UNIVERSIDAD DE CORDOBA

FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS

DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA
CURSO: GENÉTICA BÁSICA

Práctica 5.3. CROMOSOMAS POLITENICOS

Introducción
En 1881 Balbiani descubrió unas estructuras que se teñían diferencialmente en
los núcleos de las glándulas salivales de algunos insectos, hoy en día
denominados Cromosomas Politénicos y son de los más grandes que se
conocen; pueden medir más de 2 mm de longitud y claramente son visibles por
lupa. Posteriormente se descubrieron en tejidos secretores, tales como, los
túbulos de Malpigio, recto, e intestinos.
En las glándulas salivales de Drosophila sp. El
complemento cromosómico de esta especie es de 4
pares de cromosomas, de los cuales tres son
autosomas y un par son cromosomas sexuales.
Estos cromosomas presentan bandas que difieren en
morfología y amplitud, tal que el patrón de bandeo de
cada cromosoma es único y característico. Este
patrón condujo a Bridges en 1935 a la construcción
del mapa citológico proveniente de los cromosomas
politénicos de las glándulas salivales de larvas de
Drosophila. La mayoría de los genes activos residen en las zonas claras, en las
zonas oscuras el DNA está más compactado. Las bandas se pueden
descondensar para formar “ensanchamientos” o pufs que muestran que los
genes están transcribiéndose en dichas zonas.
La obtención de estos cromosomas es relativamente sencillo y rápido por lo que
resultan en excelentes herramientas de análisis citogenetico.
Objetivos

 Conocer y aprender la técnica de aislar y teñir los cromosomas

politenicos a partir de glándulas salivales de larvas de Drosophila
 Que el alumno observe el bandeo natural y las secuencias génicas de los
cromosomas
 Que el alumno identifique las estructuras de los cromosomas
politécnicos, así como el número de cromosomas visibles en la
preparación
Materiales
• Agujas de disección,
• Jeringas de insulina
• Toallas de papel
• Pinceles
• Lápiz con goma
• Portaobjetos
• Cubreobjetos
• Suero fisiológico al 0.7 % o NaCl al 7%
• Agua destilada
• Aceite de inmersión
• Aceto-orceina o acetocarmin al 2%
• Microscopio estereoscopio
• Microscopio compuesto
• Cultivo de Drosophila sp. con larvas de 3er estadio

Procedimiento

1.-Coloque una gota de agua destilada, suero fisiológico o NaCl 7%. Frote la
superficie de un portaobjetos con su dedo pulgar, esto permitirá que se forme una
gota.
2.-En un cultivo de Drosophila sp. seleccione una larva en tercer estadio de
desarrollo, utilice una aguja de disección, coloque la larva en el centro del
portaobjetos con la solución y observe bajo el estereoscopio.
RECOMENDACIONES: La solución en la que coloque la larva no debe secarse,
agregue cada vez que sea necesario. Si la solución se le seca, abandone la
disección y comience de nuevo.
Disección de la larva y obtención de las Glándulas Salivales
1.-Comience la disección localizando primero el extremo anterior (cabeza) de su
larva podrá ver las mandíbulas las cuales se distinguen por su forma y color negro.
Las glándulas podrá visualizarlas entre el tercer o cuarto segmento.
2.-Con una mano coloque una aguja de disección aproximadamente entre el tercer
y cuarto segmento de la larva y sosténgala firmemente.
3.-Con la otra mano coloque la aguja de disección justamente atrás de los
ganchos bucales de color negro.
4.-Mueva la aguja de disección que se encuentra atrás de los ganchos bucales
lentamente en dirección opuesta a la otra aguja a manera de estirar la larva, las
glándulas generalmente se quedan adheridas a la región mandibular. Además
generalmente tienen un cuerpo graso, largo, delgado unido a ellas.
5.-Para el paso siguiente puede seguir trabajando en el mismo portaobjetos, sin
embargo retire todos órganos, trozos de cutícula, deje solamente las glándulas,
cuidando de los arrastrarlas junto con los demás órganos y coloque una gota de
aceto-orceina o acetocarmin sobre las glándulas. O bien puede colocar una gota
pequeña de colorante en el centro de un portaobjetos limpio y trasferir las
glándulas a la gota de colorante. Utilice las agujas de disección para hacer esta
transferencia, una vez en el colorante las glándulas deben caerse de las agujas.
RECOMENDACIONES: si se saca completamente el extremo de la cabeza de la
larva o si los órganos internos salen desordenadamente o si se rompe la cutícula
muy lejos de la cabeza, es preferible abandonar la disección y empezar con una
nueva larva.

Si solo es posible localizar una glándula, transfiérala sola. No es necesario hacer

una disección completamente limpia de las glándulas de otro tejido, este no
interfiere con la preparación.
Colocación del cubreobjetos
1.-Tome un cubre objetos por la orilla para evitar dejar huellas en el. Sostenga la
otra orilla del cubreobjetos con su aguja de disección y suavemente bájelo sobre la
solución de aceto-orceina o acetocarmin
Deje reposar la preparación durante aproximadamente cinco minutos y observe al
microscopio.
“Squash” de las glándulas salivales
1.-Después de visualizar las glándulas en el microscopio, coloque la preparación
en una superficie lisa, coloque sobre el montaje papel secante, absorbente, o
simplemente con su dedo pulgar colóquelo sobre el cubreobjetos. Sin mover el
cubreobjetos presione lo más fuerte posible. Si utiliza dos toallas de papel
dobladas es muy difícil que rompa el cubreobjetos.
Observación de cromosomas
1.-Observe el montaje contra luz y localice las glándulas salivales aplastadas,
coloque el montaje sobre el microscopio con la glándula aplastada bajo el objetivo
10x
2.-.-Localice el condensador de su microscopio y la palanca que controla el
diafragma. Abra el diafragma hasta 2/3 partes de la abertura total.
3.-Observe en el microscopio y mueva el condensador hacia arriba y abajo hasta
obtener una iluminación brillante y homogénea en todo el campo
4.-Lentamente mueva el enfoque macrométrico hasta que su montaje este
enfocado. Asegúrese de que el enfoque sea del material biológico y no del
cubreobjetos. Ajuste el enfoque con el tornillo micrométrico
5.-Busque lentamente hasta encontrar un núcleo. Los cromosomas deben de
poderse observar claramente aun a bajo poder. Rastree todo el montaje hasta
encontrar un núcleo con los cromosomas bien extendidos.
6.-Cambie a alto poder y observe la preparación a 40x, o 100x (utilice aceite de
inmersión), tenga cuidado de no sobrepasar demasiado el punto de enfoque o
puede quebrar su montaje y dañar el objetivo.

Bibliografía
 Castillo, H., Prácticas de Laboratorio Genética General. Universidad de San
Carlos de Guatemala. 2002
 Rodríguez, A. R., et al. Manual de prácticas de genética y cuaderno de
trabajo.UNAM. 2005.
 Salceda V.M., Gallo A., J., 1984, Genetica De Drosophila Tecnicas De
Laboratorio, Limusa, Mexico D.F, Pags. 16-84

Cuestionario
1. ¿Qué importancia tuvo esta práctica para usted?
2. Menciona brevemente la importancia de los cromosomas politénicos para la
investigación genética
3. Mencione por lo menos tres descubrimientos importantes relacionados con
cromosomas politénicos
4. Explica cómo se forman los cromosomas politenicos
5. Menciona las características de los cromosomas politenicos
6. Investiga el origen de los rearreglos cromosómicos y cuál es su importancia en
el estudio de la genética de poblaciones.
7. En que otros organismos diferentes de Drosophila es posible encontrar
cromosomas politénicos.