UNIVERSIDAD DE CUNDINAMARCA
FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS
PROGRAMA ACADÉMICO INGENIERÍA AMBIENTAL
INFORME DE LABORATORIO ANÁLISIS QUÍMICO IPA 2019
DETERMINACIÓN DE LA CONCCENTRACION DE UN ANALITO POR
ESPECCTROFOTOMRTRÍA.
RESUMEN.
En esta práctica se realizó la curva de calibración a
partir de datos tomados de las soluciones de azul de
metileno en distintas concentraciones a partir del
espectrofotómetro (instrumento que mide la
absorbancia de las soluciones). En el cual las 5
disoluciones patrón a concentraciones (1,75, 5,25,
8,75, 12,25, y 17,57 ppm respectivamente); obteniendo
absorbancias de 0,223; 0,488; 0,874; 1,249 y 1,637,
donde la absorbancia fue medida en una longitud de
onda de 664 nm en el espectrofotómetro. Teniendo ya
todos los datos se realizó la curva de calibración con
los datos de absorbancia y las concentraciones en ppm;
se realizaron los cálculos para los datos requeridos.
Mediante esta se determinó la concentración del
analito, la cual fue de 11,07 ppm o 3,461 ×10-5 M.
INTRODUCCIÓN
La espectrofotometría es una técnica que mide la
interacción de moléculas con la radiación
electromagnética . La energía de la luz es usada para
promover electrones de un estado de excitación a otro.
Un espectro es obtenido cuando la absorción de luz es
medida en función de una frecuencia o longitud.
Moléculas con electrones des localizados en sistemas
aromáticos a menudo absorben la luz a 150-400 nm
(ultravioleta) o en la región visible de 400-800 nm. La
espectrofotometría de absorción es usualmente usada
con moléculas disueltas en un solvente transparente.
La absorbancia de un soluto depende linealmente de la
concentración y por consiguiente la espectrofotometría
de absorción es ideal para hacer mediciones
cuantitativas.
La longitud de absorción y la fuerza de absorbancia de
una molécula no sólo depende de la naturaleza
química, si no del ambiente molecular en donde se
encuentre el cromóforo. Las mediciones
espectroscópicas son muy sensibles y se requieren
pequeñas muestras de material para el análisis.
Mican, M. Nieto, A. Quiroga, N. Reyes, C. Williams, V.
Las moléculas absorben radiación electromagnética
Cuando una onda encuentra a una molécula, puede
cambiar la dirección de propagación (dispersión) de esa
onda, o puede ser absorbida. En este último caso, una
molécula absorbe un fotón y su energía interna
aumenta para entrar a un estado inestable, por lo que
rápidamente vuelve a liberar esa energía sobrante y
vuelve al estado inicial que es más estable. El estado
inicial se denomina estado fundamental y el estado más
energético se llama estado excitado.
La absorción de radiación produce un paso del estado
fundamental al excitado (excitación) y en el proceso
contrario (llamado relajación) hay una liberación de
energía. Esta energía liberada en la relajación puede ser
en forma de calor o en forma de radiación
electromagnética otra vez. Este último proceso de
desprendimiento de radiación se llama de emisión.
Estos procesos se pueden representar como una
reacción química y en un diagrama de energía.
Las radiaciones más energéticas (VIS, UV y mayores)
comunican suficiente energía como para alterar el
movimiento orbital de los electrones, tanto alrededor
de un átomo solo, como de los orbitales de enlace entre
átomos. Las radiaciones menos energéticas (IR)
producen cambios en los movimientos de vibración y
rotación de la molécula. Estas últimas son muy
específicas de cada enlace y por lo tanto de cada
molécula, por lo que se utilizan como técnicas de
identificación.
Para realizar una identificación generalmente se hace
incidir sobre la sustancia estudiada radiaciones
electromagnéticas de diferente energía. Normalmente
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se estudia un rango de radiaciones y se va aumentando
(o disminuyendo) la longitud de onda de las
radiaciones incidentes desde un extremo del rango
hasta el extremo opuesto. Así se obtiene un espectro de
absorción de la sustancia, que se puede representar
gráficamente y este espectro es como una huella digital
de esa molécula en donde se encuentran registrados
todos los enlaces y sus transiciones correspondientes.
Entonces, si tenemos el espectro de absorción de una
molécula podemos identificarla con bastante exactitud.
La absorción de energía de longitud de onda λ resulta
de la diferencia de energía entre niveles si E2 E1 hc
−λ
Donde E1 es el nivel de energía de la molécula antes
de la absorción y E2 es un nivel de energía alcanzado
durante la absorción. En cambio entre niveles de
energía se llama transición, que representa la energía
requerida para mover un electrón de una órbita a otra.
METODOLOGIA
MATERIALES
 Espectrofotómetro visible
 Tubos de ensayo
 Celdas de vidrio para espectrofotómetro
 Vaso de precipitado de 100 mL
 Pipeta de 10 mL
 Pipeteador
 Matraz aforado de 100 mL
 Matraz aforado de 250 mL
 Gradillas
 Azul de metileno 5%
 Agua destilada
 Alcohol etílico
 Toallas absorbentes de papel
ANALISIS DE RESULTADOS
La grafica 1 muestra la absorbancia del azul de
metileno a diferentes concentraciones en partes por
millón (ppm) a una longitud de onde de 664 nm
aproximadamente, lo que significa que este es el
máximo de absorción de luz visible del compuesto.
De la gráfica 1, para hallar la concentración en ppm del
analito cuya absorbancia es de 1,075, se obtiene al
despejar la concentración (x) de la ecuación de la
gráfica, que la misma es aproximadamente de 11,07
ppm usando la ecuación de la curva (representada en la
gráfica).
1,075=0,0924 x+ 0,0524
1,075−0,0524
x= =11,067 ppm≈ 11,07 ppm
0,0924
Sin embargo, aunque para que una curva sea confiable
la linealidad de la curva tiene un valor mayor de 0,98
en el coeficiente de determinación (R2) (Dosal y
Villanueva 2008) que tiende a 1, es decir, que la curva
es casi una línea recta, en este caso es de 0,9935 que es
un valor aceptable. Por otra parte se deduce que los
datos de absorbancia obtenidos tienen un buen nivel de
precisión y, el intervalo de confianza es de 95% en el
caso de 8 muestras.
El azul de metileno es un compuesto heterocíclico
aromático cuya fórmula molecular es C16H18ClN3 S y
peso Molecular 319,9 g/mol.
Figura 1. Estructura molecular del azul de metileno en
medio acuoso.
Este compuesto es de color verde oscuro que forma
cristales y es prácticamente inodoro. Es soluble en
agua, y moderadamente en alcohol. En solución acuosa
se torna a color azul consecuencia de la oxidación.
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Absorbancia de azul de metileno

1.8 1.64
1.6 f(x) = 0.09 x + 0.05
1.4 R² = 0.99 1.25
1.08
1.2
Absorbancia

1 0.87
0.8
0.6 0.49
0.4 0.22
0.2
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20
Concentración (ppm)

Grafica 1. Curva de calibración absorbancia versus concentración para azul de metileno.

La construcción de la curva de calibración 1,075

(absortividad vs concentración) es un método
comúnmente utilizado para evitar la desviación de la
ley de Beer y desconfiar en el cálculo directo de la
concentración mediante la misma.
Por lo cual se determina la concentración desconocida
de una muestra de azul de metileno (analito) para
contrastar los resultados de la concentración
empleando dicha ley, mediante la siguiente ecuación:
A siguiente:
c=
ϵb
Donde:
A= Absorbancia
ϵ =¿ Absortividad molar (L mol cm ) -1
b= longitud interna de la celda (cm)
Teniendo en cuenta que la absortividad molar en medio
acuoso del azul de metileno o también llamado
tetrametiltionina es de 36x10^ (3) L mol -1 cm-1 (D
´Alessio, W. A. 1980) se obtiene:
c= 3 −1 −1
=2,986 ×10−5 M
( 36× 10 Lmol cm ) ×(1 cm)
El azul de metileno pude tener una desviación negativa
con respecto a la ley de Lambert y Beer, es decir que,
físicamente la absortividad varía con respecto al índice
de refracción de la solución lo que se evidencia en
concentraciones elevadas.
En contraste si estequiométricamente se convierte la
concentración 11,07 ppm a M, obtendremos lo
mg 1g 1 mol
11,07 × × =3,461× 10−5 M
L 1000 mg 318,9 g
La anterior concentración molar es congruente al
-1 compararse con la tabla de resultados en la cual la
concentración del tubo 4 es mayor por 5 décimas, y el
volumen de solución es de 6,972 ml diluido 10 ml
(véase tabla de resultados). Al usar la ecuación de
dilución para hallar el volumen de solución de azul de
metileno se obtiene que este es de 6,301 ml
aproximadamente. Por lo cual, la concentración molar
determinada usando la ley de L. y Beer es errónea
debido a que se presenta la desviación con respecto a
dicha ley, una desviación instrumental, puesto que
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según (Gary, D. C. 2009) la absortividad molar a La espectrofotometría es el método más útil para hallar
determinada longitud de onda varia de un instrumento la concentración de casi cualquier analito que posee
a otro, y no se debe [ CITATION Gar09 \l 9226 ] confiar color en estado acuoso.
en absortividades comunicadas. Por tal motivo, se
atribuye la desavenencia entre la concentración hallada
usando la ley mencionada y la determinada con la BIBLIOGRAFÍA
ecuación de la curva (grafica 1). Se hace no confiable
el cálculo directo de concentración según la ley de D´Alessio, W. A. (1980). Determinación
Beer. espectrofotométrica de microantidades de Boro en
agua. Buenos Aires. Comisión de Nacional de
La concentración molar del analito es de 3,461 × 10-5 Energía Atómica. Recuperado de:
M. https://inis.iaea.org/collection/NCLCollectionStore/_Pu
blic/16/070/16070140.pdf

Gary, D. C. (2009). Química analítica. Sexta edición.

México D.F. McGRAW-HILL/INTERAMERICANA
EDITORES, S. A. DE C. V.

Roth, C. (2018). Ficha de datos de seguridad. Azul de

metileno. Recuperado de:
https://www.carlroth.com/downloads/sdb/es/A/SDB_A
514_ES_ES.pdf

Santos, N.D. (2016). Adsorción de azul de metileno en

medio acuoso empleando carbones activados y
carbones activados modificados con nanopartículas de
ZnO. Recuperado
de:http://www.scielo.org.pe/pdf/rsqp/v82n1/a07v82n1.
pdf

Arenas, I. Lopez, J.L (2004). Espectrofotometría de

absorción. Recuperado
de:file:///C:/Users/Al/Downloads/espectrometria_de_a
CONCLUSIONES bsorcion%20(1).pdf
Se logró determinar la concentración desconocida de
un analito, es este caso azul de metileno por
espectrofotometría mediante el uso de la ecuación de la
curva de calibración y contrastarla con la hallada
mediante la ley de Beer.

La ley de Beer no es confiable al 100% puesto que

presenta deviación negativa en la absorbancia vs
concentración, por lo que es adecuado el realizar una
curva de calibración con las absorbancias de diferentes
muestras diluidas a distintas concentraciones para
evitar errores con respecto a la determinación de las
concentraciones con dicho método.