Tinción de Gram

 •Desarrollada por el bacteriólogo ChristianGram en 1884

 •Permite la rápida evaluación de morfología y complejidad bacteriana
 •Tinción rápida y Económica
 •Puede variar según el protocolo usado (necesidad de estandarizar el
protocolo)

Reactivos necesarios

 Portaobjetos
 Agua destilada
 Pipetas Pasteur, haza, Mechero.
 Cristal Violeta
 Lugol
 Alcohol acetona
 Safranina (u otra tinción de contraste)

Procedimiento: Fijación

 Colocar una pequeña gota de Agua destilada en el portaobjetos con una

pipeta, por ejemplo
 Re-suspender muestra en el portaobjetos. Secar al mechero. La gota de
agua debe Se debe calentar por 5 ser pequeña min aprox, hasta que toda
el agua se seque.
 Se debe colocar Cristal Violeta cubriendo toda la muestra por 1min (variable
según lab.)
 Se lava con agua corriente
 Puede hacerse con gotario
 Luego debe agregarse el lugol. Este debe aplicarse como el cristal violeta y
también debe cubrir la muestra por 1 min. Luego se lava con agua
corriente.

 El cubrir la muestra con alcohol acetona para decolorarla es el paso más

crítico del procedimiento. Este debe cubrir la muestra por el tiempo que
puede ir de 15s a 30s según corresponda y la reacción debe ser detenida
con el lavado con agua corriente. El tiempo debe ser el mismo para todas
las muestras.
 Al ser tiempos por lo general muy cortos, se recomienda agregar el alcohol
mientras ya se tiene la llave del agua corriendo, listo para el lavado.
 El último paso consiste en agregar una tinción de contraste, para teñir las
bacterias que pierden el cristal violeta. Para esto se agrega safranina
cubriendo la muestra por 15s o por 1min, dependiendo. Luego se lava con
agua corriente y se deja secar.
Microscopia
Bacterias Gram positivas: Corresponden a las bacterias que mantienen la
coloración del cristal violeta después del alcohol acetona, lo que les da un color
violeta/morado.
Streptococcus pneumoniae Bacteria Gram positiva, desde cultivo bacteriano en
agar sangre.
 Bacterias Gram negativas: Corresponden a las bacterias que pierden la
coloración del cristal violeta después del alcohol acetona y se tiñen con el
colorante de contraste (safranina), lo que les da un color rosáceo/rojizo.
Escherichia coli Bacteria Gram Negativa, cultivo desde agar Macconkey
Recomendaciones finales
Es conveniente estandarizar los tiempos de tinción para cada laboratorio, ya que
la calidad y concentraciones de reactivos pueden variar bastante.
Lo más recomendable es realizar el gram de los cultivos de agares enriquecidos y
de colonias aisladas y en crecimiento.
Los gram directos de una muestra solo son útiles en ciertos casos. Las bacterias
anaerobias son más difíciles de teñir, esto puede mejorar si se agrega bicarbonato
mezclado a las tinciones.
La muestra no debe ser excesiva para poder determinar las otras características
de la bacteria, como forma y agrupación.