Universidad de La Serena Profesora Carla Maturana Valdivia

Facultad de Ciencias Profesor Francisco López Cortés

Departamento de Biología Profesor Claudio Palma Rojas

CARACTERIZACIÓN Y DIVERSIDAD DE CÉLULAS EUCARIONTES

Aprendizajes Esperados:
- Describir la técnica histológica corriente y su uso en biología celular.
- Aplicar la metodología básica para la confección y tinción de preparaciones al fresco.
- Identificar las estructuras comunes en células eucariontes.
- Caracterizar células eucariontes animales y vegetales.
- Relacionar las características de los tejidos con la morfología celular.

1.- MICROSCOPIO ÓPTICO

El microscopio es una herramienta de observación que el ser humano ha creado para

distinguir estructuras que a ojo desnudo no pueden distinguirse. En general el microscopio
de campo claro permite la observación de células que miden entre 10 a 20 µm de
diámetro, lo que equivale aproximadamente a 5 veces menos que el objeto más
pequeño visible a simple vista.
El microscopio de campo claro está compuesto por un sistema mecánico y un sistema
óptico. La porción más importante del microscopio es la parte óptica, que está
constituida por una serie de lentes que produce imágenes aumentadas de los objetos que
se observan junto con un sistema que permite la iluminación para la formación de la
imagen. La porción mecánica permite sostener convenientemente los distintos elementos
ópticos.

PROPIEDADES DE LOS LENTES

a) Poder de Aumento: Es la razón existente entre el tamaño de la imagen que el

microscopio produce y el tamaño del objeto observado. Ya que el microscopio
compuesto tiene dos sistemas ópticos, capaces cada uno de agrandar la imagen, el
aumento total es igual al producto del aumento dado por el ocular y el objetivo
(Tabla 1). Esta propiedad no debe ser confundida con el Poder de Resolución.

Tabla 1. Antecedentes de la porción óptica del Microscopio óptico de campo claro

AUMENTO AUMENTO AUMENTO APERTURA DIÁMETRO DEL

OCULAR OBJETIVO TOTAL NUMÉRICA CAMPO (μm)
10x 4x 40x 0,10 4.000
10x 10x 100x 0,25 1.800
10x 40x 400x 0,75 450
10x 100x 1.000x 1,25 170

b) Poder de Resolución (P.R.): Es la capacidad de dar imágenes bien definidas de puntos

que se encuentran situados muy cerca uno del otro. El poder de resolución depende
de la longitud de onda (l) y la apertura numérica del objetivo (AN). El microscopio
óptico tiene un límite resolución de aproximadamente 200 nm (0,2 μm), mientras que el
del ojo humano es cercano a los 100 μm.

1
c) Límite de Resolución (L.R.): Corresponde a la distancia mínima que puede existir entre
dos puntos para que puedan ser definidos como tales. Es así como mientras mayor sea
el Poder de Resolución (capacidad), menor es el Límite de Resolución (distancia
límite). Esto en microscopia tiene importantes connotaciones y cabe preguntarse
cuales son las opciones que se tiene en microscopia de luz para aumentar el Poder de
Resolución. Una de ellas es modificando la longitud de onda (l), ya que al disminuir
ésta mejora el Poder de Resolución. Sin embargo, la disminución de la longitud de
onda trae consigo ciertas dificultades. Por ejemplo, si se usara luz ultravioleta, se
duplicaría el Poder de Resolución del microscopio óptico pero no se podría utilizar
visión directa porque su alto contenido energético que provoca daños para el ojo
humano. Al usar haces de electrones se aumenta dramáticamente el Poder de
Resolución y esto constituye uno de los principios básicos de la Microscopia
Electrónica. Pensando en el microscopio óptico, la mejor manera de aumentar el
Poder de Resolución, manteniendo constante la longitud de onda (dentro del
espectro visible), es utilizar lentes con apertura numérica alta. Esto obliga a evitar al
máximo la dispersión de los rayos luminosos, para lo cual se utiliza aceite de inmersión
entre la preparación y la lente objetivo.

c) Poder de Definición: Es la capacidad del microscopio de dar imágenes nítidas de

contornos precisos. Reside en la corrección de las aberraciones propias de las lentes.

d) Poder de Penetración: Es la cualidad de los lentes que permiten averiguar hasta que
límite podemos reconocer detalles de estructuras situadas en diferentes niveles de la
preparación. Es decir, si en un mismo punto de enfoque es posible ver nítidamente dos
o más estructuras situadas en distintos planos en la preparación. Esta capacidad varía
en forma inversa con el aumento de la lente. Este poder se presta para medir el
espesor de la preparación.

2.- MÉTODOS DE EXAMEN MICROSCÓPICOS

Existen dos métodos para la examinación de muestras en microscopio óptico:

Examen inmediato: Corresponde a la observación microscópica de elementos

anatómicos hecha directamente sobre elementos vivos. El estado al fresco significa que
tal observación se hace sin recurrir a reactivos modificadores. Utilizar coloración significa
que la observación se apoya por la incorporación al animal vivo de colorantes
específicos. Entenderemos por coloración vital a aquella que conserva vivo al organismo
o los tejidos, a diferencia de la supravital en la que el organismo muere por efecto del
colorante.

Examen mediato: Se realiza a través de la muerte y preservación de las estructuras a

estudiar, debido principalmente a que es posible detener los procesos agónicos y de lisis
mediante la aplicación de sustancias que detengan tales procesos y conserven las
estructuras de manera similar a como eran en vida.

Una etapa importante de este examen lo constituye la fijación del material biológico, que
permite la preservación destinado a obtener preparados duraderos que conservan la
estructura morfológica y química que presentan las células y tejidos al estado vivo y
poder realizar posteriormente los procedimientos de coloración o identificación. Los
fijadores son sustancias químicas y agentes físicos que se utilizan para la fijación. Existen
fijadores químicos (como los alcoholes, ácido ósmico y bicloruro de mercurio entre otros)
y fijadores físicos (como la desecación, calor húmedo, frío intenso).

Guía Laboratorio de Biología Celular Eucariota 2

La manera de actuar de los fijadores varía de acuerdo a la composición del fijador. En
general se reconoce que actúan:

1. Coagulando las proteínas, sin combinarse con ellos: alcohol, ácido pícrico, yodo.
2. Reduciéndose en contacto con ella y formando un precipitado fino: ácido ósmico,
bicloruro de mercurio, cloruro de oro.
3. La mayor parte de los fijadores actúan como oxidantes, favoreciendo la coloración
posterior de los tejidos.

Las principales cualidades de los fijadores son que:

1. Actúan con rapidez, matando y fijando las células antes que aparezcan fenómenos
agónicos o post-mortem (autolisis, desintegración).
2. Presentan un alto poder de penetración, para asegurar la fijación hasta las capas
profundas, pero sin desplazar las estructuras de su posición habitual.
3. Conservan detalles estructurales que presentaban en vivo las células.
4. Permiten o favorecen el uso de procedimientos posteriores (por ejemplo, corte,
coloración).
5. No producen estructuras artificiales.
6. No retraer excesivamente los tejidos o hacerlos quebradizos.
7. Destruyen bacterias y gérmenes.

2.1.- LA TÉCNICA HISTOLÓGICA CORRIENTE

Para realizar los exámenes microscópicos es necesario someter el material en estudio a

procedimientos especiales cuyo conjunto constituye la técnica histológica. Una vez
explotadas las posibilidades que permite el examen in vivo, y de acuerdo a la necesidad
de analizar componentes o partes específicas de cierto material biológico (como tejidos,
organismos, etc.) que requieran de una tinción más específica, es preciso la muerte y
preservación del material de interés por medio de la fijación. Posteriormente se recurre a
una serie de procedimientos que como resultado final permiten la elaboración de
preparaciones permanentes del material de interés.

1. Fijación del material biológico: La utilización de fijadores permite preservar el material

de estudio, conservando la estructura biológica y química de las células o tejidos que
lo componen.
2. Deshidratación: Para la inclusión en parafina, el material debe ser deshidratado
pasándolo por una batería de alcoholes de concentración creciente (por ejemplo,
alcohol 50º, 70º, 100º) hasta que el alcohol es reemplazado por xilol o toluol, ambos son
solventes intermediarios entre el alcohol y la parafina.
3. Inclusión: El medio de inclusión más usado en microscopia óptica es la parafina. El
tejido se sumerge en este compuesto fundido y se mantiene por varias horas, para que
penetre en el tejido y al interior de las células. Posteriormente se forma un molde que
contiene una masa sólida de parafina en cuyo interior se encuentra el tejido u órgano.
Esto le imparte al tejido la consistencia necesaria para el corte.
4. Cortes: Para obtener cortes suficientemente finos se utilizan máquinas especiales
denominados micrótomos, el que posee una cuchilla fija por la cual pasa el tejido
endurecido cada vez que se gira la manivela, obteniéndose cortes del grosor
deseado. Habitualmente el corte se realiza con un grosor entre 5 a 15 m. Una vez
realizados los cortes, es necesario pegarlos sobre un portaobjeto limpio y con sustancia
adhesiva (solución acuosa de albúmina).

Guía Laboratorio de Biología Celular Eucariota 3

5.- Desparafinaje e Hidratación: Los cortes adheridos al portaobjeto se pasan por xilol o
toluol, para remover la parafina y posteriormente por una batería de alcoholes de
concentración decreciente hasta llegar a una completa hidratación en agua. La
renovación de los alcoholes, así como el tiempo de mantención del material es
variable y depende del tipo de tejido usado.
6.- Tinción: Los colorantes biológicos se usan generalmente en solución acuosa.
Químicamente suelen ser compuestos orgánicos aromáticos. Los colorantes se
clasifican en ácidos, básicos y neutros. En los colorantes básicos, el grupo cromóforo
(el que imparte el color) es básico o catiónico, son colorantes nucleares, por ejemplo
el azul de metileno. Los colorantes ácidos se combinan con las estructuras proteicas de
las células, ya sea por sus grupos hidroxilos, carboxilo o sulfónicos. Su grupo cromóforo,
es ácido o aniónico, tiñen estructuras citoplasmáticas, por ejemplo la eosina. Los
colorantes neutros, tiñen estructuras citoplasmáticas y nucleares, ejemplo el eosinato
de azul de metileno. Algunos colorantes, especialmente de tipo básico, tienen la
propiedad de teñir las estructuras celulares de un color distinto del original, este efecto
se denomina metocromasia, en caso de mantenerse la coloración se habla de
ortocromasia. Los colorantes pueden además ser divididos en vitales y supravitales.
7.- Montaje: Una vez teñido el trozo de tejido y con el objeto de preservarlo
permanentemente, se deshidrata totalmente en baterías de alcoholes de
concentración creciente y luego se impregna en toluol o xilol permitiendo pegar el
cubreobjetos con Bálsamo (por ejemplo Bálsamo de Canadá) u otra resina para darle
protección al tejido. En estas condiciones la preparación puede ser estudiada.

Figura 1. Etapas de la Técnica Histológica Corriente

3.- CÉLULAS EUCARIONTES

Con el conocimiento de la estructura y manipulación de microscopio óptico, ha sido

posible el descubrimiento y observación de estructuras hasta ahora invisibles al ojo
humano; y entre ellas las células.

Para la mayoría de las células el citosol es el compartimento de mayor dimensión,

contiene a moléculas de diversos tamaños, y es el sitio de reacciones químicas esenciales
para la célula, siendo uno de sus componentes básicos junto con la membrana
plasmática y el material genético. También existen ribosomas y proteínas que pueden
formar estructuras del citoesqueleto de algún grado de organización.

Guía Laboratorio de Biología Celular Eucariota 4

Los principales tipos celulares incluyen a células procariontes y eucariontes. Las células
procariontes no presentan compartimentos delimitados por membranas, se encuentran
formando a organismos unicelulares como bacterias y aqueas. Las células eucariontes por
su parte presentan compartimentos delimitados por membranas internas, el más
característico es el núcleo celular (lo que le da su nombre), y en el cual queda contenido
el material hereditario. Los organismos protistas, hongos, plantas y animales están
formados por una o muchas células eucariontes.

Dentro de las células eucariontes más estudiados se encuentran las células animales y
vegetales. Las células de los vegetales superiores (plantas) son eucariontes y se asemejan
en su estructura básica a las células animales (Figura 2). En sus interior se encuentra una
diversidad organelos por separado reúne distintas enzimas en su interior, a cargo de
funciones celulares específicas, esta característica le permite a la célula llevar a cabo
muchas reacciones químicas incompatibles de forma simultánea. Para organismos
pluricelulares la cantidad y tipo de estructuras subcelulares presentes permiten
especializarse en una función típica y característica de los tejidos celulares.

Figura 2. Modelos de célula eucarionte animal (izquierda) y vegetal (derecha).

Las principales diferencias con las células animales son:

1.- Presencia de plastidios.

2.- Presencia de almidón.
3.- Presencia de pared celular.
4.- Presencia de plasmodesmos.
5.- Vacuolas de gran tamaño.
6.- Ausencia de centriolos.

La pared celular es secretada por el aparato de Golgi de la célula, es rígida, fuerte y

bastante porosa, se distingue la pared primaria, es la más externa y de organización más
laxa, lo cual permite crecer con la célula; la secundaria es más interna y de mayor rigidez,
y se forma cuando la célula ha alcanzado su tamaño definitivo. Entre las células vecinas
se establecen puentes citoplasmáticos que atraviesan la pared por orificios, y constituyen
los plasmodesmos. El espesor de la pared oscila entre 0,1 a varios micrones.
Químicamente está constituida de celulosa, hemicelulosa y pectina. En relación a los
plastidios se pueden clasificar en incoloros o leucoplastos, cuya función es el
almacenamiento de sustancias de reserva (por ejemplo almidón, aceites, proteínas) y los
cromoplastos, que contienen diversos tipos de pigmentos (como clorofila, carotenoides,
ficoeritrina roja, ficocianina azul).

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4.- FORMA Y TAMAÑO CELULAR

De acuerdo a la Teoría Celular, la célula es la unidad morfológica y fisiológica en la

estructura de los seres vivos.

4.1. CRITERIOS PARA DEFINIR LA FORMA CELULAR

1.- Según presenta o no forma definida:

a) Variables, como por ejemplo las amebas.
b) Estables, como por ejemplo los espermatozoides y eritrocitos.

2.- Asimilándolas a la forma de cuerpos geométricos:

a) Esféricas, como algunos unicelulares y las células de tipo embrionario.
b) Cúbicas, como en las células de los túbulos renales y de la glándula tiroides.
c) Planas, como las células de la epidermis de las hojas y peritoneo.
d) Prismática, como las células del epitelio de las vellosidades intestinales.

3.- Comparándolas a esquemas estructurales comunes:

a) Estrelladas, esto es, semejantes a una estrella (e.g., células motoras del asta anterior de
la médula espinal).
b) Fusiformes, es decir, semejantes a un huso, como las células del tejido muscular liso.
c) Aracniformes, es decir, semejantes a una araña, como las células de la neuroglia y los
osteocitos.

TAMAÑO CELULAR

La mayor parte de las células tiene entre 10 y 100 µm de diámetro. Para un tipo particular
de célula que ha alcanzado su completo desarrollo y diferenciación es raro encontrar
variaciones muy amplias de tamaño. El tamaño es un buen indicador para la
identificación celular.

LÍMITES DE TAMAÑO

Afectado por la relación “superficie-volumen”. Relación superficie volumen de una esfera

4
𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑑𝑒 𝑢𝑛𝑎 𝑒𝑠𝑓𝑒𝑟𝑎 = 𝜋𝑟 3
3

𝑆𝑢𝑝𝑒𝑟𝑓𝑖𝑐𝑖𝑒 𝑑𝑒 𝑢𝑛𝑎 𝑒𝑠𝑓𝑒𝑟𝑎 = 4𝜋𝑟 2

ACTIVIDADES

1.- IDENTIFICACIÓN DE LOS COMPONENTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO:

Ubique un microscopio óptico sobre su mesón e identifique las partes mostradas en las siguientes
imágenes.

A B A B
C D
C D

Guía Laboratorio de Biología Celular Eucariota 6

1 6 11 16
2 7 12 17
3 8 13 18
4 9 14 19
5 10 15

2.- TÉCNICA HISTOLÓGICA CORRIENTE

A partir de un trozo de tejido recién extraído, ¿Cuál es la secuencia para llegar a montar
la preparación?

Nº Reactivo o Método Nº Reactivo o Método Nº Reactivo o Método

Alcohol 50% Xilol-Alcohol Xilol
Colorante Alcohol 80% Alcohol 70%
Agua destilada Resina Parafina
Corte Fijador Alcohol 100%

Guía Laboratorio de Biología Celular Eucariota 7

3.- OBSERVACIÓN DE CÉLULAS EPITELIALES DE MUCOSA BUCAL
Con el extremo posterior de un palillo de fósforo, raspe la parte interna de su mejilla.
Deposite el raspado en la parte central de un portaobjetos limpio y seco, y agregue sobre
la muestra una gota de azul de metileno. Espere 5 minutos y cubra la preparación con un
cubreobjetos. Retire el exceso de colorante con un trozo de papel absorbente. Observe,
describa y dibuje las células observadas con aumento 400x.

GUÍA PARA LA OBSERVACIÓN Y DESCRIPCIÓN DE CÉLULAS CON MICROSCOPIA ÓPTICA

1.- Objetivo de la observación:
2.- Muestra utilizada y tinción:

3.- Tipo de preparación:  Al fresco  Permanente

4.- Dibujo de la preparación:

Lente objetivo: _______ Aumento total: _________ x Diámetro del campo: ________ m

5.- Forma de las células observadas: ________________________________________________

6.- Dimensiones aproximadas:
Largo: _____________ m Ancho: ___________ m Diámetro: _______________ m
7.- Relaciones entre las células:
 Aisladas  En cadena  Formando membranas
Otra:____________________________________________________________________________
8.- Características del Núcleo y Nucléolo:
Forma del Núcleo:________________________ N° de núcleos por célula: ____________
Posición en el citoplasma:  Central  Periférica
Presencia de nucléolo: ___________________ N° de nucléolos por núcleo: _________
9.- Citoplasma:
Presencia de estructuras diferenciales:___ Aspecto:  Granular  Fibrilar  Globular
Nombre: _________________ Cantidad por célula:  Abundante  Regular  Escaso
Posición y distribución preferente:  Central  Periférica  Otra: ________________
10.- Otras observaciones:

Guía Laboratorio de Biología Celular Eucariota 8

4.- OBSERVACIÓN DE TEJIDOS ANIMALES EN INMERSIÓN
Realice una observación en inmersión a partir de las instrucciones dadas por su profesor
guía. Compare las propiedades de los lentes a partir de la observación de su preparación.

GUÍA PARA LA OBSERVACIÓN Y DESCRIPCIÓN DE CÉLULAS CON MICROSCOPIA ÓPTICA

1.- Objetivo de la observación:
2.- Muestra utilizada y tinción:
3.- Tipo de preparación:  Al fresco  Permanente
4.- Dibujo de la preparación:

Lente objetivo: _______ Aumento total: _________ Lente objetivo: _______ Aumento total: _________
x Diámetro del campo: ________ m x Diámetro del campo: ________ m

5.- Forma de las células observadas: ________________________________________________

6.- Dimensiones aproximadas:
Largo: _____________ m Ancho: ___________ m Diámetro: _______________ m
7.- Relaciones entre las células:
 Aisladas  En cadena  Formando membranas
Otra:____________________________________________________________________________
8.- Características del Núcleo y Nucléolo:
Forma del Núcleo:________________________ N° de núcleos por célula: ____________
Posición en el citoplasma:  Central  Periférica
Presencia de nucléolo: ___________________ N° de nucléolos por núcleo: _________
9.- Citoplasma:
Presencia de estructuras diferenciales:___ Aspecto:  Granular  Fibrilar  Globular
Nombre: _________________ Cantidad por célula:  Abundante  Regular  Escaso
Posición y distribución preferente:  Central  Periférica  Otra: ________________
10.- Otras observaciones:

Guía Laboratorio de Biología Celular Eucariota 9

5.- OBSERVACIÓN DE HOJA DE PLANTA ACUÁTICA
Monte una preparación fresca de Elodea sp. describa las estructuras presentes en su tallo
y hojas.

GUÍA PARA LA OBSERVACIÓN Y DESCRIPCIÓN DE CÉLULAS CON MICROSCOPIA ÓPTICA

1.- Objetivo de la observación:
2.- Muestra utilizada y tinción:
3.- Tipo de preparación:  Al fresco  Permanente
4.- Dibujo de la preparación:

Lente objetivo: _______ Aumento total: _________ x Diámetro del campo: ________ m

5.- Forma de las células observadas: ________________________________________________

6.- Dimensiones aproximadas:
Largo: _____________ m Ancho: ___________ m Diámetro: _______________ m
7.- Relaciones entre las células:
 Aisladas  En cadena  Formando membranas
Otra:____________________________________________________________________________
8.- Características del Núcleo y Nucléolo:
Forma del Núcleo:________________________ N° de núcleos por célula: ____________
Posición en el citoplasma:  Central  Periférica
Presencia de nucléolo: ___________________ N° de nucléolos por núcleo: _________
9.- Citoplasma:
Presencia de estructuras diferenciales:___ Aspecto:  Granular  Fibrilar  Globular
Nombre: _________________ Cantidad por célula:  Abundante  Regular  Escaso
Posición y distribución preferente:  Central  Periférica  Otra: ________________
10.- Pared Celular:
Características: _________________________________________________________________

11.- Otras Observaciones:

Guía Laboratorio de Biología Celular Eucariota 10

6.- OBSERVACIÓN DE EPIDERMIS INFERIOR DE HOJA
Utilizando preparaciones permanentes de epidermis inferior de hoja describa los distintos
tipos de células presentes en dicho tejido.

GUÍA PARA LA OBSERVACIÓN Y DESCRIPCIÓN DE CÉLULAS CON MICROSCOPIA ÓPTICA

1.- Objetivo de la observación:
2.- Muestra utilizada y tinción:
3.- Tipo de preparación:  Al fresco  Permanente
4.- Dibujo de la preparación:

Lente objetivo: _______ Aumento total: _________ x Diámetro del campo: ________ m

5.- Forma de las células observadas: ________________________________________________

6.- Dimensiones aproximadas:
Largo: _____________ m Ancho: ___________ m Diámetro: _______________ m
7.- Relaciones entre las células:
 Aisladas  En cadena  Formando membranas
Otra:____________________________________________________________________________
8.- Características del Núcleo y Nucléolo:
Forma del Núcleo:________________________ N° de núcleos por célula: ____________
Posición en el citoplasma:  Central  Periférica
Presencia de nucléolo: ___________________ N° de nucléolos por núcleo: _________
9.- Citoplasma:
Presencia de estructuras diferenciales:___ Aspecto:  Granular  Fibrilar  Globular
Nombre: _________________ Cantidad por célula:  Abundante  Regular  Escaso
Posición y distribución preferente:  Central  Periférica  Otra: ________________
10.- Pared Celular:
Características: _________________________________________________________________

11.- Otras Observaciones:

Guía Laboratorio de Biología Celular Eucariota 11

7.- OBSERVACIÓN DE EPIDERMIS INFERIOR DE HOJA
Monte una preparación fresca con tinción de epidermis inferior de hoja de Agapanto
(Agapanthus africanus) y describa los distintos tejidos presentes.

GUÍA PARA LA OBSERVACIÓN Y DESCRIPCIÓN DE CÉLULAS CON MICROSCOPIA ÓPTICA

1.- Objetivo de la observación:
2.- Muestra utilizada y tinción:
3.- Tipo de preparación:  Al fresco  Permanente
4.- Dibujo de la preparación:

Lente objetivo: _______ Aumento total: _________ x Diámetro del campo: ________ m

5.- Forma de las células observadas: ________________________________________________

6.- Dimensiones aproximadas:
Largo: _____________ m Ancho: ___________ m Diámetro: _______________ m
7.- Relaciones entre las células:
 Aisladas  En cadena  Formando membranas
Otra:____________________________________________________________________________
8.- Características del Núcleo y Nucléolo:
Forma del Núcleo:________________________ N° de núcleos por célula: ____________
Posición en el citoplasma:  Central  Periférica
Presencia de nucléolo: ___________________ N° de nucléolos por núcleo: _________
9.- Citoplasma:
Presencia de estructuras diferenciales:___ Aspecto:  Granular  Fibrilar  Globular
Nombre: _________________ Cantidad por célula:  Abundante  Regular  Escaso
Posición y distribución preferente:  Central  Periférica  Otra: ________________
10.- Pared Celular:
Características: _________________________________________________________________

11.- Otras Observaciones:

Guía Laboratorio de Biología Celular Eucariota 12