Gram-Positiva, clasificación que se les da de acuerdo a su tinción cuando están en presencia
del reactivo de Gram el cual los tiñe de color azul, de la especie de los Stereptococcus

Presenta bajo contenido en guanina y citosina y son bacterias que no forman esporas. Se considera
una especie alfa-hemolítica debido a que producen la formación de una zona verde alrededor de las
colonias en placas de agar de sangre, este color es debido a la pérdida de potasio y parte de los
eritrocitos del agar de sangre.

Anaerobia facultativa: Tiene la capacidad de poder desarrollarse tanto en presencia como en ausencia
de oxígeno por lo que pueden obtener energía en ausencia de oxígeno, pero el oxígeno no les es
tóxico.

Son usados en la producción de productos lácteos fermentados, como yogur, queso, mantequilla,
crema de leche, kéfir y koumiss gracias a su propiedad homofermentativa la cual convierte la lactosa
en solamente ácido láctico a diferencia de las heterofermentativas que producen acido láctico, etanol y
dióxido de carbono

Generalmente por ser resistentes a altas temperaturas sus cultivos son utilizados para elaborar quesos
que se caracterizan por sus altas temperaturas de cocción como por ejemplo Parmesano, Provolone y
Suizo.

Ilustración digital de la bacteria Streptococcus Thermophilus (Science Photo Library's)

 Cladosporium

Genero del reino Fungi. Las especies de Cladosporium son consideradas como saprófitas,
favoreciéndoles una distribución más amplia y una mayor tolerancia a condiciones
ambientales, normalmente se encuentra colonizando las plantas o en el suelo. Puede crecer en
paja y madera húmeda, alimentos, combustibles fósiles, cosméticos (cremas), pinturas,
plásticos, papel y tejidos (ropa, alfombras, cuero). Su temperatura óptima de crecimiento es
de 18ºC a 28ºC

Muchas especies de Cladosporium se encuentran comúnmente en material vegetal vivo y

muerto. Algunas especies son patógenos de plantas, otras parasitan otros hongos. Las esporas
de Cladosporium están dispersas por el viento y son a menudo extremadamente abundantes
en el aire exterior, estas esporas se encuentran en forma de bioaerosol en el aire,
principalmente a finales de verano y principios de otoño, sobre todo en zonas templadas,
siendo un contaminante habitual en los edificios o en los lugares de trabajo.

Las especies de Cladosporium suelen ser altamente osmotolerantes, creciendo fácilmente en

medios que contienen glucosa al 10% o NaCl al 12-17%. Raramente se cultivan en medios
que contienen 24% de NaCl o 50% de glucosa y nunca se aíslan de medio con NaCl al 32% o
mayor. La mayoría de las especies tienen cadenas de esporas muy frágiles, lo que hace
extremadamente difícil preparar una montura para la observación microscópica en la que las
cadenas de conidios se conservan intactas.

Placa de Cultivo y vista microscópica del hongo Cladosporium

2. DIAGRAMA DE FLUJO

Medios de Cultivo
Preparar Dejar secar
Se prepara los Enfriar los
las placas luego finalmente los medios de
medios de luego medios de
petri y los cultivo en la
cultivo cultivos y
frascos placa Petri de
respectivamen encender
de medio manera
te a usar el mechero
de cultivo invertida en la
Bunsen y
para su incubadora.
verter en
esterilizac
las placas
ión.
rotuladas.
3. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS

MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS

Placa petri Erlenmeyer

Mechero Bunsen Cinta de autoclave

Papel de aluminio Incubadora

Balanza de precisión Autoclave

Agar
SEGURIDAD EN EL LABORATORIO

-Para colocar el medio de cultivo en la autoclave, el frasco debe estar tapado con un algodón no
absorbente o tapón poco apretado; los tubos deben ponerse en gradillas o canastas; los frascos nunca
deben contener más de los 2/3 del volumen total de capacidad.

-Para evitar la formación de agua de condensación, no deben verterse demasiado calientes los medios
de cultivo a las placas Petri sino después de enfriarlas a T entre 50 y 45°C.

-La esterilización de los medios de cultivo se puede efectuar por calor, filtración o medios químicos.

PROCEDIMIENTO

Medios de cultivo animal

a. Caldo de infusión de carne:

▪ Carne fresca 500 g.

▪ Agua destilada 1L.

▪ Peptona 10 g.

▪ NaCl 5 g.

Coloque la carne en agua destilada toda la noche, luego hierva por media hora,

manteniendo el volumen durante el proceso (adicionando más agua si es necesario).

Enfríe, filtre y adicione la peptona y la sal, caliente para disolver, ajustar pH entre 7.4 y

7.6; esterilice por 20 minutos a 15 psi y 121 °C.

b. Caldo nutritivo y Agar nutritivo:

▪ Extracto de carne 3 g.

▪ Peptona 5 g.

Disolver los ingredientes en un litro de agua, calentar hasta ebullición, luego esterilizar a 121 °C
durante 20 minutos; en el caso de agar se le adiciona 15 g de agar-agar y se procede de la misma
forma.

Medio de cultivo vegetal

 a. PDA (Papa, dextrosa, agar): Este medio favorece el crecimiento de hongos, utilizado en el
aislamiento de hongos patógenos y no patógenos de plantas y animales.

Contiene:

▪ Caldo de papa 1L.

▪ Dextrosa 20 g.

▪ Agar 15 g.

Coloque 200 g de papa en 800 ml de agua y lleve hasta ebullición, filtre mediante una gasa delgada y
posteriormente agregue la dextrosa y el agar, enrase a 1 litro.

-Luego de preparar nuestro medio de cultivo dejar esterilizar y dejar enfriar hasta 50°C

-Se preparará las placas Petri y los frascos que contienen medio de cultivo para su esterilización en la
autoclave a 121°C durante 15 minutos,con el papel indicador.

-Encender el mechero bunsen, y comenzar a verter los medios de cultivo en las placas petri
previamente rotuladas.

-Luego dejar secar los medio de cultivo en la placa petri,y colocarlos de manera invertida en la
incubadora.

4. RESULTADOS ESPERADOS

Producen colonias muy pequeñas, translúcidas y sin pigmento, presenta a-hemólisis

caracteristicas de cultivo : temp:45°C , no tolera 6.5% de NaCl ni pH básicos de 6-9

GRUPO 4: Streptococcus termophilus y Cladosporium

El Streptococus termophilus es una bacteria Gram positiva anaerobia , se presenta en forma

de células esféricas u ovoides de 0.7-0.9um en parejas o largas cadenas..

● Medio de cultivo : Agar sangre,el cual permite ver la hemólisis de la bacteria .

● Composición del medio de cultivo y Preparación del medio de cultivo

triptona 5g

peptona de soja 5g

extracto de carne de vacuno 5g

extracto de levadura 2.5 g

glicerofosfato disodico 19 g

ácido ascórbico 0.5 g

 sulfato magnésico 0.25 g

agar-agar 11 g

El pH final debe ser 6.9 .Se disuelve 48 gramos en 900ml de agua bidestilada ;agitar
calentando hasta ebullición , para la completa disolución . Ajustar el volumen final a 1L y
volver a agitar .Autoclavar a 121 °C durante 15 min .Enfriar a 40-45°C .

Streptococcus thermophilus

El Cladosporium se muestra como una esporulacion con cadenas largas de conidios

elípticos ,nacidos de conidióforos ramificados y altos.

● Medio de cultivo : Para este tipo de hongo se usa como el APD (agar papa dextrosa),
el cual estimula la esporulación de hongos de esta especie .
● Composición del medio de cultivo y Preparación del medio:

papa natural rallada 20 g

zanahoria rallada 20 g

agar 18 g

agua destilada 1000ml

Lavar , pelar y rallar ; hervirlos lentamente en 1L de agua por espacio de una hora

Filtrar y añadir el agar

Esterilizar a 121°C por 15 min

Dispensar en placa Petri o tubo

aspecto :medio sólido , transparente o translúcido

Se siembra en la caja petri que contiene el medio de cultivo previamente preparado PDA a
un pH 5.6 y temperatura de 25°C(estas pueden oscilar entre 15-30°C) .

A los 8 dias ya se observa las colonias de diametros de 3-5um de color cafe palido y
superficie lisa , aterciopelada.Poseen ramoconidios sin o con septos de pared lisa

Técnica de siembra directa de suelo

Este método se lleva a cabo introduciendo fragmentos del suelo fresco en la superficie de
placas con diferentes medios de cultivo, para posteriormente observar el crecimiento micelial
de los hongos presentes en las muestras.

Procedimiento: Se tomarán partículas de suelo fresco y se colocan en superficies sobre placas

con agar PDA con adición de Cloranfenicol (400 ppm) 0.05mg/mL por duplicado, cinco
partículas en cada placa. Seguidamente se llevaron las placas a incubar de 3 a 6 días a 25°C
con el fin de observar el crecimiento de colonias fúngicas.

Características de Cladosporium

Fuente: Universidad de Adelaide, 2006

Aplicación

Streptococcus Thermophilus

Producción de Yogurt

Los yogures son preparaciones tradicionales de leche agria que se han convertido en los
principales productos lácteos. Existen varias variantes, pero las formas comerciales se suelen
preparar a partir de leche entera que puede complementarse con proteínas como la leche
desnatada en polvo. Esto ayuda a formar la estructura de gel de proteína del producto. Estas
materias primas se calientan y luego se enfrían antes de la inoculación; el calentamiento es
necesario, de lo contrario, la coagulación de proteínas posterior no produce un gel suave. La
inoculación implica un cultivo iniciador mixto que contiene cepas termófilas de
Streptococcus thermophilus y Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus en una proporción
de 1 a 1. El primero produce principalmente ácido, mientras que el segundo genera más
compuestos organolépticos, en particular acetaldehído.
Sus enzimas proteolíticas y polímeros extracelulares también ayudan a la formación de gel de
proteína. El yogur se puede pasteurizar para mejorar la vida útil o permanecer "vivo", este
último supuestamente tiene cualidades probióticas (sobreviven en el estómago).

Producción de Queso

La producción de proteínas lácteas coaguladas o cuajada se logra mediante las actividades de

las bacterias del ácido láctico, como Lactococcus lactis, L. Cremoris y Streptococcus
thermophilus. Estas bacterias tienen la capacidad de reducir el pH mediante la fermentación
de lactosa a ácido láctico, lo que facilita la coagulación de las proteínas.

También influyen en el sabor del producto final al producir compuestos específicos de sabor
y aroma, y realizan proteólisis y lipólisis esenciales en la maduración posterior.

A menudo se usa un cultivo iniciador mixto, que consta de varias cepas de estos
estreptococos y lactobacilos mesófilos o termófilos, que se pueden preparar en leche tratada
térmicamente o en medios a base de suero. El uso de cultivos iniciadores definidos reduce las
variaciones entre lotes tanto en el tiempo de producción como en los niveles de ácido
generado. Se añade un inóculo de 0,5 a 2,0% (v/v) y la fermentación se realiza a unos 32 ° C
durante 10 a 75 min. Para algunos quesos, esto puede controlarse aún más mediante un
tratamiento térmico a 55 ° C, que inhibe los mesófilos y promueve la acción de los
termófilos. Por lo tanto, la selección inicial de cepas microbianas adecuadas, la cantidad de
cultivo iniciador utilizado, la duración de la maduración previa y la temperatura de
incubación son importantes para crear muchas diferencias sutiles en el color, sabor y aroma
finales.

Tabla. Ejemplos de quesos con diferente textura y los microorganismos implicados en

su elaboración

Textura del Queso Microorganismos involucrados en el proceso

Suave (sin madurar)

Cottage Lactococcus lactis

Leuconostoc citrovorum
Cream Lactococcus cremoris
Mozzarella Lactobacillus bulgaricus
Streptococcus thermophilus

Suave (madurado, 1–5 meses)

Brie and Camembert Lactococcus lactis

Lactococcus cremoris
Penicillium camemberti
Penicillium candidium
Brevibacterium linens

Semi-suave (madurado, 1–12 meses)

 Gorgonzola and Lactococcus lactis
Roquefort Lactococcus cremoris
Penicillium glaucum
Penicillium roqueforti

Duro (madurado, 3–12 meses)

Cheddar Lactococcus lactis

Lactobacillus casei
Lactococcus cremoris
Streptococcus durans
Edam and Gouda Lactococcus lactis
Lactococcus cremoris
Gruyère Lactococcus lactis
Lactobacillus helveticus
Streptococcus thermophilus
Propionibacterium freudenreichii ssp. shermanii

Muy duro (madurado, 12–18 meses)

Parmesano Lactococcus lactis

Lactobacillus bulgaricus
Lactococcus cremoris
Streptococcus thermophilus

Cladosporium
Combustible y lubricantes

Los combustibles y lubricantes se producen principalmente a partir de productos

petroquímicos y solo son atacados si hay agua. En consecuencia, los lubricantes como los
aceites de corte son más propensos al biodeterioro. Consisten en una emulsión de aceite
finamente disperso en agua, en presencia de un agente emulsionante. Cuando otros
combustibles y lubricantes se contaminan con agua, se forma una capa acuosa debajo del
hidrocarburo hidrofóbico. Los hidrocarburos con longitudes de cadena más cortas, como la
gasolina, son normalmente menos susceptibles al biodeterioro que los hidrocarburos más
largos, como el aceite diesel y kerosene, al igual que los productos que contienen fenoles.

Puede producirse un biodeterioro durante el almacenamiento o el uso. El crecimiento

microbiano puede resultar en la formación de capas miceliales y lodos que pueden causar el
bloqueo de las líneas y filtros de combustible, la producción de metabolitos corrosivos y una
lubricación reducida o propiedades degradadas del combustible. Un número sorprendente de
microorganismos puede utilizar estos materiales. Se han aislado especies de Aspergillus y
varios otros géneros a partir del queroseno, pero el organismo principal responsable del
biodeterioro es el hongo Hormoconis (antes Cladosporium) resinae. Este es un
microorganismo del suelo que puede degradar una amplia gama de compuestos, desde
alcanos lineales y ramificados hasta anillos aromáticos. Puede ser un problema particular en
 el combustible de aviación y tanto en combustibles como en lubricantes para motores diesel
marinos. El biodeterioro de estos materiales puede controlarse incorporando biocidas como
compuestos de organoboro e isotiazolonas.

Biodeterioro de cosméticos y productos farmacéuticos

Las pérdidas por deterioro biológico en las industrias farmacéutica y cosmética son difíciles
de determinar.

Obviamente, los fabricantes son muy sensibles a este tema, ya que la pérdida de confianza del
público puede ser desastrosa y muy difícil de restablecer. Sin embargo, el valor mundial total
de los productos de estas industrias es del orden de cientos de miles de millones de dólares
por año. Si se estiman simplemente las pérdidas anuales en sólo el 1%, las implicaciones
económicas son muy significativas.

Estos productos pueden volverse invendibles si ocurre uno de los cuatro eventos.

1. La presencia de niveles bajos de microorganismos patógenos agudos o niveles más

altos de patógenos oportunistas.
2. Contaminación con metabolitos microbianos tóxicos que pueden persistir incluso
cuando los microorganismos productores están muertos o eliminados.
3. La ocurrencia de cambios físicos y / o químicos detectables.
4. Pérdida de función de los principios activos.

El ingrediente activo a menudo está presente en concentraciones relativamente bajas,

particularmente en productos farmacéuticos, pero si es atacado, el producto se vuelve inútil.
Estos ingredientes activos pueden ser agentes terapéuticos o antimicrobianos, y en cosméticos
y artículos de tocador son en su mayoría detergentes, colorantes, etc.

Los ejemplos de ataque a los ingredientes activos incluyen la descomposición de antibióticos

en cápsulas, tabletas y en solución. Las penicilinas y cefalosporinas son obviamente
propensas al ataque de organismos que producen b-lactamasas, mientras que el cloranfenicol
se inactiva por la acción de la cloranfenicol acetiltransferasa que es secretada por ciertos
microorganismos. Además, la aspirina y la heroína son degradadas por la bacteria
Acinetobacter lwoffii. La atropina, un alcaloide utilizado en preparaciones para los ojos, es
degradada por las especies de Pseudomonas y Corynebacterium, y la hidrocortisona es
atacada por el hongo Cladosporium herbarum.

5. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Madigan, M. T., Martinko, J. M., & Parker, J. (2004). Biología de los Microorganismos
(Décima ed.). Talca: PRENTICE HALL.

Varios. (2019). EcuRed. Recuperado el 30 de Agosto de 2020, de

https://www.ecured.cu/Cladosporium

Waites, M. J., Morgan, N. L., Rockey, J. S., & Higton, G. (2001). Industrial Microbiology:
An Introduction. Gran Bretaña: Blackwell Science.