2.

Replicación
La Replicación de DNA es un proceso semiconservativo, porque se conserva una hebra antigua y
la otra es completamente nueva.

¿Cómo se replica el DNA?

Recordar enlace fosfodiester, este se forma de la siguiente forma:

Se tiene la hebra antigua (también se le llama DNA templado que va a servir como molde para los
nucleótidos de la hebra nueva que van llegando) y llega un nucleótido nuevo, de la hebra nueva
que va creciendo, entonces si tengo una Adenina por ejemplo, lo que llega es una Timina la cual
llega como un nucleótido Trifosfato, entonces el 3´OH va a hacer un ataque nucleofílico que por
cargas se junta con el grupo fosfato y dos de los fosfatos se va a eliminar, entonces si se le
pregunta ¿cuál es la dirección del enlace fosfodiester? Será de 3´a 5´ (porque la elongación ocurre
de 5´a 3´, ocurre al revés de como ocurre en este enlace). *Entonces la replicación va a ir
creciendo de 5´a 3´ y la dirección del enlace fosfodiester es de 3´a 5´.

¿Cuál es la enzima que cataliza esta reacción?

*La enzima que cataliza la reacción de replicación es DNA polimerasa, pero para que lo haga debe
primero reconocer lo que va a catalizar y para esto existe un primer/cebador/iniciador/partidor
que es una pequeña molécula de RNA complementaria a la hebra antigua (que forma lo que el
profe llama dúplex) y que deja expuesto un 3´OH para que la DNA polimerasa reconozca y
empiece a elongar (agregar nucleótidos).

¿Qué es lo que necesita DNA polimerasa para empezar a polimerizar?, necesita reconocer un 3´OH
libre y como no hay se tiene que formar un dúplex que es una hebra pequeña “acoplada” a la
hebra antigua y que forma “una especie de doble hebra” la que permite que se reconozca y se
empiece a agregar nucleótidos de 3´ en adelante.

También existe otra forma de que la DNA polimerasa reconozca y es que es que se genere un
“Nick”, que se produce cuando hay una doble hebra, se corta, dejando un extremo 3´OH libre, y se
comienza a elongar.

Y también hay otra forma que es parecida a la primera y es que se forma como un mini primer, un
mini dúplex y al quedar el 3´OH libre la DNA polimerasa lo reconoce y comienza a elongar.

Entonces lo importante es que se genere un sitio con el extremo 3’OH libre para que DNA
polimerasa reconozca y comience a elongar.

Qué otra cosa es importante, los desoxinucleótidos, los cuales van siendo agregados a la cadena
por la DNA polimerasa. La DNA polimerasa tiene la capacidad de reconocer los nucleótidos, es
decir por ej. Reconoce que hay una adenina y sabe q tiene q llevar una timina, q es
complementaria.

Dato curioso. Los DNA de las bacterias (procariontes) y de la mitocondrias (eucariontes) son
circulares es por esto q se habla de la teoría simbionte, q dice q provenimos de las bacterias.
Replicación en procariontes

Se tiene DNA circular, también una doble hélice, solo que no tiene los extremos libres.

Las bacterias tienen DNA circulares y tienen sitios que se llaman orígenes
de replicación, que son sitios donde se va a formar el dúplex, pero para
que se forme el dúplex y llegue otra molécula hay que abrir ese DNA
para que la doble hebra quede separada, y para esto se puede aplicar
calor (para romper esos puentes de hidrogeno que lo unen), pero como
la célula no está subiendo y bajando su temperatura constantemente
para esto existen las enzimas y entre estas están las Topoisomerasas.

* Entonces se forma una “Burbuja de Replicación” que es el lugar que

generan los procariontes para iniciar la replicación la cual puede ir en
ambas direcciones, bidireccional (recordar DNA circular), o
unidireccional, y los puntos donde se están replicando estas hebras se
llaman Horquillas de Replicación.

Si es bidireccional existirán dos horquilla de replicación y si es unidireccional existirá una.

Dato. DNA circular también se llama plasmidio o

plásmido.

Los plasmidios tienen un origen de replicación y la

replicación es bidireccional, tengo dos horquillas,
entonces ¿dónde terminaría la replicación? Justo
abajo, en el punto contrario y van a quedar dos
plasmidios unidos, formando como un ocho y se van
a separar. Tiene un solo origen por tanto un solo
lugar de termino.

En cambio en el DNA de las células eucariontes,

tiene múltiples orígenes, aunque que el DNA sea
lineal y no circular como en las procariotas. La
replicación también va a ser bidireccional y como
tiene muchos lugares de replicación también tendrá
muchas horquillas. A cada uno de estos múltiples
orígenes se les llama replicón.

Si las células eucariontes tuvieran solo un origen de replicación la replicación sería muy lenta ya
que el DNA es muy extenso a comparación de las procariotas.

Plasmidio  1 origen de replicación  se forma la burbuja  se forman las horquillas

(bidireccional)  cuando llega al final se forma estructura como un ocho y se separa en 2 DNA
nuevos. * recordar que es semiconservativa.
En cambio en el DNA de las eucariontes, como es lineal la separación es mucho más fácil ya que al
ser lineal las hebras nuevas salen sin problema, en cambio en las procariotas al ser circular se tiene
q romper este “ocho” que se forma para poder separarse.

Cuando llega al punto de término, se forma este ocho, se produce una estructura de DNA
enrollado el cual no puede separarse y para esto actúan unas enzimas que lo cortan y dejándolos
como DNA suelto a estos DNA hijos y llegan otras enzimas que los pegan.

Hay virus que actúan replicando DNA circular pero de otra forma, y aquí se aplica la “teoría del
circulo rodante”, que se parece a lo del “Nick”, en q se generaba como un dúplex falso, en donde
se cortaba la hebra para empezar, se dejaba expuesto el 3’OH y se empezaba a agregar
nucleótidos nuevos. Tiene que haber un dúplex y un 3’OH libre. Acá la estructura se separa y se
forma DNA hijo que queda lineal y después se vuelve a juntar.

La replicación de DNA circular mitocondria también es diferente, “se replica como si le saliera un
huevito a la hebra, como una burbuja q no es realmente una burbuja y es solo UNIDRECCIONAL,
primero se hace la síntesis de una hebra, luego la otra hebra queda libre y se sintetiza, se parece
mucho a la teoría del cirulo rodante antes mencionada, donde se hace primero uno y después la
otra, con la diferencia que en la del circulo rodante una va a quedar lineal y después se junta, a
diferencia de la mitocondria en que siempre va a ser circular”.

Importante es saber que tanto en procariontes como eucariontes se generan burbujas de

replicación y se generan horquillas, la replicación puede ir hacia un lado o hacia a otro, pero
siempre con la dirección de 5’  3’ independientes para el lado en el que vaya.

¿Qué necesita la DNA polimerasa para reconocer este sistema?

Necesita que el DNA esté metilado, en donde una enzima le agrega un –CH3 a algún nucleótido, lo
cual no es que sea parte de los nucleótidos si no que es una modificación posterior, por lo que las
hebras hijas no estarán metiladas, pero serán metiladas después por la enzima DNA metilasa o
Transmetilasa, lo cual las dejara con 2 metilos uno en la hebra nueva y otro en la hebra antigua (q
ya lo tenía), entonces al estar metiladas ambas hebras, recién puede ser reconocido por la
“maquinaria que va a amplificar”.

Entonces en un Origen de Replicación para que esté activo las dos hebras tienen que estar
metiladas, luego se va a replicar, van a formarse las hebras nuevas, las cuales serán inactivas hasta
ser metiladas, quedando nuevamente un origen de replicación activo.

Entonces si quisiera usar una droga para inhibir la replicación, una buena forma sería inhibir a las
transmetilasas.

Vuelve a recordar que la replicación del DNA tiene un solo sentido de 5’ a 3’ y en el enlace
fosfodiester era al revés de 3’ a 5’.
Ahora sí, Cómo ocurre la replicación

Entonces, existen dos hebras que se abren por la

topoisomerasa que desenrolla…. Formando la
Horquilla de replicación, una hebra va de 5’ a 3’ y
la otra de 3’ a 5’, porque son antiparalelas.

Si la hebra antigua tiene dirección de 3’ a 5’ la

hebra nueva tiene que ir creciendo de 5’ a 3’, o sea
crece en el sentido normal, no hay dificultad. A
esta se le une un primer, sintetizado por la enzima
RNA primasa (formando el dúplex) lo que permite que la DNA polimerasa III reconozca la hebra sin
problema y comience a sintetizar esta hebra nueva que se denomina hebra continua.

La otra hebra antigua va de 5’ a 3’ o sea para la síntesis de la hebra hija no se podrá ir en el sentido
normal, tendrá que ir de 3´a 5´ pero la dirección de la elongación no puede ir en este sentido, así
que igual lo hace de 5’ a 3’ pero tiene que ir sintetizando de a poco, esperar y después continuar,
lo que forma fragmentos discontinuos, los "Fragmentos de Okasaki” (que son primers también
sintetizados por RNA primasa), y es por esto que se denomina hebra discontinua o retardada. Pero
fijarse que siempre la síntesis sigue siendo de 5’ a 3’ nunca al revés.

Cada fragmento de Okazaki es un partidor (o primer) diferente, al igual como se necesita un

partidor para iniciar la replicación de la hebra continua. Como el partidor es de RNA y no DNA hay
q eliminarlo y transformarlo en DNA y para esto se necesita una enzima, la DNA polimerasa I
elimina este partidor y sintetiza DNA nuevo, quedan extremos libres que se juntan a través de la
DNA ligasa

**Enzimas que participan

 Helicasa: rompe puentes de hidrógeno.

 Topoisomerasa: moldea, desenrolla.
 Proteínas SSB: mantiene hebras
separadas. Estabilizador.
 RNA primasa: sintetiza primers
formando dúplex. (el primer de la
hebra continua y los fragmentos
de Okazaki)
 DNA polimerasa III: sintetiza
hebra continua.
 DNA polimerasa I: elimina
primers y los reemplaza por
DNA.
  DNA ligasa: une los fragmentos de DNA sintetizados.

En las células eucariontes el proceso de replicación es mucho más lento debido a su complejidad,
esto es porque además de estar enrollado como cromosoma, el DNA está asociado a histonas, y
para comenzar el proceso de síntesis de hebras nuevas pese a que existen múltiples sitios de
replicación (y por consiguiente múltiples burbujas de replicación), para desenrollar primero hay q
modificar estas histonas (metilarlas o acetilarlas) para q se pueda llevar a cabo; cosa que no debe
hacer una célula procarionte ya q no las posee.

(Yo cacho q lo de la metilación de las hebras de DNA de las células procariontes es análogo a lo q
ocurre con las histonas en las eucariontes)

**Ver diapo de diferencias entre replicación de procariontes y eucariontes

Que son los telómeros

Son las puntas de los cromosomas, cuando una de las hebras se va sintetizando con fragmentos de
Okasaki queda un telómero corto pero hay una enzima q va a rellenar ese telómero, la telomerasa,
pero a medida q se va envejeciendo, la telomerasa va perdiendo su actividad, por lo q va dejando
de rellenar lo suficiente y los cromosomas van quedando con un telómero más corto.

Existen células a las cuales nunca se les acorta el telómero de sus cromosomas y estas son las
células cancerígenas y las células germinales. Las q se ven afectadas son las somáticas .