Guías de laboratorio de Microbiología para Farmacia.

2020
Profesora Angela Patricia Rojas

PRACTICA Nº 6

METABOLISMO

A. EVALUACION DE RUTAS DEL CATABOLISMO. PRUEBAS

BIOQUIMICAS

I. MATERIALES

• Cultivos patrón en caldo tioglicolato: Proteus vulgaris, Ps. aeruginosa,

Serratia marcecens, Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Salmonella
enteritidis, Proteus vulgaris, Proteus mirabilis, S. tiphy
• Batería Bioquímica (medios de cultivo en agar y líquidos)
• Asas bacterilógicas curvas y rectas
• Mechero

II. PROCEDIMIENTO

1. Tomar una asada del microorganismo y sembrar de acuerdo a las

siguientes recomendaciones :

MEDIO DE CULTIVO METODO DE SIEMBRA

Agar TSI Doble picadura y estría en superficie

Agar LIA Doble picadura y estría en superficie
Agar Citrato de simmons Estría en superficie
Agar (SIM) Picadura única en el centro del tubo
Agar OF Picadura única en el centro del tubo
Caldo MR-VP Suspensión
Caldo UREA Suspensión
Caldo glucosa Suspensión
Caldo Lactosa Suspensión
Caldo sacarosa Suspensión
Caldo Nitratos Suspensión

1. Incubar a 37ºC y leer a las 24 horas

III. RESULTADOS Y DISCUSION

 TSI LIA CITRATO UREA MR VP UREA NITRATOS SIM GLUCOSA LACTOSA SACAROSA AGAR OF
H2S/gas Indol /motilidad/ H2S
E. coli
S. marcecens
P. mirabilis
S. tiphy
S. enteritidis
K. pneumoniae
S. marcences
P. vulgaris
Ps. aeruginosa

Tabla de resultados. Batería Bioquímica para el análisis del metabolismo bacteriano (Enterobacterias).
V. PREGUNTAS

1. ¿Dentro del metabolismo bacteriano cuales son las rutas metabólicas que
emplean los microorganismos aerobios y anaerobios (realice un cuadro
comparativo)?

2. ¿Cuál es el fin común de las rutas anabólicas y catabólicas y cuál es su

aplicabilidad?

3. ¿Cuales son los fundamentos de las diferentes pruebas bioquímicas

empleadas para la identificación de microorganismos?

4. ¿Las pruebas bioquímicas permiten diferenciar organismos Gram (+) de Gram

(-)?

5. ¿Realice un paralelo entre eucariotas y procariotas respecto al empleo de

rutas metabólicas por parte de cada uno de éstos microorganismos y
especifique en qué tipo de compartimientos se realizan cada una de ellas?

BIBLIOGRAFIA

1. Jane Ann Phillips/Thomas D. Brock. Laboratory manual.1991 by Prentice –

Hall, Inc. Six edition.

2. Jaqueline J Black. MICROBIOLOGY. Principles and applications. Third edition.

1996.

3. Jawetz, Ernest. Microbiología médica. Mexico EDITORIAL Manual Moderno. 1983

UBICACION FISICA BIBLIOTECA CENTRAL

4. Stryer L. Biochemistry. Third edition .1988.

5. Diagnóstico por el Laboratorio. BIOBACTER.1999.

6. Manual de medios de cultivo. MERCK. 1999.

7. Curso de microbiología general. Enrique Iañez. . www.ugr.es/~eianez/

B. EVALUACION DE LA PRODUCCION DE EXOENZIMAS

I. MATERIALES

• Agar DNAsa
• Agar Almidón
• Agar Caseína
• Cultivos patrón en caldo tioglicolato conteniendo los siguientes
microorganismos: Serratia marcences, Bacilllus subtilis y Staphylococcus
aureus
• Asas bacteriológicas (curvas y rectas)
• Mechero

II. PROCEDIMIENTO

1. Sembrar por superficie en agar DNAasa, agar Almidón y agar Caseína,

una asada de cultivo puro formando una línea en cada cuadrante de la
caja de petri de acuerdo con la figura 1.

2. Posteriormente, Incubar por 24 horas a 37 ºC

3. Para evaluar los resultados, colocar 500 µl de HCl al rededor de la colonia

formada en agar DNAsa y 500 µl de lugol en el agar almidón de la misma
manera que el anterior y observar la formación de un halo producto de la
hidrólisis del correspondiente sustrato. Observar esta misma característica
en la caja de agar Caseína sin adicionar ningún reactivo.

1 2

Figura 1. Siembra de cepas patrón : 1.Serratia marcences, 2. Bacillus subtilis, 3.

Staphylococcus aureus
III. RESULTADOS Y DISCUSION

Producción de exoenzimas Amilasa Proteasa

DNAsa
Serratia marcences
Bacillus subtilis
Staphylococcus aureus

IV. PREGUNTAS

6. ¿Cómo se clasifican los organismos como eubacterias y archeobacterias de

acuerdo a su metabolismo?

7. ¿Cómo define un medio de cultivo simple y uno compuesto?

8. ¿Qué son las enzimas constitutivas e inducibles?

9. ¿En qué consisten los mecanismos de represión enzimática?

10. ¿En qué consisten los mecanismos de inhibición enzimática?

11. ¿Cuáles son los mecanismos por cuales se sintetizan macromoléculas

transmisoras de información genética?