Endosporas bacterianas

Las endosporas son formas de reposo,

con muy bajo metabolismo
(criptobiósis, viabilidad de hasta 5000
años!!).

Debido a su estructura y composición,

son capaces de resistir condiciones
ambientales, físicas y químicas muy
agresivas, como radiaciones UV, calor,
sequedad, disolventes, etc.

Se desarrollan dentro de células

bacterianas Gram positivas como
Bacillus, Clostridium, Sporosarcina.
 Endosporas bacterianas
Se induce la esporulación cuando la bacteria
detecta bajos niveles de nutrientes (C, N, P).
La espora se forma dentro de la célula
vegetativa (endospora).
Al final de la esporulación, la célula madre se
autolisa, liberando la endospora.
La endospora resiste periodos largos en
ausencia de nutrientes y bajo condiciones de
estrés ambiental.
 Cuando las condiciones son apropiadas, la
espora germina dando lugar a una célula
vegetativa.
La esporogénesis es un proceso de
diferenciación que apareció evolutivamente en
bacterias para lograr la supervivencia en
ausencia de nutrientes.
 Criterios taxonómicos

•Su diámetro relativo al de la célula madre

~Deformantes
~No deformantes

•Localización
~Subterminales
~Centrales
~Terminales
 Partes de la endospora

Pared

Corteza
Protoplasto o núcleo

Cubiertas
 Protoplasto
(núcleo de la endospora)

DPA

DPC

Sus componentes están inmovilizados en una matriz de quelatos

de ácido dipicolínico (DPA) con iones Ca2+ (dipicolinato de
calcio, DPC), que llega a representar el 15% del peso.
 Protoplasto
(núcleo de la endospora)

•Su citoplasma se encuentra deshidratado

(10 - 30% de agua)

•Contiene el cromosoma, pocos ribosomas,

ARNt, ARN polimerasa, mono y di nucleótidos
pero no tri nucleótidos (no ATP).

•Carece de componentes inestables:

~No ARNm
~No enzimas biosintéticas
~No aminoácidos ni bases nitrogenadas
~No cofactores reducidos (NADH, CoA, etc.)
 Protoplasto
(núcleo de la endospora)

•Contiene una gran cantidad de

pequeñas proteínas especiales,
solubles en ácido, (SASP) que
mantienen el pH más bajo que en
la célula vegetativa.
~Durante la germinación se
usarán como fuente de amino
ácidos.
~Acomplejan el ADN: protegen
de las radiaciones UV.
•Fuente de energía:
3-fosfoglicerato→PEP
Membrana interna de la espora.
Rodea al protoplasto, membrana citoplásmica que carece de
fluidez (estructura policristalina).
 Pared de la endospora
•A base de un péptidoglucano similar al de la célula vegetativa.
•Estructura muy delgada.
•Constituye lo que será la pared de la futura célula vegetativa.
•Se sintetiza a partir de la pre-espora

Pared
 Corteza o córtex
• Se origina a partir de la célula
madre.

• Tiene un bajo grado de

entrecruzamiento, por ello su
estructura es más laxa, floja y
flexible que el péptidoglucano
normal, además es capaz de
expandirse o contraerse.
Durante la germinación de
autolisa rápidamente.
• La lactama del murámico
presenta gran resistencia a la
lisozima.
 Corteza o córtex

Córtex

• Al microscopio electrónico: gruesa, transparente a electrones, en

láminas concéntricas, formado de un péptidoglucano con
características diferentes:
~ 30% del NAM con tetrapéptidos, pero con bajo grado de
entrecruzamiento
~ 15% del NAM tiene solamente L-Ala
~55% lactama del ácido murámico
Cubiertas •Compuestas principalmente de
proteínas (30%).

•Formada de una o más proteínas de

tipo queratina, ricas en cisteína y
amino ácidos hidrofóbicos.

•Estructura insoluble e impermeable

que impide la entrada de numerosos
agentes químicos agresivos,
incluyendo tóxicos.

•Tiene lacasa, SOD. Por eso es

resistente a H2O2, ozono, etc. Tiene
melanina vs. UV.

•Su aspecto es voluminoso, distinto

según especies. Tiene partes densas a
los electrones.
 Exosporio
• Estructura membranosa
transparente, a modo de
saco delgado y flojo a
base de proteínas,
polisacáridos complejos y
lípidos.
• Muy resistente a enzimas
proteolíticas
• En B. anthracis esta
formada por una proteína
semejante a colágeno
(BclA).
• También tiene enzimas
como inosina hidrolasa y
Fe/Mn SOD.
Esporulación
• Estímulo desencadenante de la
esporulación: estado de inanición
(carencia de nutrientes)
• Dura 7-8 horas en Bacillus subtilis o en
B. megaterium.
• Las fases se nombran con un número
romano (I, II,....VII). Se suele indicar los
límites de tiempo en los que
transcurre la fase (ej: t2-t3 significa
que la fase transcurre entre la 2ª y la
3ª hora)
 Fase I (t0-t1)
•Los dos cromosomas se condensan
formando un filamento.
•Se inicia la generación de dos
tabiques, cada uno cerca de un
polo.
•Hay degradación de proteínas
viejas y los aminoácidos se emplean
en fabricar proteínas específicas de
la esporulación.
•Existe síntesis y liberación al medio
de antibióticos y exoenzimas
(proteasas, amilasas, ribonucleasas,
etc.).
 Fase II (t1-t2)

•Se termina el septo acéntrico en uno de los polos

(el otro septo no se completa y aborta).
•Cada nucleoide queda en un:
~Compartimiento pequeño, la pre-espora.
~Compartimiento grande la célula madre.
•Continúa la síntesis de antibióticos y exoenzimas.
 Fase III (t2-t3)
•Formación del protoplasto de la
espora debido a:
~Degradación selectiva del PG
del septo
~La membrana citoplásmica
de la célula madre avanza
hacia el polo, envolviendo a la
pre-espora
•El resultado es que la pre-espora
posee dos membranas, con
polaridad opuesta.
•La síntesis de proteínas continúa
en la célula madre, pero se
detiene en la pre-espora.
 Fase IV (t3-t4)
• Formación de la corteza por
deposición de PG de la célula
madre entre las dos membranas
de la pre-espora. Hay
deposición del PG de la pared,
procedente de la pre-espora.
• La espora puede verse ya
refráctil en preparaciones
microscópicas en fresco.
• Inicia la síntesis de DPA y
acumulación de Ca2+.
• Inicia la síntesis del exosporio.
 Fase V (t4-t5.5)

•Hay deposición de material de las

cubiertas por fuera de la membrana
externa de la espora.
•Continúa la acumulación de DPA,
que secuestra iones Ca2+ para formar
el DPC en el protoplasto.
 Fase VI (t5.5-t7)
•Maduración de pre-espora a endospora.
•Maduración de la corteza y cubiertas.

•El citoplasma se
hace más
homogéneo y
denso a los
electrones.
•Presenta
resistencia al calor,
al cloroformo, a las
radiaciones UV y a
la lisozima.
 Fase VII (t7-t8)
•Hay autolisis de la célula madre y liberación de la espora.
•El exosporio pierde agua y se pega a las cubiertas.
 Propiedades biológicas de las endosporas
• Hipometabolia. La tasa metabólica más baja.
• Dormancia. Inerte a la presencia de sustratos exógenos, la
espora sólo perderá la dormancia cuando se haya activado
para la germinación.
• Resistencia al calor. Es una consecuencia de los cambios
fisiológicos que condujeron a la deshidratación como medio
para lograr la hipometabolia y la dormancia. Algunas resisten
120ºC durante 15 minutos lo que condiciona los parámetros
para esterilizar materiales.
 Propiedades biológicas de las endosporas
• Deshidratación. Se observa por la refrigencia al microscopio
óptico. Mecanismo:
~ El DPA va entrando al protoplasto de la espora
~ El Ca2+ entra a la espora formando quelatos de DPC.
~ La corteza se queda sin cationes, las cargas negativas del
PG cortical se repelen, la corteza se expande, se topa con
las cubiertas y hay extracción de agua del protoplasto.
~ El protoplasto queda muy deshidratado, con sus
componentes inmovilizados.

Micrografía electrónica de endosporas de Bacillus anthracis

 Propiedades biológicas de las endosporas
• Resistencia a los rayos UV. Se debe a:
~ La absorción de R-UV por las cubiertas (melanina).
~ La presencia del DPC.
~ La protección del ADN por las proteínas SASPs .

• Resistencia a los agentes químicos.

Debida principalmente a la gran
impermeabilidad de las cubiertas.

¿ Es posible una
contaminación del suelo de
Marte por endosporas
terrestres?
Las endosporas piden
“aventón” a Marte.
Germinación
de la
endospora

Fases:
• Pre-activación
• Activación
• Germinación
• Crecimiento ulterior (entrada
en fase vegetativa)
 Pre-activación
• Las cubiertas deben
erosionarse, de modo natural
por envejecimiento
progresivo. Artificialmente se
puede lograr:

~ Por calentamiento a100ºC

durante unos minutos
~ Aplicando radiaciones
ionizantes
~ Con tratamiento a pH bajo
~ Tratamiento con sustancias
con grupos –SH libres como Electron micrograph of Bacillus
anthracis endospores (a) Viable and
mercaptoetanol (b) following lethal plasma exposure.
 Activación
• Etapa aún reversible.
• Metabolismo aún latente.
• Desencadenada por un agente
germinante (iones inorgánicos como
Mg2+o Mn2+, L-ala, glucosa u otros
azúcares, adenina u otras bases
nitrogenadas).
~ El germinante es detectado por un receptor alostérico en la
membrana interna de la espora.
~ El receptor activado adquiere capacidad proteolítica.
~ Rompe la pro-enzima unida covalentemente al PG de la corteza.
~ La enzima reconoce al anillo del NAM e hidroliza el PG de la
corteza.
• Empieza a entrar agua al protoplasto, la espora pierde la
refringencia y comienza a perder resistencia al calor.
Germinación •El proceso se hace ya irreversible,
se rompe la dormancia, hay
metabolismo, pero es endógeno:
~ Se pierde DPA y se supone la
pérdida de Ca2+.
~ Ca2+ pasa a la corteza y
neutraliza cargas negativas del
PG hay rehidratación e
hinchamiento del protoplasto y
más contracción de la corteza.
~ El 3-fosfoglicerato → 2-
fosfoglicerato → PEP → ATP
~ SASPs se hidrolizan por una
proteasa activa y los
aminoácidos se reutilizan para
fabricar nuevas proteínas.
~ Comienza la transcripción de
genes vegetativos.
 Terminación
• El metabolismo ya se hace exógeno.
• Hay síntesis de ADN.
• El protoplasto crece.
• La pared de la espora sirve como precursor para la pared de la
célula vegetativa. La célula vegetativa “sale” rompiendo las
cubiertas.
Cuerpos parasporales
• Son producidos en algunas
especies como Bacillus
thuringiensis y B. popilliae.
• Son cristales de proteína,
octaédricos (bipiramidales)
formados en el esporangio
durante la esporulación.
• Los cristales se forman por
agregación de subunidades
de una glucoproteína de 120
kD (proteínas Cry) durante la
fase IV.
• Son insecticidas ecológicos,
específicos frente a larvas de
coleópteros y dípteros.
Toxinas Cry
 Toxinas Cry

Modo de acción:
• La oruga ingiere materia vegetal con bacterias esporuladas
productoras de Cry.
• La proteína Cry se disuelve en el tracto digestivo de la oruga. El
pH alcalino provoca la proteólisis que activa a la toxina.
• La toxina altera la permeabilidad del epitelio intestinal, pasa a la
hemolinfa lo que provoca la parálisis y muerte de la larva.
 Bacillus anthracis

• Bacilo Gram positivo.

• Esporulado.
• Causa el carbunco o ántrax en
animales herbívoros.
• Es de origen geofílico.
Bacillus anthracis

Produce tres tipos de toxinas:

• El antígeno protector (PA)
• El factor de edema (EF) y
• El factor letal (LF)
Las combinaciones binarias y
ternarias causan toxicidad
celular. Inhiben el sistema
inmune causando la muerte
al paciente.
Clostridium tetani
• Causante de tétanos
• Toxina (Tetanospamina)
• Afinidad por sistema nervioso
(neurotoxina)
• Bloquea neurotransmisores
• Provoca espasmo muscular
 Clostridium botulinum
• Botulismo
• Intoxicación alimentaria
• Alimentos enlatados pH ácidos
(vegetales)
• Toxina resistente al calor
• Parálisis flácida
• Inhibe a la acetilcolina
Clostridium botulinum
Clostridium botulinum

Food Microbiology 28 (2011) 183-191

 Clostridium botulinum

Food Microbiology 28 (2011) 183-191

Clostridium perfringens
• Intoxicación alimentaria
(Diarrea, enterotoxina)

• Gangrena gaseosa
(hemolisinas, proteasas,
lipasas, colagenasas,
hialuronidasas, etc.)
Geobacillus stearothermophilus
•Bioindicadores de
esterilización en autocalve

Negativo Positivo
Esporas bacterianas
 Esporas fúngicas

Reproducción sexual en
hongos filamentosos y
levaduriformes

Zigosporas

Ascosporas Basidiosporas
 Quistes o Cistos bacterianos

Quistes de Azotobacter

Se producen en algunas especies por engrosamiento de la pared

celular de la célula vegetativa, por deposición de nuevos
materiales sobre la membrana citoplásmica, al mismo tiempo que
se acumulan materiales de reserva en el citoplasma. Poseen
metabolismo endógeno y resisten el calor, la desecación y los
agentes químicos más que la célula vegetativa, pero menos que
las endosporas.
 Mixobacterias
•Microquistes de Mixobacterias,
llamados mixosporas.

•Sus envolturas constan de una

corteza, rodeada de cubiertas
(interna y externa).

•Estas cubiertas se componen de

una glucoproteína muy rica en
polisacáridos.
 Mixobacterias

Nature Reviews Microbiology 1, 45-54 (October 2003)

Quistes de Eucariotes

Entamoeba histolytica
Quistes de Eucariotes