Informe N°6: Preparación de medios de cultivo

I. INTRODUCCIÓN

La preparación de los medios de cultivo se realiza con la finalidad de capturar ciertos

tipos de microorganismos, de los cuales algunos pueden captar masas de diferentes
tipos de microorganismos, como también grupos selectivos de estos.
Según Olivas E. y Alarcón L. (2001) es fundamental que se lleve a cabo esta
preparación lo más esterilizado posible para así evitar contaminaciones en el medio a
cultivar y tomar precauciones en caso de alguna contaminación en las sustancias.
El presente trabajo a realizar trata sobre la preparación de medios de cultivo. De los
cuales en la preparación y/o formulación de los medios de cultivo se puede distinguir
en medios definidos y medios complejos. Los medios definidos proveen nutrientes
requeridos para el crecimiento en la forma de compuestos químicos de concentración
conocida; por otro lado el medio complejo contiene todos los nutrientes necesarios
para el crecimiento de microorganismos que pueden o no tener concentraciones
conocidas.
Por otro lado, Rodríguez, E. et.al. (2005) relatan que de acuerdo al tipo de
microorganismo que se quiere cultivar los medios pueden clasificarse en; comunes:
Los medios de cultivo en este tipo son: agar nutritivo, caldo nutritivo, agar nutritivo,
etc; especiales: pueden considerarse a los medios enriquecidos o mejorados,
selectivos y diferenciales.
Dependiendo de la técnica elegida, los medios pueden ser preparados de forma
líquida, como también sólida. En este caso las preparaciones que realizamos en el
laboratorio se trataron de medios líquidos. Los cuales fueron llevados al punto de
ebullición del agua para ayudar su solubilidad de estos medios.
El objetivo de esta práctica fue preparar y esterilizar medios de cultivo de diferentes
características para el cultivo de microorganismos (Correa, 2018), para así obtener
diversos medios de cultivo que favorezcan el crecimiento de diversos
microorganismos.

II. MATERIALES Y MÉTODOS

Materiales:

- Medios de cultivos o ingredientes deshidratados

- Agua destilada
- Algodón y gasa
- Balanza
- Erlenmeyer
- Espátulas
- Plumón indeleble
- Probetas de 100 mL
Métodos

a) Caldo nutritivo (extracto de carne 0,3% y peptona 0,5%)

Se pesó con un papel de hoja bond la cantidad de medio deshidratado
suficiente para preparar 150 ml de caldo nutritivo luego se colocó el polvo en
un erlenmeyer de 250 ml limpio y se agregó cuidadosamente el agua destilada
en la probeta para así mezclar la preparación finalmente se tapó el erlenmeyer
con tapones de algodón para llevarlo a autoclave.

b) Agar nutritivo (Extracto de carne 0,3%, peptona 0,55 y agar 1,5%)

Se pesó con un papel de hoja bond la cantidad de medio deshidratado
suficiente para preparar 150ml de caldo nutritivo luego se colocó el polvo en
un erlenmeyer de 250ml, después se agregó a 1.56 gramos de agar y se
agregó cuidadosamente el agua destilada en la probeta para así mezclar la
preparación finalmente se tapó el erlenmeyer con tapones de algodón para
llevarlo a autoclave.

c) Agar Mac Conkey (Peptona 1,7%, proteosa-peptona 0,3 %, lactosa 1%, sales
biliares 0,15%, NaCl 0,5%, agar 1,5%, rojo neutro 0,003% y cristal violeta
0.0001%)
Se realizaron los mismos pasos teniendo en cuenta que los pesos de los
componentes son diferentes al tener concentraciones diferentes.

d) Agar Manitol Salado (Extracto de carne 0,1%, proteosa-peptona 1,0%, NaCl

7,5%, agar 1,5% y rojo fenol 0.0025%)
Se realizaron los mismos pasos teniendo en cuenta que los pesos de los
componentes son diferentes al tener concentraciones diferentes.

e) Agar Almidón (Peptona 1%, K2HP4 0,5%, almidón 0,3% y agar 1,5%)
Se realizaron los mismos pasos teniendo en cuenta que los pesos de los
componentes son diferentes al tener concentraciones diferentes.

f) Agar gelatina (Peptona 0,1%, extracto de levadura 0,3%, gelatina 0,4% y agar
1,5%)
Se realizaron los mismos pasos teniendo en cuenta que los pesos de los
componentes son diferentes al tener concentraciones diferentes.
III. RESULTADOS

Fig. 1: Medio de cultivo caldo Fig. 2: Medio de cultivo agar

nutritivo nutritivo
 Fig.3: Medio de cultivo Agar Mac Conkey Fig. 4: Medio de cultivo Agar Manitol
Salado

Fig. 5: Medio de cultivo Agar Almidón Fig. 6: Medio de cultivo Agar gelatina

IV. DISCUSIONES

Caldo Nutritivo

Este tipo de medio se caracteriza por no ser un medio de cultivo selectivo, en la

práctica se utilizo una receta basada en la adición y mezcla de extracto de carne 0.3%
y peptona al 0.5%. La receta constituyen la fuente de carbono y nitrógeno necesarias
para el adecuado desarrollo bacteriano. Puede ser utilizado además, como pre-
enriquecimiento en la búsqueda de Salmonella spp. a partir de alimentos, ya que
permite recuperar células dañadas, diluir metabolitos tóxicos y sustancias inhibitorias
(Laboratorios Britania S.A., 2015).

Como tal este medio de cultivo no es el más recomendado cuando se desea extraer
y analizar una especie de bacteria en específico dentro de una muestra por la razón
que en este medio pueden proliferar varios tipos de colonias con facilidad.

Agar Nutritivo

Es un medio sólido que se prepara añadiendo 12 gr de agar agar a un caldo usual.

Existen diversas clases de agar nutritivo comercializadas: agar nutritivo, agar de
infusión de cerebro-corazón (BHI agar), agar triptona de soja (TSA), agar brucella,
agar columbia, agar GC, entre otros.

El medio agar nutritivo contiene extracto de carne, peptona y agar. Según Becton,
Dickinson and Company (2014), el extracto de carne contiene sustancias solubles en
agua incluidos los carbohidratos, vitaminas, compuestos de nitrógeno orgánicos y
sales. Las peptonas son la fuente principal de nitrógeno orgánico, en particular
aminoácidos y péptidos de cadena larga. El agar es el agente solidificante.

El agar nutritivo y el caldo nutritivo son usados para multiplicar gérmenes poco
exigentes, especialmente en la investigación bacteriológica de agua potables, aguas
de uso industrial, aguas residuales, alimentos y productos estimulantes, entre otros.
Estos dos medios de cultivo tienen otras aplicaciones, tales como: uso en cultivo y
conservación de cepas, determinación de sensibilidad y resistencia a antibióticos,
comprobación de la esterilidad, como base de medios de cultivo que contienen suero,
sangre y otro fluidos; también se usan como base de medios de cultivo especiales
(Olivas E., y Alarcón L., 2001).

Agar Mac Conkey

El agar Mac Conkey contiene peptona, proteosa peptona, lactosa, sales biliares, NaCl,
agar, rojo neutro y cristal violeta. Según Laboratorios Britania S.A. (2015), las
peptonas aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la lactosa es
el hidrato de carbono fermentable y la mezcla de sales biliares y el cristal violeta son
los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva
y finalmente el agar es el agente solidificante. La diferenciación de los
microorganismos entéricos se logra según Becton, Dickinson and Company (2003),
mediante la combinación de lactosa la cual fermenta y el indicador de pH rojo neutro.

Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos aerobios y

anaerobios facultativos a partir de muestras clínicas, aguas y alimentos, como por
ejemplo: las especies de la familia Enterobacteriaceae. Según Valtek S.A. (2015), los
aislados de bacterias coliformes presentan una coloración rosa-rojo típica, que puede
incluir halos de precipitación de sales biliares como resultado de la acidificación por la
fermentación de la lactosa en la zona que rodea las colonias. mientras que las no
fermentadoras de lactosa permanecen incoloras y no producen halos de precipitación,
aún en cercanía de colonias de coliformes.

Agar Manitol Salado

En la práctica realizada para la preparación del agar manitol salado se utilizó extracto
de carne 0,1%, proteosa-peptona 0.1%, NaCl 7,5%, manitol 1,0%, agar 1,5% y rojo
fenol 0,0025%. Según Laboratorios Britania S.A. (2015), el extracto de carne y la
peptona constituyen la fuente de carbono, nitrógeno, vitaminas y minerales mientras
que el manitol es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio el cual tiene
una alta concentración es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora
acompañante, por último el rojo fenol es el indicador de pH y el agar el agente
solidificante.

El agar manitol salado es un medio selectivo usado para el aislamiento de

estafilococos patógenos, especialmente Staphylococcus aureus, a partir de muestras
clínicas, alimentos, productos farmacéuticos, cosméticos y otros materiales de
importancia sanitaria (Durán A. et.al., 2004). Según Britania lab (2015), esto es debido
a su alta concentración salina y diferencial debido a la capacidad de fermentación del
manitol por los microorganismos.

Las bacterias que fermentan manitol y crecen en un medio de alta concentración de

sal producen ácidos que modifica el pH medio y vira el indicador de PH del color rojo
al amarillo como los estafilococos coagulasa positiva (Laboratorios Britania S.A.,
2015). Mientras que los estafilococos coagulasa negativos no fermentan manitol por
lo tanto producen colonias de color rojo y no producen cambio de color en el indicador
de rojo fenol (Laboratorios Conda S.A., 2014).

Según Durán A. et.al. (2004) ya que en el agar manitol salado incluye en su

composición el indicador de pH: rojo fenol siendo este color rojo a pH 8,2 y cuando
cambia a amarillo su pH es por debajo de 6,8; la alta concentración del indicador
puede afectar la calidad del medio de cultivo ya que la mayoría de estos indicadores
son tóxicos para los microorganismos. Además, por la cantidad excesiva de este
indicador proporciona al medio de cultivo una capacidad de buffer adicional y
disminuye la difusión de los ácidos metabólicos.
.
Agar Almidón

En la práctica realizada para la preparación de agar almidón se utilizó peptona 1%;

k2HPO4 0.5%; almidón 0.3 % ;y agar 1.5%. Este medio es utilizado en la selección
de microorganismos productores de amilasas y también en los cultivos de hongos.
Las distintas bacterias elaboran para este fin una cierta variedad de enzimas
extracelulares que segregan el medio.

La actividad amilolítica es revelada colocando al medio unas gotas de solución de

lugol que tiñe al almidón y deja un halo claro en el lugar donde el almidón fue digerido
enzimáticamente (Malajovich M., 2018).
 Por otro lado el agar almidón es un medio rico para el cultivo de microorganismos en
general, crecen una gran mayoría, excepto algunos muy exigentes. Para lo que este
último necesita de alguna alteración en pH para poder cultivar el microorganismo. El
almidón incrementa el desarrollo de neisserias y las reacciones de hemólisis de
algunos estreptococos

Agar Gelatina

En la práctica realizada para la preparación de agar gelatina se utilizó peptona 0,1%,

extracto de levadura 0,3%, gelatina 0,4% y agar 1.5%.

El agar gelatina es un buen medio no selectivo para detectar V. cholerae ya que estos
producen gelatinas as y esto se puede determinar en el agar gelatina y se reconoce
por una aparición de una zona opaca parecida a un halo alrededor de las colonias.
También se pueden detectar vibriones selectivos marinos halófilos semejantes a V.
cholerae (CDC, s.f.)

V. CONCLUSIONES

● Se logró preparar y esterilizar medios de cultivo de diferentes características

para el cultivo de microorganismos.

VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Olivas E., y Alarcón L.. (2001). Manual de prácticas de microbiología básica y

microbiología de alimentos. Ciudad de Juárez: Universidad Autónoma de
ciudad de Juárez.
2. Rodríguez, E. et.al. (2005). Bacteriología general: Principios y prácticas de
laboratorio. Costa Rica: Editorial Universidad de Costa Rica.
3. Sagardoy A.y Mandolesi M. (2004). Biología del suelo. Argentina: Editorial
Universidad Nacional del sur. 329-40p.
4. Laboratorios Britania S.A. (2015). Nutritivo Caldo. Recuperado el 13 de mayo
del 2019:
https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_5a2844b49b1c
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5. Becton, Dickinson and Company. (2014). BBL Nutrient Agar. Recuperado el
13 de mayo del 2019: https://www.bd.com/resource.aspx?IDX=22881
6. Laboratorios Britania S.A. (2015). Mac Conkey Agar. Recuperado el 12 de
mayo del 2019:
https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_5a2834ae226e
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7. Valtek S.A. (2015). Agar MacConkey. Recuperado el 13 de mayo del 2019:
https://andinamedica.com.pe/wp-content/uploads/2016/08/Agar-
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8. Becton, Dickinson and Company. (2003). BD MacConkey II Agar / Columbia
CNA Agar with 5% Sheep Blood (Biplate). Recuperado el 13 de mayo del 2019:
 https://www.bd.com/europe/regulatory/Assets/IFU/HB/CE/PA/ES-PA-
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9. Durán A. et.al. (2004). Propuesta de una modificación en la formulación del
medio agar manitol salado utilizado en el aislamiento de estafilococos de
importancia clínica. Revista Cubana de Medicina Tropical, 56(3). Recuperado
el 12 de mayo del 2019:
http://www.bvs.sld.cu/revistas/mtr/v56_3_04/mtr03304.pdf
10. Laboratorios Britania S.A. (2015). Manitol Salado Agar. Recuperado el 12 de
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11. Laboratorios Conda S.A. (2014). Instrucciones de uso. Recuperado el 13 de
mayo del 2019:
https://www.condalab.com/uploads/media/1062_AGAR_SAL_Y_MANITOL_R
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12. Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades (CDC) s.f.

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https://www.cdc.gov/cholera/pdf/es/Aislamiento-de-Vibrio-cholerae-a-partir-
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13. Melajovich M. Biotecnologia:enseñanza y divulgacion, Guía de
actividades.Disponible en:
https://bteduc.com/guias_es/78_Preparacion_del_medio_de_agar-
almidon.pdf
14.