GUÍA DE PRÁCTICAS

FACULTAD: CIENCIAS E INGENIERÍA EN ALIMENTOS Y CARRERA: INGENIERÍA EN ALIMENTOS

BIOTECNOLOGÍA
NIVEL: OCTAVO ASIGNATURA: BIOTECNOLOGÍA TIPO GUÍA DE PRÁCTICAS: Laboratorio
ALIMENTARIA II
DOCENTE: LILIANA ALEXANDRA CERDA MEJIA CICLO ACADÉMICO: SEPTIEMBRE 2019 - ENERO 2020

I. TEMA:

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE HIDROLASAS

II. OBJETIVO:

Objetivo General:
Comprobar la acción enzimática de hidrolasas mediante métodos cuantitativos y cualitativos.

Objetivos Específicos:
Determinar la actividad enzimática de la lipasa mediante la titulación ácido-base de una emulsión.
Comparar la acción de la papaína mediante el grado de gelificación de una solución en función al tiempo.
III. INSTRUCCIONES:

Todo accidente deberá ser notificado de inmediato.

Toda sustancia química dentro del laboratorio se considerará peligrosa y su manipulación estará sujeta a tal condición.
Prohibido, fumar, consumir alimentos, bebidas, masticar chicle, maquillarse, o usar calzado abierto (tipo sandalias).
Las sustancias, equipos y materiales, deberán ser manejados con el máximo cuidado, de acuerdo a los manuales de uso o de seguridad, según sea el caso.
Durante el desarrollo de las actividades de laboratorio, no deberán hacer bromas, juegos de manos o actitudes impropias que pudiesen originar accidentes.
Es obligatorio reportar de inmediato cualquier desajuste o desperfecto en los equipos.
Utilizar bata de laboratorio en buen estado (ni sucia, ni rota o sin botones).
IV. LISTADO DE EQUIPOS, MATERIALES Y RECURSOS:

Licuadora
Tubos de ensayo
Plancha de calentamiento
Bureta
Soporte
Aceite de oliva
Goma arábiga
Papaya
Gelatina sin sabor
Hidróxido de sodio 0,2 N
Etanol 95 %
V. ACTIVIDADES POR DESARROLLAR:

Determinación titrimétrica de la actividad lipolítica

a) Preparación del sustrato: emulsión de goma arábiga/aceite de oliva. Combinar 10 g de aceite de oliva y 10 g de goma arábida en un vaso de 400 ml. Llevar el volumen a
200 ml con Tampón fosfato de sodio 0,05 M de pH 8,0 (preparado mezclando las soluciones de fosfatos hasta obtener el pH indicado) y homogenizar por 5 min usando una
licuadora doméstica de modo que se produzca un exceso de espuma. Mantener en agitación a baja velocidad durante el uso.
b) Procedimiento. En cada uno de los erlenmeyers, colocar 10 ml de etanol al 95% (v/v) y 2-3 gotas de fenolftaleína al 1% en etanol. De los erlenmeyers uno hay que
utilizarlo para el blanco. En un erlenmeyer con tapa de 100 ml, colocar 50 ml de la emulsión aceite-goma arábiga al 5% (p/v). Añadir una cantidad apropiada de enzima (1/5
de cápsula, molida) para iniciar la lipólisis, Accionar el cronómetro y mantener la muestra con agitación (magnética). A intervalos de reacción adecuados (ej. 5, 10, 15, 20 y
25 min), remover 5 ml de la muestra de reacción y transferirlos a los erlenmeyers que contienen el coctel de titulación preparado inicialmente. Agitar el contenido
inmediatamente para detener la reacción. Las muestras inactivadas podían ser turbias. Las muestras se podían dejar a un lado (hasta por 2-3 h a 20-22?C) para el análisis
titrimétrico. Titular el contenido de cada frasco con NaOH 0,05 N hasta que aparezca el color característico del indicador. En el blanco añadir sólo la emulsión de
aceitegoma
arábiga tamponada y mezclar bien. Titular el contenido del frasco.

Obtención de péptidos de origen animal por hidrólisis de gelatina

Preparación del sustrato: Calentar 200 ml de agua a 90°C y adicionar 60 g de gelatina sin sabor. Por agitación constante, mezclar bien hasta la obtención de una completa
disolución homogénea. Adicionar 200 ml de agua fría sin dejar de agitar.
Preparación de fuente enzimática: Licuar trozos de papaya hasta la obtención de 60 ml de jugo. Adicionar el jugo a la solución de gelatina sin sabor.
Extracción de muestras: Tomar muestras de la mezcla cada 5 minutos y observar la disminución del poder gelificante del sustrato
VI. RESULTADOS OBTENIDOS:

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 GUÍA DE PRÁCTICAS
Lipasa
Reportar las mediciones de la titulación ácido-base de acuerdo a la siguiente tabla

Papaína
Adjunte fotografías de las muestras tomadas en función al tiempo
VII. CONCLUSIONES:

Concluir en base a los objetivos planteados

VIII.RECOMENDACIONES:

Según su criterio mencione las diferencias de catalisis de estas enzimas

VALIDACIÓN DE LAS GUÍAS DE PRÁCTICAS

Fecha de elaboración Sep 16 2019

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DOCENTE PLANIFICADOR UTA
Lic.LILIANA ALEXANDRA CERDA MEJIA

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Coordinador Unidad de Organización Curricular
PhD DAYANA CRISTINA MORALES ACOSTA

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Coordinador de Carrera
PhD JOSE HOMERO VARGAS LOPEZ

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