Facultad de Estudios Superiores Zaragoza
UNAM
Microbiología general I
Actividad Metabólica y Determinación de azúcares reductores (DNS).
Equipo 4
Actividad Metabólica: Producción de ácido
o CO2
Se clasifica en: No. de células: viables
Método indirecto para la estimación del número de
bacterias y actividad enzimática.
Supone la cantidad de cierto producto metabólico
como ácido o CO2 es directamente proporcional a
la cantidad de bacterias presentes.
Fermentador: consiste en un recipiente en el que
se mantiene un ambiente favorable para que se
desarrolle un determinado proceso biológico.
Producción de CO2 (ejemplo)
1. Muestra de suelo
2. Recipiente con agua
3. Solución de NaOH 0.5 N
4. Aguja #20 (Venocat calibre 17)
5. Jeringa desechable de 20 mL
6. Tubo de plástico flexible de 1-
2 mm de diámetro
7. Plastilina
Determinación de azúcares reductores :
por ácido 3,5 dinitrosalicílico (DNS)
Método para cuantificar masa celular indirecto
Se basa en una reacción redox, utilizando el ácido
3,5 dinitrosalicilico, provocando la oxidación de los
azúcares y su misma reducción endotérmica.
Debido a que este método es espectrofotométrico,
se realiza una curva de calibración
1. Agregar 100 µL de la solución problema (solución de
glucosa a 1 mg/mL o de sacarosa a 6 mg/mL ya
digerida).
2. Agregar 300 µL del reactivo de DNS preparado.
3. Ebullir 5 minutos y dejar enfriar (10 minutos
aproximadamente) en el recipiente con hielos.
4. Agregar 600 µL de agua destilada.
5. Agitar en vórtex a temperatura ambiente.
6. Ajustar con el blanco a cero de absorbancia.
7. Leer la absorbancia registrada en el espectro de UV-
Visible a 540 nm (cuidar que no pase más de 30 min
para su lectura).
8. Elaborar la curva patrón en donde se grafique en el
eje de las ordenadas (eje “y”) promedio de la
absorbancia determinada a 540 nm y en el eje de las
abscisas (eje ”x”) el promedio de la concentración de
Glucosa determinada en g/L.