Espectrofotómetro

El tipo más simple de espectrofotómetro de absorción se basa en la operación con

un solo haz en el cual la muestra se examina para determinar la cantidad de
radiación absorbida a una longitud de onda dada. Los resultados se comparan con
los de una referencia que se obtiene en una determinación a parte. Los cambios
en la intensidad de la fuente y en la sensibilidad del detector a la longitud de onda
son los factores limitantes en este tipo de aparatos ya que cualquier fluctuación en
la fuente o el detector entre la realización de las dos medidas produce errores
considerables. La forma de operación es la siguiente: el material de referencia se
coloca en el trayecto de la radiación y el instrumento se ajusta a 0% en
transmitancia con el obturador bloqueando por completo el paso de radiación
hacia el detector y, al retirar el obturador, el valor de la transmitancia se ajusta a
100%. Una vez realizado el ajuste, se coloca la muestra y se lee el valor de la
transmitancia.

Fuentes de luz
Las fuentes de radiación deben poseer dos condiciones básicas. Primero deben
proporcionar la suficiente energía radiante a lo largo de toda la región de
longitudes de onda en la que se medirá la absorción. Y segundo, deben mantener
una intensidad constante por encima del intervalo de tiempo durante el que se
realicen las medidas. Si la intensidad es baja en la región donde se determina la
absorción, el intervalo de longitudes de onda que pasa a través de la muestra,
debe ser relativamente amplio, a fin de obtener el rendimiento necesario de
energía, lo que puede provocar errores en las medidas de la absorción. 
 Tipos de lámparas:
-Lámparas de filamento de tungsteno: La fuente más común de radiación visible y
del infrarrojo (350 a 2,500 nm) es la lámpara de filamento de wolframio. La
distribución de energía de esta fuente se aproxima a la del cuerpo negro y, por
ello, depende de la temperatura. En esas lámparas se calienta un filamento del
alambre hasta la incandescencia por medio de corriente eléctrica. El filamento se
encuentra en un bulbo de vidrio herméticamente sellado al vacío o con gas inerte.
Los filamentos generalmente se enrollan para aumentar su emisividad, eficacia y
luminancia media. Las lámparas incandescentes son unidades robustas, de bajo
costo y lo suficientemente brillantes para casi todos los trabajos de absorción en
las regiones visible y del ultravioleta cercano. Las lámparas de wolframio y
halógeno representan una clase especial de lámparas incandescentes que
contienen todo añadido a los gases normales de relleno. En la envolvente se
utiliza el cuarzo para tolerar las altas temperaturas de operación de la lámpara
(2850 K). El yodo se combina químicamente en las paredes del bulbo con el
wolframio sublimado desde el filamento. El diyoduro de wolframio (WI2) resultante
regresa al filamento caliente, en donde se descompone redepositando wolframio
elemental. El ciclo es continuamente repetido manteniendo limpio el bulbo. Estas
lámparas conservan más del 90% de su luz inicial a lo largo de su vida útil. La
lámpara de wolframio emite mucha de su energía en el infrarrojo cercano, con un
máximo en 1000nm, y cae rápidamente en la región ultravioleta a 1/100 de ese
valor a 300nm. Sólo 15% de la energía radiante cae en la región visible.
Estas lámparas producen una radiación intensa como consecuencia del paso de
corriente a través de una atmósfera de xenón. El espectro es continuo en un
intervalo comprendido entre aproximadamente 200 y 1000 nm, con el máximo de
intensidad a aproximadamente 500 nm. En algunos instrumentos, la lámpara
funciona de forma intermitente mediante descargas regulares que proceden de un
condensador; se obtienen altas intensidades.
 -Lámparas de hidrógeno y deuterio:
Las lámparas de deuterio producen una esfera de radiación intensa algo más
grande que la del hidrógeno entre los dos electrodos, lo cual intensifica el brillo de
tres a cinco veces, esto justifica el extenso uso de las lámparas de deuterio.
Ambas lámparas producen un espectro continuo útil para la región comprendida
entre 160 y 360 nm. A longitudes de onda más largas (> 380 nm), las lámparas
producen líneas de emisión que se superponen sobre el espectro continuo. Estas
líneas pueden ser un problema para algunas aplicaciones (mediciones en el
visible) pero resultan útiles para calibrar los instrumentos.  producen un espectro
continuo en la región ultravioleta entre 220-360 nm.
- Lámparas de vapores de mercurio: emiten un espectro discontinuo o espectro de
líneas ,que se utilizan para calibración de longitudes de onda se emplean solo
para espectrofotómetros y cromatografía HPLC.

Selector de longitud de onda

Para la mayoría de análisis espectroscópicos, se necesita una radiación
constituida por un grupo limitado, estrecho y continuo de longitudes de onda
denominado banda. Un ancho de banda estrecho aumenta la sensibilidad de las
medidas de absorbancia y con frecuencia es un requisito para obtener una
relación lineal entre la señal óptica y la concentración. Idealmente, la señal de
salida de un selector de longitud de onda corresponde a una radiación de una
única longitud o frecuencia. No existe selector alguno que se aproxime al caso
ideal; en su lugar, lo que se obtiene es una banda. Para aislar una banda estrecha
de longitudes de onda, se utilizan filtros, monocromadores o ambos. 
 
Filtros de interferencia: Como su nombre lo indica se fundamentan en las
interferencias ópticas para producir bandas estrechas de radiación . Consta de un
dieléctrico transparente (con frecuencia fluoruro de calcio o de magnesio) que
ocupa el espacio entre dos películas metálicas semitransparentes. (con frecuencia
plata). Esta disposición se coloca entre dos placas de vidrio u otro material
transparente . El espesor de la capa dieléctrica se controla cuidadosamente para
tener solamente una, dos o tres medias ondas (se denominan como filtros de
primero, segundo y tercer orden) y determinan la longitud de onda de la radiación
transmitida. Cuando un haz de radiación colimada incide en esta disposición, una
fracción atraviesa la primera capa metálica, mientras que el resto se refleja. La
parte que ha pasado sufre una partición similar cuando incide en la segunda
película metálica. Si la parte reflejada de esta segunda interacción es de la
longitud de onda adecuada, se refleja parcialmente desde la cara interna de la
primera capa en fase con la luz incidente de la misma longitud de onda. El
resultado es que se refuerza esta determinada longitud, mientras que la mayoría
de las demás longitudes, que no están en fase, sufren una interferencia
destructiva
Filtros de absorción. Estos filtros que en general son más baratos que los filtros de
interferencia, se han utilizado mucho para la selección de bandas en la región
visible. Estos filtros funcionan absorbiendo ciertas zonas del espectro. El tipo más
habitual es un vidrio coloreado. Los filtros de absorción tienen anchuras de banda
efectivas que oscilan entre 30 y 250 nm. Los filtros que proporcionan las anchuras
de banda más estrechas también absorben una fracción significativa de la
radiación deseada y pueden tener una transmitancia de 10% o menos en sus
picos de banda. En el comercio existen filtros de vidrio con máximos de
transmitancia en toda la región del visible. Los filtros de vidrio son ampliamente
utilizados en los equipos automáticos de análisis químico y en colorimetría
Un monocromador consiste, en general, de una rendija de entrada que
proporciona una imagen estrecha y casi coherente de la fuente de radiación, un
colimador que hace paralela la radiación procedente de la rendija de entrada, una
red o prisma para dispersar la radiación incidente, otro colimador para formar la
imagen de la rendija de entrada sobre la rendija de salida y una rendija de salida
para aislar la banda espectral deseada. La función primordial del monocromador
es proporcionar un haz de energía radiante con una longitud de onda y una
anchura de banda dada. Los requisitos básicos de los monocromadores son:
simplicidad de diseño, resolución, gama espectral, pureza de la radiación de salida
y poder de dispersión.
Prismas: El prisma separa la radiación policromática en bandas angostas y a
diferentes ángulos. La dispersión en un prisma es mayor para longitudes de onda
cercanas a sus bandas de absorción, y como la mayoría de los primas absorbe
radiación UV, la dispersión se incrementa para longitudes de onda cortas. El
material del que está hecho el prisma debe ser transparente a la radiación
utilizada y un excelente medio dispersor. Para el UV pueden ser utilizados prismas
de sílice o de cuarzo. Para el visible e infrarrojo cercano, el vidrio ordinario con
plomo muestra buenas cualidades. Para el infrarrojo se utilizan sólidos iónicos
cristalinos, siendo uno de los más utilizados el cloruro de sodio.
Rejillas: Las rejillas como medio de dispersión de la luz son muy superiores a los
prismas. Hasta hace poco años una de las desventajas de este tipo de dispersor
era su costo. Una de las desventajas de las rejillas dispersoras es la producción
de radiación extraña,así como de espectros de segundo y tercer orden, pero estos
efectos pueden ser minimizados con el uso de filtros y una adecuado diseño del
instrumento.En los instrumentos más modernos y de mejor calidad la rejilla de
difracción han sustituido casi por completo el uso de los prismas como
monocromadores.
Cubetas
Las cubetas (o celdas) que contienen las soluciones de la muestra y de la
referencia deben tener sus ventanas perfectamente paralelas y perpendiculares al
haz de radiación. Las cubetas cilíndricas, utilizadas en espectrofotómetros de bajo
coste, deben cuidar su Instrumentos para la medida práctica del color- 12 -
posición a fin de lograr una buena reproductibilidad. Las cubetas utilizadas tienen,
por lo general, 1 cm de espesor, aunque pueden utilizarse desde 0,1 cm o menos.
Las cubetas deben construirse con materiales que no absorban la radiación en la
región de interés. El cuarzo es transparente desde los 190 nm en el ultravioleta
hasta los 3 ó 4 µm en el infrarrojo. Los vidrios desde los 350 nm hasta los 2 µm y
los plásticos desde 380 hasta los 780 nm en el visible. Para obtener buenos
resultados, las cubetas deben manejarse por pares que pueden obtenerse de los
fabricantes, pero conviene comprobarlo analizando muestras idénticas en cada
cubeta. Las cubetas deben limpiarse antes y después de ser utilizadas y nunca se
debe tocar con los dedos las caras por donde pasa la radiación pues la grasa y las
huellas dactilares pueden hacer variar la transmitancia de la cubeta.
Detector
Un detector es un transductor que convierte la radiación electromagnética en un
flujo de electrones y, posteriormente, en una corriente o voltaje en el circuito de
lectura. Existen detectores de un solo elemento como los fotodiodos de estado
sólido, los tubos fotoemisores y los tubos fotomultiplicadores y otros detectores
con elementos múltiples, como los detectores de estado sólido. Las características
más importantes para cualquier tipo de detector son: sensibilidad espectral,
respuesta a la longitud de onda, ganancia y tiempo de respuesta
Los tubos fotoemisores de vacío: son combinaciones simples de fotocátodo -
ánodo alojados en una cubierta con vacío. El fototubo de vacío de un solo paso
contiene un cátodo sensible a la radiación y un ánodo delgado situado en el eje
del cilindro rodeado por el cátodo. El fotocátodo opera según el principio de que se
emiten electrones desde algunos materiales en proporción directa al número de
fotones que incide en su superficie. Para una eficiencia óptima, la superficie del
fotocátodo debe tener el máximo coeficiente de absorción posible para la radiación
incidente. El material que recubre la superficie también deberá tener baja la
función de trabajo con objeto de extender su cobertura espectral hacia mayores
longitudes de onda.

Tubos fotomultiplicadores: Los fototubos multiplicadores de electrones, o tubos

fotomultiplicadores, son una combinación de un cátodo fotoemisor y una cadena
interna de dínodos multiplicadores de electrones. La radiación incidente expulsa
fotoelectrones del cátodo que son enfocados por un campo electrostático y
acelerados hacia un electrodo curvo, que corresponde al primer dínodo, el cual
está recubierto por un material que expulsa varios electrones como resultado del
impacto de un electrón de alta energía. La forma redondeada que tienen los
dínodos hace converger a los electrones sobre el siguiente dínodo. Repitiendo
este proceso multiplicador electrónico a lo largo de una serie de dínodos sucesivos
que se mantienen a un alto voltaje, se produce una corriente de avalancha que
finalmente llega al ánodo. Una de las mayores ventajas de los tubos
fotomultiplicadores es la capacidad que poseen de variar la sensibilidad en un
intervalo muy amplio, cambiando simplemente el voltaje de alimentación. 
Fotodiodo: Una unión semiconductora p -n posee una polarización inversa, de
modo que no existe flujo de corriente. Cuando un fotón interactúa con el diodo, los
electrones son llevados hasta la banda de conducción donde pueden actuar como
portadores de carga. De esta manera, la corriente generada es proporcional a la
potencia radiante incidente. La mayoría de estos dispositivos detectan únicamente
radiación en el visible y en el infrarrojo cercano y su respuesta es, al menos, un
orden de magnitud superior a los tubos fotoemisores de vacío, pero muchos
órdenes de magnitud menos que los tubos fotomultiplicadores.
Celda fotovoltaica: Es un dispositivo sencillo que se usa para detectar y medir
radiación en la región visible. Una celda típica tiene una sensibilidad máxima de
alrededor de 550 nm; la respuesta disminuye a casi 10% del máximo 350 y 750
nm. El intervalo es similar al del ojo humano. Está constituida por un electrodo
plano de cobre o hierro en el que se deposita una capa de material semiconductor,
como el selenio. La superficie externa del semiconductor se reviste con una
película fina y transparente de oro o plata, la cual funciona como el segundo
electrodo o colector; el sistema completo se protege mediante una cubierta
transparente. Cuando llega radiación de energía suficiente al semiconductor se
forman electrones y huecos. Los electrones que han sido impulsados a la banda
de conducción migran entonces hacia la película metálica (oro o plata) y los
huecos hacia la base (hierro o cobre). Entonces los electrones liberados migran a
través del circuito externo para interactuar con los huecos generados del otro lado.
El resultado es una corriente eléctrica de una magnitud que es proporcional a la
cantidad de fotones que golpean contra la superficie del semiconductor. Las
corrientes producidas por una celda fotovoltaica son lo suficientemente grandes
para ser medidas con un microamperímetro; la corriente fotoeléctrica es
directamente proporcional a la potencia radiante que golpea a la celda. Las
corrientes del orden de 10 a 100μA son comunes.
 
DETECTOR DE ARREGLO DE DIODOS (DAD- DIODE ARRAY DETECTOR)

 El detector de arreglo de diodos (diode array) fue introducido a mediados de los
años1970. Es una variación de los detectores de la región ultravioleta. El
desarrollo de los detectores que cuentan con arreglo de diodos es un gran avance
en la espectrofotometría UV. Poseen un nuevo sistema óptico e introducen el
concepto de integración total del detector, microprocesador y procesamiento de
datos. La base del funcionamiento de los espectrómetros de arreglo de diodos es
simple: el haz de radiación que ha atravesado la columna cromatografía, es
dispersado por medio de una red de difracción fija, siendo recogidas
simultáneamente todas las longitudes de onda dispersadas mediante una matriz
de foto diodos. Utilizan una óptica invertida respecto del convencional: Toda la luz
de la fuente atraviesa la muestra, y luego es dispersada, en lugar de una ranura
de salida, tiene en el plano focal un dispositivo que integra en un pequeño circuito
varios cientos de detectores tipo fotodiodo de silicio. El número de elementos varía
actualmente entre 64 y 4096, siendo los más comunes 512 y 1024 elementos.
Este detector se compone de una serie de diodos fotosensibles lado a lado
y aislados unos de otros en forma de capas múltiples sándwich. Cada diodo tiene
un espesor muy pequeño y la salida de cada uno se puede escanear, almacenar y
posteriormente procesadas por un ordenador en un numero de maneras
diferentes.