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RESUMEN
El objetivo del presente estudio fue aislar, caracterizar e identificar las bacterias productoras de bacteriocina que producen ácido
láctico (LAB) de la pulpa de mango. La actividad antimicrobiana de la cepa aislada se probó con patógenos de descomposición. El
compuesto antimicrobiano extraído también se probó para el ensayo de bactericina y las propiedades antimicrobianas contra las
bacterias de descomposición de la pulpa. El presente trabajo también se centró en el efecto de algunas condiciones fisiológicas
como detergentes, calor y pH y enzimas. El compuesto antimicrobiano también se probó para mantener la disminución de UFC
durante el almacenamiento de la pulpa junto con el conservante químico Metabisulfato de potasio (PMS). Se aislaron un total de
seis aislamientos bacterianos, de las seis cepas aisladas se seleccionó una para un trabajo posterior. que muestra los caracteres
probióticos como el ensayo de bacteriocina y las propiedades antimicrobianas. El compuesto extraído muestra la disminución de
CFU utilizada como conservante durante el almacenamiento de pulpa en comparación con un sin conservante y también con el
conservante químico. La proteinasa K, pepsina, muestra el efecto negativo sobre la actividad del compuesto extraído de las
bacterias del ácido láctico. Aunque, las enzimas como la tripsina y α-
la quimotripsina no tiene ningún efecto sobre la bacteriocina, y los tensioactivos no tienen efecto sobre la bactreiocina. El efecto
del pH sobre el sobrenadante del cultivo se estudió en un rango de 2 a 12. No se modifican en un amplio rango de pH de 3 a 9,
el aumento del pH después de 9 disminuye la actividad del compuesto.
Los resultados obtenidos de este estudio de las bacterias aisladas de ácido láctico muestran la potente bacteriocina y las propiedades
antimicrobianas que ejerce en el uso de este compuesto como conservante en la industria de pulpa de mango o fruta.
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INTRODUCCIÓN
Mango ( Mangifera indica L.), como un cultivo de exportación tropical emergente es producir d en aproximadamente 90
países del mundo con una producción de más de 25 . 1 millón de tonos Asia es el principal productor
con el 76.9% de la producción mundial total, seguido por América con 13.38%, África con 9%
y menos del 1% cada uno para Europa y Oceanía. Pakis tan es el quinto mayor productor de mango con
Producción de 938000 toneladas anuales de contribución wi Una participación del 7,6% en el mercado mundial [1].
El mango es una fruta poco condimentada y es altamente pe rishable no resiste incluso en frío
almacenamiento. Por lo tanto, la mayor parte del procesamiento de fruta en industria en Pakistán conserva pulpa de mango para el
fabricación de productos de mango durante todo el año. Mang o la pulpa generalmente no se consume directamente
más bien utilizado como relleno para pasteles, mermeladas, salsas, zumos y bebidas de frutas [2].
El método convencional para evitar el deterioro de la pulpa de mango es la aplicación de un tratamiento térmico
a los zumos de frutas durante la fabricación y por pH natural bajo de los jugos [3,4]. Deterioro de
zumos de frutas y productos de zumos de frutas por thermophil la bacteria ic se ha convertido en una preocupación importante como
Casos de deterioro de vegetales ácidos, jugos de frutas a nd productos de jugo de frutas Alicyclobacillus spp. tiene
ha sido reportado [5]. La mayoría de estas bacterias de descomposición tiene los ácidos grasos como los principales componentes de
la membrana celular [6], y pueden crecer en 40-60 0 0 C [7]. Aparte de este deterioro
grupo bacteriano algunas de las otras poblaciones microbianas los iones también estuvieron presentes en la fruta del mango
Siendo el siguiente método de preservación más barato, che La preservación mical de la pulpa de mango es la
más común y ampliamente utilizado en Pakistán. La quimica Todos los conservantes se utilizan para prevenir
deterioro de los alimentos debido al ataque microbiano y por lo tanto son efectivamente utilizado en combinaciones para mejor
preservación. Ningún conservante es completamente eficaz contra todos los microorganismos [8].
Benzoato de sodio (SB) y metabisulfito de potasio ( PMS) se usan comúnmente como conservantes
para el almacenamiento a largo plazo de pulpa de fruta debido a su r mejor actividad antimicrobiana [9,10,11]. los
efecto de SB sobre el crecimiento y la supervivencia de algunos años cepas de st, intoxicación alimentaria y deterioro
organismos ha sido ampliamente informado [12, 13]. Entre El conservante químico probado en un solo
dosis de 1000 ppm de PMS y 500 ppm de SB no mostraron signos n de micro flora hasta 90 días. Además
que tiene un efecto inhibitorio sobre la micro flora en el s pulpa rasgada, la adición de estos químicos puede
influir negativamente en su fisicoquímico y sensor y perfil. Se ha informado anteriormente que
los conservantes influyen en el ch fisicoquímico características de la pulpa de mango como almacenamiento
Lactobacilos son organismos importantes reconocidos por sus fermen habilidad tativa así como su
beneficios nutricionales y para la salud [14]. Ellos producen diversos compuestos como los ácidos orgánicos,
diacetil, peróxido de hidrógeno y bacteriocina o bac proteínas tericidas durante las fermentaciones lácticas
[15].
Efectos antagonistas producidos por la bacteria del ácido láctico. ia hacia otros organismos pueden jugar un
papel importante en el mantenimiento de un ba microbiano adecuado lanza en el tracto intestinal y preservación
ciertos alimentos. Algunas bacterias producen bacteriocinas w que son proteínas o complejos relacionados con proteínas
que inhiben otras bacterias que generalmente son closel y relacionado. Una serie de lactobacilos, incluidos
cepas de Lactobacilus acidophilus Producen bacteriocinas. La mayoría de las bacteriocinas son de calor st capaz y
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sensible a ciertas enzimas proteolíticas. Ac láctico Las bacterias id son ampliamente utilizadas como cultivos iniciadores
Lactobacillus lactis y Lactobacillus plantarum fueron potentes productores de bacteriocinas. Bacteriocina producida por
estas especies de Lactobacillus tuvo un amplio espectro de inhibición contra
microorganismos de descomposición de alimentos y varios st relacionados lluvias de bacterias del ácido láctico. La bacteriocina
inhibió el crecimiento de Escherichia coli pero mostró menos actividad contra Candida albicans.
La actividad antibacteriana parecía pronunciarse d entre la fase logarítmica tardía y la temprana
fase estacionaria.
MATERIALES Y MÉTODOS
Coleccion de muestra
La pulpa de fruta de mango se recogió de la pulpa de mango indu Intente en Chittoor, Andhra Pradesh, India.
00 C hasta los experimentos microbiológicos en el
Toda la muestra recolectada se almacenó a 4
laboratorio.
La pulpa de mango homogeneizada se diluyó en serie e ino formulado en un medio de agar MRS selectivo
00 C en un tarro de vela para
(HI MEDIA) para Lactobacillus y las placas estaban al bajado para incubar a 37
48 h. Los lactobacilos se identificaron sobre la base de crecimiento en agar MRS selectivo (pH 5.2), célula
morfología, tinción de Gram y actividad catalasa. F Una mayor identificación de las especies de estos
los lactobacilos se realizaron de acuerdo con carbohidratos e patrones de fermentación y crecimiento en MRS
caldo (HI MEDIA), como se describe en el Manual de Bergey o f Bacteriología sistemática [16]. los
00 C en MRS
lactobacilos aislados fueron subcultivados y el pur cultivos ified se mantuvieron a -80
caldo con 10% de glicerol.
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Ensayo de bacteriocina
18) La prueba fue
La actividad antimicrobiana de la bacteriocina fue detec Ted por la prueba de punto de agar
realizado de la siguiente manera: 200 µl de cada bacte aislado cultura rial en el crecimiento exponencial temprano
la fase (OD 600 de 0.2-0.4) en caldo MRS se mezcló con th 4 ml de agar suave MRS (0.6% agar,
0 0 C) y se vierte en una placa de agar MRS. Luego, 3 µl de e
precalentado a 48 sobrenadante de la cultura ach
se dejó caer sobre el agar blando solidificado. El plat se incubaron durante 48h de forma no aeróbica en un
tarro de vela. La inhibición de la bacteriocina se indicó mediante una zona clara en la capa de agar suave.
La sensibilidad del principio activo a la proteolia. tic y otras enzimas se probaron en células libres
sobrenadante (pH 6,0) de cultivos de 24 h incubados a 37 0 0 C. Las muestras de 100 µl se trataron durante 2 h.
- 1 y 1.0 mg / ml - 1 concentración final de las siguientes enzimas: prot
con 0.1 mg / ml einase K,
pepsina, tripsina, α- quimotripsina Los surfactantes probados fueron Tritone X-100, dodecilo de sodio
sulfato (SDS), Tween 80, EDTA y urea en la c final oncentración 0.1, 1, 1.5, 2, 3 y 5%.
Los controles consistieron en sobrenadante activo o detergentes utilizados. Todas las muestras y controles fueron
0 0 C durante 5 hy probado para actividad. La sensibilidad
incubado a 37 de la sustancia activa a
Se estimó un pH diferente ajustando el pH de s muestras de sobrenadante a pH 2, 4, 6, 8, 10 y
12 con NaOH o HCl y prueba contra el indicat o colar después de 30 min y 2 h de incubación.
La sensibilidad al calor se probó calentando la celda muestras de sobrenadante gratuitas a 30, 50, 70, 90, 100,
y 121 0 0 C y probar la actividad residual después de 30 minutos por El ensayo de dilución de agar.
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fuente 20; Fosfato de potasio 2 g; Acetato de sodio 5 gramo; Sulfato de magnesio 0,2 g; Manganeso
sulfato 0,05 g; con 1 litro de agua destilada.
Efecto de la fuente de carbono y nitrógeno.
El estudio de la producción de bacteriocina con varios ca fuentes de carbono en el medio de producción
suplementado con diferentes tipos de fuentes de carbono como lactosa, almidón, maltosa y sacarosa y
fuentes de nitrógeno como peptona, triptona, levadura extr Actuar. Los matraces medios esterilizados fueron
inoculado con inóculo al 0.1% e incubado en rota Agitador ry a 120 rpm durante 2 días y después
esas células microbianas fueron eliminadas por centrifugación n a 3000 rpm durante 15 min. Antimicrobiano
la actividad en el sobrenadante se estimó por disco m método mostrado en el procedimiento anterior.
RESULTADOS
55 Pruebas bioquímicas
Actividad antimicrobiana
Los sobrenadantes de cultivo obtenidos de str aislado ain se probó la actividad antimicrobiana
contra los organismos de prueba de laboratorio y algunas frutas t estropear las bacterias como E. coli y
Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa y Candida albicans. La cepa aislada
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UNA) SI)
Control
UFC / gr
LAB PMS
0100200300400500600700800
00 30 60 60 90
Tiempo en días
Fig. 2 Efecto del almacenamiento en el crecimiento microbiano de pulpa de mango conservada con bacteriocina y PMS. El val ues
son medios de al menos dos experimentos (DE ±)
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de la naturaleza proteica del agente activo. A Al mismo tiempo, la tripsina y la quimotripsina tenían
sin efecto.
En las investigaciones actuales, las enzimas probadas li ke amilasa y lipasa, no causaron
inactivación Esto se refería a que los carbohidratos y los restos lipídicos no fueron necesarios para el
actividad inhibitoria (tabla 2). La exposición al surf los actantes mostraron que no afectaron la actividad
de la bacteriocina en la concentración utilizada. La A Sustancia antimicrobiana en activo neutralizado
00 C para
cultura sobrenadante parecía ser relativamente calor lábil ya que fue inactivado parcialmente a 80
0 0 C durante 10 min (Tabla 2). El efecto del pH en el cul
10 min y completamente a 100 ture
el sobrenadante se estudió en un rango de 2 a 12. Ellos no se cambian bajo un amplio rango de pH de
PH aumentado de 3 a 9 después de 9 disminuye la actividad del compuesto.
Tabla: 2 Efecto de enzimas, pH, detergentes y calor. Tratamiento de la actividad inhibitoria del sobrenadante libre de células de la cepa LB:
60 60
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Zona de inhibición en mm
12
E. coli
10 Staphylococcus
Pseudomonas
68
24
Fuentes de carbono
Producción
10
8
Zona de inhibición en mm
E. coli
6
Staphylococcus
4
Pseudomonas
Fuentes de nitrógeno
DISCUSIÓN
Porque la cepa bacteriana viable aislada del mango puede inhibir el deterioro de la pulpa bacteriana y entérica
microorganismos patógenos produciendo ácido láctico y otras sustancias antimicrobianas.
En este estudio, de seis cepas aisladas, lactobacilo i cultivo sobrenadante se examinó para ácido y
producción de bacteriocina y tuvo efectos inhibitorios o n bacterias sensibles que incluyen E. coli
Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa.
La pulpa de mango es fuente de microorganismos asociados. con bebidas a base de pulpa de mango. A pesar de
La importancia general de las bacterias del ácido láctico en bebidas de mango, solo hay ocasionales
informes de su aislamiento de pulpa de fruta. Láctico las bacterias ácidas son particularmente importantes porque
de su papel en la prevención del deterioro de bacterias m pulpa de fruta pero, hasta donde sabemos, nunca ha
sido aislado de pulpa de mango. Su origen ecológico n en la producción de vino sigue siendo un misterio pero,
como la pulpa de fruta principal contiene levadura y así Me patógenos especialmente las bacterias de descomposición. Nosotros
han tenido poco éxito en aislar ba de ácido láctico cteria de pulpa de mango por placa de agar MRS
cultura. En cambio, encontramos un predominio de Lactic bacterias ácidas por este método, y esto
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correlacionado con su uso generalizado como biopreserva tive durante el almacenamiento de pulpa de fruta, en pulpa
industria.
En consecuencia, en este estudio, nos centramos en enriquecer nt cultura como un enfoque para determinar el
actividad antimicrobiana del compuesto bacteriocina de bacterias del ácido láctico. El extraído
compuesto muestra actividad antimicrobiana contra th e estropear las bacterias como E. coli, y Bacilo
y Pseudomonas Y también se prueba la capacidad de producir bacteriocina óptima en maltosa
y extractos de levadura como fuentes de carbono y nitrógeno respectivamente. El presente estudio también se centró
en la supresión de la bacteria del deterioro contando la UFC antes y después de la adición de
bacteriocina como conservante y en comparación con un ch PMS conservante emical y los resultados
indicó que la disminución de UFC en bacteriocina con muestra de muestra muy similar a la muestra
que contiene PMS, por lo tanto, es importante tener en cuenta que la adición de biopreservante es muy útil
en preservación de pulpa de fruta en comparación con ch emicales como conservante
CONCLUSIÓN
Estos resultados demostraron que el efecto inhibidor cts de cepa aislada sobre crecimiento microbiano en
la pulpa de mango El uso de conservantes químicos. había afectado significativamente el físico
Perfil químico de las muestras de pulpa durante el almacenamiento. ge. Sin embargo, una variedad de otras bacterias
los miembros pueden estar presentes en este hábitat y suprimir s el crecimiento de otras bacterias de descomposición.
Bacteriocina, un compuesto biológico extraído de l la bacteria del ácido actico muestra un pronunciado
aumento de acidez y disminución correspondiente en p H durante el almacenamiento durante 3-6 meses para que el
Los resultados obtenidos de este estudio, el aislado bacterias del ácido láctico muestran la potente bacteriocina
y propiedades antimicrobianas que ejerce en los EE. UU. ge de este compuesto como conservante en mango
o industria de pulpa de frutas.
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Reconocimiento
Los autores están extendiendo su agradecimiento a UGC-RGNF por su apoyo financiero. Los autores
También expresamos profunda gratitud a los últimos tiempos. GP Madda iah, profesor asociado, departamento de medio ambiente
Ciencia, Universidad de SV, Tirupati.
Referencias
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