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net/publication/291013914

Crecimiento de las plantas: rasgos promotores de levaduras aisladas de la filosfera

y Laboratorio de rizosfera de Drosera spathulata
Artículo en Biología Fúngica · Enero de 2016
DOI: 10.1016 / j.funbio.2015.12.006

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8 autores, incluyendo:

Shih-Feng Fu Colmillo Wei-Ta

Universidad Nacional de Educación de Changhua Universidad Nacional Normal de Taiwan
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Bai-You Cheng
Universidad TransWorld
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 fungalbiology 1 2 0 (2 0 1 6) 4 3 3 mi4 4 8

revista Página de inicio : www . De lo contrario. com / localizar / funbio

Rasgos que promueven el crecimiento de plantas de levaduras

aisladas de la filosfera y rizosfera de Drosera spatulata Lab.

una,1 una,1 una

Shih-Feng FU , Pei-Feng SOL , Hsueh-Yu LU , Jyuan-Yu
una una si C
WEI , Hong-Su XIAO Wei-Ta FANG , Bai-You CHENG , Jui-Yu
una,
CHOU * *
una
Departamento de Biología, Universidad Nacional de Educación de Changhua, Changhua 500, Taiwán
si
Instituto Graduado de Educación Ambiental, Universidad Nacional Normal de Taiwán, Taipei 116, Taiwán
C
Instituto de Posgrado en Gestión de Recursos Ambientales, TransWorld University, Yunlin County 640, Taiwan

información del artículo resumen

Historia del articulo:
Recibido el 19 de septiembre de 2015
Recibido en forma revisada 11 de
diciembre de 2015 Aceptado el 23 de
diciembre de 2015 Disponible en línea
el 2 de enero de 2016 Editor
correspondiente: Stephen W. Peterson
Palabras clave:
Biofertilizante Biofungicida
Ácido indol-3-acético
Rocío solar con hojas de
cuchara Agricultura
sostenible
Los microorganismos pueden promover el crecimiento de las plantas a través de mecanismos directos e
indirectos. En comparación con el uso de bacterias y hongos micorrícicos, el uso de levaduras como agentes
promotores del crecimiento de las plantas (PGP) no ha sido ampliamente investigado. En este estudio, los
aislados de levadura de la filósfera y la rizosfera de la planta de importancia medicinal Drosera spatulata Lab.
fueron evaluados por sus rasgos PGP. Todos los aislamientos se analizaron para determinar la capacidad de
producción de ácido indol-3-acético, amoniaco y poliamina, la capacidad de solubilización de fosfato de
calcio y óxido de zinc y la actividad de catalasa. Además, se evaluaron las actividades de sideróforo, 1-
aminociclopropano-1-carboxilato desaminasa y enzimas fúngicas que degradan la pared celular. Se evaluó la
acción antagonista de las levaduras contra Glomerella cingulata patógena.miinteracción de plantas. Los
resultados de nuestro estudio destacan el uso potencial de levaduras como biofertilizantes de plantas bajo
condiciones controladas y de campo.
ª 2016 La Sociedad Británica de Micología. Publicado por Elsevier Ltd. Todos los derechos
reservados.

Dirección de correo electrónico: jackyjau@cc.ncue.edu.tw (J. -Y. Chou).

1 Estos autores contribuyeron igualmente a este trabajo.

Introducción

Los microbios que promueven el crecimiento de las plantas (PGP) pueden

estimular el crecimiento de las plantas, aumentar el rendimiento y reducir
la infección por patógenos, así como el estrés biótico y abiótico (Saharan
& Nehra 2011) Estos microorganismos beneficiosos se han aplicado en
cultivos agrícolas como biofertilizantes y bioplaguicidas, así como
agentes de mediación de fitorretratos (Kloepper 1992; Vessey 2003) Los
microbios PGP promueven el crecimiento de las plantas a través de
mecanismos directos e indirectos. La promoción directa del crecimiento
de las plantas es a través de

* Autor correspondiente. Tel .:þ886 4 7232105x3426.

 las de las plantas (Chung et al. 2003; Spaepen y col. 2007; Reineke y col.
2008; Sun y col. 2014)

la producción de fitohormonas, como las auxinas o los gibberel-lins. El
ácido indol-3-acético (IAA) es la auxina vegetal más común y regula
varios aspectos del crecimiento y desarrollo de la planta (Teale et al.
2006; Spaepen et al. 2007) Además, los microorganismos, como bacterias,
hongos y levaduras, poseen capacidades de producción de IAA similares a
Además de la producción de fitohormonas, los microbios pueden
mejorar la absorción de nutrientes a través de varios mecanismos.
Microbiano

http://dx.doi.org/10.1016/j.funbio.2015.12.006
1878-6146 /ª2016 La Sociedad Británica de Micología. Publicado por Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados.
434 S. -F. Fu y col.
cuchara. D. spatulata ocurre en hábitats mésicos y generalmente crece en
montículos y céspedes que rodean pantanos y estanques, y en suelos de
La solubilización de fosfatos inorgánicos se ha atribuido a su producción arenisca (Nakano et al. 2004) Como mencionamos anteriormente,
de ácido orgánico y a sus capacidades de quelación (Kim et al. 1998; asociado a plantas
Chen y col. 2006) Los microorganismos solubilizadores de fosfato
mejoran el crecimiento de las plantas, particularmente en ambientes
deficientes en fósforo, al solubilizar fosfatos insolubles en el suelo. Del
mismo modo, los microorganismos solubilizan las sales de zinc,
proporcionando así el micronutriente zinc a la planta. Las plantas
þ
absorben nitrógeno del suelo en forma de nitrato y munición (NH 4 4 ) Por
lo tanto, microorganismos que poseen fijación de nitrógeno o NH 3La
capacidad de liberación es beneficiosa para las plantas. Entre todos los
nutrientes esenciales, el nitrógeno es el nutriente más esencial requerido
en grandes cantidades y, con mayor frecuencia, es el factor limitante en el
rendimiento del cultivo. Por lo tanto, investigamos el NH 3-producción de
habilidades en aislados de levadura. Los sideróforos son vitales para
promover el crecimiento de las plantas y suprimir el efecto de los
patógenos de las plantas debido a sus capacidades de transporte de hierro
(Kloepper et al. 1980; Verma et al. 2011) Los sideróforos son críticos para
garantizar una baja disponibilidad de hierro porque el hierro es un factor
crítico que limita el crecimiento de las plantas. Además, estos microbios
no patógenos pueden afectar negativamente a los patógenos de las plantas
al quitarles el hierro (Calvente et al. 1999)

Una poliamina es un compuesto orgánico que contiene dos o más

grupos amino primarios y está involucrado en varios aspectos del
desarrollo de la planta (Barón y Stasolla 2008) Las poliaminas son
moléculas críticas asociadas con la tolerancia al estrés abiótico y biótico
(Hussain et al. 2011) Se sabe que los microbios PGP poseen la enzima
desaminasa 1-aminociclopropano-1-carboxilato (ACC), que facilita el
crecimiento de las plantas. Este enzima se descubrió por primera vez en
1978 y es responsable de la escisión del precursor de etileno vegetal ACC
en NH3 y una-ketobutirato (Honma y Shimomura 1978) Al disminuir los
niveles de ACC en las plantas, los microorganismos productores de ACC
desaminasa pueden reducir los niveles de etileno de la planta para
prevenir la inhibición del crecimiento y proteger a las plantas huésped de
varios estreses ambientales (Glick et al. 2007a, b)

El crecimiento de las plantas se promueve indirectamente cuando

estos microbios reducen o previenen los efectos nocivos de los
organismos fitopatógenos. El control biológico de los patógenos de las
plantas y los microbios nocivos a través de la producción de antibióticos y
enzimas fúngicas que degradan la pared, puede mejorar la salud de las
plantas y promover el crecimiento al aumentar la emergencia, la vigilancia
y el rendimiento de las plántulas (Dey et al. 2004; Harish et al. 2009) Los
efectos sinérgicos de los factores PGP directos, como la suplementación
nutricional de las plantas y la producción de fitohormonas, y los factores
indirectos, como la restricción de la colonización de patógenos y la
eliminación de nutrientes por parte de los patógenos de las plantas, son
propicios para el crecimiento general de la planta.

Drosera es uno de los géneros más grandes de plantas carnívoras y es

una planta insectívora de importancia medicinal. Muchas especies de Dro-
sera están amenazadas debido a su hábitat restringido y su uso
indiscriminado en las industrias herbales. Este género es una fuente
natural de compuestos farmacológicamente importantes (p. Ej.,
Naftoquinonas, flavonoides, antocianinas y fenoles) que se utilizan como
sustratos en la producción de productos farmacéuticos (Marczak et al.
2005; Krolicka et al. 2008; Banasiuk et al. 2012) Drosera spatulata
Laboratorio. es un rocío de sol con forma de roseta con hojas en forma de
 El inóculo de levadura se preparó mediante cultivo en 3 ml de medio YPD
durante 24 h. El inóculo se ajustó a una densidad óptica (DO) de 0,10 a
Los microorganismos son valiosos para el crecimiento y la salud de las 600 nm, y 3metroL fue visto
plantas. Sin embargo, pocos estudios han reportado la microbiota de
levadura en la filosfera o rizosfera de la especie Drosera (Dom et al. 2014)
Por lo tanto, el propósito de este estudio fue aislar e identificar levaduras
en la filosfera y rizosfera de D. spatulata y evaluar sus rasgos de PGP.

materiales y métodos

Aislamiento de levadura

Se recogieron hojas verdes y sin daños de la planta Drosera spatulata del

0 0 00 0 0 00 0
distrito de Ruifang (N25 5 13,86 , E121 49 45,06 ; N25 3
0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 00
58.8 , E121 50 36,06 ; N25 5 21,48 , E121 50 52,2 ) y el
00 00 00 00 00 00
distrito de Shuangxi (N25 4 6.06 , E121 50 8.1 ; N25 5 27,3 ,
00 00
E121 51 35,64 ) en la nueva ciudad de Taipei, Taiwán. Las muestras
se mantuvieron a 4 ° C.

Las hojas de D. spatulata se colocaron en tubos de ensayo de 15 ml y

se incubaron en un agitador rotatorio a 28 ° C durante 1 día. Las levaduras
se aislaron usando una técnica de enriquecimiento en un medio de
1 1
extracto de malta (30 g L extracto de malta y 5 g L peptona)
suplementado con aproximadamente 2mi3 ml de ácido láctico al 100%. Se
colocó un asa llena del cultivo enriquecido sobre agar de extracto de malta
suplementado con aproximadamente 2mi3 ml de ácido láctico al 100%. Se
seleccionaron colonias de levadura de diferentes morfologías y se
purificaron mediante rayas cruzadas en agar de extracto de malta. Las
cepas de levadura purificadas se suspendieron en YPD medio (extracto de
levadura al 1%, peptona al 2%, dextrosa al 2%) suplementado con glicerol
al 15% v / v y se mantuvo a 80ºC.

Identificación de levadura

El ARN ribosómico de subunidad grande (ARNr de LSU) que incluye el

dominio D1 / D2 se determinó a partir de los productos de la reacción en
cadena de la polimerasa (PCR) del ADN genómico aislado de las células
de levadura (Dom et al. 2014) Las levaduras se identificaron según las
pautas de Kurtzman y Robnett: cepas de levadura con 0mi3 diferencias de
nucleótidos se consideran especies específicas o hermanas (Kurtzman y
Robnett 1997) y cepas con >6 sustituciones de nucleótidos se consideran
especies diferentes.

Cuantificación IAA mediante el uso del reactivo de Salkowski

Para cuantificar el IAA producido, se cultivaron aislados de levadura en

tubos de ensayo que contenían medio YPD con o sin 0.1% (p / v) de L-
triptófano (L-Trp) a pH 6.5 y se incubaron en la oscuridad en un agitador
a 28 ° C y 150 ° C. rpm por 5 d. Se centrifugó un mililitro de iso-late a
3000 g durante 5 min, y se mezclaron 0,5 ml del sobrenadante con 0,5 ml
de reactivo de Salkowski (2 ml de cloruro de hierro (III) 0,5 M y 98 ml de
perclórico al 35% ácido) (Gordon y Weber 1951) Después de 30 minutos,
el color (rojo) de la muestra se cuantificó utilizando un espectrofotómetro
(Unico 1200-Spectrophotometer, EE. UU.) A 530 nm.

Solubilización de fosfato y óxido de zinc (ZO)

Rasgos de PGP de levaduras aisladas del Laboratorio de espátula Drosera 435

en agar modificado de Pikovskaya de acuerdo con Amprayn et al. (2012).
Para evaluar la capacidad de solubilización del zinc, levaduras se
colocaron en placas sobre agar ZO (Rokhbakhsh-Zamin et al. 2011) Las
placas se incubaron a 28 ° C durante 5 días y se observó la aparición de
una zona de limpieza alrededor de las colonias (causada por la
solubilización de fosfato inorgánico o zinc por la levadura).Figura
1UNAmiRE).
NUEVA HAMPSHIRE3 producción
El inóculo de levadura se ajustó a una DO de 0,10 a 600 nm y 100
metroL se transfirió a un tubo que contenía 5 ml de agua de peptona y se
incubó en un agitador rotatorio a 28 ° C durante 5 días. NUEVA
HAMPSHIRE3La producción se detectó utilizando el reactivo de Nessler.
El desarrollo de un color amarillo a marrón fue indicativo de un resultado
positivo para NH3 producción (Cappuccino y Sherman 2002)

Producción de sideróforos
Los cultivos de levadura de 24 h se usaron como inóculo y se inocularon
puntualmente en una placa de agar modificada con doble capa de azurol
de cromo S (CAS) de acuerdo con Hu y Xu (2011). Todos los
experimentos se realizaron con agar azul CAS como la capa inferior. El
agar YPD como capa superior sirvió como medio rico no selectivo para el
crecimiento de la levadura. El agar azul CAS se preparó de acuerdo
conSchwyn y Neilands (1987). La mezcla azul oscuro resultante se diluyó
5 veces y se esterilizó en autoclave a 121 ° C durante 15 minutos. Se usó
agar (2%, p / v) como agente gelificante, y los cultivos se incubaron a 28 °
C durante 5 días. Los aislados que expresaban colonias rodeadas de zonas
de color naranja (en la versión web) se consideraron aislados productores
de sideróforos (Figura 1MI).
Producción de enzimas que degradan la pared celular
El inóculo de levadura se ajustó a una DO de 0,10 a 600 nm, y 3 metroL
se detectó en diferentes medios y se incubó a 28 ° C durante 5 días. La
actividad de la proteasa se determinó al detectar muestras en placas de
agar con leche descremada que contenían peptona (0,1%), NaCl (0,5%) y
leche descremada (10%) (Cattelan et al. 1999) Las placas se incubaron a
28 ° C durante 5 días, y se registró la zona de limpieza, indicativa de la
actividad enzimática, alrededor de las colonias (Figura 1F). La actividad
de celulasa se determinó usando el método descrito anteriormente,
excepto que se usó 1% de carboximetilcelulosa (CMC) o avicel y se
incubó a 28 C durante 5 días (Mangunwardoyo et al. 2011) Después de la
inoculación,

Figura 1 mi (UNmiD) Halos producidos por levaduras en agar de Pikovskaya por inoculación puntual e incubación a 28 ° C durante 5 días. Medio de
solubilización de fosfato por separado utilizando (A) DCP, (B) CPT y (C) TCP como fuente de fosfato inorgánico insoluble. (D) Para el estudio de
solubilización de zinc, se detectaron levaduras en agar ZO. (E) Siderophore fue producido por levaduras en agar CAS. (FmiH) Producción de enzimas que
degradan la pared celular. (F) La proteasa fue producida por levaduras en agar con leche desnatada. (G) La celulasa fue producida por levaduras en agar
modificado con agar CMC al 1%. (H) La quitinasa fue producida por levaduras en agar con quitina coloidal como única fuente de carbono.
436 S. -F. Fu y col.
10 minutos, y se lavaron cuatro veces con agua esterilizada. Las semillas
se sembraron en Murashige de cuarto de resistencia.mi-Skoog medium
Las placas se inundaron con solución roja de Congo al 0,1% y se (M5519, Sigma, MO, EE. UU.) Complementado con
reservaron durante 15 minutos con agitación intermitente. Luego se
lavaron las placas con solución de NaCl 1 M. La zona de limpieza de la
actividad enzimática era visible alrededor de las colonias (Figura 1SOL).
Para el cribado de la actividad quitinasa de las levaduras, se preparó
quitina coloidal a partir de quitina comercial (Charming & Beauty)
utilizando el método deAgrawal y Kotasthane (2012). Las zonas de color
púrpura (en la versión web) observadas dentro y después de 4 días de
incubación indicaron actividades de quitinasa fuertes y débiles,
respectivamente (Figura 1H)

Prueba de catalasa

Los cultivos de levadura de 24 h se mezclaron con cantidades apropiadas

de H2O2 en un portaobjetos de vidrio para determinar la producción de
oxígeno.

Producción de poliaminas

Los cultivos de levadura de 24 h se usaron como inóculo y se inocularon

puntualmente en una placa de agar Long Ashton descarboxilasa (LAD) de
acuerdo con Amprayn et al. (2012). Las placas LAD inoculadas se
incubaron en la oscuridad a 28 ° C durante 9 días. Los halos rojos
alrededor de las colonias en el fondo amarillo eran indicativos de la
descarboxilación de arginina por la cepa de levadura.

Actividad de desaminasa de ACC

Seguimos el método de Nutaratat et al. para medir la actividad ACC

desaminasa (Nutaratat et al. 2014) La capacidad de usar ACC como
fuente de nitrógeno es una consecuencia de la actividad enzimática de
ACC desaminasa. Si los aislados de levadura probados exhibieron tasas de
crecimiento significativamente más altas que los controles, el potencial de
las levaduras para usar ACC como fuente de nitrógeno a través de la
desaminación es alto.

Evaluación del antagonismo in vitro en medio sólido.

Un bucle lleno de inóculo de levadura se transfirió a placas YPD mediante

rayas. Para evaluar la inhibición del crecimiento fúngico por las levaduras
aisladas de la filósfera y la riosósfera de Drosera spatulata, las levaduras y
otros hongos se cultivaron en un ensayo, como se describe enRosa et al.
(2010). Se preparó una placa de control para comparar solo la inoculación
del hongo patógeno Glomerella cingulata (Ston.) Spauld. et Schrenk
(proporcionado por el Sr. Hsing-Lung Liu, Estación de Investigación y
Extensión Agrícola del Distrito de Taichung). El experimento se realizó
por triplicado y las placas se incubaron a 28 ° C. Se observó crecimiento
micelial los días 3, 5 y 7 de la incubación.

Inoculación de plantas con levaduras.

La línea transgénica Nicotiana benthamiana pNbCMT3-2 :: GFP-GUS se

generó como se describe en un estudio anterior (Lin et al. 2015) y se
utiliza para caracterizar la actividad mitótica en raíz de meristemos
apicales. Las semillas se esterilizaron en superficie usando una solución
de hipoclorito de sodio al 5% (v / v) con unas gotas de Tween 20 durante
1,0% (p / v) de sacarosa (pH 5,7) y 0,05% (p / v) de monohidrato de ácido
2-morfolinoetanosulfónico, y solidificado con agar Bacto al 1,5% (p / v)
(BD, MD, EE. UU.). Dos semanas después de la germinación, 8miSe
inocularon 10 levaduras sanas en una placa con levaduras. Los
tratamientos de control negativo con levaduras se realizaron en paralelo.
Las plántulas se colocaron en una cámara de crecimiento durante 3
semanas adicionales con una luz de 16 h: 8 hmiciclo oscuro a 25 C.

Análisis histoquímico de la actividad de la b-glucuronidasa.

Análisis histoquímico de si-glucuronidasa (GUS) se realizó con

modificaciones menores, como se describió anteriormente (Jefferson et al.
1987; Lin et al. 2015) Para cada tratamiento, se analizaron al menos cinco
plántulas. El experimento se realizó por triplicado independiente. Se
seleccionó un tejido raíz representativo y se fotografió usando un
microscopio estereoscópico (microscopio Z16 APO, Leica Microsystems,
Heerbrugg, Alemania).

Medición del contenido de clorofila

El contenido de clorofila se midió después de preparar los extractos como

se describe (Lichtenthaler 1987; Hajirezaei et al. 2002) con
modificaciones. Se extrajeron plántulas de Nicotiana benthamiana
cocultivadas con levaduras durante 3 semanas con 95% (v / v) de etanol.
Las muestras se centrifugaron a 16 000 g durante 2 minutos para obtener
el sobrenadante. Los contenidos de clorofila ayb se midieron a una
absorbancia de 662 y 647 nm, respectivamente. La absorbancia se registró
usando un UVmiespectrofotómetro visible. La clorofila total se expresó
como el contenido (metrog) por planta.

análisis estadístico

Los datos se expresan como desviación estándar media (DE). La

importancia de las diferencias entre los grupos se determinó mediante
pruebas t de Student y análisis de varianza. PAG< 0.05 fue considerado
estadísticamente significativo.

Resultados

Identificación de levadura

El dominio D1 / D2 de las secuencias del gen LSU rRNA indicó que

aislamos 32 levaduras de la filosfera y ocho levaduras de la rizosfera de la
espátula Drosera. Aísla con>6 sustituciones de nucleótidos se
consideraron heteroespecíficas. Por lo tanto, identificamos y clasificamos
las 40 cepas de levadura en 14 especies conocidas y varias especies no
descritas de los 15 géneros (tabla 1) En la filosfera de D. spatulata, cinco
especies conocidas y nueve desconocidas pertenecían a siete géneros del
filo Ascomycota, y seis especies conocidas y una desconocida pertenecían
a cinco géneros del filo Basidiomycota. En la rizosfera de D. spatulata,
tres especies conocidas y cinco desconocidas pertenecían a cinco géneros
del filo Ascomycota, y ninguna especie pertenecía a la phid-lum
Basidiomycota. Nuestros resultados revelan que 72.5% y 27.5%
Rasgos de PGP de levaduras aisladas del Laboratorio de espátula Drosera 437

tabla 1 miLevaduras y hongos similares a levaduras aislados de Drosera spatulata Lab. identificado por las secuencias del ARNr de LSU.
Son Especies más cercanas (número de acceso de GenBank) Sustituciones de nucleótidos / nt total

Filosfera
Filo Ascomycota
JYC101 Aureobasidium pullulans (FN665417) 4/787
JYC104 Aureobasidium pullulans (KM555174) 3/610
JYC357 Aureobasidium pullulans (KJ917967) 1/613
JYC374 Aureobasidium pullulans (KJ917967) 1/641
JYC375 Aureobasidium pullulans (KF059238) 1/622
JYC376 Aureobasidium pullulans (KJ917967) 3/631
JYC378 Aureobasidium sp. (FN665411) 0/699
JYC379 Aureobasidium pullulans (KJ917967) 3/669
JYC384 Aureobasidium pullulans (FJ744591) 2/658
JYC363 Candida akabanensis (EU100744) 28/742
JYC359 Dothideomycetes sp. (JQ759986) 0/651
JYC371 Dothideomycetes sp. (JQ759981) 0/642
JYC373 Dothideomycetes sp. (JQ759986) 0/651
JYC377 Dothideomycetes sp. (JQ759986) 0/578
JYC380 Dothideomycetes sp. (JQ759986) 1/682
JYC364 Hanseniaspora uvarum (JX188166) 0/689
JYC365 Hanseniaspora uvarum (JX188166) 18/662
JYC366 Hanseniaspora uvarum (JX188166) 19/612
JYC358 Meyerozyma caribbica (KJ705006) 0/662
JYC382 Saccharomyces cerevisiae (KF447149) 0/672
JYC381 Barnettozyma californica (FR772338) 1/613

Phylum Basidiomycota
JYC370 Cryptococcus laurentii (FN428900) 0/655
JYC103 Pseudozyma aphidis (FN424100) 4/779
JYC108 Pseudozyma aphidis (FN424100) 2/766
JYC356 Pseudozyma aphidis (KJ917976) 0/699
JYC367 Pseudozyma aphidis (KJ917976) 0/643
JYC372 Pseudozyma prolifica (AM160639) 13/624
JYC102 Pseudozyma rugulosa (KJ917976) 0/629
JYC100 Rhodosporidium paludigenum (KF411539) 0/568
JYC099 Sporidiobolus ruineniae (EU547494) 4/748
JYC107 Ustilago esculenta (AB211926) 0/704
JYC368 Ustilago esculenta (KJ917978) 0/633

Rizosfera
Filo Ascomycota
JYC362 Dothideomycetes sp. (JQ759986) 1/652
JYC383 Dothideomycetes sp. (JQ759986) 0/676
JYC385 Dothideomycetes sp. (JQ759986) 1/551
JYC396 Dothideomycetes sp. (JQ759986) 0/632
JYC360 Galactomyces candidum (JN974267) 0/569
JYC361 Kazachstania jiainicus (FJ196732) 0/541
JYC369 Torulaspora sp. (FJ888525) 8/640
JYC386 Barnettozyma californica (FR772338) 1/629

de las cepas aisladas fueron levaduras ascomicetos y basidiomicetos, Producción de IAA en ausencia de Trp exógeno
respectivamente.
El aminoácido Trp es un precursor prominente de IAA. Sin embargo, Trp
puede no siempre estar disponible o ser adecuado para que las levaduras
Producción IAA sinteticen IAA. Una vía independiente de Trp para la síntesis de IAA
existente en varias especies de levadura (Rao et al. 2010; Dom et al. 2014)
1 Para confirmar la existencia de una vía independiente de Trp en nuestras
La concentración de IAA varió de 610.63 54.7 a 8.63 1.4 metrog mL
levaduras probadas, analizamos la producción de IAA en los cultivos de
cuando se cultiva en un medio YPD con Trp como precursor bioquímico
levadura que carecen de Trp. La concentración de IAA varió de 236.62
(Tabla 2) Además, la concentración del IAA producido dependía de la 1
tensión. Las ocho cepas de Aureobasidium pullulans en nuestro estudio 14.6 a 1.6 0.6metrog mL cuando se cultiva en medio YPD sin Trp.
produjeron IAA en un mecanismo dependiente de la cepa, y la Todos los aislados de levadura evaluados produjeron IAA en ausencia de
concentración varió de 610.63 54.7 a 56.06 2.9metrog mL .
1 Trp exógeno (tabla 1) Dos aislamientos produjeron grandes cantidades de
IAA y 32 aislamientos produjeron bajos
 438
Tabla 2 miRasgos directos de PGP de levaduras y hongos similares a levaduras aislados de Drosera spatulata Lab .; SE[ diámetro de toda la

zona clara / diámetro de la zona con levadura colonias (Los datos se expresan como media ± DE. P< 0.05 fue considerado significativo.
*PAGS < 0,05; **PAGS < 0.01.)
NUE
VA
HA
MPS
DCP CPT TCP ZO HIR Poliamin Catalas
Son Producción IAA Producción IAA (SE) (SE) (SE) (SE) E3 a a
1 1
(metrog mL ) en YPD (metrog mL ) en producci producci prue
con Trp YPD sin Trp ón ón ba
Filo Ascomycota
Aureobasidium pullulans
JYC101 66,35 (10,7) 80,77 (20,9) mi 1,2 mi mi þ mi þþ
Aureobasidium pullulans
JYC104 610,63 (54,7) 145,63 (12,9) ** mi mi mi mi þþ þ þþ
Aureobasidium pullulans
JYC357 197,57 (29,6) 110,03 (6,3) * mi mi mi 1,5 þþ mi þþ
Aureobasidium pullulans
JYC374 172,34 (30,8) 188,87 (45,3) mi 1,2 mi mi þ mi þþ
Aureobasidium pullulans
JYC375 56,06 (2,9) 9,44 (1,9) ** 1.13 1.1 mi mi þ mi þþ
Aureobasidium pullulans
JYC376 217,03 (25,7) 173,33 (2,7) * mi mi mi 1,25 þ mi þþ
Aureobasidium pullulans
JYC379 255,68 (16,3) 236,62 (14,6) 1.1 1.08 mi mi þ þ mi
Aureobasidium pullulans
JYC384 132,34 (10,7) 34,17 (4,9) ** 1.11 1.1 mi mi þ mi mi
Aureobasidium sp. JYC378 108,09 (23,9) 99,89 (3,6) mi 1.1 mi mi þ mi þþ
Candida sp. JYC363 68,31 (1,6) 21,6 (0,4) ** 1,38 1,43 mi mi þþ mi þþ
Dothideomycetes sp. JYC359 84,79 (4,8) 57,86 (6,5) ** 1.08 1,22 mi mi þþ mi þþ
Dothideomycetes sp JYC362 252,07 (20,3) 142,7 (5,1) ** mi mi mi 1.13 þþ þ þþ
Dothideomycetes sp. JYC371 252,07 (11,5) 66,24 (9,2) ** mi mi mi 1,25 þ mi þþ
Dothideomycetes sp. JYC373 206,58 (31,1) 183,92 (12) mi mi mi 1.14 þ mi þþ
Dothideomycetes sp. JYC377 189,91 (21,6) 46,69 (0,5) ** mi 1.1 mi mi þ þ þþ
Dothideomycetes sp. JYC380 226,85 (5,6) 151,49 (35,4) * mi mi mi mi þþ mi þþ
Dothideomycetes sp JYC383 75,21 (3,1) 88,09 (4,5) * mi mi mi mi þþ þ þþ
Dothideomycetes sp JYC385 202,61 (21,7) 180,54 (12) mi 1.05 mi 2,18 þ mi þþ
Dothideomycetes sp JYC396 295,77 (10,4) 112,97 (12,3) ** mi mi mi 1,25 þ þ þþ
Galactomyces candidum
JYC360 95,57 (2,3) 16,42 (5,8) ** mi mi mi 1.11 þþ þ þþ
Hanseniaspora uvarum
JYC364 41,74 (0,8) 11,65 (0,2) ** mi 1,17 mi mi mi mi þþ
Hanseniaspora uvarum
JYC365 50,7 (3,8) 26,06 (2,8) ** mi 1,17 mi mi mi mi þþ
Hanseniaspora uvarum
JYC366 89,08 (3,8) 20,3 (0,2) ** mi 1,17 mi mi mi mi þþ
Kazachstania jiainicus
JYC361 8,63 (1,4) 4.08 (1.2) ** mi mi mi mi mi mi þþ
Meyerozyma caribbica
JYC358 27,37 (3) 1,6 (0,6) ** mi 1,22 mi mi þþ mi þþ
Saccharomyces cerevisiae
JYC382 27,37 (0,3) 5,7 (2,3) ** 1.09 1,44 1,33 mi mi mi þþ
Torulaspora sp. JYC369 79,4 (2,7) 10,16 (0,6) ** 1,25 1,63 1,17 2 mi mi þþ
Barnettozyma californica
JYC381 49,4 (1,8) 12,1 (0,7) ** mi 1.11 mi 1,42 þ mi þþ
Barnettozyma californica
JYC386 40,16 (2,9) 12.05 (0.8) ** mi 1,33 mi 1.05 þ mi þþ
Phylum Basidiomycota
Cryptococcus laurentii
JYC370 70,97 (3) 29,85 (0,7) ** 1,25 1,86 mi 1,25 þ mi þþ
Pseudozyma aphidis JYC103 66,69 (6,1) 77,32 (5,4) * 1,44 1.4 mi mi þ mi mi
Pseudozyma aphidis JYC108 110,43 (24,9) 59,26 (10) * 1.1 1.08 mi mi þ mi mi
Pseudozyma aphidis JYC356 81,2 (3) 37,23 (1,6) ** 1.09 1,2 mi mi þ mi mi
Pseudozyma aphidis JYC367 114,23 (29,1) 44,62 (7,9) * 1.11 1.1 mi mi þ mi mi
Pseudozyma rugulosa
JYC102 32,77 (4,3) 20,39 (3,6) * 1,2 1.09 mi mi þ mi mi
Pseudozyma sp. JYC372 43,41 (5,5) 18,95 (1) ** 1,38 1,57 mi mi þþ þþ mi
Rhodosporidium
paludigenum JYC100 400,59 (52,5) 39,62 (3,2) ** 1,67 1,63 mi mi þþ mi þþ
Sporidiobolus ruineniae
JYC099 115,3 (14,2) 69,4 (8,4) ** 1,38 1,43 mi mi þþ mi þþ
Ustilago esculenta JYC107 67,77 (4,1) 71,38 (6,5) 1.1 1.08 mi mi þ mi mi
Ustilago esculenta JYC368 195,32 (27,4) 51,94 (15) ** 1.08 1,22 mi mi þþ mi þþ

þþ Fuerte resultado positivo,þ ligero resultado positivo, mi no detectado.

S. -F. Fu y col.
Rasgos de PGP de levaduras aisladas del Laboratorio de espátula Drosera 439

cantidades de IAA en ausencia de Trp. exógeno Seis aislamientos
produjeron cantidades similares de IAA en presencia y ausencia de Trp
(Tabla 2)
promover la salud de las plantas. Sin embargo, las levaduras que exhiben
actividad antifúngica no producen sideróforos como elemento clave de los
mecanismos de defensa, como se describe más adelante. La unidad de
actividad (AU) de

Solubilidad de fosfato y ZO

La disponibilidad de fósforo está sujeta a su fijación química en el suelo

con otros cationes metálicos dependiendo de los ambientes del suelo. En
el presente estudio, 18 cepas exhibieron capacidad de solubilización in
vitro de fosfato dicálcico (DCP), y Rhodosporidium palu-digenum
JYC100 exhibió la actividad solubilizante más fuerte, expresada usando la
unidad de eficiencia de solubilización (SE) de 1.67 (Tabla 2) Además, 29
cepas exhibieron actividad solubilizante in vitro de fosfato de calcio
tribásico (CPT), y Cryptococcus laurentii JYC370 tuvo la actividad
solubilizante más fuerte, con una unidad SE de 1.86 (Tabla 2) Sin
embargo, solo dos cepas, Saccharo-myces cerevisiae JYC382 y
Torulaspora sp. JYC369, con unidades SE de 1.33 y 1.17,
respectivamente, exhibió actividad solubilizadora de fosfato tricálcico
(TCP) in vitro (Tabla 2) Además, 12 cepas exhibieron actividad
solubilizadora de ZO in vitro, y Dothi-deomycetes sp. JYC385 tuvo la
actividad solubilizante más fuerte, con una unidad SE de 2.18 (Tabla 2)

NUEVA HAMPSHIRE3, poliamina y producción de ACC

desaminasa

NUEVA HAMPSHIRE3 La producción es una de las características

generales de la bacteria PGP (Ahmad et al. 2008; Yadav et al. 2010) Sin
embargo, si NH3La producción es un rasgo común de las levaduras es
desconocida. En nuestro estudio, 21 y 13 cepas exhibieron NH débil y
fuerte3-produciendo habilidades, respectivamente. Se ha propuesto que las
poliaminas funcionen en respuesta al estrés ambiental y en la regulación
del crecimiento y desarrollo de las plantas (Barón y Stasolla 2008) En este
estudio, el ensayo de producción de poliaminas indicó que ocho levaduras
producían poliaminas en el caldo de cultivo (Tabla 2) La actividad de
ACC desaminasa fue fuerte en Pseudozyma sp. JYC372 y débil en
Aureobasidium pullulans JYC104 y JYC379, Dothideomycetes sp.
JYC362, JYC383, JYC396 y JYC377, y Galactomyces candidum
JYC360. Ninguno de los aislados de levadura exhibió actividad ACC
desaminasa.

Prueba de catalasa

La catalasa fue producida por 31 de los aislados de levadura probados en

este estudio. La catalasa es una enzima común en casi todos los
organismos vivos expuestos al oxígeno; Cataliza la descomposición del
peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno. La presencia de catalasa en
microorganismos es útil para proteger las células del daño oxidativo
causado por especies reactivas de oxígeno (ROS). Por lo tanto, las cepas
de levadura que exhiben actividad catalasa deben ser altamente resistentes
al estrés ambiental, mecánico y químico.

Producción de sideróforos

La producción de sideróforos que quelan el hierro, por lo que no está

disponible para el crecimiento del patógeno, es fundamental para
 carboximetilcelulasa (CMCasa) en 19 cepas, con un rango de AU de 2 a
la producción de sideróforos se definió por el diámetro de la zona or-ange 3.2; A. pullulans JYC379 exhibió la actividad más fuerte. Sin embargo, no
dividido por el diámetro de la zona con colonias de levadura. Nuestra se detectó actividad de avicelasa en ninguno de los aislados de levadura.
investigación sobre la producción de sideróforos reveló que 15 cepas
fueron producidas por sideróforos in vitro, y Pseudozyma aphidis JYC356
tenía la mayor capacidad de producción de sideróforos, con una UA de 4
(Tabla 3)
Varios investigadores han intentado dilucidar los roles de la quitinasa
en hongos (Duo-Chuan 2006; Seidl 2008) El hongo Lecanicillium lecanii
y la levadura Pichia membrana faciens y Candida guilliermondii pueden
Producción de enzimas que degradan la pared celular producir quitinasa para destruir la pared celular del hongo (Ventilador et
al. 2002) En este estudio, la actividad extracelular de quitinasa se detectó
La capacidad de sintetizar enzimas fúngicas que degradan la pared celular, sobre la base de la descomposición de la quitina en N-acetil glucosamina,
que suprimen el crecimiento de patógenos fúngicos, puede promover una lo que provoca un cambio correspondiente en el pH hacia la alcalinidad y
competencia exitosa con los patógenos fúngicos nocivos por los nutrientes un cambio de color del colorante indicador de pH (BCP) de amarillo a
de las plantas (Ghodsalavi et al. 2013) La actividad de protección púrpura en la zona que rodea la colonia de levadura inoculada en la región
extracelular se detectó mediante degradación de caseína, indicada por las de utilización de quitina. En nuestro estudio, 15 cepas exhibieron una
zonas de limpieza en el agar de leche desnatada. La UA de producción fuerte actividad de quitinasa, nueve cepas exhibieron una actividad débil
enzimática se definió como el diámetro de la zona de limpieza total de quitinasa y 16 cepas no mostraron ninguna actividad de quitinasa.
dividido por el diámetro de la zona con colonias de levadura. Los
resultados indicaron que 25 cepas de levadura producían proteasa, con un
rango de AU de 1.16 a 2.4; Aureoba-sidium pullulans JYC375 exhibió la
actividad más fuerte. La pared celular fúngica es una estructura dinámica
que protege a la célula del estrés ambiental. En la mayoría de los hongos, Producción de compuestos antifúngicos.
la pared celular consiste en contenidos complejos, como la quitina, el
glucano y la manoproteína. A diferencia de los hongos, las paredes Los aislados de levadura fueron investigados por su actividad antagónica
celulares de los oomicetos están compuestas de celulosa y glucano. Los contra el patógeno fúngico de la fruta, Glomerella cingulata, que causa
oomicetos son un grupo de varios cientos de especies de organismos que podredumbre madura en las uvas, podredumbre amarga en las manzanas y
contienen algunos de los patógenos de plantas más devastadores (Morgan varias enfermedades en frutas y verduras (Brook 1977; Herrero & Black
y Kamoun 2007) Por lo tanto, la capacidad de las levaduras para producir 1990; Buck y col. 2003) Nuestros resultados indicaron que el la levadura
celulosa facilita la promoción de la actividad antagonista contra estos Barnettozyma californica JYC381 y JYC386 y Galacto-myces candidum
patógenos de plantas. En nuestro estudio, se observó la actividad de JYC360 exhibieron efectos antagonistas significativos contra todos los
hongos probados en las placas de agar YPD (Figura 2)
H
Tabla 3 miRasgos indirectos de PGP de levaduras y hongos similares a levaduras aislados de Drosera spatulata Lab .; AU[ diámetro de la a
zona de reacción / diámetro de la zona con colonias de levadura. ns
e
ni
Producción de Actividad Actividad de Producción de Antagonismo en medio as
sideróforos proteasa CMCase quitinasa sólido p
or
a
Filo Ascomycota u
Aureobasidium pullulans v
JYC101 1,29 1,69 2,63 þþ mi ar
Aureobasidium pullulans u
JYC104 2.11 mi 2 þþ mi m
Aureobasidium pullulans J
JYC357 1,75 1.16 3.17 þþ mi Y
Aureobasidium pullulans C
JYC374 mi 2 2,44 þþ mi 3
Aureobasidium pullulans 6m
JYC375 mi 2,4 2 þþ mi 4m
mii
Aureobasidium pullulans H
JYC376 1.4 1,86 2,38 þ mi a
Aureobasidium pullulans
ns
JYC379 2 2,17 3.2 þþ mi
Aureobasidium pullulans e
JYC384 mi 2 2,67 mi mi ni
as
Aureobasidium sp. JYC378 mi 1,71 3 mi mi p
Candida sp. JYC363 1,45 mi mi þþ mi or
Dothideomycetes sp. a
JYC359 1.4 1,87 2,75 þ mi u
Dothideomycetes sp v
JYC362 mi 1,89 2,44 þ mi ar
Dothideomycetes sp. u
JYC371 mi 2.12 2,4 þ mi m
Dothideomycetes sp. J
JYC373 1.6 2,14 2,56 þ mi Y
Dothideomycetes sp.
C
JYC377 1,5 2,14 3 þ mi
Dothideomycetes sp. 3
JYC380 mi 1,78 2,56 þþ mi 6m
Dothideomycetes sp 5m
mii
JYC383 1,33 1,5 2,71 þ mi Hmi
mi
m
Dothideomycetes sp a
JYC385 1,78 2 2,57 þþ mi ns
Dothideomycetes sp e
JYC396 mi 1,25 2,4 þ mi ni
Galactomyces candidum as
JYC360 mi 1,25 2,4 þþ þ p
 ora uvarum JYC366

440
Kazachstania jiainicus
JYC361 mi mi mi mi mi
Meyerozyma caribbica
JYC358 mi mi mi þþ mi
Saccharomyces cerevisiae
JYC382 mi mi mi mi mi
Torulaspora sp. JYC369 mi mi mi mi mi
Barnettozyma californica
JYC381 mi mi mi mi þ
Barnettozyma californica
JYC386 mi mi mi mi þ
Phylum Basidiomycota
Cryptococcus laurentii
JYC370 mi mi mi þþ mi
Pseudozyma aphidis
JYC103 2,15 1,2 mi mi mi
Pseudozyma aphidis
JYC108 mi 1,5 mi mi mi
Pseudozyma aphidis
JYC356 44 1,57 mi þþ mi
Pseudozyma aphidis
JYC367 2,75 mi mi þþ mi
Pseudozyma rugulosa
JYC102 mi 1,55 mi mi mi
Pseudozyma sp. JYC372 mi 1,54 mi þ mi
Rhodosporidium
paludigenum JYC100 mi mi mi mi mi
Sporidiobolus ruineniae
JYC099 1.6 mi mi mi mi
Ustilago esculenta JYC107 mi 1,18 mi mi mi
Ustilago esculenta JYC368 mi 2.2 2.2 mi þþ mi

þþ Fuerte resultado positivo, þ ligero resultado positivo, mi no detectado.

S. -F. Fu y col.
Rasgos de PGP de levaduras aisladas del Laboratorio de espátula Drosera
Figura 2 miEvaluación del antagonismo in vitro en un medio sólido por levaduras contra el hongo fitopatógeno Glomerella cingulata. (UNmiB): las
levaduras (derecha) fueron antagónicas a G. cingulata (izquierda). (CmiD): Las levaduras (derecha) no fueron antagónicas a G. cingulata (izquierda). (E)
G. cingulata solo como grupo de control.
Efectos de las levaduras productoras de IAA en el
crecimiento y desarrollo de las plantas.
Para comprender los efectos de las levaduras productoras de IAA en el
crecimiento y desarrollo de las plantas, utilizamos Nicotiana benthamiana
como sistema modelo. Se germinaron plántulas de N. benthamiana de tipo
salvaje y se cultivaron en placas que contenían medio Mur-ashige &
Skoog (MS) solidificado en agar. A las 2 semanas después de la
germinación, se inocularon cepas de levadura, incluidas tres cepas
productoras de IAA y dos cepas de control negativo, en las placas a 3 cm
de las puntas de las raíces. Las cepas JYC099, 367 y 385 exhibieron una
alta producción de IAA, mientras que las cepas JYC361 y Han-naella
coprosmaensis JYC089 exhibieron una baja producción de IAA. Las
cepas JYC099, 367 y 385 se usaron como levaduras PGP potenciales
debido a sus capacidades de producción de IAA y su capacidad en rasgos
de PGP directos e indirectos.Dom et al. 2014) Después de 3 semanas de
cocultivo de N. benthamiana con cepas JYC099, 367 y 385, se observaron
incrementos notables en el crecimiento de brotes y raíces en comparación
con esos controles (Fig. 3UN). El crecimiento del brote, incluido el
alargamiento del tallo y el número de hojas, se mejoró cuando se
cocultivó con las cepas JYC099, 367 y 385 productoras de IAA en
comparación con las cultivadas con los controles negativos (Fig. 3SI). En
particular, el peso fresco y los contenidos de clorofila de N. benthamiana
cocultivados con la cepa JYC385 fueron mucho más altos que los de N.
441
Benthamiana cocultivada con otras cepas. Los resultados sugirieron un
efecto beneficioso de las levaduras productoras de IAA en el crecimiento
y desarrollo de las plantas.
Las levaduras productoras de IAA regulan la arquitectura
del sistema radicular en Nicotiana benthamiana
Para obtener información detallada sobre los efectos del IAA productor de
levadura en la arquitectura del sistema radicular, el desarrollo de raíces
laterales, la formación de pelos radiculares y el alargamiento de las raíces
primarias, las plántulas de N. benthamiana se cultivaron con levaduras
(Higos 3 y 4) El desarrollo de raíces laterales y pelos radiculares en las
plántulas cocultivadas con levadura JYC099, 367 y 385 cepas se mejoró
en comparación con la de los controles y los controles negativos (Fig. 3A
y B). Para investigar si el IAA producido por levadura modifica la
expresión génica relacionada con la mitosis en meristemos apicales de
raíz, inoculamos plántulas pNbCMT3-2 :: GFP-GUS N. benthamiana
transgénicas con diversas cepas de levadura. La línea pNbCMT3-2 ::
GFP-GUS se ha utilizado para caracterizar la actividad mitótica en plantas
(Lin et al. 2015) El gen de la cromometilasa (CMT) es responsable de la
metilación del ADN durante la mitosis en los tejidos en proliferación (Lin
et al. 2015) El análisis histoquímico reveló la tinción de los meros tallos
apicales de la raíz en las plántulas transgénicas pNbCMT3-2 :: GFP-GUS
(Higo 4) El meristemo apical de la raíz se amplió en plantas transgénicas
pNbCMT3-2 :: GFP-GUS cocultivadas con levadura JYC385 en
comparación con las de los controles negativos (Higo 4) Estas
442 S. -F. Fu y col.

Fig. 3 miEfectos del IAA productor de levadura en el crecimiento y desarrollo de plántulas de N. benthamiana. (A) Se cultivaron plántulas de N.
benthamiana (2-w-old) en placas de agar que contenían medio MS de un cuarto de fuerza. Las plántulas se inocularon con diversas cepas de levaduras,
incluidas JYC099, 367, 385, 361 y 089 en los extremos opuestos de las placas de agar, y las plántulas se cultivaron conjuntamente con la levadura durante
3 semanas adicionales. Las levaduras de JYC099, 367 y 385 exhibieron una producción de IAA relativamente más alta. JYC361 y 089 produjeron un IAA
relativamente más bajo y sirvieron como controles negativos (Neg). Las muestras de plantas sin tratamiento de levadura sirvieron como control (Con). (B)
El alargamiento de las raíces primarias, el número de raíces laterales, la longitud de los tallos, el número de hojas, el contenido de clorofila y el peso
fresco de las plántulas de N. benthamiana se midieron después de 3 semanas de inoculación con levaduras. Los datos muestran la media ± DE de diez
plántulas. La importancia de las diferencias entre los grupos se determinó mediante pruebas t de Student y análisis de varianza. PAGS<0.05 se consideró
estadísticamente significativo (*). Los experimentos se repitieron tres veces y se obtuvieron resultados similares.
Rasgos de PGP de levaduras aisladas del Laboratorio de espátula Drosera 443

Higo 4 miCaracterización de la expresión génica relacionada con la mitosis en raíces de N. benthamiana inoculadas con levaduras productoras de IAA. La
línea transgénica pNbCMT3-2 :: GFP-GUS de N. benthamiana se generó y obtuvo como se describió anteriormente (Lin et al. 2015) La inoculación de las
cepas de levadura JYC089 y 385 fue como se describe en Fig. 3. La línea transgénica pNbCMT3-2 :: GFP-GUS se usó para evaluar la actividad de
división celular en las puntas de las raíces sobre la base de la expresión pNbCMT3-2 :: GFP-GUS. La región del meristemo apical en la punta de la raíz se
indica con líneas.

IAA mejoran el crecimiento de la raíz y aumentan la longitud de la raíz,

lo que resulta en un área de superficie radicular aumentada, lo que
permite un mayor acceso a nutrientes basados en el suelo. Esta
fitohormona
Los resultados indican que el IAA producido por levaduras estimula la
actividad micótica de las puntas de las raíces.

Discusión

Biofertilizante, un término recientemente acuñado, se refiere a una

sustancia que contiene microorganismos vivos, que cuando se aplica a
semillas, plantas y superficies del suelo, coloniza la rizosfera o el interior
de la planta y promueve el crecimiento de la planta huésped al aumentar el
suministro o disponibilidad de nutrientes primarios. Numerosas especies
de bacterias del suelo florecen en la rizosfera de las plantas; pueden estar
presentes en otros tejidos y están directa o indirectamente involucrados en
la promoción del crecimiento y desarrollo de las plantas. Estas bacterias
se conocen colectivamente como rizobacterias PGP (PGPR) (Vessey
2003; Lugtenberg y Kamilova 2009) Estos microbios tienen el potencial
de aumentar las cosechas al tiempo que permiten a los agricultores usar
menos cantidades de fertilizantes y pesticidas. Además, ciertos microbios
permiten el crecimiento de las plantas bajo condiciones de estrés,
mejorando su adaptabilidad al cambio climático (Delaware Vrieze 2015)
En este estudio, evaluamos los rasgos de PGP de levaduras aisladas de la
filósfera y rizosfera de Dro-sera spatulata y los efectos de la inoculación
de levaduras en el crecimiento de las plantas.

Producción IAA

Los microorganismos productores de IAA están recibiendo una atención

creciente como candidatos favorables para su uso como biofertilizantes
(Saharan & Nehra 2011) Se cree que los microorganismos productores de
es producido comúnmente por PGPR (Vessey 2003; Yadav et al. 2010)
Rao y col. (2010)sugirió la presencia de una vía independiente de Trp para
la síntesis de IAA en levadura para hornear (Sac-charomyces cerevisiae).
Para determinar si una vía independiente de Trp es común a las levaduras,
analizamos la producción de IAA en cultivos de levadura sin Trp. Los
aislados de levadura en nuestro estudio produjeron IAA en ausencia de
Trp exógena. Dos aislamientos produjeron cantidades significativamente
altas de IAA, y 32 aislamientos produjeron cantidades significativamente
bajas de IAA en ausencia de Trp exógeno. Seis aislamientos produjeron
cantidades similares de IAA en presencia y ausencia de Trp (Figura 1)
Nuestros resultados apoyan firmemente la presencia de una vía
biosintética IAA independiente de Trp en levaduras, y estos resultados son
consistentes con los de nuestro estudio anterior (Dom et al. 2014) Jaeger y
col. (1999)reportado que Trp era el más componente abundante en el suelo
en la región 12miA 16 cm de la punta de las raíces, mientras que la
sacarosa era el componente más abundante en el suelo cerca de la punta de
la raíz. La alta disponibilidad de sacarosa en la punta de la raíz es
consistente con la pérdida de fotosinato de tejidos de raíz inmaduros y de
rápido crecimiento. Sin embargo, la perforación lateral de la epidermis de
la raíz puede provocar la pérdida de Trp de las secciones de raíz más
antiguas. Por lo tanto, la disponibilidad de Trp influye en la producción de
IAA en microbios con solo la ruta biosintética de IAA dependiente de Trp.

En particular, nuestra investigación de las capacidades de producción

de IAA de las levaduras reveló que las diferentes cepas de una especie
exhiben diferentes capacidades de producción de IAA. En este estudio, las
ocho cepas de Aureobasidium pullulans produjeron IAA; la concentración
de IAA fue dependiente de la cepa y varió de 610.63 54.7 a 56.06
1
2.9metrog mL . En nuestro estudio anterior, las cinco cepas de
Cryptococcus flavus produjeron IAA; la concentración de IAA fue
1
dependiente de la tensión y varió de 38.6 1.7 a 103.9 21.2metrog mL
(Dom et al. 2014) Estos resultados
444 S. -F. Fu y col.
sincronización del desarrollo de colonias a través de NH 3 la señalización
es un fenómeno común en varias especies de levadura y existe entre
son consistentes con los de estudios previos que evalúan otros levaduras
microorganismos y han informado las diferencias en la biosíntesis de IAA
entre cepas de la misma especie (Tsavkelova et al. 2006; Ruanpanun y
col. 2010)

Solubilidad de fosfato y ZO

El fósforo es vital para el crecimiento y la productividad de las plantas.

Los microorganismos solubilizadores de fósforo desempeñan un papel en
la nutrición de fósforo al mejorar su disponibilidad para las plantas a
través de la solubilización y mineralización en suelos inorgánicos y
orgánicos. Sin embargo, el grado de solubilización de fosfato varía con los
microorganismos. La solubilización de fosfato está influenciada por el
efecto combinado de la disminución del pH y la producción de ácido
orgánico (Fankem et al. 2006) Por lo tanto, la eficiencia de la
solubilización de fosfato-fosfato disminuye en condiciones amortiguadas
en comparación con condiciones no amortiguadas (Joseph y Jisha 2009)
En este estudio, evaluamos la capacidad de solubilización de fosfato de
las levaduras en medios no tamponados y observamos que los TCP
solubilizantes de los aislamientos fueron menores que los DCP y CPT
solubilizantes. Todas las cepas de levadura que solubilizan DCP pueden
solubilizar CPT, pero lo contrario no siempre es cierto. Sin embargo, en
comparación con el fósforo, el zinc se requiere en cantidades
extremadamente pequeñas para las plantas, ya que el Zn es un
componente crítico de varias enzimas responsables de impulsar varias
reacciones metabólicas de las plantas. En nuestro estudio, los
experimentos sobre solubilización de Zn usando ensayos en placa
revelaron la solubilización efectiva de compuestos de Zn por varias cepas
de levadura. Sin embargo, solo Torulaspora sp. JYC369 DCP
solubilizado, CPT, TCP y ZO, con unidades SE de 1.25, 1.63, 1.17 y 2,
respectivamente. Cryptococcus laurentii JYC370 solubilizado DCP, CPT
y ZO, con unidades SE de 1.25, 1.86 y 1.25, respectivamente. EnNutaratat
et al. (2014), solo uno (Torulaspora globosa DMKU-RP31) de 13
aislamientos de levadura exhibió capacidad de solubilización in vitro de
fosfato de calcio, que también fue el único aislado que ZO solubilizado.
Parque et al. (2013) tomaron muestras de 1100 cepas de levadura de
varios alimentos fermentados coreanos y los seleccionaron para la
solubilización de fosfato; solo cinco cepas solubilizaron TCP. De manera
similar, Onyia y Anyanwu aislaron 12 cepas de hongos de las rizosferas
de la planta de pimienta Nsukka e informaron que solo seis cepas
exhibieron una zona de solubilización TCP prominente (Onyia y
Anyanwu 2013) Aunque se justifica una mayor investigación para
explorar estos mecanismos en detalle, es evidente que la solubilización de
fosfato y Zn no son rasgos comunes en las levaduras.

NUEVA HAMPSHIRE3 producción

NUEVA HAMPSHIRE3la producción es una característica general de los

microbios PGP; por lo tanto, investigamos NH 3producción en las
levaduras que aislamos. Notablemente, NH 3es producido y utilizado por
las propias levaduras. Palkova y col. informó que NH3 fue producido por
colonias de levadura en pulsos y que media la comunicación entre las
colonias de levadura (Palkova et al. 1997) Además demostraron que la
colonia que primero alcanza NH intenso3 la producción induce
NH3producción en las colonias circundantes independientemente de su
edad. Este comportamiento sincroniza NH 3transferencia y desarrollo de
colonias en los pulsos y consecuentemente su crecimiento. Además, la
 indirectamente el crecimiento de la planta huésped. En nuestro estudio,
todas las cepas de Aureobasidium pullulans produjeron proteasa y
colonias de diferentes géneros (Palkova y Forstova 2000) NUEVA
HAMPSHIRE3 la producción y su papel como mediador de comunicación
se informó en Debaryomyces hansenii y otras especies de levadura
relevantes para el queso (Gori et al. 2007) La sincronización de las
colonias de levadura para su crecimiento y desarrollo podría ser valiosa
para establecer su distribución óptima en un hábitat natural. Esto podría
explicar por qué la mayoría de los aislados de levadura en este estudio
exhibieron NH3-produciendo habilidades.

Producción de catalasa

La catalasa es una enzima antioxidante clave producida por el huésped en

la defensa contra el estrés oxidativo. Nuestros resultados indicaron que la
mayoría de las cepas probadas exhibieron actividad catalasa. Estos
resultados son consistentes con los de las levaduras epifito y endofíticas
aisladas de arroz y hojas de caña de azúcar (Nutaratat et al. 2014) La
catalasa protege a los microbios asociados con las plantas de ROS, una
ocurrencia común en las plantas (Lindow y Brandl 2003) Las superficies
aéreas de la planta están expuestas a condiciones ambientales severas y
que fluctúan rápidamente. La exposición a una gran cantidad de radiación
UV es una de las selecciones más prominentes del ambiente de la
superficie de la hoja, y las epífitas probablemente se han adaptado a esta
condición. Además, las plantas liberan metanol generado por pectina
metilesterasas (PME). Los PME liberan metanol como subproducto
durante la desmetilterificación del componente homogalac-turonano de las
pectinas de la pared celular (Micheli 2001) Las levaduras usan este
metanol a través de la actividad catalasa para reaccionar con el peróxido
de hidrógeno en los peroxisomas (van der Klei et al. 2006) Por lo tanto, la
producción de catalasa puede ser un rasgo común de levaduras,
particularmente en aquellas asociadas con hojas de plantas.

Producción de sideróforos

La mayoría de las bacterias y hongos producen sideróforos, agentes

quelantes para el ión férrico, que no solo apoyan el crecimiento de las
plantas sino que también inhiben indirectamente a los patógenos de las
plantas al eliminar el hierro disponible del ambiente del huésped
(Neubauer et al. 2000) Calvente et al. informó que la acción antagónica
de Rhodotorula glutinis siderophores tras la exposición al patógeno
poscosecha Penicillium expansum (Calvente et al. 1999) Wang y col.
aisló una cepa HN6.2 de Aureobasidium pullulans de origen marino con
una alta capacidad de producción de sideróforos. Informaron que el
sideróforo crudo producido por esta levadura inhibió el crecimiento
celular de ciertas Vibrio spp. aislado de los peces marinos enfermos
(Wang et al. 2009) Sin embargo, las levaduras que exhiben actividad
antifúngica pueden no necesariamente producir sideróforos, como se
observó en nuestro estudio, en donde las cepas de levadura Barnettozyma
californica JYC381 y JYC386 suprimieron el crecimiento de Glomerella
cingu-lata fitopatógena pero no produjeron sideróforos ni enzimas
hidrolíticas ( proteasa y CMCasa).

Enzimas que degradan la pared celular

Otro mecanismo a través del cual los microorganismos inhiben los

fitopatógenos es la producción de enzimas fúngicas que degradan la pared
celular. Las enzimas que degradan la pared celular afectan la integridad
estructural de las paredes del patógeno diana, promoviendo
Rasgos de PGP de levaduras aisladas del Laboratorio de espátula Drosera
CMCase. A. pullulans, popularmente conocido como levadura negra, es
un hongo saprófito generalizado que habita en una amplia gama de
hábitats terrestres y acuáticos. Varias cepas de esta especie producen
hidrolasas, como glucanasas, quitinasas y pro-teasas, y pueden usarse
como posibles agentes de biocontrol (Donaghy y McKay 1993; Mounir et
al. 2007; Gaur et al. 2010) Cabe destacar que varios estudios han
informado que A. pullulans es un organismo no celulolítico (Deshpande et
al. 1992) Sin embargo,Kudanga
& Mwenje (2005) recogido aislamientos tropicales de varias fuentes y los
seleccionaron para la producción de celulasa. Todos los aislamientos
evaluados exhibieron actividad de CMCasa. Se ha informado una alta
variabilidad de la cepa de A. pullulans (Urzyo et al. 1999; Loncaric y col.
2009), explicando así las diferencias en el potencial enzimático o las
propiedades de esta ubicua especie de levadura. Sin embargo, varias cepas
de este hongo similar a la levadura se han informado como patógenos
oportunistas y se aislaron de la piel de un paciente inmunocomprometido
(Girardi et al. 1993; Hawkes y col. 2005; Chan y col. 2012) A pesar de los
importantes potenciales biotecnológicos de A. pullulans, su patogenicidad
debe evaluarse antes de usarlo como biofertilizante comercial.
La quitina es el segundo biopolímero más abundante después de la
pérdida de celula, que se distribuye ampliamente en ambientes marinos y
terrestres. La quitinasa ha recibido una mayor atención debido a su amplio
uso en aplicaciones biotecnológicas, particularmente en la agricultura para
el control biológico de hongos fitopatógenos e insectos dañinos. Además,
la quitinasa se ha utilizado en la preparación de quitooli-gosacáridos y N-
acetil- farmacéuticamente valiosos.re-glucosamina (Dahiya et al. 2006) Se
han propuesto y discutido los posibles roles de la quitinasa fúngica (Duo-
Chuan 2006) La quitinasa desempeña funciones autolíticas, nutricionales,
morfogenéticas y parasitarias y regula las funciones fisiológicas y
biológicas (Seidl 2008; Hartl y col. 2012) Las revisiones de las quitinasas
fúngicas ya han destacó la diversidad de estas enzimas (Gooday 1994;
Duo-Chuan 2006), y los recientes avances en genómica y Las técnicas
proteómicas y los enfoques interdisciplinarios permitirán la investigación
de toda la gama de quitinasas fúngicas. Los estudios futuros deberían
centrarse en el descubrimiento de nuevas quitinasas, particularmente de
hongos ambientales extremos para expandir el conocimiento sobre este
grupo de enzimas y sus funciones versátiles.
Producción de compuestos antifúngicos.
El control biológico ofrece una alternativa ecológica al uso de pesticidas
para controlar las enfermedades de las plantas y es una necesidad
apremiante para la agricultura en el nuevo sigloEmmert y Handelsman
1999) El control biológico utilizando microorganismos productores de
compuestos antibióticos y antifúngicos contra las enfermedades de las
plantas ofrece una poderosa alternativa al uso de productos químicos
sintéticos que son peligrosos para los humanos (de Vrieze 2015) En el
presente estudio, las levaduras aisladas se seleccionaron sobre la base de
sus mecanismos PGP directos ejecutados a través de la acción de
compuestos antifúngicos difusibles (coinoculación directa) o volátiles
(compartimentos separados). Sin embargo, un método analítico preciso,
como la microextracción en fase sólidamicromatografía de gasesmiSe
debe aplicar espectrometría de masas para confirmar si los compuestos
volátiles fueron producidos por estas levaduras.
445
Interacciones entre levaduras y plantas productoras de IAA
Las interacciones de plantas y hongos han sido un área de interés
sustancial porque el conocimiento de estos procesos puede conducir a
prácticas agrícolas amigables con el medio ambiente. La evidencia ha
indicado que las levaduras productoras de IAA juegan un papel vital en la
promoción del crecimiento y desarrollo de las plantasEl-Tarabily
& Sivasithamparam 2006) Por ejemplo, el productor de IAA La cepa
Candida tropicalis SSm-39 aumentó el crecimiento y el rendimiento del
maíz (Mukherjee y Sen 2014) En comparación con los controles no
inoculados, la calidad del grano de las plantas inoculadas mejoró en un
85%, como lo indica el contenido mejorado de carbohidratos y proteínas.
C. tropicalis HY (CtHY), una levadura del suelo, estimuló el crecimiento
de las plántulas de arroz (Amprayn et al. 2012) Los experimentos de
laboratorio revelaron que CtHY produce pequeñas cantidades de IAA. La
aplicación de CtHY en semillas germinadas de arroz dio como resultado
un crecimiento superior de las raíces y aumentó el peso seco de las raíces
inoculadas en 16mi35% en comparación con la de los controles no
inoculados. Cyberlindnera saturnus, una levadura endofítica productora de
IAA, mejoró el crecimiento de las plantas de maíz, como lo indican los
aumentos en el peso seco y la longitud de las raíces y brotes (Nassar et al.
2005) Anteriormente informamos que Ustilago esculenta JYC070 exhibió
una alta producción de IAA (Dom et al. 2014) El número de raíces
laterales de las plántulas de Arabi-dopsis cocultivadas con U. esculenta
fue 10 veces mayor que el de la cepa de control negativo Hannaella cop-
rosmaensis. En este estudio, las cepas de levadura productoras de IAA,
como JYC099, 367 y 385, promovieron el crecimiento de brotes y raíces
(Higos 3 y 4) JYC385 produjo la mayor cantidad de IAA entre las cepas
de levadura seleccionadas (Tabla 2) En consecuencia, el número de raíz
lateral, el alargamiento del tallo, el peso fresco y el contenido de clorofila
de las plantas de Nicotiana benthamiana inoculadas con levadura JYC385
fueron mayores que los de N. ben-thamiana cocultivados con cualquier
otra cepa. Las cepas JYC361 y 089 con capacidad débil de producción de
IAA no ejercieron efectos de promoción en el crecimiento y desarrollo de
las plantas. Por lo tanto, los rasgos que promueven el crecimiento de los
microbios PGP están potencialmente correlacionados con su capacidad de
producir IAA. Las levaduras productoras de IAA pueden ejercer efectos
morfofisiológicos beneficiosos en los brotes y raíces de las plantas.
Agradecimientos
Agradecemos a los miembros de los laboratorios Chou y Fu por su
contribución al manuscrito. Este trabajo fue apoyado por subvenciones del
Ministerio de Ciencia y Tecnología (MOST104-2311-B-018-003-MY3 a
S.-F. Fu; MOST104-2119-M-003-003 a W.-T. Fang, B.-Y. Cheng y J.-Y.
Chou; MOST104-2311-B-018-001 a J.-Y. Chou). Los autores agradecen
al Sr. Sheng-Yu Wu por su asistencia sobre el terreno.
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