Oxido-

reducción Tema 2: Oxidoreducción biológica

y fosforilación oxidativa

Oxidorreducción biológica

•Potencial de oxido-reducción y ∆ de energía libre.

•Cadena respiratoria: composición y localización subcelular

•Fosforilación oxidativa: teoría quimiosmótica

• Acoplamiento y rendimiento energético en la formación de ATP

•ATP-sintasa: estructura y función

 Oxido-
reducción Tema 2: Oxidacción biológica de nutrientes
NADH + H+
NADH transporta e- a la cadena respiratoria
El transporte de e- genera gradiente de H+ en la membrana
Esos H+ activan a la ATP-sintasa (fosforilación oxidativa)

Objetivos de aprendizaje:
Entender que la oxidación del NADH transcurre en múltiples pasos
efectuada por tres complejos de proteínas transmembrana con varios
grupos red-ox activos en cada uno.
Comprender que la Coenzima Q y el citocromo c son transportadores
móviles de e- entre los complejos proteícos.
Comprender que los H+ son traslocados a través de la membrana
mitocondrial por los complejos I, III y IV.
Entender como la energía libre de la oxidación del NADH se conserva
como un gradiente electroquímico de H+.
 APLICAR EL BALANCE: 2NADH + 2H+ + O2
4e-
4 H2O
Entender que la reducción de cada molécula de O2 por los e- aportados
por 2 NADH hasta formar 2 H2O , requiere 4 e- y produce la translocación
de 20 H+ al espacio intermembranoso.
 Oxido-reducción biológica
Las células oxidan los nutrientes orgánicos para generar ATP,
necesario para su trabajo útil.
Perdida de electrones = Oxidación A A+ + e -
Ganancia de electrones = Reducción reducido oxidado
El flujo de electrones en el metabolismo se canaliza a través de
intermediarios metabólicos y de transportadores (COENZIMAS REDOX) que
convierten la energía del flujo de e- (∆ Eo) en energía química (∆ Go): ATP.
Ejemplo: La glucosa es un nutriente reducido, una fuente de electrones. Su
degradación producirá NADH

CO2

NAD+ NADH ∆ Eo
FAD FADH2

∆ Go
∆ Go
H2O
ATP
 Reacciones de oxidación reducción

A + B+ A+ + B
reducido oxidado oxidado reducido

A: pierde e-, se oxida Reductor

B: gana e-, se reduce Oxidante

A (red) A (ox) + e-
B (ox) + e- B (red)

Fe2+ + Cu2+ Fe3+ + Cu+

Fe2+ Fe3+ + e-
Cu2+ + e- Cu+
Fe2+ (donador) / Fe3+ (aceptor): par redox conjugado

NADH (donador) / NAD+ (aceptor): par redox conjugado

 Potencial de reducción: Eo

Potencial de reducción ( E ): tendencia de un reductor a ceder e-

 En condiciones estándar ( Eo ):
25º C, 1 atm presión, [oxidante] y [reductor] = 1 M

H+ + e- ½ H2 Eo = 0 V Patrón o par estandar

 En condiciones fisiológicas pH = 7 ( Eo´ )

Eo(H+/1/2H2) = 0,42 V

•Tendencia a adquirir e- > par estándar Eo´ + Mucha afinidad por e- ->OXIDANTE

•Tendencia a adquirir e- < par estándar Eo´ - Poca afinidad por e- ->REDUCTOR

Los e- fluyen desde las especies reductoras, con un Eo´ más electronegativo (- Eº’)
a las especies oxidantes, con un Eo´ más electropositivo (+ Eº’).
 Potencial de reducción e ∆G

RT [aceptor electrones]
E = Eo + ln
nF [donador de electrones]

n = nº de e- cedidos
F = cte de Faraday = 96,48 kJ/mol V

∆G ) capaz de realizar trabajo útil

 El flujo de e- produce una energía libre (∆

 ∆Go´´ es proporcional a ∆Eo´

∆Go´ = - n F ∆E
∆ o´ ∆G = - n F ∆E
∆

∆Eo´ + ∆Go´´ - Reacción espontánea

 Potencial de reducción e ∆G
Los potenciales de reducción estándar de los compuestos permiten
calcular la ∆Gº de la reacción redox
Piruvato + NADH + H+ Lactato + NAD+
 Semirreacciones:
Piruvato + 2H+ + 2e- Lactato Eo´ = -0,19 V
NADH - 2H+ - 2e- NAD+ Eo´ = -0,32 V

∆Go´ = - n F ∆E
∆ o´

n = nº de e- cedidos = 2, F = 96,48 kJ/mol V

∆Eo´ = Eo´ (aceptor e-) – Eo´ (donador e-) ∆Eo´ = -0,19 – (-0,32) = 0,13 V
∆Eo´ = Eo´ (oxidante) – Eo´ (reductor) Piruvato acepta e- del NADH

∆Go´´ = -2 (96,5 kJ/mol V) (0,13 V) = -25,09 kJ/mol

La reacción es espontánea en condiciones estándar: [ ]= 1M, 25ºC y pH 7
Respiración mitocondrial
• Las células aeróbicas consumen O2 y lo
reducen a H2O con los e- procedentes de la
oxidación de nutrientes (NADH, FADH2).

 TRANSPORTE ELECTRÓNICO MITOCONDRIAL:

Se da en la membrana interna mitocondrial a través
de una serie de transportadores de e- (componentes
de la cadena respiratoria) que llevan los e- desde las
coenzimas reducidas (NADH, FADH2) hasta el O2.

 Durante la transferencia de e- desde el NADH, o

el FADH2 , hasta el O2 se genera un bombeo de H+
hacia el espacio intermembranoso, originando una
fuerza protomotriz (H+-motriz) que activa a la ATP-
sintasa.

• La fosforilación oxidativa consiste en

la fosforilación del ADP hasta ATP por la
ATP-sintasa, activada por los H+.
• constituye la fuente más importante de ATP
en los organismos aerobios
 Mitocondria
La fosforilación oxidativa se produce en la membrana
interna de la mitocondria

La mitocondria posee dos membranas

muy estructuradas, que rodean a la
matriz.

Membrana externa
 Es bastante permeable a iones y
moléculas pequeñas

Membrana interna
 Es impermeable a casi todos los iones,
Se pliega en crestas
 Contiene los componentes de la Crestas
cadena de transporte de e- Espacio intermembrana
 y la ATP sintasa
Matriz

Matriz
 Interior mitocondrial donde tienen lugar
el ciclo del ácido cítrico y la oxidación de
Membrana externa
los ácidos grasos, etc.
Membrana interna
 La oxidación del NADH se produce en
la cadena respiratoria mitocondrial
Formada por
Complejos proteicos
 1.- Transporte de
electrones desde el NADH

• Complejo I: NADH CoQ oxidorreductasa

• Complejo III: Ubiquinol citocromo c oxidorreductasa

• Complejo IV: Citocromo c oxidasa

Compuestos
 2.- Transporte de electrones redox
desde el FADH2

• Complejo II: Succinato CoQ

reductasa
• Otros
 Componentes de la cadena respiratoria
Transportadores de electrones
 Coenzimas:
NAD+
Coenzimas SOLUBLES de enzimas deshidrogenasas
NADP+

FMN
UNIDAS covalentemente a flavoproteínas (grupo prostético)
FAD

 Quinonas: Transportadores en medio no acuoso (membranas)

Ubiquinona = Co Q = Q

 Citocromos:
Proteínas con grupo prostético hemo

 Centros ferro-sulfurados
Proteínas con Fe asociado a átomos de S
 algunos transportadores de e- están asociados a proteínas y forman lo
que llamamos Complejos: I, II, III y IV
 Coenzimas transportadoras de e- :
DINUCLEOTIDOS DE ADENINA y NICOTINAMIDA

NADH (coenzima soluble)

NADH
NAD+ (reducido)
(oxidado) NAD+ + 2H+ + 2e- NADH + H+
Adenina

AH2 + NAD+ A + NADH + H+

 Coenzima de oxidorreductasas o
deshidrogenasas
 Responsable entrada e- por el complejo I
 MONONUCLEOTIDOS DE FLAVINA y
DINUCLEOTIDOS DE FLAVINA y ADENINA

FMN y FAD (coenzimas NO solubles,

ligadas a proteínas)

Anillo de isoaloxazina

FMN .
FADH (FMNH )
. FADH2 (FMNH2)
(totalmente reducido)
(semiquinona)
FAD

FAD + 2H+ + 2e- FADH2

FMN + 2H+ + 2e- FMNH2

 FMN presente en complejo I

 FADH2 entrada de e- por el complejo II
COENZIMA transportadora de e- :
Ubiquinona, Coenzima Q, CoQ
Unidades de ISOPRENO

Ubiquinoa (Q)
Totalmente oxidada

 Lípido isoprenoide

Radical Semiquinona
Parcialmente oxidado  Difunde libremente por la membrana
QHo

 No está ligado a ninguna proteína

Ubiquinol
 Puede transferir 1 e- o 2 e-
Totalmente reducido
QH2
Método: Extraible con isooctano
 Proteínas con transportadores de e- :
Citocromos (HEMO)

 Proteínas con un grupo hemo

 Transfieren 1 e- mediante la
oxidorreducción del Fe (2+, 3+)
 Clasificación según su espectro de absorción: a, b, c
 Citocromos a y b están en LOS complejos III y IV
 Citocromo c es una proteína soluble, se asocia con la membrana interna
 Proteínas con centros
ferro-sulfurados

 Proteínas con Fe en forma NO HEMO sino asociado a átomos de S

 Transfieren 1 e- mediante la oxidorreducción del Fe

Fe-S 2Fe-2S 4Fe–4S

 TRANSPORTE en
Complejo I:
NADH CoQ reductasa

Transfiere 2 e-
desde el NADH
hasta la CO Q,

pasando por
FMN y por
grupos
ferosulfurados
(Fe-S)
 TRANSPORTE en
Complejo II:

• succinato CoQ reductasa

• Glicerol-3-P desHasa
• Acil-CoA desHasa

Transfieren 2 e- desde
diversos sustratos
(succinato, glicerol-3-P, Acil-
CoA) que son oxidados por
estas enzimas, y los e- van

a través de FAD y
por grupos ferrosulfurados

hasta la CoQ
 TRANSPORTE en
Complejo III:
CoQ cit c reductasa

Transfiere 2 e-
desde la CO Q
hasta el cit c,

pasando por
los cit b y c1 y
por grupos
ferosulfurados

Los e- se
transfieren aquí
de 1 en 1
 TRANSPORTE en
Complejo IV:
Cit c oxidasa

Transfiere e- desde
el citocromo c (4
viajes) hasta el O2,

pasando por dos

grupos de Cu y por
los citocromos a y
a3.
 Secuencia del transporte de e- en la cadena respiratoria

Complejo I

[ H +]
FADH2
Complejo III

[ H +]

Complejo IV

NADH → FMN [ H +]
Q → cito b → cito c1 → cito c → cito a → cito a3 → O2
FADH2
Potenciales de reducción de los pares
red-ox transportadores de e- en la
cadena respiratoria

REACCIÓN E0‘
•NAD+ / NADH + H+ -0.32
•Flavoproteina-FMN (ox) / Flavoproteina-FMNH2 (red) -0.30

Piruvato / Lactato –0.18

Acetaldehido / Etanol -0.16
Oxalacetato / L - malato -0.166

•Coenzima Q (ox) / Coenzima Q (red) +0.04

•Citocromo C (ox) / Citocromo C (red) +0.25
•Citocromo a3 (ox) / citocromo a3 (red) +0.55
•½ O 2 / H2O +0.82
 Determinación de la secuencia con
Inhibidores del transporte electrónico

NADH → FMN
CoQ → cit b → cit c1 → cit c → cit a → cit a3 → O2
FADH2

Rotenona
barbitúricos Amital

Azida
 Inhibidores del T.E.M.
Sugars
Impiden el paso de e- a través de los
transportadores respiratorios, interrumpiendo
Glycolysis en consecuencia la forforilación oxidativa.

TCA Cycle
Rotenona
insecticida

Electron Oxidative
Transport Phosphorylation
 Teoría quimiosmótica de Mitchel: Los Complejo I, III, y IV generan
un gradiente de H+ (fuerza protón-motriz) que que activa la ATP sintasa

La FUERZA
PROTÓN-
MOTRIZ, en el Espacio
espacio intermembrana
intermembrano
so, tiene dos
componentes

El gradiente de Fumarato
carga
Succinato
potencial
eléctrico = ∆Ψ
Mitocondri
a
El gradiente de
[ H+ ]
Potencial Síntesis Potencial
potencial químico de ATP eléctrico
químico = ∆pH guiada ∆ψ
2,3 RT ∆pH / F (dentro por la (dentro
alcalino) fuerza H+- negativo)
motriz)
Balance energético en la cadena respiratoria

A) 2NADH
4e-

O2
H2O

20 H+
6 ATP

B) 2 FADH2
4 e-

O2
H2O

12 H+
4 ATP
 Agentes desacoplantes
DISIPAN LA FUERZA PROTÓN-MOTRIZ y
desacoplan la fosforilación oxidativa del
TEM, por tanto bajan el rendimiento de la
p-DNF síntesis de ATP
p-dinitrofenol
La gramicidina A
es un ionóforo
Los agentes desacoplantes son
sustancias que introducen H+
hacia el interior mitocondrial.
El p-DNF entra en las células en
estado molecular y en el interior se
disocia.
En el espacio intermembranoso (pH
inferior) se protona y entra a la
mitocondria, en el interior hay un pH
superior y se disocia.
UCP1 o termogenina (adiposo pardo)
Obesidad y Proteínas desacoplantes
(UCPs)
 ATP sintasa: la subunidad F0 la ancla a la
membrana y la F1 en la matriz mitocondrial
F1= α3 β3 γ δ ε

El anillo c gira con el paso de H+

γε”
γε provoca cambios
El giro de “γε
conformacionales en las
subunidades αβ F0= a b2 c12
 Mecanismo de actuación T
de la ATP sintasa L

O
Las 3 unidades β de la ATP sintasa
no son equivalentes, la rotación de
“γγ−ε” las cambia la conformación.

Según va girando el complejo por el O

L
paso de H+ las unidades β cambian O
de conformación: T
L: une ADP y Pi
T: sintetiza ATP L T
O: libera ATP
 Transportadores de iones a través de la
membrana interna
Espacio DENTRO de la
intermembranoso Matriz

El ATP sintetizado en el Traslocasa de

interior nucleotidos de
adenina
mitocondrial debe (antiporte)
de exportarse al
citoplasma para
cumplir allí con las ATP
necesidades propias sintasa
-Esto se hace con un
sistema antiporte:
1 ATP sale y 1ADP
entra a refosforilarse Traslocasa
de fosfato
- Hay otro sistema (simporte)
simporte que importa
Pi y H+