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Universidad Andrs Bello

Facultad de Medicina
Laboratorio de Biologa Celular
Profesores: Andrea Tapia
Mara Soledad Campano

Trabajo Prctico N6:

Mitosis, Meiosis y
Fecundacin
BIO131

Autores: Patricio Brito.


Alejandra Montes.
Fernanda Opazo.
Fecha de entrega: 15 de Julio.

- 2016

Introduccin
La clula eucarionte puede reproducirse de dos formas: mitosis y meiosis. La primera busca
mantener un linaje gnico intacto y limitarse solo a aumentar el nmero de clulas o
recambiar clulas en un tejido. La segunda es propia de las clulas sexuales, ya que su
objetivo es disminuir a la mitad la carga cromosmica y generar una combinacin gnica
con el propsito de generar un nuevo individuo al fusionarse con el gameto del sexo
opuesto, genticamente diferente a ambos progenitores, causando variabilidad gentica en
su descendencia.
El ciclo celular se divide en dos etapas: interfase y fase M. Dentro de la interfase, se pueden
encontrar 3 sub-fases, G1, S y G2, mientras que la fase M se divide en profase, metafase,
anafase y telofase, terminando con la citoquinesis siendo la separacin completa de ambas
clulas. Cuando una clula sale del ciclo para especializarse, permanece en el Fase G0
haciendo que esta no se vuelva a reproducir.
La meiosis, en cambio, al ser caracterstica de la reproduccin sexual, tiene que disminuir a
la mitad el nmero de cromosomas en las clulas germinales, para esto, tiene las siguientes
etapas: Profase I, esta,para dar lugar a cromosomas genticamente variados y posee las subfases, leptoteno, cigoteno, paquiteno, diploteno y diacinesis; luego siguen Metafase I;
Anafase I; Telofase I. Despus de la primera divisin cada clula resultante tiene la mitad
del nmero de cromosomas original, pero cada cromosoma se encuentra duplicado y
compuesto por dos cromtidas hermanas. Ahora comienza la segunda divisin celular, sin
que se produzca una nueva duplicacin del DNA. (1) Esta segunda divisin se divide en:
Profase II; Metafase II; Anafase II; Telofase II. Tras finalizar la meiosis se tiene que cada
clula resultante despus de la segunda divisin meitica es haploide, ya que tiene slo la
mitad de los cromosomas originales de la especie y cada cromosoma tiene slo una
cromtida. (2)
Gametognesis, es el proceso por el cual las clulas precursoras sexuales maduran. Existen
dos tipos: la Espermatognesis en el caso de los machos, proceso por el cual un
espermatogonio se dividepor meiosis-, especializa y madura en 4 espermatozoides
funcionales. La ovognesis, por parte de las hembras, es el proceso por el cual un ovogonio
se reproduce, especializa y madura en 1 ovocito y 3 cuerpos polares, ms pequeos.
Cuando se encuentran ambas celulas sexuales espermatozoide y ovocito- se lleva a cabo la
fecundacin. Este proceso comienza cuando un espermatozoide reconoce al ovocito y se
acopla a l, al unirse sus membranas, el acromosa del espermio deja salir las enzimas
hidrolticas que contiene, pasando a travs de la capa pelcida del ovocito, cuando ocurre
esto, la membrana del ovocito se despolariza evitando el ingreso de otro espermio
opoliespermia. Una vez situado el ncleo espermatozoide dentro del ovocito, la
fecundacin termina cuando ambos pronucleos se fusionan, transformando el ovocito en
cigoto.

Objetivos
Identificar visualmente cada etapa de la mitosis.
Reconocer diferentes etapas de ambas gametognesis.
Diferenciar cada parte de un espermatozoide.

Resultados
Actividad N4: Reconocimiento de
espermatozoides
IMAGEN XX:

IMAGEN 6:
Nombre: Tbulos seminferos de rata
(rattusnorvegicus)
Tipo de muestra:Permanente
Tincin:Hematoxilina-eosina
Aumento objetivo:40X
Aumento ocular:10X
Aumento total:400X
Observaciones: (1) Lmina Basal; (2)
Espermatogonias; (3) espermtidas; (4) lmen del
tbulo seminfero.
Se puede observar que a medida que las
estructuras se alejan de la lmina basal, comienzan
a perder volumen citoplsmicodebido a su
maduracin.

IMAGEN : XX

IMAGEN 7:
Nombre:
Espermatozoides humanos
Tipo de muestra:
Permanente
Tincin:
Hematoxilina-eosina
Aumento objetivo:
100X
Aumento ocular:
10X
Aumento total:
1000X
Observaciones: (1) Cabeza; (2) Cola; (3) grupo
de espermatozoides; (4) Cuello.
Es notorio el cambio morfolgico que sufren los
espermatozoides, perdiendo casi la totalidad de
material citoplasmtico y obteniendo una larga
cola flagelada.

Resultados:
Actividad N2: Observacin microscpica de preparaciones permanentes de tejidos
vegetales en distintas etapas de mitosis.
Profase
Telofase
Citocinesis

IMAGEN 1:
Nombre: Raz de cebolla.
Tipo de muestra: Permanente.
Tincin:
Aumento objetivo: 40X
Aumento total: 400X
Observaciones: Etapas del ciclo celular;
Interfase, Profase, Telofase y Citocinesis.
*La
citocinesis
sealada
est
recin
comenzando.
*El crculo encierra una fase determinada para
una mejor identificacin.

Interfase
Metafase

Anafase

IMAGEN 2:
Nombre: Raz de cebolla.
Tipo de muestra: Permanente
Tincin: Azul de Toluidina.
Aumento objetivo: 40X
Aumento total: 400X
Observaciones: Etapas del ciclo celular;
Metafase, Anafase.
Metafase
*El crculo encierra una fase determinada para
una mejor identificacin.

Actividad N3:
Observacin microscpica de una preparacin permanente de tejidos en meiosis.
Folculo
primario

IMAGEN 3:
Nombre: Corte de tejido ovrico de rata.
Folculo primario.
Tipo de muestra: Permanente
Tincin: Hematoxilina-eosina.
Aumento objetivo: 40X
Aumento total: 400X
Observaciones: Se observa encerrado en un
crculo un folculo primario.

IMAGEN 4:
Nombre: Corte de tejido ovrico de rata.
Tipo de muestra: Permanente
Tincin: Hematoxilina-eosina.
Aumento objetivo:
Aumento total:
Observaciones: Se observa la corteza ovrica,
y un conjunto de folculos primordiales a la
izquierda del esquema.

Corteza ovrica

Folculos
primordiales

Folculo maduro
de Graff

ovocito
Zona
pelcida

IMAGEN 5:
Nombre: Corte de tejido ovrico de rata.
Folculo de Graff.
Tipo de muestra: Permanente
Tincin: Hematoxilina-eosina.
Aumento objetivo: 10X
Aumento total: 100X
Observaciones: Folculo de Graff, antro
folicular, corona radiada, ovocito, clulas
granulosas, zona pelcida.

Antro folicular

Corona radiada
Clulas
granulosas

Materiales y Mtodos

La primera actividad sealada en la gua, consista en la observacin microscpica del


proceso de fecundacin in vitro de molusco (Choromytilus chorus.) Sin embargo, no se
realiz puesto que no hubo material disponible para su realizacin.

La segunda actividad consisti en la observacin microscpica de clulas vegetales de


Allium cepa (L). Esta preparacin, hecha a partir de raz de cebolla, se encontraba teida
con azul de toluidina y se observ con el objetivo de 40X. Esto se realiz con el fin de
identificar las fases de la divisin mittica en clulas vegetales y las estructuras
caractersticas de ellas.

La tercera actividad consisti en la observacin de la gametognesis femenina y


masculina en tejido ovrico y testicular, respectivamente, de Rattus norvegicus
(Berkenhout). Ambas muestras permanentes se observaron con un objetivo 40X, llegando
a un aumento de 400X. Ambas muestras permanentes se encontraban teidas con
Hematoxilina-eosina. Esta actividad se realiz con el objetivo de observar e identificar la
formacin de los gametos durante el proceso de ovognesis y espermatognesis.

La cuarta actividad se bas en examinar la morfologa de clulas espermatozoides de


Rattus norvegicus (Berkenhout). Esta muestra permanente se encontraba previamente
teida con Hematoxilina-eosina y se observ con un aumento de objetivo 40X, con el fin de
identificar las estructuras contenidas en un tbulo seminfero.
Luego se observ una muestra de espermatozoides humanos con el objetivo de 100X, por
lo que fue necesario agregar aceite de inmersin para su visualizacin. Llegndose a un
aumento total de 1000X, con el fin de identificar la estructura del gameto masculino con
sus partes ms caractersticas y visibles.

Discusin
La primera actividad consisti en comprender la fecundacin, mediante su proceso in vitro,
el cual sucede de la misma manera que en organismos vivos. El espermatozoide debe tener
contacto con el ovocito penetrando las clulas foliculares que lo rodean. Una vez en
contacto con la zona pelcida se lleva a cabo la reaccin acrosmica, en que se vierte el
contenido de enzimas hidrolticas del acrosoma al exterior y se genera entre los gametos un
reconocimiento mutuo y fuerte adhesin. Cuando ocurre la fusin de ambas clulas, el
ovocito sufre cambios a fin de evitar la polespermia, pierde la capacidad de volver a
fusionarse ya que modifica la estructura de la membrana pelcida, expulsando los otros
espermatozoides atrapados en ella. Finalmente, ambos proncleos se fusionan dando fin a
la fecundacin con la primera segmentacin del cigoto y posterior desarrollo embrionario.
(3)

Sin embargo, por motivos externos, no fue posible efectuarlo en este trabajo prctico,
rescatando solamente la informacin terica del proceso.
La segunda actividad fue posible llevarse a cabo mediante la tincin de Azul de Toluidina,
sustancia usada para identificar las sustancias bsicas de los ncleos celulares.(4)Se
identific correctamente la Interfase, cada etapa de la Mitosis y la Citocinesis,
diferenciando principalmente la disposicin de la cromatina y los cromosomas dispuestos
dentro de estas clulas vegetales. La Interfase consiste en la etapa de mayor actividad
biosinttica, tanto en el ncleo como en el citoplasma, duplicando su material gentico y su
tamao (5) es por esto, que el nuclolo cumple un rol fundamental y puede ser claramente
identificado por el microscopio como caracterstica de esta fase. La Profase se identifica
con el inicio de la condensacin de cromatina, manifestada en el oscurecimiento del ncleo,
la aparente desaparicin del nuclolo y discontinuidad de la envoltura nuclear ya que sta
se rompe. La Metafase fue fcilmente identificada ya que consiste primordialmente en la
ubicacin de los cromosomas ya condensados en el centro de la clula gracias al anclaje de
los microtbulos del huso mittico. (6) Luego se separarn las cromtidas hermanas hacia
los polos en la Anafase, con el acortamiento de microtbulos. En la Telofase se pueden
identificar los ncleos pequeos recin formndose pero que an estn muy juntos; como se
trat de clulas vegetales tambin se pudo identificar en esta etapa la creacin del tabique
que formara parte de la pared celular que separe ambas clulas hijas. Finalmente, es
posible identificar la citodiresis observando que ambos ncleos perdieron su forma
circular y que se encuentran ms separados que en la etapa anterior.
Las actividades siguientes se basaron en la observacin de distintas muestras permanentes
teidas con hematoxilina eosina el cual es lo ms usado para observar cortes histolgicos,
coloreando el citoplasma y algunas otras estructuras oscilando de rosa a rojo. (7)
La tercera actividad, se centr en gametognesis. La funcin de la meiosis en este proceso
est en que produce las clulas sexuales con la mitad del material gentico para que as, tras
la fecundacin, el cigoto obtenga la cantidad normal de cromosomas (46 en total) y no
aumente al doble en cada reproduccin como ocurrira con la mitosis. Mediante dos
divisiones sucesivas se generan cuatro clulas haploides (es decir, con la mitad de material
gentico): cuatro espermatozoides en el hombre; tres cuerpos polares y un ovocito en la
mujer. Adems, la meiosis es el proceso responsable de la variabilidad gentica ya que

ocurre la segregacin azarosa de genes paternos y maternos, y el intercambio de segmentos


cromosmicos con su cromosoma homlogo, denominado recombinacin gentica. (8)
Con la observacin de un ovario gatuno se demostr el proceso de ovognesis con el
resultado exitoso de la identificacin de estructuras importantes: ms pequeos, se
apreciaron en 40X los folculos primordiales, (con ncleos alargados de las clulas
foliculares planas o granulosas que lo rodean en una nica capa (9) y los folculos primarios
(presentando capas ms gruesas y ncleos ms esfricos), el primero, dirigido ms hacia la
corteza que el segundo. Por ltimo, de tamao mucho mayor, slo bast con el aumento de
10X para hacer posible la observacin del ovocito formado, dentro del folculo ya maduro.
Posteriormente, dentro de esta misma actividad, se continu con la observacin en 40X del
proceso de espermatognesis en cortes de tbulo seminfero. Es posible identificar distintas
estructuras, considerando la posicin y forma, observando las espermatogonias hacia la
membrana basal del tbulo, los espermatocitos I y II debiesen estar un poco ms hacia la
luz del tbulo o lmen(10) , sin embargo, en esta actividad no fue posible diferenciarlos. En
el lumen propiamente tal, separados del resto del tejido se encontraron las espermtidas,
que luego maduraran en espermatozoides, los que, al reducir considerablemente su
citoplasma, pierden tamao, siendo bastante imperceptibles en esta muestra.
La cuarta actividad tuvo una variante: el uso del objetivo 100X con el cuidado de ocupar el
aceite de inmersin, esto debido a que, como la distancia focal es muy pequea, evita que
llegue una pequea parte de la luz a la muestra, dirigiendo todos rayos correctamente sin
mayor desviacin. (11) Se procedi con la observacin e identificacin de estructuras del
espermatozoide humano, tratndose de clulas sexuales muy pequeas, por lo que con tal
aumento slo fue posible distinguir cuello, cabeza y cola de cada uno.

Conclusin
Una vez finalizado este ltimo prctico y tras el anlisis de los resultados es posible
determinar que los objetivos se cumplieron satisfactoriamente, es decir, se obtuvo imgenes
que al ser interpretadas se establecieron los diferentes elementos buscados.
No cabe duda que poder ver las diferentes fases de la mitosis ha sido de gran ayuda para
poder no slo entender el mecanismo de la misma, sino en algunos casos, poder entender y
aplicarlo en fallas que desencadenan de una mutacin o enfermedad en un individuo.
Adems ha significado un importante avance en la ingeniera gentica, que cada vez avanza
ms y ms, permitiendo realizar intervenciones que aos atrs eran impensadas, como lo es
la fecundacin in vitro, actividad que incluso estaba propuesta para realizarse en este
prctico.
A modo de cierre, la posibilidad de ver en primera persona todas y cada una de las fases e
incluso sus sub-fases de procesos tan importantes y significativos, que de hecho son los que
no slo mantienen a un individuo vivo, mediante el recambio de clulas y regeneracin de
heridas, sino que incluso son los que dieron origen al mismo individuo completo mediante
la fecundacin de clulas obtenidas a partir de procesos meiticos es algo realmente
sorprendente, en especial, el hecho de observar espermatozoides humanos que fcilmente
en un contexto futuro habran sido parte de la formacin de un ser humano completo y
funcional.

Bibliografa
1.2.3. 5. 8. E. M. F. De Robertis, J. Hib, R. Ponzio. Biologa celular y molecular (2000). El
Ateneo. 13 edicin. Buenos Aires. pp 408-4012, 373, 390.
4.[Internet]
http://recursosbiblioteca.unab.cl:2243/buscador.aspx?NIVEL_BUS=3&LEMA_BUS=azul
%20toluidina; citado 12 de Julio de 2016.
6.Universidad Andrs Bello, Gua de laboratorio N6: Mitosis, meiosis y fecundacin,
curso de laboratorio de biologa celular BIO-131.
7.[Internet]
http://recursosbiblioteca.unab.cl:2243/buscador.aspx?NIVEL_BUS=3&LEMA_BUS=eosin
a; citado 12 de Julio 2016.
9. 10. L. C. Junqueira, J. Carneiro. Histologa bsica. (2004). Masson. 5 edicin,
Barcelona. pp.423-425, 412.
11. [Internet] http://www.ugr.es/~agros/ugr/basfis07.htm; citado 14 de Julio 2016.