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Aplicación del Método de Estándar Interno a la Cromatografía de Gases

Prof. Jorge Castillo R, 18/ Agosto / 2003

Introducción:

El método del estándar interno debe su nombre a la forma como AA = 500 y AB =1000 ( Fig. 1).
se preparan las muestras a ser analizadas. El estándar interno es
una sustancia que se añade a todas las muestras y estándares en Al calcular los factores se obtiene:
cantidad conocida y a la vez en cantidad suficiente para poder ser
determinado sin problemas, Su adición no debe de causar ningún FB = CB/AB = 0.1/1000 = 0.0001
tipo de interferencia en el análisis, y debe de proporcionar una señal FA = CA/AA = 0.1/500 = 0.0002
analítica similar al analito en el análisis pero distinguible del mismo.
Además el estándar interno No debe estar presente en la matriz en Como podrá observar existe una
estudio. relación directa entre estos factores de
respuesta y el área del pico
Los métodos basados en la adición de un estándar interno cromatografico; Entre mas pequeño
generalmente se utilizan cuando el analista esta interesado en la sea el factor mas grande será el área y
concentración de uno o algunos de los componentes y el método de Figura 1
mayor la sensitividad del detector para
análisis es susceptible a errores tanto sistemáticos como al azar. ese analito. De lo anterior podemos
observar que FB es la mitad de FA y que el detector producirá una
El método esta basado en que cuando las señales del analito y señal (área) para el compuesto B que será el doble de la esperada
del estándar interno responden proporcionalmente a las fluctuaciones para el compuesto A (empleando mismas condiciones y
del método y del instrumental empleado, entonces la razón de estas concentraciones de A y B).
señales es independiente de tales fluctuaciones; De esta forma el
método compensa por errores provenientes de la manipulación de la Supongamos ahora que
muestra por analizar. queremos calcular la cantidad del
compuesto A y B en una solución
Un ejemplo del método lo encontramos en la determinación desconocida, la cual se inyecta en
espectroscópica de sodio y potasio en suero sanguíneo por emisión igual cantidad y bajo las mismas
atómica. El estándar interno es generalmente litio el cual tiene una condiciones que los estándares (ver
señal de emisión comparable al analito pero no se encuentra
fig. 2). En esta mezcla se encontró que
naturalmente en la sangre; La emisión de litio ocurre a diferente Figura 2
el área de A es igual al área de B. Si
longitud de onda que el sodio y potasio por lo que se puede analizar
nos dejamos llevar simplemente por las áreas de los compuestos
sin problemas de interferencias espectrales; además su adición en la
podemos suponer que habrá igual cantidad (concentración) del
cantidad requerida no afecta la matriz en estudio (sangre) y no
compuesto A y del compuesto B en la mezcla lo cual seria un grave
interfiere químicamente con el analito. Al llevar a cabo el análisis de
error (de 50%, en este caso) ya que supondríamos factores de
la muestra se determina simultáneamente la lectura de emisión de
respuesta idénticos para ambos compuestos; lo cual es poco común
sodio, potasio y litio, si en algún momento existe un error (fluctuación)
pero... algunas veces ocurre como por ejemplo para algunos
en el análisis, podemos esperar que el mismo afecte de manera
compuestos con isomería espacial (enanteomeros).
similar las lecturas del analito y del estándar interno y podamos
compensar el análisis.
Calculemos las concentraciones de cada componente en la
mezcla empleando los factores de respuesta previamente calculados:
Factores de Respuesta:
CA = AA/FA = (500)/(5000) = 0.10%
Para aplicar el método del estándar interno a la cromatografía
CB = AB/FB = (500)/(10000) = 0.05%
de gases debemos primeramente emplear correctamente los factores
de respuesta, por lo que se dará a continuación una pequeña
Método del Estándar Interno
introducción a la utilización y determinación de los factores de
respuesta del detector al analito.
En el método de estándar interno se emplea normalmente una
curva de calibración (fig. 3) empleando una serie de soluciones que
Tanto en cromatografía como en la gran mayoría de las técnicas
contienen igual cantidad del estándar interno e incrementos en la
instrumentales de análisis, es poco frecuente que todos los
cantidad del analito. Se
componentes de una muestra tengan una misma respuesta en el
inyectan las soluciones y del
detector, es por esta razón que debemos emplear la misma sustancia
cromatógrama obtenemos el
a analizar (analito) en forma pura para preparar los estándares en
área del analito y el área del
una curva de calibración, además de tratar de mantener las mismas
estándar intern, se calcula la
condiciones del método y del instrumental que serán empleados en el
relacion entre las áreas
análisis para todas las muestras (estándar y desconocido)
(Aanalito/AEst. Int.) y se gráfica
contra la concentración de
Básicamente los factores de respuesta se obtienen de la
analito en cada solución.
siguiente relación:
Finalmente se interpola en la
Ci = FiAi
gráfica obtenida el valor de la
razón de áreas de una
Así el factor de respuesta del detector (F) a una sustancia es
muestra desconocida, la cual
una constante que correlaciona el área (A) con la concentración (C).
debe contener la misma
cantidad de estándar interno
Supongamos dos soluciones cada una de concentración
que los patrones.
0.1%v/v de los compuestos A y B las cuales se inyectan en igual Fig. 3 Curva de Calibración (Estándar Interno)
cantidad y empleando las mismas condiciones a un cromatógrafo del
cual se obtienen las siguientes áreas: Por desgracia en el experimento de laboratorio (GC2) no
tenemos el tiempo para realizar el análisis de las soluciones patrón
requeridas por lo que solo empleamos un solo estándar (patrón) y
supondremos una relación lineal entre la razón de áreas y la

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concentración de analito. El análisis se efectúa de la siguiente
manera:

Se prepara una solución patrón de concentración conocida tanto


del estándar interno como del analito, con lo que se establecerá una
relación entre sus concentraciones, en nuestro caso:

CA = CEi  AA FA = AEi FEi  FA = AEi FEi /AA

Ahora asignaremos al estándar interno un factor de respuesta


igual a la unidad (1.0) esto nos permitirá calcular el factor F A en
función del estándar interno, de tal forma que el factor obtenido será
un factor de respuesta relativo.

Una ves encontrado el valor del factor de respuesta relativo del


compuesto procederemos a analizar los datos del desconocido, el
cual debe contener una concentración conocida del estándar interno
(CEiD). Emplearemos para ello las áreas del analito (AAD) y del
estándar interno (AEID) en la muestra del desconocido, para obtener la
concentración del analito en el desconocido, se procedera de la
siguiente forma:

CAD = FAAAD y CEiD = FEiAEiD  CAD/CEiD = FAAAD/FEIAEiD

CAD = FA AAD CEiD / FEi AEID

De esta forma se obtiene el valor de la concertación del analito


en el desconocido (CAD).

Recuerde que en el experimento GC2 se calculan los factores


para cada inyección del patrón y luego estos se promedian; De igual
forma, la concentración del analito se determina en cada inyección
del desconocido y luego se promedian.

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