6.

COLIMETRIA

“Año del Diálogo y la Reconciliación Nacional”

Universidad Nacional Agraria La Molina

Departamento de acuicultura e industrias pesqueras

Curso:
Microbiología Pesquera

Práctica:
6- COLIMETRIA

Profesora:
Ing. Nancy Martínez Ordinola

Alumno:
N. Ruth Yupanqui Quispe

Realización de la práctica:
15/05/18

Entrega del informe:

22/05/18

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6. COLIMETRIA

I.INTRODUCCIÓN

La calidad higiénico – sanitaria son las características que debe cumplir un producto alimentario para asegurar
que su consumo no implica un riesgo de salud para el consumidor. Para esto existen métodos para la
determinación de las cantidades de bacterias existentes en una muestra alimentaria.

La determinación del número de coliformes presentes en una muestra se basa mediante la siembra de
distintos volúmenes del agua problema en series de tubos conteniendo un medio de cultivo líquido lactosado y
una posterior resiembra en un medio de cultivo selectivo con incubación a temperaturas adecuadas.

El objetivo de la práctica fue conocer la técnica necesaria para evaluar la presencia del grupo de coliformes
totales y fecales, por su importancia en el control microbiológico del agua y los productos pesqueros.

I. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA

1. Determinación del Número más Probable (NMP) de bacterias en un alimento

El recuento por dilución proporciona una idea del número de organismos vivos presentes en una muestra que
son capaces de multiplicarse en un medio líquido determinado. Se elige un medio líquido capaz de mantener
el crecimiento de las bacterias que se están estudiando. Este método se utiliza cuando se sospeche un número
muy bajo de bacterias. (Anco, 2009))

1.1. NMP de Coliformes Totales

Es un procedimiento mediante el cual, una reacción negativa excluye la presencia del grupo coliforme,
mientras que una reacción positiva indica su presencia inequívoca.
Deben someterse a esta prueba todos los tubos que hayan resultado positivos en la prueba presuntiva.
1.2. NMP de Coliformes fecales

Es un procedimiento por el cual una reacción negativa excluye la presencia de coliformes fecales, mientras que
una reacción positiva indica su presencia inequívocamente. (Ugr.es, 2010)

El término coliformes fecales ha surgido como un intento de encontrar métodos rápidos y fiables para
establecer la presencia de E. coli y variantes estrechamente relacionadas sin necesidad de purificar los cultivos
obtenidos en las pruebas para coliformes o de aplicar las relativamente costosas pruebas confirmatorias
( Martinez, 2016).

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Determinación de coliformes totales y fecales en aguas de

uso tecnológico para las centrífugas

María Teresa Fernández-Santisteban

María Teresa Fernández-Santisteban Instituto Cubano de Investigaciones de los Derivados de la

Caña de Azúcar (Icidca). Vía Blanca 804 y Carretera Central, San Miguel del Padrón, La Habana,
Cuba. maritere.fernandez@icidca.azcuba.cu

RESUMEN Los coliformes son indicadores de contaminación del agua y los alimentos. La
determinación y concentración de estas bacterias en el agua condensada para usos
tecnológicos en los centrales azucareros proporciona una herramienta de control
indispensable para conocer su calidad. El objetivo del trabajo fue la detección y
enumeración de coliformes totales y fecales a las aguas para el lavado del azúcar crudo en
las centrífugas en dos centrales del país por el método del número más probable (NMP),
tomando como referencia las NC-ISO 4831-7218 y NC 968. Los resultados reflejaron la
presencia en estas aguas de coliformes fecales y totales, estos últimos, por encima de los
límites máximos admisibles reportados en la norma. Asimismo indicaron que algunas de
estas aguas no cumplen los requisitos sanitarios del agua potable.

PALABRAS CLAVE: coliformes totales, coliformes fecales, contaminación, calidad, agua.

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II. MATERIALES Y MÉTODOS

1. NMP de coliformes totales

A. Prueba presuntiva

 Sembrar 1 mL de diluciones de la muestra por quintuplicado en caldo lauril sulfato triptosa (CLST).

Distintas diluciones.
En la práctica, se
usaron 10-3, 10-4 y
10-5.

5 tubos para cada

Siembra de una
dilución 3°,4° y 5°
dilución en un tubo
Se rotula los tubos de ensayo con CLST.
con CLST.

 Incubar a 37°C por 24 horas.

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Incubación de las
siembras en los
tubos de ensayo.

 Observar los tubos con reacción positiva (producción de gas en los tubos de fermentación que se
encuentran en el medio de cultivo).
Resultados: 3° dilución (4 tubos positivos) y 4° dilución (2 tubos positivos)

B. Prueba confirmativa

 Agitar cada tubo de CLST presuntivo positivo y con un asa de kolle, previamente quemada y
enfriada, extraer una asada.
 Inocular en el tubo de caldo lactosado verde brillante bilis.
 Incubar a 37°C por 24 horas.
 Proceder a la lectura luego de las 24 horas, considerando pruebas positiva confirmativa para
coliformes totales a todos los tubos que presentan formación de gas en el tubo de fermentación
invertido.

Tubos de ensayo con siembras

incubadas.

2. NMP de coliformes fecales

A. Prueba confirmativa

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 Agitar los tubos con CLST positivos y con el asa de kolle transferir un inoculo desde el CLST a los
tubos con EC.

Incubación de las
siembras con Tubos de ensayo con siembras
reacción positivas. incubadas.

 Incubarlos en Baño Maria a 44.5 +/- 0.2°C por 24 horas.

Prueba confirmativa de coliformes Prueba confirmativa de coliformes

fecales. Incubados en Baño maría a totales. Incubados a 37°C por 24
44.5 +/- 0.2 °C por 24 horas. horas.

Descarte de los tubos que no

presentaron reacción positiva en pág. 6
prueba presuntiva.
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III. RESULTADOS

1. NMP de coliformes totales

En los resultados de la prueba confirmativa para coliformes totales, se tuvieron las siguientes cantidades de
reacciones positivas:

Dilución N° de tubos con reacción positiva

-3
10 4
10-4 2
-5
10 0
Usando la tabla de colimetria, se lee que el NMP tabla es: 14

Tabla de colimetría

Por lo que, para el cálculo del NMP/ml:

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6. COLIMETRIA

NMP NMP tabla x f

=
ml 100

NMP 22 x 10−4
=
ml 100

NMP
=22 x 10−6
ml

Formación de gases en los tubos de

la prueba confirmativa

2. NMP de coliformes fecales

En los resultados de la prueba confirmativa para coliformes fecales, se

tuvieron las siguientes cantidades de reacciones positivas:

Dilución N° de tubos con reacción

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6. COLIMETRIA

positiva
10-3 3
10-4 2
10-5 0

Usando la tabla de colimetria, se lee que el NMP tabla es: 22

Por lo que, para el cálculo del NMP/ml:

NMP NMP tabla x f

=
ml 100

NMP 14 x 10−4
=
ml 100

NMP
=14 x 10−6
ml

Formación de gases en los tubos de

la prueba confirmativa
IV. DISCUSIONES

Al haberse presentado formación de gases en los tubos de

la prueba confirmativa para coliformes totales y fecales significa la presencia de diversa variedad de estos
en los tubos, esto es debido a que las bacterias coliformes fermentan la lactosa incubada a 37°C durante
24 horas, resultando una producción de ácidos y gases. (Martinez, 2016)

La diferencia en la reacción positiva en los tubos incubados en Baño María a 44.5 +/- 0.2 °C, es que se
encontraba en el rango de temperatura para su crecimiento, cuyo rango va [4 – 45] °C. (Albrecht, 2014).

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Esta Escherichia coli manifiesta, como un indicador clásico, la posible presencia de patógenos entéricos en
la muestra.

V. CONCLUSIÓN

 Se confirmó la presencia de coliformes, tanto totales como fecales, en las diluciones de 10 -3, 10-4 y
10-5.
 Se observó una mayor cantidad de reacciones positivas en los tubos incubados, en la prueba
confirmativa de coliformes fecales, para la dilución 10 -3.
 Se debe considerar que los coliformes detectados constituyen una parte de la contaminación, ya
que pueden existir otros factores que hayan logrado contaminar también a la muestra.

VI. REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA

Albrecht, J. 2014. Escherichia coli. UNL Food. Revisado en mayo, 2018. Disponible en:
http://food.unl.edu/escherichinia-coli-o157h7-e-coli

Anco, R; Perez, L; Vasquez, D & Collachagua, J. 2009. Microbiología aplicada: Colimetría total y fecal.
Universidad Peruana “Los Andes”.

Martínez, N. Microbiología pesquera: Guía de práctica. UNALM, FAPE.

Ugr.es. 2010. Determinación de bacterias coliformes: Colimetría. Ugr.es. Revisado en mayo, 2018.
Diponible en: http://www.ugr.es/~cjl/colimetria.pdf

Fernández M., 2017. Determinación de coliformes totales y fecales en aguas de uso tecnológico para
las centrífugas. . Revisado en mayo, 2018. Diponible en:
http://www.redalyc.org/pdf/2231/223154251011.pdf

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