Estudio cinético de la enzima alfa amilasa

Sebastián Caicedo Arias, Laura Mejía; A00358723, A00358804

Laboratorio de Bioquímica, Ing. Bioquímica, Facultad de Ingeniería,
Universidad ICESI
Santiago de Cali, Colombia
21 de septiembre de 2019
Sebastiancaicedo121@hotmail.com ; laura.mejia.icesi@gmail.com

Resultados
∆[ E]
V=
∆t
Ecuación 1

ESTUDIO DEL EFECTO DE LA [E] SOBRE LA VELOCIDAD DE LA REACCIÓN

ENZIMÁTICA
Tabla 1. Datos crudos del estudio del efecto de la [E] sobre la velocidad de la
reacción enzimática
Tiempo de Observaciones
reacción Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4
(Min) (0,1 mL) (0,2 mL) (0,3 mL) (0,4 mL)
2 5 5 5 5
4 5 5 5 5
6 5 5 5 5
8 5 5 5 5
10 5 5 5 5
12 5 5 5 5
14 5 5 5 5
16 5 5 5 4
18 5 5 4 4
20 5 4 4 4
30 4 4 4 4
40 4 4 4 4
50 4 4 4 4
60 4 4 4 4
Ilustración 1. Gráfica concentración de sustrato VS. tiempo

Con la ecuación 1 calculamos la velocidad de la reacción para cada uno de los

tubos
( 4−5) −1 [E]
V T 1= = =−0.017
(60−2) 58 Min
Como podemos observar en la gráfica todas las concentraciones y tiempos de los
demás tubos son iguales a la del tubo 1, por lo que podemos concluir que:
V T 1 =V T 2=V T 3=V T 4

En esta grafica podemos observar cómo se obtuvo un comportamiento casi lineal

al momento de la obtención de los resultados, se puede concluir que los
resultados no fueron los esperados dado a que el objetivo principal era lograr la
hidrolisis del almidón a través de la enzima alfa amilasa
EFECTO DEL pH SOBRE LA VELOCIDAD DE REACCIÓN ENZIMÁTICA
Tabla 2. Resultados del pH sobre la velocidad enzimática
Tiempo de Observaciones
reacción (Min) pH 7,0 pH 4,0
0 4 5
3 4 5
6 4 5
9 4 4
12 4 4
15 3 4
18 3 4
21 3 4
24 3 4
27 3 3
30 2 3

Ilustración 2. Concentración de sustrato VS. tiempo en pH

 (3−5) −2 −1 [E ]
VT = = = =−0.0 66
7
(30−0) 30 15 Min
(2−5) −3 −1 [ E]
VT = = = =−0.1
4
(30−0) 30 10 Min
En esta grafica podemos observar que la hidrolisis de la enzima comenzó muy
lenta y en algún punto se estancó hasta el de la toma final de la reacción, aun que
se logró obtener una mejor hidrolisis que a comparación de la primera gráfica
ESTUDIO DEL EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA VELOCIDAD DE
LA REACCIÓN ENZIMÁTICA
Tabla 3. Resultados del efecto de la temperatura sobre la actividad enzimática
Tiempo de Observaciones
reacción (Min) 4 Celsius Temperatura ambiente 50 Celsius

5 5 5 5
10 5 5 5
15 5 5 4
20 5 5 4
25 5 4 4
30 4 4 4

Ilustración 3. Concentración de sustrato VS. tiempo en diferentes temperaturas

 (4−5) −1 [ E]
VT = = =−0.0 4
4C
(3 0−5) 25 Min
(4−5) −1 [ E]
VT = = =−0.04
Amb
(30−5) 25 Min
(4−5) −1 [E ]
VT = = =−0.04
50 C
(30−5) 25 Min
En esta gráfica la hidrolisis comenzó, mas al momento de finalizar el
procedimiento sucedió que todas las reacciones obtuvieron un numero igual de
concentración de sustrato, por lo que las velocidades obtenidas son las mismas, lo
que causa que no seamos capaces de obtener ninguna conclusión al respecto de
cada velocidad o por que sus velocidades pudieron llegar a ser o no diferentes en
algún punto

EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO SOBRE LA ACTIVIDAD

ENZIMÁTICA
Tabla 4. Efecto de la concentración de sustrato sobre la actividad enzimática
Tiempo de Observaciones
reacción (Min) Tubo 1 (1.0 Tubo 2 (1.5 Tubo 3 (2.0 Tubo 4 (3.0
mL) mL) mL) mL)
5 5 5 5 5
10 4 5 5 5
15 3 4 4 4
20 3 4 4 4
25 3 4 4 4
30 3 4 4 4
Ilustración 4. Volumen de sustrato VS. velocidad, ecuación de Michaelis-Menten

(3−5) −2 [E]
V T 1= = =−0.0 8
(30−5) 25 Min
( 4−5) −1 [E ]
V T 2= = =−0.04
(30−5) 25 Min
V T 2 =V T 3=V T 4
Ilustración 5. Linealización de la ilustración 4

Para empezar, podemos apreciar que la grafica de Michaelis. Menten no resultó al

igual que su linealización causando así que los demás resultados obtenidos
también contaran con una distorsión en ellos
Análisis de resultados
I. Estudio del efecto de la [E] sobre la velocidad de reacción
enzimática
a) Es una reacción usada para determinar la presencia de almidón, La
prueba de yodo se basa en la coloración oscura que produce la
interacción del almidón con el ion yoduro presente en el reactivo de
Lugol. Dado que el almidón está integrado por dos fracciones, la
amilosa y la amilopectina, debe tenerse en cuenta las reacciones
que ambas producen, así como sus respectivos productos de
hidrólisis
b) El modelo de la cinética enzimática descrito por Michaelis-Menten no
se ajustaron a la práctica dado que durante el laboratorio los
resultados no fueron los esperados y ocasionaron que las gráficas no
dieran correctamente

c)
Ilustración 6. Resultados de la reacción de pH del grupo 1

d)
Ilustración 7. Resultados de la reacción de pH de nuestro grupo

Podemos observar como en la ilustración 6 la enzima es más rápida

que en la ilustración 5 dado a que esta logró hidrolizarse más rápido
que la otra

II. Efecto del pH sobre la velocidad de una reacción enzimática

a) cataliza la hidrólisis de los enlaces alfa-glucosídicos, de los
polisacáridos alfa glucosídicos de alto peso molecular, tales como el
almidón y el glucógeno, liberando glucosa y maltosa.
 b) según la información anterior la enzima no dio los resultados
esperados ya que no catalizo la hidrolisis de los enlaces alfa-
glucosídicos de los polisacáridos dándonos resultados totalmente
diferentes a lo esperado
c) La enzima alfa amilasa se encuentra en su pH óptimo entre 5.5 y 8.0
y podemos ver que más velocidades de reacción para el pH 7.0 es
de -0.066, mientras que para el pH 4.0 la velocidad de reacción es
de -0.1, por lo que podemos concluir que la velocidad de reacción se
ve afectada por la posición del pH escogido dentro del intervalo del
pH óptimo que tiene la enzima por lo general

III. Estudio del efecto de la temperatura sobre la velocidad de reacción

enzimática
a) No, la muestra debería reflejar a que temperatura la enzima es más
optima y esto debería coincidir con las consultas realizadas
previamente, pero no es así
b) Dado a que la enzima trabaja mejor cierto tipo de temperatura, la
diferencia de velocidad de reacción debió ser afectada por ello, pero
debido a que los resultados del laboratorio no fueron correctos, las
velocidades de reacción obtenidas de cada tubo fueron iguales
IV. Efecto de la concentración de sustrato sobre la actividad
enzimática
a) No, según el modelo de cinética enzimática de Michaelis – Menten,
la gráfica debería representar un crecimiento exponencial y en la
linealización debería mostrar una línea recta con pendiente
Esta no se da debido a que los resultados obtenidos de la prueba de
laboratorio no se hallaron satisfactoriamente y generaron el mal
desarrollo de la practica
b) Durante la ingestión del almidón, si las persona que los ingiere,
consume en gran medida este sus enzimas alfa amilasas actuaran
más rápido en la hidrolisis de este y serán más eficientes, mientras
que al ingerir celulosa esta no se hidroliza en el cuerpo dado a que la
enzima alfa amilasa solo es capaz de hidrolizar los enlaces alfa
glucosídico que la celulosa no posee, por lo que esta pasa
completamente intacta a través de nuestro cuerpo hasta ser
expulsada [CITATION Guz19 \l 9226 ]

c) Los genes de amilasa salival son: AMY1A, AMY1B, AMY1C para los
humanos y primates[ CITATION Wiksf \l 9226 ]
La capacidad de degradar almidón fue un factor importante en el
desarrollo de las civilizaciones ya que el adquirir la capacidad de
almacenar carbohidratos pudimos sobrevivir a las condiciones
extremas que poseían algunos ambientes

Bibliografía
Guzman, A., & Martínez, J. (2019). Alfa Amilasa Bioquimica. Cali.

Wikipedia. (s.f). Obtenido de https://es.wikipedia.org/wiki/%CE%91-Amilasa#Genes