Anexo 1.

CURVA DE CALIBRACIÓN

Se trata de una curva de referencia construida con cantidades conocidas de una sustancia;
Curva calibración materia orgánica

Para la determinación de carbono orgánico, se debe preparar una curva de calibración con
concentraciones conocidas de carbono que estén dentro del rango lineal, en nuestro caso se
preparó la curva de calibración como se indica en la metodología de determinación de carbono
orgánico del suelo, con concentraciones de 0, 25, 50, 100, 200, 250 y 300 ppm de carbono
(Grafico 1), al leer en el espectrofotómetro UV/Visible se determinó las absorbancias a 430nm de
cada patrón (tabla 1).

Grafico 1. Muestras patrón para una curva de calibración de carbono.

CONCENTRACIÓN PPM ABSORBANCIA

0 0.000
25 0.066
50 0.115
100 0.199
200 0.406
250 0.498
300 0.590
Cuadro 20 : valores de concentración y absorbancia para para la curva de calibración de carbono.

Para realizar una curva de calibración hay diferentes aplicaciones, en Excel 2013, se siguen
los siguientes pasos:

1. Introducir los datos en el programa, señalarlos, y darle clic en insertar, gráficos,

dispersión.

“en el eje X iría la concentración de carbono en ppm y en el eje Y la absorbancia”

2. Señalar los puntos de intersección, y dar clic derecho en la opción agregar línea de
tendencia y presentar ecuación en el gráfico, (grafico 2).
 Curva de calibración carbono orgánico
0.7
0.6
f(x) = 0 x + 0.01
Absorbancia
0.5
0.4 R² = 1
0.3
0.2
0.1
0
0 50 100 150 200 250 300 350
Concentración de C en ppm

Grafico 2. Curva de calibración carbono orgánico.

3. Sabiendo que y=mx+b, donde m es la pendiente, b el intercepto, X la

concentración en ppm de carbono y Y la absorbancia, despejar X de la ecuación
obtenida en Excel, como se muestra a continuación.

y=0.0019 x +0.0104

( y −0.0104)
x=
0.0019

(absorbancia−0.0104 )
concentracion carbono( ppm)=
0.0019

4. Remplazar en Y el valor de la absorbancia (adimensional) obtenida en el

espectrofotómetro UV-Vis, para cada muestra desconocida que ha sido analizada,
usando la metodología de carbono orgánico, de esta manera se tendrá la lectura de
la muestra en ppm de la curva de calibración, que sería el Lm de la ecuación para
determinar el porcentaje de carbono orgánico en el suelo.

Nota: La curva de calibración se prepara por cada lote de muestras a analizar.

Ejemplo: Se requiere analizar la cantidad de carbono orgánico usando el método de

digestión vía húmeda (Walkley – Black), para ello se pesaron o.15g de suelo, (humedad
higroscópica de 3.14%, y un volumen final de solución de 50ml, al hacer la lectura en el
espectrofotómetro UV/Visible dio una absorbancia de 0.230. ¿Qué porcentaje de carbono
orgánico habrá en el suelo?

Para encontrar el porcentaje de carbono orgánico en el suelo se requiere encontrar el

valor de la lectura de la muestra en ppm, para ello se remplaza el valor de la absorbancia
en la ecuación encontrada en la curva de calibración, dando como resultado 115.58 ppm de
carbono, así:
(absorbancia−0.0104 )
concentracion carbono( ppm)=
0.0019
 (0.230−0.0104)
concentracion carbono( ppm)=
0.0019

concentracion carbono( ppm)=115.58 ppm Lm

Este valor es el lm requerido en la ecuación mencionada anteriormente, en la metodología

para carbono orgánico del suelo, al remplazar los datos en la ecuación, se obtiene un
porcentaje de carbono orgánico del 3.97%, como se muestra a continuación:

( Lm x Vf ) (100+ pw)
% C .O .= x
( pm x 10000) 100

(115.58 x 50 ml) (100+3.14 %)

% C .O .= x
( 0.15 g x 10000) 100

% C .O .=3.97 %