Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
Facultad de Ingeniería
2014
Determinación de modelos para la predicción de los coeficientes volumétricos
de transferencia de masa (kLa) oxígeno-medio de cultivo en biorreactores tipo
tanque agitado
Sustentado por:
fN\~ w MGMjJ
lng. Andrea Mangel Ra s
Miembro Lector
ii
AGRADECIMIENTOS
A mis padres y a mi familia, por darme el apoyo necesario a lo largo de estos años.
A don Sergio Madrigal y al personal administrativo de CENIBiot, por haberme abierto las puertas a su
centro y haberme brindado todo el soporte en materiales y equipo necesarios para la realización de este
proyecto. A Daniel, en particular, por su servicio y disposición cuando no había muchas manos en el
centro. A Lucho, por haberme ayudado desinteresadamente con el análisis estadístico de este proyecto.
A Francisco por sus observaciones pertinentes en cuanto al desarrollo de la investigación.
A Iray, quien más que una tutora, fue una madre en CENIBiot. Gracias por la paciencia, el cariño, las
enseñanzas y la ayuda invaluable en cada aspecto de este trabajo. Gracias por la motivación, las sonrisas
y las palabras de ánimo en los días más oscuros.
A Jéssica, por haber sido mi compañera en las buenas y en las malas. Por ser mi punto de apoyo cuando
todo parecía irse por la borda. Gracias por tantas conversaciones, echadas de mano, risas y
observaciones; todo hizo que la estancia en CENIBiot fuera mucho más agradable.
A Rebeca y a Jorge por haberme aceptado dentro de su exclusivo departamento de Análisis Finos y
haber sido, junto a Lucho y a Roberto, siempre una excelente compañía para conversar.
A Carlos, por haber luchado por mí y por Jéssica en todo momento. Por siempre estar dispuesto, con
una sonrisa y un chiste, a cualquier consulta que tuviéramos. Gracias por haberse aventurado a la
realización de este proyecto y por la ayuda mostrada para que este culminara de manera expedita.
A don Manuel Molina, por ser mi tutor inicial, y a Andrea por asumir el compromiso posteriormente.
Gracias por ser tan cálidos en el trato y serviciales en las dudas.
A Ale, por una infinidad de razones que cuesta exponer en tan poco espacio. Gracias por la motivación y
el apoyo aun cuando todo parecía estancarse. Por no dejar de creer en mí ni dejarme echar para atrás.
Gracias por siempre encontrar tiempo para darme y por ser un novio increíble durante esta etapa.
A Melissa y a Antonio, por ser mis amigos en los tiempos difíciles y siempre ofrecerme ese rato para
desahogarme, para esparcimiento y relajación. Gracias por tanto cariño y tanta entrega, no lo hubiera
logrado sin ustedes.
A Michelle, quien siempre me hace ver hacia arriba y aspirar a ser una mejor persona. No podría pedir
una amiga más leal y entregada que vos. Gracias por todo ese tiempo de calidad y por demostrarme que
con el pasar de los años, nos vamos uniendo más y más.
A Sylvia, quien a pesar de estar muy lejos siempre estuvo cerca. Gracias por siempre pensar más de mí
de lo que yo mismo hago, por creer que soy capaz de grandes cosas y que nos espera un futuro brillante.
Es un futuro que no va a estar completo hasta que volvamos a estar cerca geográficamente.
A mis demás amigos y compañeros que estuvieron pendientes y presentes a lo largo de estos años, por
ser todos parte del gran engranaje que es la vida. Gracias por los buenos y malos momentos que hemos
vivido. Gracias por los recuerdos y experiencias, que todo al final me han hecho lo que soy hoy.
iii
RESUMEN
El presente trabajo tiene como objetivo el estudio del fenómeno de transferencia de oxígeno del aire a
caldos de cultivo en biorreactores tipo tanque agitado. Específicamente, se busca determinar el
coeficiente volumétrico de transferencia de masa (kLa) bajo distintas condiciones de operación.
Posteriormente, con los datos obtenidos se pretende realizar una regresión a modelos de predicción
que permitan en investigaciones futuras calcular a priori un valor de este parámetro conociendo cuáles
son las condiciones de operación.
La investigación se llevó a cabo con los biorreactores con capacidad de 7 L y con los de 70 L del Centro
Nacional de Innovaciones Biotecnológicas (CENIBiot). En el biorreactor de 7 L se analizaron 3 niveles de
agitación (100, 250 y 400 RPM), 3 niveles de aireación (2, 4 y 8 LPM) y 3 arreglos de impulsores (2R, MR
y 2M; R siendo turbina Rushton y M hélice marina). Para simular el comportamiento reológico de los
caldos de cultivo se trabajó con una disolución al 0,2 % de goma xantán en agua. Esta disolución posee
un comportamiento pseudoplástico análogo a un caldo de cultivo de hongos completamente
desarrollado.
Se determinó el valor de kLa por medio del método dinámico, utilizando nitrógeno como gas de lavado y
aire como el gas portador de oxígeno. Con un sensor de oxígeno disuelto se tomaron datos cada 10 s
desde una concentración cercana al 0% y hasta que se alcanzaba un nivel cercano a la saturación de
100%. A estos datos de oxígeno disuelto en función del tiempo se les hizo un tratamiento sencillo y se
les graficó en función del tiempo para obtener el valor de kLa como la pendiente de dicha gráfica.
Cuando se obtuvieron los valores del kLa en el nivel de 7 L, por medio de un escalamiento de velocidad
de punta se trabajó en los biorreactores de 70 L. En el biorreactor de 70 L se analizaron 4 niveles de
agitación (referidos en velocidad de punta del impulsor como 31,5; 78,5; 125,7 y 179,1 cm/s), 3 niveles
de aireación (5, 10 y 13 LPM) y 3 arreglos de impulsores (2R, MR y 2M).
Tanto para el nivel de 7 L como el de 70 L se realizó un análisis estadístico para determinar cuáles de los
factores eran determinantes en el valor de kLa y en qué magnitud. Se obtuvo como resultado que en los
biorreactores de 7 L, los 3 factores estudiados fueron significativos así como las interacciones agitación-
arreglo y agitación-aireación. Los niveles de kLa máximos se obtuvieron con una agitación de 400 RPM,
una aireación de 8 LPM y un arreglo 2M. En los biorreactores de 70 L, los 3 factores estudiados también
fueron significativos así como las interacciones agitación-arreglo y agitación-aireación. Los niveles de kLa
máximos se obtuvieron con una agitación de 300 RPM (correspondiente a una velocidad de punta de
179,1 cm/s) una aireación de 13 LPM y un arreglo 2R. Además se obtuvieron las correlaciones para la
estimación del kLa en cada tipo de biorreactor con cada tipo de arreglo. Estas correlaciones presentaron
porcentajes de error bajos a la hora de predecir el valor de kLa en niveles de agitación superiores.
Se recomienda que para estudios posteriores se analicen niveles de agitación mayores en el biorreactor
de 7 L para observar si el arreglo 2M es el más eficiente. Además resulta de interés investigar si
invirtiendo el arreglo MR o incluyendo un impulsor de aspas inclinadas los valores de kLa son superiores.
iv
ÍNDICE GENERAL
Página
v
vi
C.3. Cálculo de los índices de comportamiento (n) y de consistencia (K) predichos de las disoluciones
de goma xantán. ................................................................................................................................... 151
C.4. Cálculo del porcentaje de error entre los índices de consistencia (K) y de comportamiento (n)
experimentales y predichos. ................................................................................................................. 151
C.5. Cálculo de la masa promedio de las muestras de goma xantán medidas en el picnómetro. ....... 152
C.6. Cálculo de la masa neta de disolución de goma xantán en el picnómetro. .................................. 152
C.7. Cálculo de la densidad promedio de las muestras de goma xantán y del promedio general de
densidad. ............................................................................................................................................... 152
C.8 Cálculo de la velocidad superficial del aire en el biorreactor. ........................................................ 153
C.9 Cálculo de la viscosidad aparente. .................................................................................................. 153
C.10. Cálculo de la razón PG/PO ............................................................................................................. 154
C.11. Cálculo de la potencia sin aireación, PO ....................................................................................... 154
C.12 Cálculo de la potencia con aireación, PG ....................................................................................... 155
C.13 Cálculo de la potencia total del sistema ....................................................................................... 155
C.14 Cálculo de la potencia por unidad de volumen ............................................................................ 156
C.15 Cálculo de la velocidad de punta del agitador en el biorreactor de 7 L ....................................... 156
C.16 Cálculo de la velocidad de agitación en el biorreactor de 70 L .................................................... 157
C.17 Cálculo de los parámetros de los modelos predictivos para el kLa............................................... 157
C.18. Cálculo del porcentaje de error entre los valores de kLa experimentales y predichos por las
correlaciones. ........................................................................................................................................ 157
D. Procedimiento experimental ................................................................................................................ 158
D.1. Preparación de las disoluciones de goma xantán y p-clorocresol para los biorreactores de 7 L. . 158
D.2. Acondicionamiento del biorreactor de 7 L. ................................................................................... 158
D.2.1. Armado de la tapa .................................................................................................................. 158
D.2.2. Conexiones entre el controlador y el biorreactor .................................................................. 160
D.2.3. Calibración sensor de pH ........................................................................................................ 160
D.2.4. Calibración sensor de oxígeno disuelto .................................................................................. 162
D.2.5. Calibración del termopar ........................................................................................................ 164
D.2.6. Llenado de la chaqueta........................................................................................................... 164
D.2.7. Ajuste de temperatura y de velocidad de agitación ............................................................... 166
D.3. Desplazamiento del oxígeno presente en la disolución ................................................................ 166
D.4. Aireación de la disolución (corrida experimental para determinar el kLa).................................... 167
D.5. Programación BioXpert XP para la toma de datos ........................................................................ 167
x
xi
xii
Cuadro 8.3. Resumen de los valores del coeficiente volumétrico de transferencia de masa (kLa) en h-1
obtenidos en la etapa experimental con el biorreactor de 7 L y el arreglo de MR. ................................... 70
Cuadro 8.4. Resumen de los valores del coeficiente volumétrico de transferencia de masa (kLa) en h-1
obtenidos en la etapa experimental con el biorreactor de 7 L y el arreglo de 2M. ................................... 70
Cuadro 8.5. Resultados del análisis estadístico realizado sobre los datos experimentales de kLa obtenidos
en el biorreactor de 7 L. .............................................................................................................................. 72
Cuadro 8.6. Resumen de los valores del coeficiente volumétrico de transferencia de masa (kLa) en h-1
obtenidos en la determinación del ámbito de condiciones de operación y el arreglo de 2R. ................... 76
Cuadro 8.7. Resumen de los valores del coeficiente volumétrico de transferencia de masa (kLa) en h-1
obtenidos en la determinación del ámbito de condiciones de operación y el arreglo de 2M. .................. 76
Cuadro 8.8. Resumen de los valores del coeficiente volumétrico de transferencia de masa (kLa) en h-1
obtenidos en la etapa experimental con el biorreactor de 70 L y el arreglo de 2R. ................................... 77
Cuadro 8.9. Resumen de los valores del coeficiente volumétrico de transferencia de masa (kLa) en h-1
obtenidos en la etapa experimental con el biorreactor de 70 L y el arreglo de MR. ................................. 77
Cuadro 8.10. Resumen de los valores del coeficiente volumétrico de transferencia de masa (kLa) en h-1
obtenidos en la etapa experimental con el biorreactor de 70 L y el arreglo de 2M. ................................. 78
Cuadro 8.11. Resultados del análisis estadístico realizado sobre los datos experimentales de kLa
obtenidos en el biorreactor de 70 L. ........................................................................................................... 79
Cuadro 8.12. Correlaciones para la predicción del coeficiente volumétrico de transferencia de masa (kLa)
para los distintos biorreactores con sus respectivos arreglos de impulsores. ........................................... 82
Cuadro 8.13. Valores de kLa obtenidos experimentalmente, valores predichos por la correlación y
porcentaje de error para el biorreactor de 7 L y el arreglo de 2R. ............................................................. 83
Cuadro 8.14. Valores de kLa obtenidos experimentalmente, valores predichos por la correlación y
porcentaje de error para el biorreactor de 7 L y el arreglo de MR. ............................................................ 84
Cuadro 8.15. Valores de kLa obtenidos experimentalmente, valores predichos por la correlación y
porcentaje de error para el biorreactor de 7 L y el arreglo de 2M. ............................................................ 84
Cuadro 8.16. Valores de kLa obtenidos experimentalmente, valores predichos por la correlación y
porcentaje de error para el biorreactor de 70 L y el arreglo de 2R. ........................................................... 84
Cuadro 8.17. Valores de kLa obtenidos experimentalmente, valores predichos por la correlación y
porcentaje de error para el biorreactor de 70 L y el arreglo de MR. .......................................................... 85
Cuadro 8.18. Valores de kLa obtenidos experimentalmente, valores predichos por la correlación y
porcentaje de error para el biorreactor de 70 L y el arreglo de 2M. .......................................................... 85
Cuadro A.1. Porcentajes de oxígeno disuelto en función del tiempo para la corrida con agitación de 300
RPM, aireación de 5 LPM y arreglo 2R en el Biorreactor B. ........................................................................ 96
Cuadro A.2. Viscosidad aparente de la disolución de goma xantán en el Biorreactor 1 para distintas
velocidades de cizalla. ................................................................................................................................. 97
xiii
Cuadro A.3. Viscosidad aparente de la disolución de goma xantán en el Biorreactor 2 para distintas
velocidades de cizalla. ................................................................................................................................. 98
Cuadro A.4. Viscosidad aparente de la disolución de goma xantán en el Biorreactor 3 para distintas
velocidades de cizalla. ................................................................................................................................. 99
Cuadro A.5. Masas medidas en el picnómetro de las disoluciones de goma xantán de los biorreactores.
.................................................................................................................................................................... 99
Cuadro B.1. Índices de comportamiento y de consistencia obtenidos experimentalmente y predichos
para la disolución al 0,2 % de goma xantán en agua. ............................................................................... 143
Cuadro B.2. Masa promedio del picnómetro, masa promedio del líquido y densidad promedio de las
distintas disoluciones de goma xantán en los biorreactores. ................................................................... 143
Cuadro B.3. Velocidad de agitación, flujo de gas, velocidad superficial y viscosidad aparente de los
distintos tratamientos en el biorreactor de 7 L para los 3 arreglos de impulsores. ................................. 143
Cuadro B.4. Razón de potencia, potencia sin aireación (PO) y potencia con aireación (PG) para los
impulsores superior e inferior en los distintos tratamientos en el biorreactor de 7 L para el arreglo 2R.
.................................................................................................................................................................. 144
Cuadro B.5. Razón de potencia, potencia sin aireación (PO) y potencia con aireación (PG) para los
impulsores superior e inferior en los distintos tratamientos en el biorreactor de 7 L para el arreglo MR.
.................................................................................................................................................................. 144
Cuadro B.6. Razón de potencia, potencia sin aireación (PO) y potencia con aireación (PG) para los
impulsores superior e inferior en los distintos tratamientos en el biorreactor de 7 L para el arreglo 2M.
.................................................................................................................................................................. 144
Cuadro B.7. Potencia total y potencia por unidad de volumen en los distintos tratamientos en el
biorreactor de 7 L para el arreglo 2R. ....................................................................................................... 145
Cuadro B.8. Potencia total y potencia por unidad de volumen en los distintos tratamientos en el
biorreactor de 7 L para el arreglo MR. ...................................................................................................... 145
Cuadro B.9. Potencia total y potencia por unidad de volumen en los distintos tratamientos en el
biorreactor de 7 L para el arreglo 2M. ...................................................................................................... 145
Cuadro B.10. Velocidad de agitación en los biorreactores de 7 L, velocidad de punta y velocidad de
agitación correspondiente por impulsor para los biorreactores de 70 L. ................................................ 146
Cuadro B.11. Velocidad de agitación, flujo de gas, velocidad superficial y viscosidad aparente de los
distintos tratamientos en el biorreactor de 70 L para el arreglo 2R......................................................... 146
Cuadro B.12. Velocidad de agitación, flujo de gas, velocidad superficial y viscosidad aparente de los
distintos tratamientos en el biorreactor de 70 L para el arreglo MR. ...................................................... 146
Cuadro B.13. Velocidad de agitación, flujo de gas, velocidad superficial y viscosidad aparente de los
distintos tratamientos en el biorreactor de 70 L para el arreglo 2M. ...................................................... 147
xiv
Cuadro B.14. Razón de potencia, potencia sin aireación (PO) y potencia con aireación (PG) para los
impulsores superior e inferior en los distintos tratamientos en el biorreactor de 70 L para el arreglo 2R.
.................................................................................................................................................................. 147
Cuadro B.15. Razón de potencia, potencia sin aireación (PO) y potencia con aireación (PG) para los
impulsores superior e inferior en los distintos tratamientos en el biorreactor de 70 L para el arreglo MR.
.................................................................................................................................................................. 148
Cuadro B.16. Razón de potencia, potencia sin aireación (PO) y potencia con aireación (PG) para los
impulsores superior e inferior en los distintos tratamientos en el biorreactor de 70 L para el arreglo 2M.
.................................................................................................................................................................. 148
Cuadro B.17. Potencia total y potencia por unidad de volumen en los distintos tratamientos en el
biorreactor de 70 L para el arreglo 2R. ..................................................................................................... 148
Cuadro B.18. Potencia total y potencia por unidad de volumen en los distintos tratamientos en el
biorreactor de 70 L para el arreglo MR. .................................................................................................... 149
Cuadro B.19. Potencia total y potencia por unidad de volumen en los distintos tratamientos en el
biorreactor de 70 L para el arreglo 2M. .................................................................................................... 149
ÍNDICE DE FIGURAS
Página
xv
xvi
Figura 6.8. Diagrama esquemático del sistema de agitación del biorreactor de 70 L modelo V6LE764461
de Applikon. ................................................................................................................................................ 48
Figura 6.9. Diagrama de los impulsores del biorreactor de 70 L. ............................................................... 49
Figura 6.10. Diagrama de la mampara y del burbujeador del biorreactor de 70 L ................................... 49
Figura 6.11. Diagrama esquemático de la línea de entrada de gas al biorreactor de 70 L y el filtro PTFE 50
Figura 6.12. Diagrama del condensador del biorreactor de 70 L................................................................ 51
Figura 6.13. Sistema de drenaje del biorreactor de 70 L con sus distintos componentes. ........................ 52
Figura 6.14. Diagrama de la línea de biodesechos del biorreactor de 70 L . .............................................. 52
Figura 6.15. Diagrama del sistema de válvula de adición del biorreactor de 70 L .................................... 53
Figura 6.16. Manómetros utilizados en el biorreactor de 70 L.. ................................................................. 54
Figura 6.17. Diagrama del disco de ruptura y de la tubería de descarga del biorreactor de 70 L .............. 54
Figura 6.18. Diagrama del sistema de iluminación del biorreactor de 70 L ............................................... 55
Figura 6.19. Sensores utilizados en el biorreactor de 70 L. ........................................................................ 55
Figura 8.1. Distintas gráficas de los residuos de los datos obtenidos en el análisis factorial de las corridas
experimentales en el biorreactor de 7 L. .................................................................................................... 71
Figura 8.2. Gráficas de los efectos principales de los datos obtenidos en el análisis factorial de las
corridas experimentales en el biorreactor de 7 L. ...................................................................................... 73
Figura 8.3. Gráficas de las interacciones principales de los datos obtenidos en el análisis factorial de las
corridas experimentales en el biorreactor de 7 L. ...................................................................................... 75
Figura 8.4. Distintas gráficas de los residuos de los datos obtenidos en el análisis factorial de las corridas
experimentales en el biorreactor de 7 L. .................................................................................................... 78
Figura 8.5. Gráficas de los efectos principales de los datos obtenidos en el análisis factorial de las
corridas experimentales en el biorreactor de 7 L. ...................................................................................... 80
Figura 8.6. Gráficas de las interacciones principales de los datos obtenidos en el análisis factorial de las
corridas experimentales en el biorreactor de 70 L. .................................................................................... 81
Figura B.1. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 100 RPM, aireación de
2 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores 1, 2 y 3. ................................................................................ 100
Figura B.2. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 100 RPM, aireación de
4 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores 1, 2 y 3. ................................................................................ 100
Figura B.3. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 100 RPM, aireación de
8 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores 1, 2 y 3. ................................................................................ 101
Figura B.4. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 250 RPM, aireación de
2 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores 1, 2 y 3. ................................................................................ 101
xvii
Figura B.5. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 250 RPM, aireación de
4 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores 1, 2 y 3. ................................................................................ 102
Figura B.6. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 250 RPM, aireación de
8 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores 1, 2 y 3. ................................................................................ 102
Figura B.7. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 400 RPM, aireación de
2 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores 1, 2 y 3. ................................................................................ 103
Figura B.8. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 400 RPM, aireación de
4 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores 1, 2 y 3. ................................................................................ 103
Figura B.9. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 400 RPM, aireación de
8 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores 1, 2 y 3. ................................................................................ 104
Figura B.10. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 100 RPM, aireación
de 2 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores 1, 2 y 3. .......................................................................... 104
Figura B.11. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 100 RPM, aireación
de 4 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores 1, 2 y 3. .......................................................................... 105
Figura B.12. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 100 RPM, aireación
de 8 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores 1, 2 y 3. .......................................................................... 105
Figura B.13. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 250 RPM, aireación
de 2 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores 1, 2 y 3. .......................................................................... 106
Figura B.14. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 250 RPM, aireación
de 4 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores 1, 2 y 3. .......................................................................... 106
Figura B.15. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 250 RPM, aireación
de 8 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores 1, 2 y 3. .......................................................................... 107
Figura B.16. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 400 RPM, aireación
de 2 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores 1, 2 y 3. .......................................................................... 107
Figura B.17. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 400 RPM, aireación
de 4 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores 1, 2 y 3. .......................................................................... 108
Figura B.18. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 400 RPM, aireación
de 8 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores 1, 2 y 3. .......................................................................... 108
Figura B.19. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 100 RPM, aireación
de 2 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores 1, 2 y 3. .......................................................................... 109
Figura B.20. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 100 RPM, aireación
de 4 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores 1, 2 y 3. .......................................................................... 109
Figura B.21. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 100 RPM, aireación
de 8 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores 1, 2 y 3. .......................................................................... 110
Figura B.22. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 250 RPM, aireación
de 2 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores 1, 2 y 3. .......................................................................... 110
xviii
Figura B.23. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 250 RPM, aireación
de 4 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores 1, 2 y 3. .......................................................................... 111
Figura B.24. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 250 RPM, aireación
de 8 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores 1, 2 y 3. .......................................................................... 111
Figura B.25. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 400 RPM, aireación
de 2 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores 1, 2 y 3. .......................................................................... 112
Figura B.26. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 400 RPM, aireación
de 4 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores 1, 2 y 3. .......................................................................... 112
Figura B.27. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 400 RPM, aireación
de 8 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores 1, 2 y 3. .......................................................................... 113
Figura B.28. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para la corrida con agitación de 10 RPM, aireación de
10 LPM y arreglo de 2R en el Biorreactor A. ............................................................................................. 113
Figura B.29. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para la corrida con agitación de 20 RPM, aireación de
10 LPM y arreglo de 2R en el Biorreactor A. ............................................................................................. 114
Figura B.30. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para la corrida con agitación de 30 RPM, aireación de
10 LPM y arreglo de 2R en el Biorreactor A. ............................................................................................. 114
Figura B.31. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 40 RPM, aireación de
10 LPM y arreglo de 2R en el Biorreactor A. ............................................................................................. 115
Figura B.32. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para la corrida con agitación de 53 RPM, aireación de
10 LPM y arreglo de 2R en el Biorreactor A. ............................................................................................. 115
Figura B.33. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para la corrida con agitación de 60 RPM, aireación de
10 LPM y arreglo de 2R en el Biorreactor A. ............................................................................................. 116
Figura B.34. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para la corrida con agitación de 10 RPM, aireación de
20 LPM y arreglo de 2R en el Biorreactor A. ............................................................................................. 116
Figura B.35. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para la corrida con agitación de 20 RPM, aireación de
20 LPM y arreglo de 2R en el Biorreactor A. ............................................................................................. 117
Figura B.36. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para la corrida con agitación de 30 RPM, aireación de
20 LPM y arreglo de 2R en el Biorreactor A. ............................................................................................. 117
Figura B.37. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 40 RPM, aireación de
20 LPM y arreglo de 2R en el Biorreactor A. ............................................................................................. 118
Figura B.38. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 53 RPM, aireación de
20 LPM y arreglo de 2R en el Biorreactor A. ............................................................................................. 118
Figura B.39. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 60 RPM, aireación de
20 LPM y arreglo de 2R en el Biorreactor A. ............................................................................................. 119
Figura B.40. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 10 RPM, aireación de
10 LPM y arreglo de 2M en el Biorreactor B. ............................................................................................ 119
xix
Figura B.41. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 20 RPM, aireación de
10 LPM y arreglo de 2M en el Biorreactor B. ............................................................................................ 120
Figura B.42. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 30 RPM, aireación de
10 LPM y arreglo de 2M en el Biorreactor B. ............................................................................................ 120
Figura B.43. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 40 RPM, aireación de
10 LPM y arreglo de 2M en el Biorreactor B. ............................................................................................ 121
Figura B.44. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 50 RPM, aireación de
10 LPM y arreglo de 2M en el Biorreactor B. ............................................................................................ 121
Figura B.45. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 10 RPM, aireación de
20 LPM y arreglo de 2M en el Biorreactor B. ............................................................................................ 122
Figura B.46. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 20 RPM, aireación de
20 LPM y arreglo de 2M en el Biorreactor B. ............................................................................................ 122
Figura B.47. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 30 RPM, aireación de
20 LPM y arreglo de 2M en el Biorreactor B. ............................................................................................ 123
Figura B.48. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 40 RPM, aireación de
20 LPM y arreglo de 2M en el Biorreactor B. ............................................................................................ 123
Figura B.49. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 50 RPM, aireación de
20 LPM y arreglo de 2M en el Biorreactor B. ............................................................................................ 124
Figura B.50. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 67 RPM, aireación de
20 LPM y arreglo de 2M en el Biorreactor B. ............................................................................................ 124
Figura B.51. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 53 RPM, aireación de
5 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores A y B. .................................................................................... 125
Figura B.52. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 53 RPM, aireación de
10 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores A y B. .................................................................................. 125
Figura B.53. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 53 RPM, aireación de
13 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores A y B. .................................................................................. 126
Figura B.54. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 132 RPM, aireación
de 5 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores A y B. ............................................................................... 126
Figura B.55. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 132 RPM, aireación
de 10 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores A y B. ............................................................................. 127
Figura B.56. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 132 RPM, aireación
de 13 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores A y B. ............................................................................. 127
Figura B.57. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 211 RPM, aireación
de 5 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores A y B. ............................................................................... 128
Figura B.58. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 211 RPM, aireación
de 10 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores A y B. ............................................................................. 128
xx
Figura B.59. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 211 RPM, aireación
de 13 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores A y B. ............................................................................. 129
Figura B.60. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 300 RPM, aireación
de 5 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores A y B. ............................................................................... 129
Figura B.61. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 300 RPM, aireación
de 10 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores A y B. ............................................................................. 130
Figura B.62. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 300 RPM, aireación
de 13 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores A y B. ............................................................................. 130
Figura B.63. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 60 RPM, aireación de
5 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores A y B. .................................................................................. 131
Figura B.64. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 60 RPM, aireación de
10 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores A y B. ................................................................................ 131
Figura B.65. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 60 RPM, aireación de
13 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores A y B. ................................................................................ 132
Figura B.66. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 150 RPM, aireación
de 5 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores A y B............................................................................... 132
Figura B.67. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 150 RPM, aireación
de 10 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores A y B. ........................................................................... 133
Figura B.68. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 150 RPM, aireación
de 13 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores A y B. ........................................................................... 133
Figura B.69. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 240 RPM, aireación
de 5 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores A y B............................................................................... 134
Figura B.70. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 240 RPM, aireación
de 10 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores A y B. ........................................................................... 134
Figura B.71. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 240 RPM, aireación
de 13 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores A y B. ........................................................................... 135
Figura B.72. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 342 RPM, aireación
de 5 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores A y B............................................................................... 135
Figura B.73. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 342 RPM, aireación
de 10 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores A y B. ........................................................................... 136
Figura B.74. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 342 RPM, aireación
de 13 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores A y B. ........................................................................... 136
Figura B.75. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 67 RPM, aireación de
5 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores A y B. ................................................................................... 137
Figura B.76. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 67 RPM, aireación de
10 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores A y B.................................................................................. 137
xxi
Figura B.77. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 67 RPM, aireación de
13 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores A y B. ................................................................................. 138
Figura B.78. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 169 RPM, aireación
de 5 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores A y B. .............................................................................. 138
Figura B.79. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 169 RPM, aireación
de 10 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores A y B. ............................................................................ 139
Figura B.80. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 169 RPM, aireación
de 13 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores A y B. ............................................................................ 139
Figura B.81. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 270 RPM, aireación
de 5 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores A y B. .............................................................................. 140
Figura B.82. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 270 RPM, aireación
de 10 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores A y B. ............................................................................ 140
Figura B.83. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 270 RPM, aireación
de 13 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores A y B............................................................................. 141
Figura B.84. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 384 RPM, aireación
de 5 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores A y B. .............................................................................. 141
Figura B.85. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 384 RPM, aireación
de 10 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores A y B. ............................................................................ 142
Figura B.86. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 384 RPM, aireación
de 10 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores A y B. ............................................................................ 142
Figura D.1. Piezas que conforman la tapa del biorreactor de 7 L. ............................................................ 159
Figura D.2. Configuración final de la tapa del biorreactor de 7 L. ............................................................ 159
Figura D.3. Imagen del biocontrolador ez-Control del biorreactor de 7 L que muestra los pasos 2-5 de la
calibración de pH ...................................................................................................................................... 161
Figura D.4. Imagen del bio controlador ez-Control del biorreactor de 7 L que muestra el paso 6 de la
calibración de pH ...................................................................................................................................... 161
Figura D.5. Imagen del bio controlador ez-Control del biorreactor de 7 L que muestra el paso 7 de la
calibración de pH ...................................................................................................................................... 162
Figura D.6. Disoluciones tampón utilizadas en la calibración del sensor de pH de los biorreactores de 7 L
y 70 L. ........................................................................................................................................................ 163
Figura D.7. Imagen del bio controlador ez-Control del biorreactor de 7 L que muestra el paso 5 de la
calibración de oxígeno disuelto ................................................................................................................ 164
Figura D.8. Imagen del bio controlador ez-Control del biorreactor de 7 L que muestra el paso 1 del
llenado de la chaqueta .............................................................................................................................. 165
Figura D.9. Imagen del bio controlador ez-Control del biorreactor de 7 L que muestra los pasos 3 y 4 del
llenado de la chaqueta .............................................................................................................................. 166
xxii
El Centro Nacional de Innovaciones Biotecnológicas (CENIBiot) inició actividades en enero de 2007, con
el refrendo de dos convenios, el primero suscrito entre la Unión Europea y el Gobierno de Costa Rica y el
segundo por el Ministerio de Ciencia y Tecnología con el Consejo Nacional de Rectores (CENIBiot, 2013).
Con el fin de cumplir a cabalidad esta misión, es de gran importancia que en CENIBiot se realice la
caracterización de sus equipos de trabajo, entre ellos sus biorreactores. Como se presenta más adelante,
los biorreactores juegan un papel fundamental en los bioprocesos, siendo además instrumentos de gran
complejidad que deben ser descritos y entendidos a cabalidad para poder explotar su potencial al
máximo.
Desde sus inicios y hasta el presente, el centro ha llevado a cabo las fermentaciones en dichos
biorreactores sin un procedimiento de estandarización establecido. Muchas de las condiciones y
parámetros de operación de los biorreactores se modifican a criterio de sus investigadores, que si bien
cuentan con la capacitación en el área de los bioprocesos, no dejan de introducir el factor subjetivo en
los procedimientos. Como se explica en el presente trabajo, el coeficiente volumétrico de transferencia
de masa (kLa) es quizás el parámetro más importante en los bioprocesos y en el escalamiento de estos.
1
2
Se crea así la necesidad del CENIBiot por contar con una herramienta que permita iniciar las futuras
investigaciones relacionadas con cultivos biológicos desde un punto en común; una investigación cuyos
resultados se ajusten adecuadamente a los equipos y a las necesidades con las que cuenta el centro, de
manera que no se tenga que depender de estudios realizados en otras latitudes. La caracterización de
los biorreactores de 7 L y de 70 L del CENIBiot en función de la transferencia de oxígeno a los medios de
cultivo dentro de un ámbito de operación conocido será de gran valor para investigaciones futuras.
El presente proyecto explora ese ámbito de operación para cada uno de los equipos. El ámbito incluye lo
que es la velocidad de agitación dentro de los biorreactores, el flujo de aire que se ingresa al medio de
cultivo, y los impulsores que se encargan de distribuir el aire dentro de la mezcla. El proyecto propone
entonces un modelo de predicción mediante el cual sea posible estimar el kLa partiendo de ciertos
supuestos en las condiciones de operación que se encuentren en el ámbito antes mencionado. Si se
tiene por ejemplo que realizar un cultivo con un microorganismo nuevo, cuya cinética biológica se haya
descrito y esté al alcance, el kLa óptimo para su crecimiento será un parámetro el cual el investigador
deseará obtener. Si se cuenta con un modelo que prediga el kLa de manera eficiente, las pruebas
iniciales serán más cortas y la variable de respuesta más cercana al valor preciso. Consecuentemente, no
sólo habrá un ahorro en tiempo y recursos para dichos bioprocesos, sino que además se espera que
logren resultados más significativos. Los resultados provechosos beneficiarán no sólo al CENIBiot, sino
también al sector académico, al productivo, y en última instancia a la sociedad.
CAPÍTULO 2 – REACTORES BIOLÓGICOS Y SU FUNCIÓN EN LOS
BIOPROCESOS
Diferentes tipos de reactores se han desarrollado para llevar a cabo estas funciones, muchos de los
cuales se han basado en biorreactores presentes en la naturaleza. La mayoría de los biorreactores caen
dentro de una de las siguientes categorías: recipientes sin agitación, recipientes agitados, columnas de
burbujeo, acoplados a bombas de succión, de lechos fluidizados o de lechos empacados. Los tipos de
reactores difieren principalmente en cuanto al modo de agitación y de aireación. En los reactores
agitados mecánicamente, el mezclado se obtiene por medio de agitadores internos mientras que en los
reactores agitados neumáticamente el flujo se logra solo con la aireación. En reactores con reciclo, parte
del líquido es continuamente removido por medio de una bomba hacia un circuito externo. La aireación,
adición de sustratos y la transferencia de calor pueden todos ser suministrados en el circuito externo
(Nielsen, 2002). Un esquema general de estos biorreactores se muestra en la Figura 2.1.
3
4
El tipo más importante de biorreactor que se usa en la industria hoy en día es el de tipo tanque agitado.
Este es típicamente cilíndrico, con una razón de diámetro a altura entre 1:2 y 1:5. El material de
construcción es por lo general acero inoxidable tipo 316L. El reactor tiene un fondo redondeado para
facilitar la limpieza y la esterilización in situ y para evitar las zonas estancadas durante la operación.
También está equipado con un agitador, que consiste de una barra sobre la cual uno o más propulsores
se colocan. La barra del agitador puede estar montada arriba o abajo, siendo esta última configuración
la más común. Es esencial que la barra del agitador entre al equipo de tal manera que se prevenga la
contaminación. Por lo general, se utiliza un doble sello mecánico (Nielsen, 2002).
Figura 2.1. Vista esquemática de algunos tipos de reactores. a) reactor tipo tanque agitado, b) columna
de burbujeo, c) reactor acoplado a bomba de succión, d) reactor de lecho fijo, e) reactor de reflujo
con circuito externo de recirculación e intercambio de calor (Nielsen, 2002).
El enfriamiento (o calentamiento) puede llevarse a cabo a través de la pared del reactor o por medio de
serpentines internos. Alternativamente, el líquido puede ser bombeado hacia afuera del equipo y ser
enfriado o calentado en un intercambiador de calor externo. Para reactores de pequeña escala
(menores a unos pocos m3) el enfriamiento a través de la pared es normalmente suficiente mientras que
para los grandes deba ser necesario utilizar además serpentines internos. El reactor está
frecuentemente equipado con mamparas. Típicamente 4 mamparas equidistantes es lo que se utiliza. El
propósito de las mamparas es evitar la formación de vórtice, el cual disminuiría la eficiencia del
mezclado. El grosor de la mampara es usualmente 1/12 o 1/10 del diámetro del tanque (Nielsen, 2002).
Existen diferentes tipos de propulsores disponibles. Sus características varían con respecto al patrón de
flujo, capacidad de suspensión y capacidad de dispersión. Se pueden distinguir dos tipos principales de
5
propulsores: propulsores de flujo axial (propelas) y propulsores de flujo radial (turbinas de hoja plana).
El diseño con seis aspas igualmente espaciados montadas sobre un disco es por lo general llamado
turbina de Rushton. El diámetro del propulsor es usualmente cerca de 1/3 del diámetro del reactor para
turbinas de Rushton, mientras que los propulsores de aspas inclinadas pueden tener un diámetro mayor
a la mitad del diámetro del tanque (Nielsen, 2002).
La aireación ocurre al introducir aire u oxígeno por medio de un burbujeador el cual se encuentra
localizado debajo del propulsor inferior. El burbujeador puede consistir de un tubo abierto simple, o un
anillo con orificios pequeños. El burbujeador de anillo por lo general tiene un diámetro ligeramente
menor que el del propulsor.
La razón entre el flujo volumétrico de aire y el área de sección transversal de un reactor se conoce como
la velocidad superficial del gas. Esta velocidad no debe ser muy grande para asegurar una dispersión
eficiente y una buena utilización del gas. A velocidades superficiales muy altas, el propulsor llega a estar
completamente envuelto en el gas y la capacidad de dispersión cae dramáticamente. A este fenómeno
se le conoce como inundación (Nielsen, 2002).
Muchos estudios a su vez han indicado la presencia de gradientes de concentración de oxígeno disuelto
como resultado de un mezclado y una transferencia de masa insuficiente. Su existencia ha sido inferida a
partir de análisis de régimen y en algunos casos por medio de mediciones directas. Estos gradientes
pueden ser muy perjudiciales en fermentadores ya que al existir agitación, las células circulan desde las
zonas con buena mezcla (cerca del propulsor) a las zonas con baja mezcla (lejos del propulsor) y
experimentarán fluctuaciones en la concentración de oxígeno (Oosterhuis, 1984).
En algunos procesos de fermentación, el desempeño puede ser gobernado por la eficiencia con la cual
los nutrientes como la glucosa son mezclados. La falta de homogeneidad también se presenta cuando se
da la adición o la remoción de un componente de una manera no uniforme. Es así como la adición de
6
ácido o base concentrada para el control del pH elevará o disminuirá el pH local a un valor que persistirá
por mucho tiempo si la tasa de mezclado es baja. El pH de disolución es un parámetro fundamental en la
regulación del metabolismo celular y los efectos de variaciones espaciales en pH pueden ser
importantes para el escalamiento hacia arriba exitoso (Paul, 2004).
La viscosidad del caldo influenciará el mezclado masivo, la dispersión de aire y la potencia consumida
por el agitador. El comportamiento reológico de los caldos de fermentación generalmente se ve
influenciado por la morfología del microorganismo y en algunos casos por la formación de productos
extracelulares como por ejemplo la goma xantán y la goma gelan. En suspensiones de microorganismos
filamentosos, como diversas especies de hongos, las hifas miceliales rápidamente se entrelazan. En
conjunto con una alta concentración de biomasa, el medio de cultivo tiene comportamiento no
newtoniano tipo plástico de Bingham o pseudoplástico. El comportamiento no newtoniano puede
representar serias implicaciones para el mezclado masivo. La presencia o ausencia de un esfuerzo de
cedencia dictará si hay flujo en regiones con bajo esfuerzo cortante en el contenedor. Las regiones
estancadas fuera del vórtice de agitación persisten aún en suspensiones aireadas; y por lo tanto, la
transferencia adecuada de oxígeno puede llevarse a cabo efectivamente solamente en la vecindad del
impulsor. Los bajos niveles de oxígeno disuelto como resultado de una pobre transferencia y mezclado
de oxígeno pueden causar cambios en el metabolismo microbiano, su productividad y la calidad del
producto (Amanullah, 2002).
CAPÍTULO 3 – EL COEFICIENTE VOLUMÉTRICO DE TRANSFERENCIA DE
MASA (KLA)
Figura 3.1. Gradientes de concentración entre dos fases en contacto (Welty, 1999).
7
8
El flujo del componente A de una fase a la otra se puede describir por medio de la ecuación (3.1)
( ) (3.1)
Siendo Jo la intensidad de flujo molar del componente A (mol ∙ m-2 s-1) a través de la interfase gas-líquido:
kG y kL son los coeficientes de transferencia de masa locales para el gas y el líquido respectivamente.
Debido a que las concentraciones interfasiales no son medibles directamente y considerando el
coeficiente global de transferencia de masa, la ecuación (3.1) puede reescribirse como:
( ) (3.2)
Donde pA* es la presión parcial del componente A en el equilibrio con la fase líquida, CA* es la
concentración de saturación del componente en el líquido en equilibrio con la fase gaseosa. KG y KL son
los coeficientes globales de transferencia de masa en el gas y en el líquido respectivamente. Si se utiliza
la ley de Henry y se combinan las ecuaciones (3.1) y (3.2) se obtiene:
(3.3)
(3.4)
El balance de masa para el oxígeno disuelto en una fase líquida bien mezclada puede verse como:
(3.5)
Donde,
dC/dt = tasa de acumulación del oxígeno en la fase líquida, mol ∙ L-1 ∙ s-1
OTR = tasa de transferencia del oxígeno del gas al líquido, mol ∙ L-1 ∙ s-1
OUR = tasa de utilización del oxígeno por parte de los microorganismos, mol ∙ L-1 ∙ s-1
La OTR puede calcularse utilizando la ecuación (3.4) mientras que la OUR puede ser expresada como
qO2∙Cx, donde el primer término corresponde a la tasa específica de consumo del microorganismo
empleado y el segundo a la concentración del microorganismo en el medio (García-Ochoa, 2009).
Los métodos más comunes utilizados para medir la tasa de transferencia de oxígeno en los bioprocesos
microbianos pueden clasificarse dependiendo de si la medición se realiza en ausencia de
microorganismos o con células muertas o si se hace en presencia de biomasa que consume oxígeno
durante el período de medición (García-Ochoa, 2009).
En ausencia de biomasa, cuando se cuenta con células que no están respirando o cuando no se están
llevando a cabo reacciones bioquímicas, OUR = 0. En este caso la ecuación (3.5) puede simplificarse a:
(3.6)
Los métodos a continuación se basan en la ecuación (3.6) y las técnicas para medir la concentración de
oxígeno disuelto se dividen en dos grupos: los métodos químicos y los métodos físicos (García-Ochoa,
2009).
10
Los métodos químicos fueron los primeros en ser ampliamente aceptados. Sin embargo, estos no se
recomiendan para determinar los coeficientes volumétricos de transferencia de masa en el caso de los
biorreactores con burbujeadores debido a los cambios en las propiedades fisicoquímicas de los líquidos,
principalmente los cambios en coalescencia, producidos por la adición de químicos. Estos métodos
pueden dar valores más altos que los reales debido a que la tasa de absorción puede engrandecerse por
las reacciones químicas rápidas que ocurren en la fase líquida si las condiciones experimentales no se
mantienen dentro de ciertos límites (García-Ochoa, 2009).
Método de oxidación de sulfito de sodio: este método se basa en la reacción del sulfito de sodio, un
agente reductor, con el oxígeno disuelto para producir sulfato en la presencia de un catalizador
(usualmente un catión divalente como Cu2+ o Co2+). El método fue descrito por primera vez por Cooper
(1944) e involucra la siguiente reacción:
(3.7)
Existe un rango de concentración de sulfito de sodio (desde 0,04 a 1 N) para el cual la reacción es tan
rápida que la concentración de oxígeno puede suponerse como de cero. La velocidad de reacción es
mucho mayor que la velocidad de transferencia de oxígeno; por lo tanto, la tasa de oxidación es
controlada por la tasa de transferencia de masa y si se mide esta tasa de oxidación se puede obtener la
tasa de transferencia de oxígeno. Al utilizar este método es necesario tener presente que la velocidad de
reacción es una función compleja de la concentración del catalizador y de las condiciones operacionales
y que estás deben ser controladas para obtener mediciones reproducibles (Linek, 1981).
El procedimiento experimental consiste en el llenado del reactor con una disolución 1 N de sulfito de
sodio que contenga al menos una concentración 1 mM de ión Cu2+, activar la entrada de aire y comenzar
el conteo cuando el aire sale del burbujeador. Se deja que la reacción de oxidación ocurra por unos
minutos y luego de eso se detiene el flujo de aire, la agitación. Durante el proceso se toman alícuotas de
la disolución que se mezclan con un exceso de reactivo estándar de yodo para luego titular las muestras
con una disolución estándar de tiosulfato de sodio utilizando almidón como indicador. Las reacciones
que se llevan a cabo son las siguientes:
(3.8)
(3.9)
La cantidad de sulfito residual también puede ser estimada indirectamente con la estequiometría de la
reacción (3.8) por medio de determinación colorimétrica de la concentración de yodo como lo describe
11
Yang (1992). Una vez que la concentración de sulfito se ha determinado en función del tiempo, la tasa
de consumo de sulfito se determina y el kLa puede ser calculado de la forma:
(3.10)
Este método es muy simple de utilizar pero presenta la limitación de que la hidrodinámica de la
disolución cambia al agregar el sulfato de sodio lo cual genera que las estimaciones del k La suelan ser
mayores que las que son en la realidad (García-Ochoa, 2009).
Método de absorción de CO2: este método fue propuesto por Danckwerts (1966) y consiste en la
absorción de dióxido de carbono en una disolución alcalina. Las reacciones que ocurren son las
siguientes:
(3.11)
(3.12)
De acuerdo con Danckwerts (1970), la reacción de la ecuación (3.11) es de cinética de segundo orden
con una constante de reacción de 5 x 103 L∙mol-1∙s-1 a 20 °C. Por otro lado, la reacción (3.12) tiene una
cinética de primer orden con respecto al dióxido de carbono con una constante de reacción de 2 x 10 -2 s-
1
a 20 °C. Por lo tanto, en cualquier disolución en donde la concentración de OH- es mayor que 10-4 M (es
decir, un pH> 10), la tasa de reacción de (3.11) tendrá una velocidad constante de pseudo primer orden
de al menos 0,5 s-1, la cual es 25 veces mayor que la velocidad de la reacción (3.12). Así, es posible
asumir que la reacción (3.12) es el paso controlante que determina la tasa de absorción de dióxido de
carbono en soluciones básicas con un pH superior a 10. El coeficiente de transferencia de masa se puede
obtener a partir de:
(3.13)
√
Donde k es la constante de velocidad de la reacción (3.11). En principio, este método utiliza una reacción
más fácilmente controlable que el método de la oxidación de sulfito. No obstante, tiene desventajas
similares al método anterior debido a la necesidad de utilizar altas concentraciones de ión hidroxilo el
cual inhibe la coalescencia de burbujas y resulta en un kLa sobreestimado (García-Ochoa, 2009).
Para cuantificar la transferencia de masa de otros componentes, en este caso del oxígeno, se puede
utilizar la relación entre los coeficientes volumétricos de transferencia de masa de dos compuestos
distintos expresada por la teoría de capa. De esta manera:
12
(3.14)
Donde DO2 y DCO2 corresponde a las difusividades del oxígeno y del dióxido de carbono en el medio
respectivamente (García-Ochoa, 2009).
Los métodos físicos emplean la respuesta de un sensor de oxígeno ante los cambios en la concentración
del gas dispersado en el medio bajo condiciones no estacionarias. Estos métodos son actualmente los
más comúnmente utilizados para la estimación de la transferencia de oxígeno ya que se basan en la
medición de la concentración de oxígeno disuelto en el líquido durante la absorción o desorción de
oxígeno en la disolución (García-Ochoa, 2009).
Método dinámico: este método analiza el cambio dinámico en la concentración de oxígeno disuelto
cuando ocurre un cambio rápido en la concentración del gas de entrada. La ecuación (3.5) se puede
utilizar nuevamente, de nuevo con OUR = 0. Si se integra entre dos marcas de tiempo (t) se obtiene la
expresión:
(3.15)
Este método ha sido utilizado por muchos años (Van’t Reit, 1979; Nishikawa, 1981; García-Ochoa, 1998)
y fue descrito inicialmente por Wise (1951). La técnica dinámica de absorción consiste en producir la
eliminación del oxígeno en la fase líquida, utilizando por ejemplo un burbujeo con nitrógeno o con la
adición de sulfito de sodio, hasta que la concentración de oxígeno sea igual a cero. Luego el líquido se
pone en contacto de nuevo con el aire, midiendo la variación de la concentración de oxígeno con el
tiempo. Para este caso, se utiliza la siguiente expresión:
(3.16)
( )
Por otro lado, la técnica de desorción consiste en administrar aire hasta que la saturación de la
concentración de oxígeno en el líquido se alcance. Luego se introduce nitrógeno al recipiente y se
registra la disminución en la concentración de oxígeno disuelto como una función del tiempo. En este
caso, la ecuación (3.15) se modifica y se obtiene:
(3.17)
( )
13
Las ecuaciones (3.16) y (3.17) describen el transcurso de tiempo en el oxígeno disuelto desde el reinicio
de la aireación o cuando se elimina del cultivo. En ambos casos, el kLa puede determinarse de la
pendiente de la gráfica del logaritmo de la función de la concentración respectiva en función del tiempo
(García-Ochoa, 2009).
Si bien este método es muy utilizado, es necesario tomar en cuenta que el tiempo de respuesta del
sensor de oxígeno, τR, es un parámetro crítico para la determinación de valores precisos de oxígeno
disuelto. Este tiempo de respuesta puede afectar la determinación correcta del coeficiente de
transferencia de masa si el tiempo característico para el transporte de oxígeno, 1/kLa, es del mismo
orden que el tiempo de respuesta del sensor, definido como el tiempo necesario para alcanzar el 63%
del valor final medido cuando se es expuesto a un cambio rápido en la concentración (Van’t Reit, 1979).
El tiempo de respuesta del sensor se puede determinar transfiriendo el sensor de oxígeno desde una
disolución con sulfito de sodio, cuya concentración de oxígeno sea de cero, hacia otra disolución que
esté saturada de aire, con un 100% de saturación. En caso de que el sensor de oxígeno tenga un valor
alto de τR es necesario introducir una corrección al modelo de respuesta de la ecuación (3.6). Una buena
aproximación es una dinámica de primer orden descrita por Weiland (1981).
(3.18)
Donde CME es la concentración medida por el sensor de oxígeno disuelto. La combinación de las
ecuaciones (3.6) y (3.18) permiten obtener el valor de kLa de las mediciones de concentración de
oxígeno disuelto en caso de saturación de acuerdo a la siguiente ecuación:
(3.19)
[ ( ) ]
Suponiendo que la respuesta de sensor es de primer orden, caracterizado por una constante de tiempo,
un criterio simple para la selección de un sensor adecuado, y sin tomar en cuenta este efecto, sería que
τR < 1/ kLa (Van’t Riet, 1979). Cuando únicamente un medidor se utiliza este método es difícil porque
depende enormemente del modelado de la dinámica del medidor, de la posición de este en el reactor y
de las suposiciones sobre las condiciones hidrodinámicas (García-Ochoa, 2009).
tiempo de rezago del sensor el cual es más crítico en las etapas iniciales. Sin embargo, no se recomienda
truncar más del 30% de los primeros datos (Merchuk, 1990).
Este método utiliza un analizador de oxígeno gaseoso para medir la concentración de oxígeno tanto en
el flujo de gas a la entrada como a la salida del biorreactor y un sensor para medir la concentración de
oxígeno disuelto en el líquido. Un balance de masa de oxígeno en estado estacionario es el siguiente:
(3.20)
Donde FIN y FOUT son las tasas de flujo molar de oxígeno medidas a la entrada y la salida del biorreactor
respectivamente y V es el volumen del biorreactor. En el estado estacionario, la tasa de transferencia de
oxígeno desde las burbujas es igual a la tasa de consumo de oxígeno por parte de las células, es decir:
(3.21)
Una vez que se determina la tasa de utilización de oxígeno a partir de la medición de este en el gas de
salida y al mismo tiempo se mide la concentración de oxígeno disuelto en el medio, el kLa puede
calcularse de acuerdo a:
(3.22)
Los métodos dinámicos se basan en la técnica propuesta por Taguchi (1967) que mide la actividad
respiratoria de los microorganismos que están creciendo activamente en el biorreactor. Si la entrada de
15
aire al biorreactor se restringe, la concentración de oxígeno disuelto disminuirá a una tasa equivalente al
consumo de oxígeno producto de la respiración del microorganismo. Bajo estas condiciones, la ecuación
(4.5) puede simplificarse a:
(3.23)
Figura 3.2. Descripción esquemática de la medición directa del OTR en bioprocesos por medio de la
técnica dinámica clásica (García-Ochoa, 2009).
Cuando la aireación se reanuda, la concentración de oxígeno disuelto aumenta hasta que alcanza la
concentración del estado estacionario. Utilizando el valor estimado de OUR el kLa puede ser
determinado a partir del perfil de concentración de oxígeno disuelto utilizando nuevamente la ecuación
(3.5). Bajo estas condiciones, para una concentración dada de biomasa y una vez que el valor de qO2 es
conocido, la ecuación (3.5) puede ser integrada tomando en consideración el tiempo en el cual la
aireación del cultivo se reanuda (t = t1 y C = CL, ambos parámetros conocidos) obteniéndose la siguiente
expresión:
(3.24)
∫
16
La ecuación (3.24) puede ser utilizada para determinar la transferencia volumétrica de oxígeno varias
veces durante el proceso de producción al resolver esta ecuación para cada conjunto de datos
experimentales de CL en función del tiempo. Este método es simple y puede aplicarse durante una
fermentación real, recordando que debe cumplirse con la condición de que el tiempo de respuesta de
sensor de oxígeno sea menor al del proceso de transferencia de masa como se mencionó previamente
(García-Ochoa, 2009).
Se han propuesto otras técnicas para la medición del coeficiente volumétrico de transferencia de masa
las cuales mejoran ciertos aspectos de los métodos clásicos. Algunos de ellos se basan en una reacción
química como por ejemplo la oxidación de hidracina propuesta por Onken (1985) o la biooxidación de
catecol la cual forma un semialdehído 2-hidroximucónico y es catalizada por la enzima catecol-2,3-
dioxigenasa (Ortiz-Ochoa, 2005). Hill (2006) elabora un método que utiliza el cambio de pH producto de
un constante burbujeo de dióxido de carbono en un reactor bien mezclado. Si bien este método se
utiliza originalmente para la medición de la transferencia de masa del dióxido de carbono, se puede
correlacionar con la transferencia de oxígeno por medio de la teoría de capa (ecuación 3.14) (Hill, 2006).
Otros métodos consisten en la medición de la tasa de crecimiento de un microorganismo estrictamente
aeróbico en condiciones limitadas de oxígeno por un período de tiempo específico (Duetz, 2000).
También existen técnicas para la determinación del coeficiente de transferencia de masa basadas en
métodos físicos. Carbajal (2004) propone el método del cambio dinámico de presión, en donde se mide
el cambio en la concentración de oxígeno disuelto cuando se cierra parcialmente la salida del gas de un
medio de cultivo para aumentar la presión parcial de oxígeno. Este método tiene la ventaja sobre el
método dinámico tradicional en que en ningún momento se priva a los microorganismos de oxígeno
(Carbajal, 2004). Otra técnica es conocida como el método dinámico con pulsos azarosos y consiste en la
generación de perturbaciones de corta duración en el aire de entrada al biorreactor, conocidas como
pulsos. Los pulsos pueden ser nitrógeno puro o aire, por lo que la concentración del oxígeno disuelto
varía al ocurrir cada pulso y esto puede ayudar a determinar el kLa (Gauthier, 1991). Pendersen (1994)
introduce un nuevo método que consiste en la inyección del isótopo radioactivo Kr-85 dentro del medio
y la posterior medición de la radioactividad en el gas de salida. Este método, al igual que los que utilizan
la concentración de dióxido de carbono, se vale de la teoría de capa para predecir el kLa del oxígeno a
partir del de kriptón (Pendersen, 1994).
3.3.4. Comparación de los valores de kLa obtenidos por los diferentes métodos
Como se mencionó previamente, los métodos químicos tienen la limitación de los cambios en la
dinámica del fluido causada por la adición de sustancias adicionales. Entre los métodos físicos, el
método dinámico es por mucho el más comúnmente utilizado en las últimas décadas para evaluar el kLa
debido a su simplicidad y su buena precisión. Tanto las mediciones de absorción como la de desorción
dan valores idénticos del kLa bajo las mismas condiciones hidrodinámicas (Gomez, 1995); sin embargo, si
el tiempo de respuesta del sensor de oxígeno es de la misma magnitud que el tiempo del proceso de
transferencia de oxígeno (1/kLa), la respuesta dinámica del sensor debe tomarse en cuenta para la
17
determinación correcta del kLa (García-Ochoa, 2009). En el Cuadro 3.1 se muestra una comparación de
los diferentes métodos para la determinación del coeficiente volumétrico de transferencia de masa en
bioprocesos.
Método de Kr-85 0 a 0,3 Minutos Cualquiera El uso del isótopo radioactivo puede causar
algunos problemas en aplicaciones
industriales. Puede ser aplicado en procesos
microbianos.
Medición del pH en 0 a 0,1 Minutos Cualquiera La adición de sales no mejor la tasa de
disoluciones de CO2 transferencia de masa del CO2. No puede ser
aplicado a procesos microbianos.
18
(3.25)
( )
Donde,
C1 = constante que depende de los parámetros geométricos del sistema y del agitador utilizado
μa = viscosidad aparente, Pa ∙ s
El término de potencia por unidad de volumen de la ecuación (3.25) puede ser sustituido por la
velocidad del agitador, N, haciendo la salvedad de que se introduce un error en la predicción del kLa si se
trabaja con un medio que es distinto en composición al que se utilizó para obtener los valores de los
exponentes (García-Ochoa, 2009). Los valores de los exponentes de los términos de la ecuación (3.25)
van a depender de cada sistema en particular. Para sistemas no viscosos, las correlaciones más utilizadas
son las propuestas por Van’t Riet (1979). Para el agua bajo condiciones de coalescencia se utiliza la
expresión (3.26):
19
(3.26)
( )
Donde 0,002 m3≤ V ≤ 2,6 m3 y 500 W/m3≤ (Pg/ V) ≤ 10 000 W/m3. Para disoluciones salinas sin
coalescencia se utiliza la expresión (3.27):
(3.27)
( )
Es importante notar que por tratarse de sistemas no viscosos, se elimina el término relacionado a la
viscosidad aparente. El modelo asume en este caso que las disoluciones son newtonianas (Van’t Riet,
1979).
Otra forma para predecir el kLa es por medio de números adimensionales tales como el de Sherwood
(kLa D2/DL) o el de Stanton (kLa V/Q) expresados en función de otros como el de Reynolds (ρND2/μ),
Schmidt (μ/ρDL), Weber (ρNT3/σ), Aireación (NT/Vs), Froude (N2T/g), parámetros geométricos del
biorreactor y propiedades reológicas del fluido. García-Ochoa (2009) realiza una recopilación de algunas
de las correlaciones propuestas por diversos autores.
Los valores de kLa disminuyen conforme aumenta la viscosidad del líquido (Arjunwadkar, 1998; García-
Ochoa; 1998). Gogate (2000) explica que este fenómeno se presenta debido a que la distribución del
tamaño de las burbujas en esta disolución es tal que predominan las burbujas muy grandes y las muy
pequeñas. Las burbujas grandes tienen una alta velocidad de ascensión, poco tiempo de retención y un
área superficial baja. Por otro lado, las burbujas muy pequeñas poseen muy poco oxígeno y se agotan
rápidamente. Además, con un aumento en la viscosidad existe un aumento en la capa límite la cual
aumenta la resistencia a la transferencia de masa. Por lo tanto, únicamente los vórtices con suficiente
20
energía pueden penetrar esta capa y lograr el rompimiento de las burbujas o la transferencia de solutos
gaseosos al líquido (Gogate, 2000).
La presencia de espuma en los bioprocesos es algo muy común y una estrategia para controlar esta
situación es con el uso de un agente antiespumante. Los agentes antiespumantes de silicón son
considerados como ideales entre los disponibles para sistemas biológicos debido a su naturaleza inerte.
Los agentes antiespumantes actúan al alterar las características de la tensión superficial las cuales
también afectan el comportamiento de coalescencia en la fase gaseosa, y a su vez, afecta el k La (Gogate,
2000). La coalescencia aumenta y se forman burbujas más grandes, por lo que la transferencia
disminuye (Arjunwadkar, 1998). Otros autores han señalado que estas sustancias provocan un efecto
barrera debido a la capa de surfactante que se forma en la interfase gas-líquido la cual ofrece una
resistencia al movimiento de las moléculas de oxígeno (Yagi, 1974; Linek, 2005)
En los sistemas de fermentación, es muy común la utilización de más de un agitador debido a que
aumenta el tiempo de retención del gas, disminuye el consumo de potencia general, disminuye el
esfuerzo cortante y mejora la suspensión de sólidos así como el mezclado en general (Gogate, 2000).
Cuando existe entonces más de un agitador, Machon (1988) estudió los efectos de la separación entre
los agitadores sobre el kLa y concluyó que estos valores aumentan conforme se hace un aumento en el
espaciado de los agitadores. El valor incrementado en el kLa se puede atribuir al hecho de que conforme
aumenta el espaciado entre agitadores, la magnitud de la influencia del agitador en el campo de flujo
generado por el otro agitador disminuye y se da una situación que sería similar a tener a dos agitadores
rotando independientemente. Debido a esto aumenta el tiempo de retención de gas y por lo tanto el
valor del coeficiente volumétrico de transferencia de masa (Machon, 1988).
Dado que el agitador es el dispositivo principal de dispersión del gas, este naturalmente tendrá un
profundo efecto en las características de transferencia de masa del sistema. Arjunwadkar (1998) realizó
experimentos con combinaciones distintas de agitadores y reportó que una combinación de una turbina
de disco plano (Rushton) en la posición inferior y una turbina de aspa inclinada con flujo descendente en
la posición superior produce el mejor desempeño por unidad de potencia consumida. Esto se debe a
que la retención del gas es máxima cuando se utiliza este arreglo. En términos de dispersión, dos
turbinas Rushton son más eficientes que el arreglo descrito previamente pero consumen más potencia
(Arjunwadkar, 1998).
Vashitz (1989) ha reportado que el coeficiente de transferencia de oxígeno aumenta con el consumo de
oxígeno por parte de los microorganismos en un cultivo de Xanthomonas campestris. Calik (1997; 2004)
realizó estudios similares en Pseudomonas dacunhae y Escherichia coli y describió resultados similares.
21
Este efecto se presenta debido a que existe una mejora en la transferencia conforme el oxígeno que
entra en disolución es consumido por los microorganismos presentes en el medio. La variación en la tasa
específica de absorción de gas por unidad de fuerza motriz por unidades de área interfasial debido a la
presencia de microorganismos se conoce como el factor de mejora biológico, E. En términos numéricos,
E se puede ver de la siguiente manera:
(3.28)
4.1. Generalidades
La goma xantán es un polisacárido extracelular secretado por el microorganismo Xanthomonas
campestris. Fue descubierta en los años 50 en Northern Regional Research Laboratories del
Departamento de Agricultura de los Estados Unidos. Se le conoce también como polisacárido β-1459 y
se le estudió ampliamente por propiedades que permitirían suplementar a otras gomas sintéticas y
naturales (García-Ochoa, 2000). La goma xantán es soluble en agua y sus disoluciones presentan un
comportamiento altamente pseudoplástico. Su viscosidad tiene una estabilidad excelente en un amplio
ámbito de pH y temperatura y el polisacárido es resistente a la degradación enzimática (Sworn, 2000).
La goma xantán no es tóxica y ni inhibe el crecimiento bacteriano. No califica como alérgeno ni causa
irritación al contacto con la piel o los ojos (García-Ochoa, 2000).
Perdensen (1993) describe a las disoluciones de goma xantán como las más parecidas reológicamente a
los caldos de cultivo de Penicillium chrysogenum y esta característica es la que ha popularizado el uso de
las disoluciones de goma xantán como medio de simulación de caldos de cultivo en otras investigaciones
(García-Ochoa, 1998; Badino, 2001; García-Ochoa, 2005). El comportamiento reológico de una
disolución al 0,2 % de goma xantán corresponde al de un medio de cultivo con una concentración de
aproximadamente 20 g/L de biomasa (Pendersen, 1994).
4.2. Estructura
La estructura primaria de la goma xantán se muestra en la Figura 4.1. El polisacárido consiste en un
esqueleto de β-D-glucosa con uniones lineales (1 → 4) con una cadena lateral de trisacáridos de glucosa
de por medio en C-3 que contiene un residuo de ácido glucorónico unido (1 → 4) a una unidad de
manosa terminal y a una segunda manosa (1 → 2) que se conecta a la cadena principal.
Aproximadamente un 50% de los residuos de manosas terminales tienen un piruvato unido a ellos entre
las posiciones 4 y 6 por medio de un enlace cetónico y el residuo no terminal por lo general posee un
grupo acetilo en C-6. La presencia de ácidos acético y pirúvico genera que la molécula sea un
polisacárido tipo aniónico (García-Ochoa, 2000).
Estudios con difracción de rayos X en fibras de goma xantán ordenadas han mostrado que la
conformación molecular consiste en una hélice de cinco pliegues con una separación de 0,94 nm entre
cada pliegue, lo que le otorga una altura total a la molécula de 4,7 nm. En esta conformación la cadena
lateral de trisacáridos se encuentra alineada con el esqueleto de la molécula y estabiliza la conformación
general por medio de interacciones no covalentes, principalmente puentes de hidrógeno. En disolución
las cadenas laterales se envuelven alrededor de la cadena principal y por lo tanto protegen los enlaces
β-(1 → 4) de ataques externos. Se cree que esta protección es la responsable de la estabilidad de la
22
23
goma ante condiciones adversas (Sworn, 2000). Las cadenas también pueden existir como hélices dobles
o triples y estas variaciones son producto de las condiciones de producción de la goma (García-Ochoa,
2000).
Las disoluciones de goma xantán con baja concentración iónica presentan una transición térmica. Por
debajo de una temperatura crítica, que es dependiente de la concentración de sales en la disolución (ver
Figura 4.2), se ha propuesto que el polisacárido se comporta como un bastón rígido. Arriba de esta
temperatura, la estructura pasa por una transición hélice-bucle que afecta por lo tanto la viscosidad
resultante de la disolución. Esta transición es reversible y las moléculas regresan a su formación
helicoidal original conforme se enfrían. Una disolución de goma xantán también es capaz de formar
asociaciones intermoleculares las cuales forman una red compleja de moléculas débilmente unidas
(Sworn, 2000).
24
La Figura 4.3 muestra el efecto de la tensión de corte en una disolución al 0.5% de goma xantán. Se
cubren once órdenes de magnitud y la goma xantán presenta propiedades pseudoplásticas en la
mayoría del ámbito. Tanto en los puntos más altos de esfuerzo como en los más bajos se muestra que
hay aplanamiento de la curva de viscosidad. A estas regiones se les conoce como las regiones
newtonianas superior e inferior (Sworn, 2000).
25
Figura 4.3. Curva de flujo de una disolución al 0,5% de goma xantán en agua de grifo estandarizada. El
agua de grifo estandarizada se prepara disolviendo 1 g de NaCl y 0,15 g de CaCl2∙2H2O en
1 litro de agua desionizada (Sworn, 2000).
Las disoluciones de goma xantán al 1% o de concentración mayor tienen la apariencia de un gel cuando
están en reposo. Sin embargo, estas mismas disoluciones se vierten con facilidad y tienen baja
resistencia al mezclado y al bombeo. Estas mismas características se observan en los niveles más
comunes de concentración, que se encuentran entre el 0,1 % y el 0,3% (Sworn, 2000).
26
La reología de las disoluciones de goma xantán se puede ajustar al modelo de Ostwald de Waele que
establece que:
(4.1)
Donde
µa viscosidad a ar t Pa s
K í dic d co sist cia Pa sn
γ v ocidad d ciza a s-1
n = índice de comportamiento, adimensional
García-Ochoa (2000) expone dos expresiones para predecir los valores de los índices de
comportamiento y de consistencia del modelo de Ostwald de Waele partiendo del porcentaje peso-
volumen de goma en disolución y de la temperatura de dicha disolución. Estas expresiones son las
siguientes:
(4.2)
(4.3)
En las ecuaciones (4.2) y (4.3), K tiene unidades de kg m-1 sn-2, Cp es el porcentaje peso/volumen y TM es
la temperatura de la disolución en °C. KX, Kb, m, n1, n2 y b son parámetros cuyos valores se muestran en
el Cuadro 4.2.
Cuadro 4.2. Parámetros utilizados en las ecuaciones para la estimación de los índices de
comportamiento y de consistencia de disoluciones de goma xantán en función de la
temperatura (García-Ochoa, 2000).
TM (°C) KX m Kb n1 n2 b
25 54.01 2,40 -0,024 0,558 -1,54 3,2 x 10-3
40 20.70 2,10 -0,021 0,477 -0,69 2,1 x 10-3
60 4.47 0,79 -0,023 0,412 -098 3,3 x 10-3
80 36.24 2,09 -0,025 0,424 -0,92 3,7 x 10-3
Otro modelo que describe muy bien el comportamiento de las disoluciones de goma xantán es el
modelo de Casson que toma en consideración un esfuerzo de cedencia inicial (τ0) y la constante de
Casson (Kc):
(4.4)
La manera en la cual las sales afectan la viscosidad depende de la concentración de goma xantán en la
disolución. A niveles del 0,25% de goma o inferiores, las sales monovalentes como el cloruro de sodio
causan una disminución leve de la viscosidad. Este efecto se ha atribuido a la reducción de las
dimensiones de las moléculas debido a la disminución de las fuerzas electroestáticas intermoleculares
(García-Ochoa, 2000). A niveles mayores el efecto es contrario y se ha atribuido a que existe una mayor
interacción entre las moléculas en general. Sin embargo, cuando se llega a un nivel de 0,1% de cloruro
de sodio se alcanza un punto estable en la viscosidad y una cantidad extra de sales tiene muy poco
efecto en la viscosidad. Muchas sales metálicas divalentes, incluidas las de calcio y las de magnesio,
tienen un impacto similar en la viscosidad. Para lograr propiedades reológicas óptimas y de disolución
uniforme, algún tipo de sale debe estar presente; usualmente las sales encontradas naturalmente en el
agua de grifo son suficientes para generar estos efectos (Sworn, 2000).
En general, el pH tiene poco efecto en la viscosidad de las disoluciones de goma xantán. Una viscosidad
uniforme y alta se mantiene a lo largo de un ámbito de pH entre 2-12 con una reducción de esta en
valores más extremos a esta. Sin embargo, las diferencias en la viscosidad son más evidentes a bajas
concentraciones de goma xantán. Estas disoluciones tienen una excelente estabilidad a pH bajo en un
período largo de tiempo. (Sworn, 2000)
Las disoluciones de goma xantán son únicas en su habilidad de mantener su viscosidad hasta que se
alcanza la temperatura de transición. A partir de esta temperatura, la viscosidad cae bruscamente
debido a que las hélices cambian su conformación a bucles. La temperatura de transición depende de la
fuerza iónica de la disolución como se muestra en la Figura 4.2. Por encima de aproximadamente 5% de
NaCl la temperatura de transición es mayor a los 100 °C. La pérdida en viscosidad es reversible y cuando
la disolución se enfría se recupera la viscosidad alta original. (Sworn, 2000)
A continuación se hace una descripción de cada una de las tres partes mencionadas
Las Figuras 5.1. y 5.2. muestran diagramas esquemáticos de las vistas del biocontrolador ez-Control en
donde se puede apreciar la disposición de las secciones mencionadas previamente. Algunas de estas
secciones se describen brevemente a continuación.
Está equipada con cuatro rotámetros. Para el oxígeno se utiliza el modelo Z3RM002025 de Applikon el
cual tiene una escala de 0 a 5 L/min calibrado a 21,1 ◦C y 1 atm. El nitrógeno y el aire se miden con el
modelo Z3RM002030 el cual tiene una escala de 0 a 10 L/min calibrado a 21,1 ◦C y 2 bar manométricos.
El dióxido de carbono se mide con el modelo Z3RM002016 el cual tiene una escala de 0 a 500 mL/min
calibrado a 21,1 ◦C y 2 bar manométricos. Cada salida de gas cuenta con una válvula reguladora que
permite controlar eficazmente el suministro de gases al biorreactor (Applikon Biotechnology, 2008).
Esté modulo contiene tres diferentes bombas de desplazamiento positivo modelo Z310116060 de
Applikon para la adición de disolución acida, básica o de antiespumante. Posee una velocidad de
bombeo máxima de 20 RPM y la cantidad de volumen bombeado depende de las mangueras que estén
acopladas. Esta cantidad puede ir desde 0,06 mL/rev en una manguera de 0,8 mm de diámetro interno
hasta 1,7 mL/rev en una de 7,9 mL de diámetro interno (Applikon Biotechnology, 2008).
28
29
Figura 5.1. Vista frontal (izquierda) y lateral (derecha) del biocontrolador ez-Control autoclavable
(Applikon Biotechnology, 2008).
Figura 5.2. Vista trasera del biocontrolador ez-Control autoclavable (Applikon Biotechnology, 2008).
30
5.1.3. Termocirculador
Es la sección que se encarga de mantener la temperatura dentro de la chaqueta del biorreactor estable.
Posee un pequeño recipiente de almacenamiento equipado con una resistencia eléctrica la cual calienta
el agua de la chaqueta hasta la temperatura deseada. Tiene un sistema de control de nivel que evita el
desborde del agua y además uno de bombeo para estar constantemente moviendo el líquido a través de
la chaqueta y así garantizar una transferencia de energía eficaz. Cuando la temperatura del biorreactor
es mayor que la requerida, el termocirculador purga el agua del sistema interno y toma agua fresca para
enfriarse. Esta unidad es el modelo Z310111015 de Applikon (Applikon Biotechnology, 2008).
Como parte adicional del termocirculador también está presente una válvula de regulación del agua
hacia el condensador del biorreactor. Esta válvula se encuentra acoplada al circuito del agua de
enfriamiento del condensador y permite controlar el flujo de esta. Este sistema es el modelo
Z310111031 de Applikon (Applikon Biotechnology, 2008).
Este biorreactor está fabricado con vidrio de borosilicato, material que ofrece las ventajas de: alta
resistencia a choques térmicos, excelente resistencia a la corrosión, superficie lisa de fácil limpieza y
transparencia óptima para inspección visual de los cultivos. Los accesorios por su parte están fabricados
con acero inoxidable 316L para garantizar la resistencia a la corrosión por picadura o por grieta en
ambientes con cloruro. Además, todas las piezas son pulidas con acabado de espejo si no son piezas de
contacto, mientras que las piezas de contacto con el medio son electropulidas para garantizar una
limpieza óptima. Las uniones entre el medio exterior y el interior del biorreactor están recubiertas por
un empaque de silicón que funciona como una barrera aislante. El recipiente y los accesorios son
resistentes a altas temperaturas y se pueden autoclavar múltiples veces (Applikon Biotechnology, 2008).
Esta porción del biorreactor está fabricada de acero inoxidable y es fácilmente removible y ajustable a la
parte superior del recipiente de vidrio utilizando seis tornillos gruesos. La tapa cuenta con los siguientes
puertos en donde se acomodan los accesorios (Applikon Biotechnology, 2008):
La distribución de los puertos y la ubicación de los accesorios en la tapa se resumen en el Cuadro 5.2.
31
Cuadro 5.2. Distribución de puertos y ubicación de los accesorios de la tapa del biorreactor de 7 L
modelo Z611000720 de Applikon.
Ubicación Pieza
A Sensor OD
B Septo
C Tapón ciego
D Puerto triple
E Sensor de pH
F Condensador
G Termopozo
H Mampara
I Toma de muestra
J Mampara
K Tubo de aireación
L Mampara
M Tornillo ciego ancho
N Tornillo ciego delgado
Ñ Puerto de adición
O Tornillo ciego ancho
P Tornillo ciego delgado
Q Sensor de nivel
El motor del agitador para el biorreactor de 7 L es del tipo P140 modelo Z510000020 de Applikon y se
utiliza en aplicaciones diversas con medios viscosos y velocidades de agitación de hasta 800 RPM. Puede
llegar a un torque máximo de 0,3 Nm y trabaja con una corriente de 3 A. Un esquema de este motor se
muestra en la Figura 5.4 (Applikon Biotechnology, 2008).
Figura 5.4. Motor P140 del agitador (izquierda) y montura del agitador con sello magnético (derecha)
del biorreactor de 7 L (Applikon Biotechnology, 2008).
5.3.4. Impulsores
El biorreactor de 7 L viene con la posibilidad de ser equipado con 3 tipos de impulsores cuyas
características se muestran en el Cuadro 5.3. Para la presente investigación, únicamente se hace uso de
los primeros dos tipos descritos y un esquema de estos se muestra en la Figura 5.5 (Applikon
Biotechnology, 2008).
Cuadro 5.3. Características de los impulsores que se pueden equipar al biorreactor de 7 L de Applikon.
Característica Turbina Rushton Hélice marina Propela 6 aspas a 45°
Modelo Z81313R607 Z82314RC07 -
Diámetro agitador 60 mm 60 mm 44,6 mm
Largo aspa 15 mm 26 mm 14 mm
Ancho aspa 12 mm 43 mm 8,3 mm
Grosor aspa 0,0016 mm 0,0015 mm 0,0016 mm
5.3.5. Mamparas
Figura 5.5. Diagrama de los impulsores del biorreactor de 7 L. A la izquierda la turbina Rushton modelo
Z81313R607 de Applikon y a la derecha la hélice marina modelo Z82314RC07 de Applikon
(Applikon Biotechnology, 2008).
Figura 5.6. Diagrama de la mampara (izquierda) y del burbujeador (derecha) del biorreactor de 7 L
(Applikon Biotechnology, 2008).
35
5.3.6. Burbujeador
En este tipo de biorreactor, se utiliza un burbujeador en forma de “L” que se ajusta a la tapa. El gas
previamente filtrado sale por el fondo del burbujeador a través de 7 orificios de 1 mm de diámetro
separados 2 mm entre ellos. Los orificios se encuentran en la cara inferior del cilindro para asegurarse
de que el medio no ingresa al burbujeador cuando está saliendo gas. Las caídas de presión en este
dispositivo son despreciables. El burbujeador modelo Z81318L007 de Applikon utilizado en este
biorreactor se muestra en la Figura 5.6 (Applikon Biotechnology, 2008).
5.3.7. Condensador
Este dispositivo se coloca a la salida del gas de biorreactor para evitar la evaporación y el arrastre
excesivo de la disolución cuando se trabaja a temperaturas elevadas o con un flujo de burbujeo alto. Si
existe una pérdida excesiva de líquido, el resultado es una disminución en el volumen y un aumento en
la concentración de sólidos disueltos lo cual puede ser perjudicial. El biorreactor de 7 L utiliza un
condensador de acero inoxidable modelo Z81308L007 de Applikon cuyo diagrama se presenta en la
Figura 5.7 (Applikon Biotechnology, 2008).
Figura 5.7. Diagrama del condensador del biorreactor de 7 L (Applikon Biotechnology, 2008).
5.3.8. Septo
El septo es un sistema de adición al biorreactor que se ubica en la tapa y cuya función es la de crear una
entrada estéril en casos que se necesite inocular el medio de cultivo con un líquido o un gas. El septo de
hule y silicón puede ser perforado por una jeringa múltiples veces. El modelo para el biorreactor de 7 L
es el Z813902PD02 de Applikon y se muestra en la Figura 5.8 (Applikon Biotechnolgy, 2008).
36
La función de este accesorio de la tapa es la de ser el canal de entrada para las disoluciones ácida, básica
y de antiespumante. Posee un arreglo simple de tres puertos de entrada de 1 mm de diámetro cada
uno. El modelo para el biorreactor de 7 L es el Z813902PD02 de Applikon y se muestra en la Figura 5.8
(Applikon Biotechnolgy, 2008).
Figura 5.8. Diagrama del septo (izquierda) y del puerto triple (derecha) del biorreactor de 7 L
(Applikon Biotechnology, 2008).
Este dispositivo se utiliza para recolectar una muestra del medio del cultivo durante la fermentación sin
correr el riesgo de contaminarlo por exposición a la atmósfera. Consiste en un tubo de 320 mm que
cuelga desde la tapa y se ubica cerca del fondo. El modelo Z81319MB07 de Applikon es de longitud fija y
tiene un diámetro interno de 4 mm. La toma de muestra se presenta en la Figura 5.9 (Applikon
Biotechnolgy, 2008).
5.3.11. Termopozo
Es la estructura cilíndrica hueca que permite la inserción del termopar para que este esté en contacto
indirecto con la disolución dentro del biorreactor. Posee una longitud de 290 mm y un diámetro externo
de 10 mm. Para mejorar la conductividad térmica se debe llenar con agua o con aceite de silicona. El
modelo que se utiliza para el biorreactor de 7 L se muestra en la Figura 5.9 y corresponde al Z81323TP07
de Applikon (Applikon Biotechnolgy, 2008).
Los sensores de oxígeno disuelto ADI se utilizan para la medición de la presión parcial de oxígeno
disuelto en el medio para procesos biotecnológicos. El modelo Z010032520 de Applikon es de baja
deriva, tiene una punta de membrana de titanio y una longitud de 325 mm. Por ser un instrumento que
se utiliza en sistemas estériles, este permite ser autoclavable múltiples veces sin alterar su
funcionamiento. Su tiempo de respuesta es muy rápido, tiene alta resistencia mecánica y requiere de
poco mantenimiento. Una imagen de este sensor se muestra en la Figura 5.10 (Applisens, 2009a).
37
El sensor polarográfico de oxígeno disuelto ADI basa su funcionamiento en el principio de una celda
Clark. Consiste en un electrodo funcional de platino (el cátodo) y un electrodo de referencia de plata
(ánodo); la membrana permeable al gas separa el electrodo del medio. El amplificador polarográfico
provee un voltaje de polarización constante de -675mV (Applisens, 2009a).
Las moléculas de oxígeno que se difunden a través de la membrana semipermeable y a través de la capa
delgada del electrolito se reducen en el cátodo mientras que el ánodo de plata se oxida
simultáneamente. La polarización produce una corriente que fluye la cual es medida por el amplificador
y que es proporcional a la presión parcial de oxígeno en el medio (Applisens, 2009a).
La pendiente del sensor de oxígeno es dependiente de la presión, de la temperatura y del tipo del
medio. Por lo tanto se debe realizar una calibración del sensor bajo las condiciones de operación
(Applisens, 2009a).
El ámbito de operación de este sensor es entre el 0 % y el 500 % cuando se está trabajando en función
de cantidad de aire y de 0 % a 100 % cuando se utiliza la modalidad de oxígeno. La incertidumbre es de
±0,1 %.
38
5.3.13. Sensor de pH
Este instrumento está conformado por un electrodo de gel polimérico de KCl presurizado con una
referencia Ag/AgCl. El electrodo de referencia integrado tiene un cartucho que contiene Ag/AgCl situado
en el gel. Por ser dicho gel presurizado, este se puede autoclavar sin problemas. La longitud del
dispositivo es de 325 mm y el sensor tiene un diámetro de 12 mm. Un diagrama del sensor de pH
modelo Z001032551 se puede apreciar en la Figura 5.11 (Applisens, 2009b).
El electrodo de pH tiene un diafragma separador fijo. Comparado con otros tipos de diafragma, el
diafragma separador otorga una precisión y exactitud de medición debido a la difusión de electrolitos
más definida en el diafragma. Este dispositivo también evita la contaminación del sistema de referencia
y virtualmente elimina la contaminación cruzada entre lotes debido al ingreso de medio. El separador en
sí en poco propenso al fallo debido a su superficie lisa (Applisens, 2009b).
Consiste en un cilindro delgado aterrizado a la tapa que se introduce a través de esta en el biorreactor
para determinar si el nivel de espuma del medio de cultivo ha alcanzado la altura a la cual se fija la punta
del sensor. Si existe contacto, el sensor envía un pulso al actuador de la bomba de antiespumante por
cierto tiempo y luego lo cesa. Luego de un tiempo muerto, el sensor se reactiva y determina si la
cantidad de antiespumante agregada fue suficiente o no. Este mecanismo es tipo encendido/apagado y
no por medio del controlador PID. El sensor utilizado en el biorreactor de 7 L es el modelo Z71205AF03
de Applikon y su esquema se muestra en la Figura 5.12 (Applikon Biotechnolgy, 2008).
Figura 5.12. Diagrama del sensor de nivel del biorreactor de 7 L (Applikon, 2013c).
CAPÍTULO 6 - DESCRIPCIÓN DEL BIORREACTOR DE 70 L
Los biorreactores Applikon de 70 L poseen un sistema de esterilización in situ. Por tratarse de
instrumentos tan grandes y de uso acomodado a las necesidades de cada laboratorio, no pertenecen a
una familia de modelos específica. Sin embargo, la mayoría de estos biorreactores poseen las siguientes
partes principales:
La disposición del biorreactor y sus partes se puede apreciar en la Figura 6.1. A continuación se hace una
descripción de cada una de las cuatro partes mencionadas. Es importante aclarar que muchos de los
accesorios son similares en su forma y funcionamiento a aquellos ya previamente presentados en el
Capítulo 5.
Está equipada con dos rotámetros en el controlador y dos rotámetros fuera de este. Para el oxígeno y el
dióxido de carbono se utilizan los rotámetros en el controlador los cuales tienen una escala de 0 a 10
L/min calibrados a 21,1 °C y 1 atm. El nitrógeno y el aire se miden con rotámetros de la marca Brooks
Instrument que tienen una escala de 0 a 110 L/min calibrados a 20 °C y 1,5 bar manométricos. Cada
salida de gas cuenta con una válvula reguladora que permite controlar eficazmente el suministro de
gases al biorreactor (Applikon Biotechnology, 2009).
40
41
Figura 6.1. Diagrama isométrico del biorreactor esterilizable in situ de 70 L con sus accesorios
(Applikon Biotechnology, 2009a).
Figura 6.2. Vista frontal (izquierda) y lateral (derecha) del biocontrolador ez-Control
esterilizable in situ (Applikon Biotechnology, 2009a).
42
6.1.3. Termocirculador
Es la sección que se encarga de mantener la temperatura dentro de la chaqueta del biorreactor estable.
El agua proveniente de una línea externa ingresa a un compartimento con una resistencia eléctrica que
se encarga de calentarla. Por acción de una bomba, el fluido es movilizado posteriormente a través de la
chaqueta del biorreactor y el circuito se completa cuando el agua regresa al calentador. Cuando la
temperatura del biorreactor es mayor que la requerida, el termocirculador purga el agua del circuito y
toma agua fresca para enfriarse. Un esquema ilustrativo de este sistema se muestra en la Figura 6.3.
(Applikon Biotechnology, 2009a).
Figura 6.4. Diagrama esquemático del sistema de suministro de gases externo y del termocirculador
para el biorreactor esterilizable in situ. (Applikon Biotechnology, 2009a)
El biorreactor y sus accesorios están fabricados con acero inoxidable 316L para garantizar la resistencia a
la corrosión por picadura o por grieta en ambientes con cloruro. Además, todas las piezas son pulidas
con acabado de espejo si no son piezas de contacto, mientras que las piezas de contacto con el medio
son electropulidas para garantizar una limpieza óptima. La rugosidad que se logra con este pulido es
menor a los 0.4 µm. Aunado a esto, las superficies internas se encuentran libres de grietas para facilitar
la limpieza y evitar la contaminación (Applikon Biotechnology, 2009a).
44
Figura 6.5. Vista frontal (izquierda) y lateral (derecha) de la unidad de poder del
biorreactor esterilizable in situ (Applikon Biotechnology, 2009a)
La mirilla está fabricada con vidrio de borosilicato, material que ofrece las ventajas de: alta resistencia a
choques térmicos, excelente resistencia a la corrosión, superficie lisa de fácil limpieza y transparencia
óptima para inspección visual de los cultivos. Las uniones entre el medio exterior y el interior del
biorreactor están recubiertas por un empaque de silicón que funciona como una barrera aislante. Tanto
el recipiente como los accesorios son resistentes a altas temperaturas para que pueda ser autoclavado
múltiples veces (Applikon Biotechnology, 2009a).
El biorreactor está construido de acuerdo a los códigos del ASME y puede trabajar para presiones de
diseño y máximas 4,1 y de 4,8 bar absolutos respectivamente y a temperaturas máximas de 135 °C.
Figura 6.6. Diagrama del biorreactor de 70L de Applikon. Nota: las medidas están en milímetros
(Applikon Biotechnology, 2009a).
Esta porción del biorreactor está fabricada de acero inoxidable y es removible y ajustable a la parte
superior del biorreactor utilizando seis tornillos gruesos. La tapa es además un punto de conexión entre
el biorreactor y sistema de transporte de fluidos; a través de ella es que sale la línea de aire de salida y la
46
línea de liberación de presión de emergencia. La tapa cuenta con los siguientes puertos en donde se
acomodan los accesorios (Applikon Biotechnology, 2009a):
3 * 16 mm
4 * 27 mm
3 * 1,5” TC
La distribución de los puertos y la ubicación de los accesorios en la tapa se resumen en el Cuadro 6.2,
mientras que las dimensiones principales de la ella se muestran en la Figura 6.7.
Figura 6.7. Plano descriptivo de la tapa removible del biorreactor esterilizable in situ de 70 L de
Applikon. Nota: las medidas están en milímetros (Applikon Biotechnology, 2009a).
47
Cuadro 6.2. Distribución de puertos y ubicación de los accesorios de la tapa del biorreactor de 70 L de
Applikon.
Ubicación Pieza
A Manómetro
Puerto de
B
Adición
C Iluminación
Disco de
D
ruptura
E Tapón ciego
F Condensador
G Tapón ciego
H Tapón ciego
I Sensor de nivel
J Tapón ciego
Los biorreactores esterilizables in situ de 70 L vienen equipados con un arreglo de agitación que se
acopla magnéticamente y el cual está diseñado para operar en largos períodos de tiempo (hasta 20 000
horas) con un servicio de mantenimiento mínimo. El modelo corresponde al V6LE764461.
Un diagrama esquemático del eje acoplado al motor se muestra en la Figura 6.8. El eje posee una altura
de 690 mm desde su base ancha y de 510 mm partiendo desde donde inicia su cuerpo angosto. Los
impulsores pueden acoplarse tanto en la porción intermedia como en la superior siempre y cuando la
sección central de estos lo permita. Para la presente investigación, se trabaja solamente con impulsores
en la sección superior (Applikon Biotechnology, 2009a).
6.4.2 Impulsores
El biorreactor de 70 L viene con la posibilidad de ser equipado con 3 tipos de impulsores cuyas
características se presentan en el Cuadro 6.3. Para la presente investigación únicamente se hace uso de
los primeros dos tipos descritos y un esquema de estos se muestra en la Figura 6.9 (Applikon
Biotechnology, 2009a).
48
Cuadro 6.3. Características de los impulsores que se pueden equipar al biorreactor de 70 L de Applikon.
Característica Turbina Rushton Hélice marina Propela 6 aspas a 45°
Diámetro agitador 114 mm 89 mm 114,8 mm
Largo aspa 29,7 mm 32 mm 30,15 mm
Ancho aspa 20 mm 57,2 mm 16,1 mm
Grosor aspa 0,002 mm 0,002 mm 0,002 mm
Figura 6.8. Diagrama esquemático del sistema de agitación del biorreactor de 70 L modelo V6LE764461
de Applikon. A la izquierda la vista lateral y a la derecha la vista superior
(Applikon Biotechnology, 2009a).
6.4.3. Mamparas
Figura 6.9. Diagrama de los impulsores del biorreactor de 70 L. A la izquierda la turbina Rushton
modelo V6LE262571 de Applikon y a la derecha la hélice marina marca Applikon
(Applikon Biotechnology, 2009a).
Figura 6.10. Diagrama de la mampara (izquierda) y del burbujeador (derecha) del biorreactor de 70 L
(Applikon Biotechnology, 2009a).
50
6.4.4 Burbujeador
En este tipo de biorreactor, se utiliza un burbujeador en forma de “O” que se acopla en la parte superior
de la pared del biorreactor, desciende hasta tocar casi el fondo del equipo y alrededor del eje de
agitación. El gas previamente filtrado sale por el fondo del burbujeador a través de 23 orificios de 1,5
mm de diámetro separados 7,6 mm entre ellos. Los orificios se encuentran en la cara superior del anillo.
Las caídas de presión en este dispositivo son despreciables. El burbujeador modelo V6LE730201 de
Applikon utilizado en este biorreactor se muestra en la Figura 6.10 (Applikon Biotechnology, 2009a).
Las líneas de entrada y de salida de aire presentan un ensamblaje con filtro que se utiliza para proveer
una corriente aséptica de aire al biorreactor. El sistema de filtro de gas consiste en una carcasa de acero
inoxidable la cual contiene un filtro de politetrafluoroetileno (PTFE) hidrofóbico a través de la cual pasa
el gas. Este sistema es marca Parker y un esquema de las líneas de entrada se muestra en la Figura 6.11
(Applikon Biotechnology, 2009a).
Figura 6.11. Diagrama esquemático de la línea de entrada de gas al biorreactor de 70 L y el filtro PTFE
(Applikon Biotechnology, 2009a).
6.4.6. Condensador
Este dispositivo se coloca a la salida del gas de biorreactor para evitar la evaporación y el arrastre
excesivo de la disolución cuando se trabaja a temperaturas elevadas o con un flujo de burbujeo alto. Si
existe una pérdida excesiva de líquido, el resultado es una disminución en el volumen y un aumento en
51
Figura 6.12. Diagrama del condensador del biorreactor de 70 L (Applikon Biotechnology, 2009a).
El biorreactor de 70 L cuenta con un sistema de drenaje en el fondo para tomar muestras relativamente
grandes del cultivo y para drenar rápidamente el sistema en el momento en que se finaliza el proceso de
cultivo. Dicho sistema se esquematiza en la Figura 6.13 y sus partes se describen a continuación:
A: válvula de membrana utilizada para proveer vapor para esterilización. Es de control manual.
B: válvula de pistón aséptica con 3 empaques cilíndricos que previenen la contaminación
durante el muestreo y el drenaje. Es de control manual.
C: salida del contenido.
D y E: conectores cónicos que pueden acoplarse al puerto de salida. El conector D es abierto
para un muestreo o drenaje del biorreactor mientras que el E es ciego y se utiliza en la
esterilización (Applikon Biotechnology, 2009a).
52
Figura 6.13. Sistema de drenaje del biorreactor de 70 L con sus distintos componentes
(Applikon Biotechnology, 2009a).
Está línea es un colector múltiple para los condensados del filtro del gas de entrada, de la válvula de
fondo, del gas de salida, etc. Todas las conexiones que no se estén utilizando en el biorreactor deben ir
conectadas a esta línea por seguridad. Un esquema ilustrativo de esta línea se muestra en la Figura 6.15
(Applikon Biotechnology, 2009a).
Es una válvula con un ensamblaje tal que permite el empuje de esta para la entrada fácil y aséptica de
algún fluido a través de puertos que se ubican en la parte superior de la pared externa del biorreactor.
Es del modelo Z82324MT29 de Applikon y se muestra en la Figura 6.15 (Applikon Biotechnology, 2009a).
6.4.10. Manómetros
El disco de ruptura es el encargado de liberar la presión cuando esta aumenta por encima de los 2 bar
manométricos. Junto con la tubería de descarga, el disco se acopla a un puerto de 1,5” TC. El disco es del
modelo Z821302070 de Applikon y la tubería es modelo Z811302085 del mismo fabricante. Ambos se
muestran en la Figura 6.17 (Applikon Biotechnology, 2009a).
6.4.12. Iluminación
El ensamblaje de iluminación se utiliza para iluminar los adentros del biorreactor. El contenido puede
entonces ser visto a través de la mirilla en el lado frontal del biorreactor. El ensamblaje de iluminación
consiste en un bombillo halógeno de 12 V / 10 W y un sostenedor, el cual se monta en la tapa del
biorreactor. Esta pieza es del modelo Z821320090 de Applikon y se muestra en la Figura 6.18 (Applikon
Biotechnology, 2009a).
54
Figura 6.17. Diagrama del disco de ruptura y de la tubería de descarga del biorreactor de 70 L
(Applikon Biotechnology, 2009a).
55
El funcionamiento de estas cuatro piezas es idéntico al ya explicado para sus análogos del biorreactor de
7 L en las Secciones 5.3.12, 5.3.13 y 5.3.14. La diferencia entre ambos biorreactores radica en la posición
en la cual se colocan dichos sensores, y por lo tanto, su diseño. Exceptuando al sensor de nivel, el cual
posee un punto de ajusta en la tapa, los otros tres sensores se acoplan al biorreactor en un punto
cercano a la base. Los diagramas que muestran a los 4 sensores se muestran en la Figura 6.19 y los
modelos son: Z001012051 (pH), Z0100007025 (oxígeno disuelto), Z722200002 (temperatura) y
Z72205AF20 (nivel) (Applikon Biotechnology, 2009a).
7.1. Materiales
A continuación se presentan los principales materiales utilizados en la determinación de los coeficientes
volumétricos de transferencia de masa en los biorreactores de 7 L y de 70 L.
7.1.1. Nitrógeno
El nitrógeno es un gas inerte, no inflamable, sin olor ni color, que se utiliza para desplazar el oxígeno de
las disoluciones de goma xantán dentro de los biorreactores. El nitrógeno utilizado es del tipo NI 5.5CE
de la marca PRAXAIR y posee un grado de pureza del 99,9995% con trazas de O2, H2O, CO2, CO, THC, NOx
y SO2.
La goma xantán utilizada para las pruebas experimentales es producida por Shandong Fufeng
Fermentation Company. El lote adquirido fue producido el 4 de marzo del 2013 y sus principales
características se muestran en el Cuadro 6.1. Esta goma xantán es grado alimenticio y es distribuida en
el país por Insumos Químicos y Servicios de Costa Rica.
56
57
7.1.3. p-clorocresol
7.1.4. Antiespumante
El uso de antiespumante es necesario en las fermentaciones para evitar que se produzca un espumado
excesivo el cual puede generar problemas en el equipo y en el proceso. Con las disoluciones de goma
xantán, al introducir aire se produce una gran cantidad de espuma por la retención de aire producto de
la alta viscosidad. Se trabaja entonces con antiespumante 204 de Sigma Aldrich. Este producto es una
mezcla de dispersiones orgánicas de poliéteres de base polipropilénica sin silicón, no contiene aceite
mineral y funciona además como surfactante. Es un producto sintético, esterilizable múltiples veces y
posee propiedades de flujo tales que permiten que pueda ser bombeado conforme las necesidades del
sistema (Sigma Aldrich, 2014).
7.1.5. Agua
El agua utilizada para preparar las disoluciones de goma xantán es agua de suministro público. Se decide
utilizar esta sin ningún tratamiento químico ni físico debido a que la viscosidad de disoluciones de goma
xantán varía con respecto a la cantidad de iones disueltos. Skoog (2000) establece que el agua de
suministro público posee una cantidad suficiente de iones para que se logre propiedades reológicas
óptimas y uniformes.
7.1.6. Aire
El aire que se burbujea al interior de los biorreactores es proporcionada por una línea de aire
comprimido central que está conectada a un compresor marca POWEREX modelo OTS075 que tiene una
potencia de 7,5 HP y puede trabajar hasta 120 psi. A este aire no se le realiza ningún tratamiento
químico previo a su ingreso a los biorreactores y solamente atraviesa un filtro para recoger las partículas
suspendidas.
Tal como se describe en el Capítulo 5, el sensor de oxígeno disuelto AppliSens es el que se utiliza para
cuantificar la cantidad de oxígeno disuelto en los biorreactores. Su funcionamiento se describe en la
Sección 5.3.12.
59
El pH de las disoluciones de los biorreactores se determina por medio del sensor de pH AppliSens
previamente descrito en Capítulo 5 y su funcionamiento se describe en la sección 5.3.13.
Para hacer el cálculo de la densidad de las disoluciones de goma xantán se hace uso de un picnómetro y
de una balanza granataria. Se mide la masa del picnómetro vacío y cuando ya se le ha agregado la
disolución. Por medio de la diferencia entre estas dos masas se puede determinar la masa de la
disolución contenida dentro del picnómetro. Dicha masa de disolución se divide entre el volumen
conocido del picnómetro y se obtiene la densidad.
Cuando ya se cuenta con el modelo que describe la viscosidad de las disoluciones, se puede hacer una
correlación entre la velocidad de agitación en los biorreactores y la tasa de corte experimentada por el
fluido. Metzner y Otto (1957) determinan una constante que al ser multiplicada por la velocidad del eje
de agitación estima la velocidad de corte. Esta constante fue utilizada por otros autores con el valor de
11,5 (Xie, 2014; Nienow, 1995; Metzner, 1957) y Shekhar (2003) hace un estudio exhaustivo que da
como resultado que su valor es de 4π; valor que se utiliza en el presente trabajo. Luego de estimar la
velocidad de corte a partir de una velocidad de agitación, se utiliza el modelo potencial para calcular la
viscosidad aparente.
La velocidad de punta de los impulsores en los biorreactores se utiliza como un factor de escalamiento
secundario a la hora de establecer el ámbito de trabajo para los biorreactores de 70 L. Para obtener
dicha velocidad se utiliza la ecuación 7.1.
(7.1)
60
Donde,
Así mismo, reacomodando la ecuación 7.1, se puede obtener la velocidad de agitación para los
biorreactores de 70 L partiendo del mismo valor de la velocidad de punta para los biorreactores de 7 L y
los de 70 L. Esto se muestra en la ecuación 7.2.
(7.2)
La potencia consumida por el agitador en el biorreactor se estima a partir de la correlación utilizada por
algunos autores (Xie, 2014; Fujasová, 2007; Hughmark, 1980) para tanques agitados en los cuales hay
aireación. Dicha correlación se presenta en la ecuación 6.3.
P (7.3)
( ) ( )
P
Donde,
a cho d a ro a m
61
El volumen por etapa corresponde al volumen que se encuentra bajo la influencia de un impulsor
específico. Se calcula dividiendo el volumen total entre el número total de agitadores, bajo la condición
de que estos se encuentran distanciados uniformemente. Esta condición se cumple en el presente
trabajo.
El valor de los parámetros E1, E2 y E3 está en función del tipo de impulsor utilizado y su posición en el eje
de agitación. Distintos trabajos han presentado valores para estos parámetros; sin embargo, en la
presente investigación se trabaja con aquellos calculados por Fujasová (2007) ya que contemplan una
investigación con un fluido pseudoplástico y una variedad de tipos de impulsores en donde uno de ellos,
la Lightnin A315 (LTN), posee un diseño y un número de potencia que son muy parecidos al de la hélice
marina que se utiliza en el presente trabajo. Los valores de los parámetros bajo las distintas condiciones
se muestran en el Cuadro 7.3.
Cuadro 7.3. Valores de los parámetros E1, E2 y E3 del modelo de estimación de la potencia con aireación
para dos tipos de impulsores en dos tipos de posiciones (Fujasová, 2007).
Impulsor / posición* E1 (x 102) E2 E3
Rushton / inferior 4,76 -0,372 -0,126
Rushton / superior 7,12 -0,286 -0,242
LTN / inferior 6,02 -0,350 -0,282
LTN / superior 10,1 -0,235 -0,271
*Posición inferior corresponde al impulsor más cercano al burbujeador y superior al más distante.
(7.4)
Para el caso de las turbinas Rushton, el valor de Np es de 6 y para la hélice marina es de 1,5. El manual
establece que la ecuación (7.4) corresponde a la potencia del impulsor inferior. Para estimar la potencia
consumida sin aireación en un impulsor superior, se debe multiplicar el valor del impulsor inferior por
0,9 (Applikon, 2009a).
Luego de obtener la potencia consumida con aireación para cada turbina (superior e inferior), se hace la
suma de ambos valores para obtener la estimación de la potencia consumida total por el sistema de
agitación. Este valor luego se divide entre el volumen de trabajo para obtener la relación de potencia
por unidad de volumen.
62
A los datos experimentales de kLa obtenidos en las distintas fases experimentales se les realiza un ajuste
para acoplarlos a un modelo del tipo potencial (ecuación 7.1) utilizando el software matemático Curve
Expert Pro 2. El programa permite obtener los exponentes del modelo para cada uno de los casos
estudiados.
7.4.1. Primera fase experimental: Determinación del valor de kLa en los biorreactores de 7 L.
Para plantear los niveles de agitación y de aireación utilizados en la primera fase experimental, se
consulta al personal del Área de Bioprocesos de CENIBiot con el objetivo de simular condiciones a las
cuales dicha área opera y tener así resultados que sean más útiles para las operaciones futuras del
Centro.
7.4.1.1. Variables
Para determinar los valores de kLa en los biorreactores de 7 L, se consideran las siguientes variables:
Variables fijas
Variables experimentales
Variable de respuesta
La primera etapa experimental tiene como objetivo la determinación de los coeficientes volumétricos de
transferencia de masa (kLa) en los biorreactores de 7 L bajo distintas condiciones de operación. Dicha
etapa inicia con la preparación de la disolución que se va a colocar dentro de los biorreactores como se
indica en el Apéndice D.1.
Para la primera fase se trabajan 3 variables con 3 niveles cada una: velocidad de agitación, tasa de
aireación y arreglo de impulsores. Estas variables en conjunto logran un total de 27 tratamientos
distintos. Cada tratamiento además se realiza por triplicado ya que se utilizan los biorreactores 1, 2 y 3
simultáneamente.
Para observar los efectos de la agitación, la aireación y el arreglo de los impulsores, se realiza un diseño
factorial de estas tres variables con tres niveles cada una tal como se muestra en el Cuadro 7.4. El orden
de los tratamientos así como las características de cada uno se muestran en el Cuadro 7.5.
64
Cuadro 7.4. Niveles de las variables experimentales utilizadas en la determinación del kLa en la primera
etapa experimental.
Variable Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3
Agitación (RPM) 100 250 400
Aireación (LPM) 2 4 8
Arreglo 2R MR 2M
Cuadro 7.5. Matriz de diseño factorial 33 utilizado en la determinación del kLa en la primera etapa
experimental.
Tratamiento Agitación (RPM) Aireación (LPM) Arreglo
1 100 4 2M
2 400 8 2M
3 100 2 2R
4 100 8 MR
5 100 8 2M
6 400 4 2M
7 100 8 2R
8 250 4 2R
9 400 8 MR
10 250 2 2M
11 250 2 MR
12 400 2 2R
13 400 8 2R
14 400 2 2M
15 250 4 2M
16 250 4 MR
17 250 8 2R
18 100 2 MR
19 400 4 MR
20 250 8 MR
21 400 2 MR
22 250 8 2M
23 100 2 2M
24 400 4 2R
25 250 2 2R
26 100 4 2R
27 100 4 MR
65
Para poder seleccionar los niveles de agitación y de aireación a utilizar en los biorreactores de 70 L se
debe hacer un escalamiento de condiciones de operación con el objetivo de obtener valores del
coeficiente volumétrico de transferencia de masa en los biorreactores de 70 L que sean similares a
aquellos obtenidos en los de 7 L. Como punto de partida se toma un factor de escalamiento para cada
variable. Para la tasa de aireación, se trabaja con los mismos vvm (litros de aire por litro de disolución
por minuto); en el caso de la velocidad de agitación, se utiliza una misma velocidad de punta; y para el
arreglo de los impulsores, se utilizan los mismos tres arreglos con los impulsores de mayor diámetro de
agitación.
7.4.2.1. Variables
Para establecer el ámbito de condiciones de operación para los biorreactores de 70 L, se consideran las
siguientes variables:
Variables fijas
Se mantienen las mismas variables fijas que en la primera fase experimental (Sección 7.4.1.1). La
única diferencia se encuentra en las dimensiones y la configuración del biorreactor de 70 L que
se detallan en las Secciones 6.3 y 6.4.
Variables experimentales
Volumen de aireación: se trabaja con 20 LPM como punto de partida ya que representa 0,5 vvm.
Luego a partir de los resultados con este nivel de aireación se seleccionan nuevos niveles.
Velocidad de agitación: se trabaja con velocidades de 53, 132 y 211 RPM para el arreglo con dos
turbinas Rushton (2R) y con velocidades de 67, 169 y 270 RPM para el arreglo de dos hélices
marinas (2M). Las velocidades en cada arreglo corresponden a las velocidades de punta de 31,4;
78,5; 125,7 y 179,1 cm/s respectivamente.
Arreglo de impulsores: se trabaja con dos turbinas Rushton (2R) y con dos hélices marinas (2M).
En esta etapa no se considera el arreglo intermedio de una hélice marina en la posición inferior
y de una Rushton en la posición superior ya que es una etapa intermedia que busca encontrar
los límites extremos del ámbito de operación.
Variable de respuesta
La segunda etapa experimental tiene como objetivo el identificar el ámbito de condiciones de agitación
y aireación en los biorreactores de 70 L que permiten obtener valores de kLa que sean similares a los
obtenidos en la primera etapa experimental. Se inicia con la preparación de la disolución de goma
66
xantán y p-clorocresol, la cual sigue el mismo formato que el descrito en la Sección 7.4.1.2. Las
diferencias radican en la cantidad de los reactivos que se necesitan para obtener 40 L en vez de 4 L. Se
utilizan entonces 80 g de goma xantán y 40 g de p-clorocresol y se disuelven en un recipiente de 15
galones utilizando el agitador ultrasónico grande. Además, cuando se introduce en el biorreactor, se
agregan 30 gotas de antiespumante.
Para la segunda fase se trabajan 3 variables con distintos niveles cada una: velocidad de agitación, tasa
de aireación y arreglo de impulsores. Estas variables en conjunto logran un total de 12 tratamientos
distintos. Cada tratamiento además se realiza una única vez ya que el biorreactor A trabaja con el
arreglo 2R y el biorreactor B con el arreglo 2M.
7.4.3. Tercera fase experimental: Determinación del valor de kLa en los biorreactores de 70 L
Para plantear los niveles de agitación y de aireación utilizados en la tercera fase experimental, se decide
mantener el criterio de escalamiento de las velocidades de punta para cada uno de los arreglos de
impulsores y trabajar con 3 nuevos niveles de aireación que no corresponden a un escalamiento de los
utilizados en la primera fase experimental. Se introduce además un cuarto nivel de agitación que es de
una velocidad de punta de 179,1 cm/s.
7.4.3.1 Variables
Para determinar los valores de kLa en los biorreactores de 70 L, se consideran las siguientes variables:
Variables fijas
Se mantienen las mismas variables fijas de la segunda etapa experimental (Sección 7.4.2.1).
Variables experimentales
velocidades en cada arreglo corresponden a las velocidades de punta de 31,4; 78,5; 125,7 y
179,1 cm/s respectivamente.
Arreglo de impulsores: se trabaja con dos turbinas Rushton (2R), dos hélices marinas (2M) y una
hélice marina en la posición inferior con una turbina Rushton en la posición superior (MR).
Variable de respuesta
Para la tercera fase se trabajan 3 variables con distintos niveles cada una: velocidad de agitación (4
niveles), tasa de aireación (3 niveles) y arreglo de impulsores (3 niveles). Estas variables en conjunto
logran un total de 36 tratamientos distintos. Cada tratamiento además se realiza por duplicado ya que
se repite cada uno en los biorreactores A y B.
Para observar los efectos de la agitación, la aireación y el arreglo de los impulsores, se realiza un diseño
factorial de estas tres variables con tres niveles cada una tal como se muestra en el Cuadro 7.6. El orden
de los tratamientos así como las características de cada uno se muestran en el Cuadro 7.7.
Cuadro 7.6. Niveles de las variables experimentales utilizadas en la determinación del kLa en la tercera
etapa experimental.
Variable Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 Nivel 4
Velocidad de punta (cm/s) 31,4 78,5 125,7 179,1
Aireación (LPM) 5 10 13 -
Arreglo 2R MR 2M -
68
Cuadro 7.7. Matriz de diseño factorial utilizado en la determinación del kLa en la tercera etapa
experimental.
Velocidad de punta Aireación
Tratamiento Arreglo
(cm/s) (LPM)
1 125,7 10 2M
2 78,5 5 MR
3 78,5 10 MR
4 31,4 10 MR
5 125,7 13 2M
6 125,7 10 2R
7 179,1 13 2R
8 78,5 13 2R
9 125,7 5 2R
10 31,4 5 2M
11 125,7 5 MR
12 78,5 10 2R
13 179,1 13 MR
14 78,5 10 2M
15 179,1 5 2R
16 31,4 10 2M
17 179,1 5 MR
18 179,1 10 2M
19 31,4 5 2R
20 31,4 10 2R
21 78,5 13 2M
22 179,1 5 2M
23 125,7 5 2M
24 78,5 13 MR
25 31,4 13 2R
26 179,1 10 2R
27 31,4 13 MR
28 125,7 13 MR
29 179,1 10 MR
30 31,4 5 MR
31 179,1 13 2M
32 125,7 13 2R
33 125,7 10 MR
34 78,5 5 2R
35 78,5 5 2M
36 31,4 13 2M
CAPÍTULO 8 – ANÁLISIS DE RESULTADOS
Observando los datos del Cuadro 8.1, es evidente que estas proporciones no se mantienen constantes.
Debido a esto, se descarta automáticamente la posibilidad de que los bioprocesos puedan ser llevados a
cabo en una escala pequeña y luego en la grande solamente con un ajuste en la velocidad de agitación y
manteniendo un tasa de aireación constante, en términos de vvm. Estas diferencias geométricas
explican, entre otros factores, el por qué el establecimiento de un ámbito de operaciones para obtener
valores de kLa similares no fue fructífero con el criterio de la velocidad de punta y la misma tasa de
aireación por unidad de volumen como se verá más adelante.
69
70
Aunado a esto, se eliminan el 10 % de datos iniciales. Esto se realiza puesto que de acuerdo con
Merchuk (1990) el análisis de datos de transferencia de masa para la determinación del kLa por el
método dinámico pueden ser simplificado al truncar la primera parte de la curva de respuesta del sensor
y aplicando una aproximación de primer orden. Este efecto permite reducir el error introducido por el
tiempo de rezago del sensor el cual es más crítico en las etapas iniciales. Con estas dos consideraciones
tomadas en cuentas, los valores del kLa son más precisos.
La primera etapa experimental tiene como objetivo el obtener valores del coeficiente de transferencia
de masa (kLa) en 3 niveles de agitación (100, 250 y 400 RPM), 3 niveles de aireación (2, 4 y 8 LPM) y tres
arreglos de impulsores (2R, MR y 2M) en los biorreactores de 7 L. Los valores de kLa obtenidos durante
la primera etapa experimental se muestran en forma resumida en los Cuadros 8.2, 8.3 y 8.4. Observando
dichos datos, se puede notar como para los tres tipos de arreglos, la transferencia de oxígeno al medio
de cultivo aumenta conforme lo hace el nivel de agitación. Esta observación es esperable ya que un
incremento en la agitación hace que la mezcla se vuelva más homogénea y las burbujas de aire puedan
ser dispersadas de manera más efectiva en todo el volumen. Estos resultados son congruentes con los
reportados por diversos autores en sus estudios (Nishikawa, 1981; García-Ochoa, 2009; Alabek, 2011).
Cuadro 8.2. Resumen de los valores del coeficiente volumétrico de transferencia de masa (kLa) en h-1
obtenidos en la etapa experimental con el biorreactor de 7 L y el arreglo de 2R.
Velocidad (RPM)
Aireación (LPM)
100 250 400
2 1,135 3,860 10,55
4 1,799 5,728 15,94
8 5,597 6,601 19,88
Cuadro 8.3. Resumen de los valores del coeficiente volumétrico de transferencia de masa (kLa) en h-1
obtenidos en la etapa experimental con el biorreactor de 7 L y el arreglo de MR.
Velocidad (RPM)
Aireación (LPM)
100 250 400
2 1,196 8,066 11,01
4 1,737 9,225 14,52
8 4,295 13,36 20,01
Cuadro 8.4. Resumen de los valores del coeficiente volumétrico de transferencia de masa (kLa) en h-1
obtenidos en la etapa experimental con el biorreactor de 7 L y el arreglo de 2M.
Velocidad (RPM)
Aireación (LPM)
100 250 400
2 1,267 7,464 11,716
4 1,903 10,198 15,584
8 4,090 14,202 22,761
71
Es evidente también que para los tres arreglos, la transferencia de oxígeno se ve favorecida por un
aumento en la tasa de aireación. Esta observación también va de la mano con lo expuesto en otros
estudios (Badina, 2011; Nishikawa, 1981) y se explica por dos motivos. En primera instancia, un aumento
en la velocidad de aireación logra una tasa de lavado superior de la fase gaseosa contenida en el líquido;
es decir, el gas que ya está disuelto y cuyo oxígeno ha sido transferido, puede ser evacuado y sustituido
más rápidamente por nuevo aire cuya concentración de oxígeno es mayor. El segundo motivo proviene
del aumento de la cantidad de burbujas en la disolución; cuando hay más burbujas, existe una mayor
área superficial global para la transferencia de masa.
Para estudiar cuál de los dos efectos posee una contribución mayor al aumento del kLa, es necesario
realizar un análisis estadístico, específicamente un análisis de factorial. Este estudio tiene además como
propósito el determinar si el arreglo de los impulsores representa una diferencia significativa en la
transferencia de oxígeno, un resultado que no es tan claro cuando se analizan los valores de k La a simple
vista. El análisis se llevó a cabo con el software estadístico Minitab y los resultados del análisis ANOVA se
presentan en el Cuadro 8.5 y en las Figuras 8.1, 8.2 y 8.3.
El primer punto por abordar antes de iniciar el análisis, es la validez estadística que presentan los
resultados obtenidos. Esta validez se puede corroborar por un estudio de la probabilidad, distribución
de frecuencia, valores ajustados y orden de observación de los residuos. Si alguno de estos parámetros
no es satisfactorio, no se puede trabajar los datos obtenidos y de ahí la importancia de su estudio. Para
realizar tal estudio, se procede a observar la Figura 8.1 que contiene en forma gráfica todos los
parámetros previamente mencionados.
2.5
Residuo
50
0.0
10
-2.5
1
0.1 -5.0
-5.0 -2.5 0.0 2.5 5.0 0 5 10 15 20
Residuo Valor ajustado
2.5
Residuo
20 0.0
10 -2.5
0 -5.0
-4 -2 0 2 4 6 1 10 20 30 40 50 60 70 80
Residuo Orden de observación
Figura 8.1. Distintas gráficas de los residuos de los datos obtenidos en el análisis factorial
de las corridas experimentales en el biorreactor de 7 L.
72
Iniciando con la esquina superior izquierda, se puede apreciar que la gráfica de probabilidad normal de
los residuos presenta una tendencia recta y que sus valores centrales están bien alineados, que en
esencia son los más importante en este tipo de análisis. En los extremos superior e inferior se muestran
puntos muy distantes que pueden corresponder a valores que difieren mucho del promedio pero que no
contradicen el supuesto de normalidad. Continuando con la esquina inferior izquierda, se ve que la
distribución de frecuencias de los residuos forma una campana de Gauss, exceptuando un par de valores
a la derecha que se encuentran aislados y podrían ser valores atípicos (Montgomery, 2008). El
histograma entonces cimenta con más fuerza el resultado analizado en la gráfica anterior sobre la
normalidad.
Luego se procede con la esquina superior derecha en donde se encuentran los residuales en función de
los valores ajustados. Se nota que no existe una tendencia clara en los residuos, por lo que con certeza
se puede afirmar que la varianza no presenta un cambio sistemático con el valor del residuo y es por lo
tanto constante. Finalmente, en la esquina inferior derecha se tiene el valor de los residuos en términos
del orden de observación. Por su patrón irregular en picos, se puede decir con toda confianza que los
errores obtenidos fueron aleatorios; y por lo tanto, que hubo una buena aleatorización en la recolección
de datos. Con base en toda esta evidencia, se puede asegurar que los datos cumplen con los supuestos
estadísticos para la aplicación de un diseño factorial.
Al haber garantizado la validez de los datos, se puede proseguir con el análisis de los efectos en sí y para
ello se hace uso del Cuadro 8.5. La última columna de dicho cuadro muestra el valor P para los efectos y
las interacciones. Al trabajar con una significancia α = 0,05, serán significativos aquellos efectos e
interacciones cuyo valor P sea menor a este valor. Se tiene entonces que las tres variables son
significativas, así como las interacciones entre la agitación y el arreglo, además de la agitación y la
aireación. El modelo posee una desviación estándar de S = 1,76 h-1 y un R2 del 94,95%, lo cual indica que
el modelo es satisfactorio.
Cuadro 8.5. Resultados del análisis estadístico realizado sobre los datos experimentales de kLa obtenidos
en el biorreactor de 7 L.
Fuente GL SC Sec. SC Ajust. CM Ajust. F P
Agitación 2 2360,19 2360,19 1180,10 379,50 0,000
Aireación 2 505,65 505,65 252,82 81,30 0,000
Arreglo 2 56,70 56,70 28,35 9,12 0,000
Agitación*Aireación 4 100,41 100,41 25,10 8,07 0,000
Agitación*Arreglo 4 108,12 108,12 27,03 8,69 0,000
Aireación*Arreglo 4 8,49 8,49 2,12 0,68 0,607
Agitación*Aireación*Arreglo 8 20,29 20,29 2,54 0,82 0,592
Error 54 167,92 167,92 3,11
Total 80 3327,77
Se procede a analizar la Figura 8.2. En dicha figura se puede apreciar no solamente la dirección de los
efectos sobre el kLa, sino también la magnitud en comparación con los otros efectos. Se puede
corroborar las observaciones iniciales de que el aumento en la agitación y en la aireación favorece el
73
coeficiente volumétrico de transferencia de masa. La agitación abarca el factor de peso sobre el kLa más
significativo entre los 3 efectos y esto concuerda con lo observado por Calik (1997), que comprueba en
sus estudios que el efecto de la agitación tiene una mayor magnitud que el de la aireación en la
transferencia de oxígeno en tanques agitados. La aireación a su vez posee un efecto más significativo
que el arreglo y este último posee una magnitud levemente perceptible. El arreglo, sin embargo, posee
un trasfondo que se debe explicar más adecuadamente.
10
5
Media
10
2R MR 2M
Figura 8.2. Gráficas de los efectos principales de los datos obtenidos en el análisis factorial
de las corridas experimentales en el biorreactor de 7 L.
Arjunwadkar (1998) establece que el patrón de flujo del tanque determina la homogeneidad de la fase
gaseosa en este y, consecuentemente, la transferencia de masa que se da en el biorreactor. El agitador
en la posición inferior del eje, o el agitador en tanques donde sólo se utiliza uno, es el que pasa por los
regímenes de inundación, carga, dispersión y recirculación del aire, mientras que el agitador superior
solamente tiene la función de dispersar. En combinaciones de agitadores en donde un agitador de
patrón de flujo combinado se pone en la posición inferior, se nota que la dispersión es pobre en
comparación con la producida por un agitador de flujo radial. El resultado es una retención del gas
pobre y una menor transferencia de masa. Bajo este enfoque, los resultados obtenidos para el
biorreactor de 7 L resultan opuestos a lo esperado. Se puede argumentar esta situación a partir de dos
criterios: la alta viscosidad de la disolución y el nivel “bajo” de agitación.
En términos de viscosidad, Arjunwadkar (1998) y Gogate (2000) describen que existe una disminución en
el valor de kLa conforme las disoluciones son más viscosas. Este fenómeno se presenta debido a que la
74
distribución del tamaño de las burbujas en este tipo de disoluciones es tal que predominan las burbujas
muy grandes y las muy pequeñas. Las burbujas grandes tienen una alta velocidad de ascensión, poco
tiempo de retención y un área superficial baja. Por otro lado, las burbujas muy pequeñas poseen muy
poco oxígeno y se agotan rápidamente. En el caso del biorreactor de 7 L, si la agitación no es muy
eficiente, las burbujas grandes no tenderán a romperse en elementos más pequeños. La ventaja que
ofrece la turbina Rushton sobre la hélice marina radica precisamente en su capacidad para dispersar la
fase gaseosa. Si esta situación no se está logrando, entonces es un tipo de impulsor que no provee una
ventaja significativa sobre el otro.
La hélice marina, por su parte, genera un patrón de flujo axial independientemente de la velocidad de
agitación. Este patrón genera a su vez un tipo de circulación dentro del fluido el cual alarga el tiempo de
retención de las burbujas dentro del biorreactor. Si las burbujas grandes son capaces de transferir
oxígeno al medio siempre y cuando no asciendan demasiado rápido, la hélice marina favorecería valores
superiores de kLa al generar este patrón de flujo.
La hipótesis expresada anteriormente puede ser reforzada al observar las diferencias que existen entre
los valores del kLa obtenidos en los bordes del ámbito de agitación y compararlos con los valores
centrales. Tanto para la agitación a 100 RPM como a 400 RPM, las diferencias en la transferencia de
oxígeno no son tan evidentes como sí lo son a 250 RPM. En el extremo inferior se tendría una agitación
tan baja que no genera una circulación de material efectiva; es decir, que la “ventaja” que presenta la
hélice marina sobre la turbina Rushton no se está aprovechando. En el extremo superior, el nivel de
agitación ya comienza a ser mayor y la ventaja que posee la turbina Rushton sobre la hélice marina
comienza a compensar la falta del patrón de flujo axial. Esto equipara el funcionamiento de ambos
impulsores. Podría hacerse un estudio adicional que analice los valores de kLa que se obtendrían a una
velocidad de agitación mayor y si efectivamente la turbina Rushton logra una mayor transferencia al
romper las burbujas grandes.
Analizando el nivel medio, se podría suponer que la agitación a 250 RPM proporciona un movimiento tal
que ya se comience a aumentar la retención de las burbujas de aire, pero que a su vez es insuficiente
para reventar y dispersar las burbujas de aire adecuadamente. Bajo este enfoque, la hélice marina es la
que se ve más favorecida en el nivel intermedio y otorgaría una ventaja sobre la turbina Rushton.
Las observaciones anteriores se aprecian con mayor claridad en la Figura 8.3. En esta gráfica de
interacciones se ve que en el cruce entre Agitación y Arreglo, para 100 RPM y 400 RPM, no existe un
cambio significativo mientras que para 250 RPM sí. Este último efecto es el que a escala global indica
que el arreglo 2M sea el más favorable para aumentar el kLa y la variabilidad a cada nivel de agitación es
lo que justifica que sea el menos significativo de todos.
20 Agitación
100
250
A gitación 10 400
0
20 Aireación
2
4
A ir eación 10 8
A r r eglo
Figura 8.3. Gráficas de las interacciones principales de los datos obtenidos en el análisis factorial
de las corridas experimentales en el biorreactor de 7 L.
Las mismas tasas de disipación de energía específica introducen un error acarreado grande ya que las
mediciones de potencia consumida no se realizaron y más bien esta se estima a partir de otros datos y
supuestos. La similitud geométrica, como se describió en la Sección 8.1, no procede debido a las
76
diferencias significativas entre los dos biorreactores; esta razón descarta además el criterio de
extrapolación de datos experimentales con un factor de seguridad. El tiempo de mezclado es un
parámetro no relevante en este estudio debido a que las pruebas no presentan una duración específica
como si se trabajara en un bioproceso por lotes. Quedan remanente entonces los criterios de la
velocidad de punta y la tasa de aireación por volumen de disolución (vvm), los cuales son los
seleccionados para este trabajo. El criterio de mantener los mismos coeficientes volumétricos de
transferencia de masa es el fin último de la investigación.
Debido a la diferencia en el diámetro del agitador entre las hélices marinas y las turbinas Rushton a la
escala de 70 L, se hace necesario trabajar con velocidades de agitación distintas entre los 3 arreglos.
Estas velocidades se presentaron en la Sección 7.4.2.1. La aireación por su parte, manteniendo el criterio
de los vvm semejantes, posee valores de 20, 40 y 80 LPM. Los resultados de esta fase se muestran en los
Cuadros 8.6 y 8.7. Solamente se estudian el arreglo 2R y 2M por ser a su vez los valores extremos de los
arreglos.
Cuadro 8.6. Resumen de los valores del coeficiente volumétrico de transferencia de masa (kLa) en h-1
obtenidos en la determinación del ámbito de condiciones de operación y el arreglo de 2R.
Velocidad (RPM)
Aireación (LPM)
10 20 30 40 53 60
10 10,65 11,24 11,83 10,75 9,341 8,046
20 17,83 17,43 10,48 10,65 11,36 12,38
Cuadro 8.7. Resumen de los valores del coeficiente volumétrico de transferencia de masa (kLa) en h-1
obtenidos en la determinación del ámbito de condiciones de operación y el arreglo de 2M.
Velocidad (RPM)
Aireación (LPM)
10 20 30 40 50 67
10 7,148 7,240 8,151 9,450 - -
20 11,95 15,16 15,41 15,23 13,54 12,93
El primer obstáculo que presenta esta segunda etapa experimental se hace evidente con las primeras
corridas. Al trabajar con la velocidad de punta y la tasa de aireación más bajas, el valor del kLa obtenido
es mucho mayor al que se obtiene en los niveles más bajos del biorreactor de 7 L. Se decide entonces
trabajar a menores velocidades de agitación para observar si se obtienen coeficientes más pequeños.
Los resultados, como se presentan en los Cuadros 8.6 y 8.7 no son muy satisfactorios ni reveladores ya
que tienden más bien a fluctuar en vez de presentar una tendencia. Esto se puede explicar a partir del
hecho de que los modelos predictivos de los valores de kLa parten, en su mayoría, del supuesto de que la
mezcla dentro del biorreactor es perfectamente homogénea (Gourich, 2008). En estos casos, un
aumento en la velocidad de agitación naturalmente logra un aumento en la transferencia de oxígeno.
No obstante, las velocidades de agitación son tan bajas que el mezclado se está generando casi que
exclusivamente por medio de la aireación. Estas burbujas por su parte presentan los mismos obstáculos
en la transferencia de masa que los que presentaban en el nivel de 7 L, tamaños grandes y poco tiempo
de retención. Aunado a esto, la aleatoriedad del burbujeo en sí es lo que ocasiona la fluctuación en los
77
resultados obtenidos, ya que para ciertas corridas existirán en promedio más burbujas, tamaños
distintos y una dispersión desigual. Todos estos efectos en conjunto evitan que se logre una correcta
predicción del comportamiento del kLa cuando se varían los niveles de agitación.
A su vez, se decide también observar si la tasa de aireación es la que define los valores de kLa bajo estas
condiciones. Se introduce entonces un nuevo nivel que es el de 10 LPM, que es la marca mínima del
rotámetro. Para todos los casos, exceptuando la velocidad de 30 RPM en el arreglo de 2R, se comprueba
que es efectivamente la tasa de aireación la que gobierna los valores del kLa. Aún si los valores se logran
disminuir, estos distan mucho de los obtenidos en el biorreactor de 7 L, por lo que se debe concurrir a
la solución de cambiar los dispositivos de medición y control de flujo por unos que trabajen a menor
ámbito. Es así como se instalan los rotámetros de 3 a 13 LPM, se fijan nuevos niveles de aireación, y los
resultados obtenidos son satisfactorios para lo que a la investigación concierne. Dichos resultados se
toman como las primeras corridas para la tercera etapa experimental y es por esto que no se muestran
en la presente sección.
Cuadro 8.8. Resumen de los valores del coeficiente volumétrico de transferencia de masa (kLa) en h-1
obtenidos en la etapa experimental con el biorreactor de 70 L y el arreglo de 2R.
Velocidad (RPM)
Aireación (LPM)
53 132 211 300
5 2,226 3,520 8,182 24,65
10 6,176 5,603 11,99 31,21
13 6,711 6,904 12,97 31,66
Cuadro 8.9. Resumen de los valores del coeficiente volumétrico de transferencia de masa (kLa) en h-1
obtenidos en la etapa experimental con el biorreactor de 70 L y el arreglo de MR.
Velocidad (RPM)
Aireación (LPM)
60 150 240 342
5 1,797 3,412 7,434 21,25
10 5,122 6,904 12,47 26,60
13 6,822 8,112 13,90 30,83
78
Cuadro 8.10. Resumen de los valores del coeficiente volumétrico de transferencia de masa (kLa) en h-1
obtenidos en la etapa experimental con el biorreactor de 70 L y el arreglo de 2M.
Velocidad (RPM)
Aireación (LPM)
67 169 270 384
5 1,745 2,393 3,864 6,989
10 4,468 4,481 7,659 12,35
13 5,657 5,936 9,766 13,12
Al igual que en la Sección 8.1, el análisis de esta etapa experimental debe iniciarse a partir del estudio
del cumplimiento de los supuestos, utilizando la herramienta estadística Minitab. Dichos resultados se
muestran en el Cuadro 8.11. y en las Figuras 8.4, 8.5 y 8.6. De nuevo, el primer punto por abordar antes
de iniciar el análisis, es la validez estadística que presentan los resultados obtenidos en esta etapa y para
ello se hace uso de las gráficas representadas en la Figura 8.4. De la esquina superior izquierda, se
puede ver que la gráfica de probabilidad normal de los residuos presenta una tendencia recta y que sus
valores centrales están bien alineados. Similar a lo comentado en la Sección 8.2, hay puntos extremos en
este diagrama, pero no deben resultar alarmantes ya que la mayoría se ajustan muy bien a la tendencia
central.
El histograma de la esquina inferior izquierda, muestra una distribución de frecuencias de los residuos
con tendencia normal, exceptuando un par de valores a la derecha y a la izquierda que se encuentran
aislados y podrían ser valores atípicos. Este histograma, de hecho, es bastante más simétrico que el
obtenido para los datos de los biorreactores de 7 L.
1
Residuo
50 0
10 -1
1 -2
0.1
-2 -1 0 1 2 0 10 20 30
Residuo Valor ajustado
20 1
Residuo
0
10 -1
-2
0
-2 -1 0 1 2 1 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70
Residuo Orden de observación
Figura 8.4. Distintas gráficas de los residuos de los datos obtenidos en el análisis factorial
de las corridas experimentales en el biorreactor de 7 L.
79
En la esquina superior derecha se encuentran los residuos en función de los valores ajustados. En esta
sección pareciera que los datos se abren y se cierran en forma cónica, pero como no lo hacen en un
patrón regular ni con una tendencia fija, se puede tener la certeza de que no hay un cambio sistemático
en la varianza. Finalmente, en la esquina inferior derecha se tiene el valor de los residuos en términos
del orden de observación. Por su patrón irregular en picos se puede decir con toda confianza que los
errores obtenidos fueron aleatorios; y por lo tanto, que hubo una buena aleatorización en la recolección
de datos. Con base en toda esta evidencia, se puede asegurar que los datos cumplen con los supuestos
estadísticos que los hacen significativos.
Con haber garantizado la validez de los datos, se puede proseguir con el análisis de los efectos en sí y
para ello se hace uso del Cuadro 8.11. Como se puede observar, para este caso los efectos e
interacciones cuyo valor P es menor al 0,05 son exactamente los mismos que aquellos que se obtuvieron
para los biorreactores de 7 L. El modelo posee una desviación estándar de S = 0,936 h-1 y un R2 del 99,40
%, lo cual indica que el modelo es satisfactorio.
Cuadro 8.11. Resultados del análisis estadístico realizado sobre los datos experimentales de kLa
obtenidos en el biorreactor de 70 L.
Fuente GL SC Sec. SC Ajust. CM Ajust. F P
Agitación 3 3557,01 3557,01 1185,67 1354,20 0,000
Aireación 2 376,34 376,34 188,17 214,91 0,000
Arreglo 2 545,74 545,74 272,87 311,66 0,000
Agitación*Aireación 6 27,82 27,82 4,64 5,30 0,001
Agitación*Arreglo 6 700,42 700,42 116,74 133,33 0,000
Aireación*Arreglo 4 7,53 7,53 1,88 2,15 0,095
Agitación*Aireación*Arreglo 12 8,24 8,24 0,69 0,78 0,663
Error 36 31,52 31,52 0,88
Total 71 5254,62
Prosiguiendo el análisis, en la Figura 8.5 se puede apreciar no solamente la dirección de los efectos
sobre el kLa, sino también la magnitud en comparación con los otros efectos. Similarmente a lo
descubierto en los biorreactores de 7 L, para la escala de 70 L es evidente que tanto la agitación como la
aireación juegan un papel fundamental en la determinación del kLa; siendo la agitación, a su vez, el
efecto de mayor importancia. En esta etapa experimental, se decide además incluir un nuevo nivel de
agitación para seguir estudiando la relevancia de este efecto. El nuevo nivel superior, con una velocidad
de punta de 179,1 cm/s, dispara el valor del kLa hacia arriba. Tiene a su vez un rol muy relevante que es
la definición del efecto que produce el arreglo de los impulsores como se estudiará a continuación.
Existen dos razones principales por las cuales se puede explicar la discrepancia con respecto a la escala
de 7 L. La primera tiene que ver con la geometría del tanque en sí. En los biorreactores de 70 L existe
80
una mayor relación de altura con respecto al diámetro, la cual logra un tiempo de retención mayor de
las burbujas al tener estas un trayecto más largo que recorrer hasta la superficie. Durante este trayecto,
las burbujas pueden transferir oxígeno, tienen más posibilidad de ser reventadas por los impulsores y
existe una probabilidad más grande de que los patrones de flujo existentes pueden mezclarlas. La
presión hidrostática dentro del recipiente es superior, lo cual contribuiría a un diámetro de burbuja que
en promedio es menor, lo cual ralentizaría el ascenso de las burbujas. Este biorreactor además presenta
4 mamparas en vez de 3, lo cual provoca un grado de turbulencia mayor en comparación con el
observado en los biorreactores de 7 L. El burbujeador a su vez es de forma de anillo, y el aire puede
desde un inicio salir con cierto grado de dispersión a lo largo del área transversal del tanque, mientras
que en el biorreactor de vidrio, la dispersión tiene que realizarla enteramente el impulsor inferior.
20
15
10
5
Media
20
15
10
5
2R MR 2M
Figura 8.5. Gráficas de los efectos principales de los datos obtenidos en el análisis factorial
de las corridas experimentales en el biorreactor de 7 L.
Al igual que en los biorreactores de 7 L, la Figura 8.6 muestra la tendencia que existe en los valores de
kLa cuando se analizan las interacciones. En esta gráfica se ve que en el cruce entre Agitación y Arreglo,
es el que presenta una diferencia más drástica en cuanto al arreglo de los impulsores respecta. Es
además la interacción más importante. Para las tres velocidades inferiores, el cambio de impulsores no
refleja un cambio muy grande, pero en el último nivel sí se hace evidente la diferencia. La interacción
Agitación y Aireación tiene un esquema similar al que se obtuvo para el biorreactor de 7 L.
30
Aireacion
5
20 10
A ir eacion 13
10
A r r eglo
Figura 8.6. Gráficas de las interacciones principales de los datos obtenidos en el análisis factorial
de las corridas experimentales en el biorreactor de 70 L.
3.25). Haciendo uso del programa CurveExpert Pro 2.0, se realiza la regresión de los datos al modelo
para obtener los coeficientes de este. Trabajando con los datos de los Cuadros 8.2, 8.3, 8.4, 8.8, 8.9 y
8.10, se obtienen las correlaciones para la predicción del kLa para los biorreactores de 7 L y de 70 L con
sus diversos arreglos. Estas correlaciones se muestran en el Cuadro 8.12.
Cuadro 8.12. Correlaciones para la predicción del coeficiente volumétrico de transferencia de masa (kLa)
para los distintos biorreactores con sus respectivos arreglos de impulsores.
Biorreactor Arreglo Correlación
2R ( )
7L MR ( )
2M ( )
2R ( )
70 L MR ( )
2M ( )
Muchos autores han referido distintos valores para los exponentes y la constante que acompañan a la
correlación; lo que a veces resulta en discrepancias grandes entre dichos parámetros. García-Ochoa
(2009) resume muchas de las correlaciones generadas en estudios previos y establece que los valores
de los exponentes rondan los siguientes intervalos: 0,3 ≤ a ≤ 0,7; 0,4 ≤ b ≤ 1; -0,7 ≤ c ≤ -0,4. Aún si la
mayoría de los exponentes obtenidos calzan dentro de estas categorías, hay que recordar que por el
método matemático que utiliza el programa, estos no son definitivos. El algoritmo de Lavenberg-
Marquardt tiende a converger rápidamente cerca de un punto, y para el caso de los modelos
potenciales, las combinaciones de exponentes que logran converger a un punto satisfactorio son
muchas. Es por este motivo que comparar los exponentes obtenidos frente a aquellos presentados por
otros autores representa poca utilidad.
No obstante, sí es importante notar que los valores de los exponentes asociados a la viscosidad
aparente todos presentan exponentes negativos. Esto indica que conforme aumenta la viscosidad de
una disolución, disminuye la transferencia de oxígeno. Pendersen (1994) describe este tipo de
resultados al trabajar con disoluciones de goma xantán. Muller (1992) además establece que con un
aumento en la viscosidad existe un incremento en la capa límite la cual aumenta la resistencia a la
transferencia de masa; y que únicamente los vórtices con suficiente energía pueden penetrar esta capa
y lograr el rompimiento de las burbujas o la transferencia de solutos gaseosos al líquido.
Sobre la variación presente en los exponentes, Moucha (2012) explica que son diversas razones las
cuales generan estas incongruencias. En primera instancia, se tiene que los valores estimados de kLa se
obtienen por los distintos métodos expuestos en el Sección 3.2, los cuales tienen sus ventajas y
83
desventajas. Los datos en algunos casos se pueden corregir utilizando modelos físicos más complejos de
flujo a través de las fases. Para extraer el valor adecuado del coeficiente volumétrico de transferencia de
masa a partir de datos de transferencia de oxígeno, es necesario separar la fuerza motriz
adecuadamente. A su vez, para calcular los valores apropiados de la fuerza motriz se utilizan distintos
modelos de flujo de gas y de líquido propuestos en la literatura. Los modelos de flujo que se utilizan por
lo general para el cálculo de la fuerza motriz son los de una fase líquida perfectamente homogénea
combinada con un flujo pistón del gas que también se encuentre mezclado perfectamente. Si bien la
suposición de que la fase líquida se encuentra totalmente homogénea es una aproximación razonable, la
suposición de la fase gaseosa solamente es aplicable en los sistemas en los cuales la coalescencia y
redispersión de las burbujas dentro del biorreactor aseguran este mezclado perfecto. Cuando los
líquidos contienen sustancias que inhiben o dificultan la coalescencia de las burbujas, el modelo falla y
otorga valores de kLa que son subestimados (Moucha, 2012).
Para el caso en estudio, muchas de estas consideraciones se pueden analizar. Los niveles de agitación
menores podrían ser lo suficientemente bajos como para que el supuesto de un fase líquida homogénea
no se cumpla. Este efecto, explicaría por qué los porcentajes de error entre el valor predicho por el
modelo y el observado experimentalmente es tan alto a los niveles de agitación bajos mientras que a los
niveles altos es casi que nulo. La fase gaseosa por su lado, dista mucho de presentar un comportamiento
de flujo tipo tapón debido a la alta viscosidad de la mezcla. Como se mencionó anteriormente, en los
fluidos altamente viscosos como la disolución de goma xantán y los caldos de cultivo, las burbujas
suelen ser muy grandes o muy pequeñas, con velocidades de ascensión radicalmente distintas. Cuando
se aumenta la tasa de aireación se contrarrestan dos efectos: primero, la tasa de lavado es mayor y el
flujo se asemejaría más al flujo tapón; y segundo, la aireación vigorosa en sí ayuda a lo que es la
agitación y homogenización del medio. Es por esto que los porcentajes de error también tienden a
disminuir conforme se aumenta la aireación dentro de un mismo nivel de agitación tal como se observa
en los Cuadros 8.13, 8.14, 8.15, 8.16, 8.17 y 8.18.
Cuadro 8.13. Valores de kLa obtenidos experimentalmente, valores predichos por la correlación y
porcentaje de error para el biorreactor de 7 L y el arreglo de 2R.
Agitación Aireación kLa experimental kLa predicho con
% de error
(RPM) (LPM) (h-1) el modelo (h-1)
2 1,135 0,859 24,29
100 4 1,799 1,160 35,53
8 5,597 1,567 72,01
2 3,860 4,575 18,53
250 4 5,728 6,164 7,61
8 6,601 8,308 25,86
2 10,55 10,83 2,70
400 4 15,94 14,58 8,56
8 19,88 19,63 1,29
84
Cuadro 8.14. Valores de kLa obtenidos experimentalmente, valores predichos por la correlación y
porcentaje de error para el biorreactor de 7 L y el arreglo de MR.
Agitación Aireación kLa experimental kLa predicho con
-1 % de error
(RPM) (LPM) (h ) el modelo (h-1)
2 1,196 2,417 102,16
100 4 1,737 3,278 88,67
8 4,295 4,446 3,51
2 8,066 6,567 18,58
250 4 9,225 8,907 3,45
8 13,36 12,080 9,55
2 11,01 10,966 0,39
400 4 14,52 14,872 2,41
8 20,01 20,172 0,80
Cuadro 8.15. Valores de kLa obtenidos experimentalmente, valores predichos por la correlación y
porcentaje de error para el biorreactor de 7 L y el arreglo de 2M.
Agitación Aireación kLa experimental kLa predicho con
-1 % de error
(RPM) (LPM) (h ) el modelo (h-1)
2 1,267 2,271 79,25
100 4 1,903 3,203 68,36
8 4,090 4,522 10,56
2 7,464 6,622 11,28
250 4 10,20 9,338 8,44
8 14,20 13,174 7,24
2 11,72 11,469 2,11
400 4 15,58 16,168 3,75
8 22,76 22,804 0,19
Cuadro 8.16. Valores de kLa obtenidos experimentalmente, valores predichos por la correlación y
porcentaje de error para el biorreactor de 70 L y el arreglo de 2R.
Agitación Aireación kLa experimental kLa predicho con
-1 % de error
(RPM) (LPM) (h ) el modelo (h-1)
5 2,226 0,493 77,86
53 10 6,176 0,614 90,06
13 6,711 0,667 90,06
5 3,520 3,769 7,08
132 10 5,603 4,683 16,43
13 6,904 5,085 26,35
5 8,182 10,77 31,65
211 10 11,99 13,37 11,46
13 12,97 14,51 11,89
5 24,65 23,74 3,71
300 10 31,21 29,43 5,69
13 31,66 31,93 0,84
85
Cuadro 8.17. Valores de kLa obtenidos experimentalmente, valores predichos por la correlación y
porcentaje de error para el biorreactor de 70 L y el arreglo de MR.
Agitación Aireación kLa experimental kLa predicho con
-1 % de error
(RPM) (LPM) (h ) el modelo (h-1)
5 1,797 0,854 52,46
60 10 5,122 1,170 77,16
13 6,822 1,318 80,69
5 3,412 4,424 29,66
150 10 6,904 6,058 12,26
13 8,112 6,824 15,88
5 7,434 10,284 38,33
240 10 12,47 14,083 12,91
13 13,90 15,863 14,15
5 21,25 19,418 8,63
342 10 26,60 26,593 0,03
13 30,83 29,955 2,82
Cuadro 8.18. Valores de kLa obtenidos experimentalmente, valores predichos por la correlación y
porcentaje de error para el biorreactor de 70 L y el arreglo de 2M.
Agitación Aireación kLa experimental kLa predicho con
-1 % de error
(RPM) (LPM) (h ) el modelo (h-1)
5 1,745 1,689 3,20
67 10 4,468 2,919 34,66
13 5,657 3,591 36,52
5 2,393 3,365 40,62
169 10 4,481 5,815 29,77
13 5,936 7,152 20,49
5 3,864 4,771 23,47
270 10 7,659 8,243 7,63
13 9,766 10,139 3,82
5 6,989 6,203 11,25
384 10 12,35 10,717 13,22
13 13,12 13,182 0,49
De manera general, luego de haber analizado los datos de los Cuadros 8.13, 8.14, 8.15, 8.16, 8.17 y 8.18,
es posible determinar que las correlaciones obtenidas en el presente trabajo funcionan más
adecuadamente a partir del segundo nivel de agitación en ambos sistemas de biorreactores. Es desde
acá en donde las condiciones dentro del equipo satisfacen de mejor manera los supuestos del modelo
que da origen a las correlaciones. Además resulta prudente a futuro realizar pruebas experimentales
adicionales dentro del ámbito en el cual se trabajó y fuera de este para corroborar la validez de estas
correlaciones en lo que a la predicción del kLa respecta. También es de interés para investigaciones
futuras ver si en caldos de cultivos reales aplican dichos modelos, el cual es el fin último del presente
trabajo.
CAPÍTULO 9 – CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
Los rotámetros que se utilizan en los biorreactores de 70 L no son los adecuados si se desea escalar
bioprocesos desde los biorreactores de 7 L ya que la tasa de aireación mínima que estos pueden
regular proporciona valores de kLa que son inestables y mucho mayores que los obtenidos en la
escala pequeña.
86
87
Las correlaciones obtenidas para predecir los valores del coeficiente volumétrico de transferencia
de masa tanto para los biorreactores de 7 L como los de 70 L predicen de una manera efectiva el
kLa cuando los niveles de agitación no corresponden al mínimo estudiado en las pruebas
experimentales. Se puede concluir entonces que el modelo de predicción utilizado es adecuado
para estos casos. La falta de homogeneidad producto de una mala agitación hacen que el modelo
no se ajuste adecuadamente a las condiciones dentro de los biorreactores.
Se sugiere que tanto para los biorreactores de 7 L como para los de 70 L se utilice un arreglo
invertido de los impulsores de manera que la turbina Rushton quede en la posición inferior y la
hélice marina esté en la superior. Este arreglo es el que promueven varios autores como el más
eficiente en términos de potencia.
Las diferencias entre los valores de kLa obtenidos para el arreglo 2R y el MR no son muy
significativas en el biorreactor de 70 L. Si el consumo de potencia del arreglo MR es
considerablemente menor que el de 2R, podría considerarse utilizar el primero para ahorrar en
costos de operación.
Se propone que si se desea seguir trabajando con la hélice marina como impulsor en los
biorreactores de 70 L, se contacte al proveedor de material para ordenar una pieza cuyo diámetro
de agitación sea mayor.
Debido a que el centro cuenta con impulsores de aspas inclinadas tanto para los biorreactores de 7
L como los de 70 L, se insta a que se investigue el fenómeno de transferencia de masa utilizando
dichos impulsores en los biorreactores. La literatura tiende a favorecer este tipo de impulsor sobre
la hélice marina cuando se quiere obtener un patrón de flujo axial.
CAPÍTULO 10 – NOMENCLATURA
88
89
kG Coeficiente local de transferencia de masa en fase gaseosa mol m-2 s-1 Pa-1
kL Coeficiente local de transferencia de masa en fase líquida m s-1
kLa Coeficiente volumétrico de transferencia de masa s-1 o h-1
n Índice de comportamiento Adimensional
n1 Parámetro del modelo de predicción del índice de consistencia Adimensional
n2 Parámetro del modelo de predicción del índice de consistencia Adimensional
p Presión parcial Pa
Unidades de
pH Potencial de hidrógeno
pH
qO2 Tasa específica de consumo de oxígeno del microorganismo mol g-1 s-1
t Tiempo s
vP Velocidad de punta cm s-1
γ Velocidad de cizalla s-1
µ Viscosidad Pa ∙ s
ρ Densidad kg m-3
σ Tensión superficial N m-1
τ Esfuerzo Pa
τR Tiempo de respuesta del sensor de oxígeno s
ω Grosor de aspa del impulsor m
Subíndices:
0 Se refiere al estado inicial
1 Se refiere al estado 1
2 Se refiere al estado 2
7 Se refiere al biorreactor de 7 L
70 Se refiere al biorreactor de 70 L
A Se refiere al componente A
CO2 Se refiere al dióxido de carbono
G Se refiere al estado gaseoso
L Se refiere al estado líquido
M Se refiere a la disolución de goma xantán
O2 Se refiere al oxígeno
SO3-2 Se refiere al ion sulfito
a Se refiere a aparente
g Se refiere a condiciones con aireación
i Se refiere a la interfase gas-líquido
ms Se refiere al instrumento de medición
n Se refiere a etapa
o Se refiere a condiciones sin aireación
x Se refiere a un microorganismo
Superíndices:
* Se refiere a la condición de equilibrio
in Se refiere a las condiciones de entrada
out Se refiere a las condiciones de salida
CAPÍTULO 11 – REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Applikon Biotechnology (2008). Hardware Manual: ez-Control for Autoclavable Bioreactor Systems 1-20
L. Schiedam, Holanda: Applikon Biotechnology B.V.
Applikon Biotechnology (2009a). Hardware Manual: ez-Control for In Situ Sterilizable Biorreactors.
Schiedam, Holanda: Applikon Biotechnology B.V.
Applikon Biotechnology (2009b). User Manual: BioXpert XP. Supervisory Control & Data Acquisition
Program. Schiedam, Holanda: Applikon Biotechnology B.V.
Applikon Biotechnology (2013c). Spare Parts: Other Parts. Extraído el 11 de marzo, 2014, de
http://www.applikon-bio.com/index.php?option=com_content&view=article&id=418:spare-
parts-other-parts&catid=83:autoclavable-
bioreactors&Itemid=389#Foam%20Sensor%20(10%20mm%20port):
Applisens (2009a). User Manual: Sterilazable Dissolved Oxygen Sensors. Schiedam, Holanda: Applisens.
Amanullah, A.; Christensen L. H.; Hansen, K.; Nienow A. W.; Thomas, C. R. (2002). Dependence of
morphology on agitation intensity in fed-batch cultures of Aspergillusoryzae and its implications
for recombinant protein production. Biotecnology and Bioengineering. 77 (7), pp. 815-826.
Arjunwadkar, S.J.; Sarvanan A.B.; Kulkarni P.R.; Pandit A.B. (1998). Gas liquid mass transfer in dual
impeller bioreactor. Biochemical Engineering Journal. 1, pp. 99-106.
American Society of Civil Engineers (2007). ASCE Standard for Measurement of Oxygen Transfer in Clean
Water. New York, Estados Unidos: ASCE.
Badino, A.C.; Facciotti, M.C.R; Schmidell, W. (2001). Volumetric oxygen transfer coefficients (kLa) in
batch cultivations involving non-Newtonian broths. Biochemical Engineering Journal. 8, pp. 111-
119.
Calik, G.; Vural, H.; Ozdamar, T.H. (1997). Bioprocess parameters and oxygen transfer effects in the
growth of Pseudomonas dacunhae for L-alanine production. Chemical Engineering Journal. 65,
pp.109-116.
90
91
Calik, P.; Yilgor, P.; Ayhan P.; Demir, A.S. (2004). Oxygen transfer effects on recombinant benzaldehyde
lyase production. Chemical Engineering Science. 59, pp. 5075-5083.
Carbajal, T. I.; Tecante, A. (2004). On the applicability of the dynamic pressure step method for kLa
determination in stirred Newtonian and non-Newtonian fluids, culture media and fermentation
broths. Biochemical Engineering Journal. 18, pp. 185-192
Cooper, C.M.; Fernstorm, G.A. (1944). Performance of agitated gas-liquid contactors. Industrial and
Engineering Chemistry. 36 (6), pp. 504-509.
Danckwerts, P.V. (1970) Gas-Liquid Reaction. New York, Estados Unidos: McGraw-Hill.
Danckwerts, P.V.; Gillham, A.J. (1966). The design of gas absorbers I – Methods for predicting rates of
absortion with chemical reaction in packed columns, and tests with 11/2 in Raschig rings.
Chemicals Engineering Research and Design. 44(a), pp. 42-54.
Doble, M.; Kumar, A.; Gaganan, V. (2004). Biotransformations and Bioprocesses. New York, Estados
Unidos: Marcel Dekker Inc.
Duetz W.A.; Witholt, B. (2004). Oxygen transfer by orbital sheking of square vessels and deepwell
microtiter plates of various dimensions. Biochemical Engineering Journal. 17, pp. 181-185.
Fujasová, M.; Linek, V.; Moucha, T. (2007). Mass transfer correlations for multiple-impeller gas-liquid
contactors. Analysis of the effect of axial dispersion in gas liquid phases on “local” kLa values
measured by the dynamic pressure method in individual stages of the vessel. Chemical
Engineering Science. 62, pp. 1650-1669.
Garcia-Ochoa, F.; Gomez, E. (1998). Mass transfer in stirred tank reactors for xantham gum
solutions. Biochemical Engineering Journal. 1, pp. 1-10.
Garcia-Ochoa, F.; Gomez, E. (2005). Prediction of gas-liquid mass transfer in sparged stirred tank
bioreactors. Biotechnology and Bioengineering, 92 (6), pp. 761-772
Garcia-Ochoa, F.; Gomez, E. (2009). Bioreactor scale-up and oxygen transfer rate in microbial processes:
an overview. Biotechnology Advances. 27, pp.153-176.
Garcia-Ochoa, F.; Santos, V.E; et al (2000). Xantham gum: production, recovery, and
properties. Biotechnology Advances. 18, pp. 549-579.
Gauthier, L.; Thibault, J.; LeDuy, A. (1991). Measuring kLa with randomly pulsed dynamic method.
Biotechnology and Bioengineering. 37 (9), pp. 889-893.
Gogate, P.R.; Beenackers, A. A.; Pandit, A. B. (2000). Multiple-impeller systems with a special emphasis
on bioreactors: a critical review. Biochemical Engineering Journal. 6, pp. 109-144.
92
Gourich, B.; Vial C.H. et al (2008). Influence of hydrodynamics and probe response on oxygen mass
transfer measurements in a high aspect ratio bubble column reactor: Effect of the coalescence
behavior of the liquid phase. Biochemical Engineering Journal. 39 (1), pp. 1-14.
Hill, G. A. (2006). Measurement of overall volumetric mass transfer coefficients for carbon dioxide in
well-mixed reactor using a pH probe. Industrial and Engineering Chemical Research. 45, pp.
5796-5800.
Hughmak, G. (1980). Power requirements and Interfacial Area in Gas-Liquid Turbine Agitated Systems.
Industrial and Engineering Chemistry Process Design and Development. 19 (4), pp. 638-641.
Linek, V.; Vacek, V. (1981). Chemical engineering use of catalyzed sulfite oxidation kinetics for the
determination of mass transfer characteristics of gas-liquid contactors. Chemical Engineering
Science. 36 (11), pp. 1747-1768.
Linek, V.; Kordac, M.; Moucha, T. (2005). Mechanism of mass transfer from bubbles in dispersions. Part
II: Mass transfer coefficients in stirred gas-liquid reactor and bubble column. Chemical
Engineering and Processing. 44 (1), pp. 121-130.
Machon, V.; Vleck, J.; Hudcova, V. (1988). Multi-impeller gas-liquid contactors, Proceedings on the 6th
European Conference of Mixing. pp. 351-361.
McCabe, W.; Smith, J.; Harriot, P. (2007). Operaciones unitarias en ingeniería química. (7 ed.) México
D.F., México: McGraw-Hill Interamericana.
Merchuk, J.C.; Yona S.; Siegel, M.H.; Ben Zvi, A. (1990). On the first-order approximation to the response
of disolved oxygen electrodes for dynamic kLa estimation. Biotecnology and Bioengineering. 35,
pp. 1161-1163.
Metzner, A.; Otto, R. (1957). Agitation of non-Newtonian fluids. American Institute of Chemical
Engineers Journal. 3 (1), pp. 3-10.
Montgomery, D. (2008). Diseño y análisis de experimentos (2 ed.). México D.F., México: Editorial Limusa.
Moucha, T; Rejl, F., Kordac, M.; Labík, L. (2012). Mass transfer characteristics of multiple-impeller
fermenters for their design and scale-up. Biochemical Engineering Journal. 69, pp. 17-27.
Muller, F.; Davidson, F. On the contribution of small bubbles to mass transfer in bubble columns
containing highly viscous fluids. Chemical Engineering Science. 47 (13/14), pp. 3525-3532.
Nielsen, J.; Villadsen, J.; Lidén G. (2002). Bioreaction Engineering Principles. (2 ed). New York, Estados
Unidos: Plenum Publishers.
93
Nienow, A.; Hunt, G.; Buckland, B. (1995). A fluid dynamic study using a simulated viscous, shear
thinning broth of the retrofitting of large agitated bioreactors. Biotechnology and
Bioengineering. 49 (1), pp. 15-19.
Nishikawa, M.; Nakamura, H.; Yagi, K. (1981). Gas absorption in aerated mixing vessels. J. Chem. Eng.
Japan 14 (3), pp. 219-226.
Novak, M.; Klekner, V. (1988). Comparison of various methods of kLa estimation in cultures of
filamentous microorganisms. Biotechnology Techniques. 2 (4), pp. 243-248.
Onken, U.; Sick, R.; Weiland, P. (1985). Determination of gas-liquid mass transfer by oxidation of
hydrazine. Chemical Engineering Science. 40 (10), pp. 1990-1993.
Oosterhuis, N. M. G. (1984). Scale up of bioreactors: a scale down approach. (Tesis de doctorado) Delft,
Holanda: Delft University of Technology.
Ortiz-Ochoa, K.; Doig, S. D.; Ward, J.M.; Baganz, F. (2005). A novel method for the measurement of
oxygen mass transfer rates in small-scale vessels. Biochemical Engineering Journal. 25, pp. 63-68.
Paul, E., Atiemo-Obeng, V., Kresta, S. (2004). Handbook of Industrial Mixing. Science and Practice. New
Jersey, Estados Unidos: Wiley Interscience.
Pendersen, A. G.; Bundgaard-Nielsen, M.; Nielsen, J.; Villadsen, J. (1993). Rheological characterization of
media containing Penicillium chrisogenum. Biotechnology and Bioengineering. 41 (1), pp. 162-
164.
Pendersen, A. G.; Anderson, H.; Nielsen, J.; Villadsen, J. (1994). A novel technique based on Kr-85 for
quantification of gas-liquid mass transfer in bioreactors. Chemical Engineering Science. 49 (6),
pp. 803-810.
Roels, J. A. (1982). Mathematical models and the design of biochemical reactors, Journal of Chemical
Technology and Biotechnology. 32 (1) , pp. 59-72
Russell, A., Ditchett, P. (2006). Disinfection. En J. Pfafflin y E. Ziegler (Eds.) Encyclopedia of environmental
science and engineering (pp. 224-243). Boca Raton, Estados Unidos: CRC Press.
Shekhar, S.; Jayanti, S. (2003). Mixing of power-Law fluids using anchors: Metzner-Otto concept
revisited. American Institute of Chemical Engineers Journal. 49 (1), pp. 30-40.
Sworn, G. (2000). Xantham Gum. En G. O. Phillips y P.A. Williams (Ed.) Handbook of hydrocolloids.
Cambridge, Inglaterra: Woodhead Publishing Limited.
94
Taguchi H.; Humphrey A. E.; Bandyopadhyay, B. (1967). Dynamic measurement of the volumetric oxygen
transfer coefficient in fermentation systems. Biotechnology and Bioengineering. 9, pp. 533-544.
Treybal, R. (1988). Operaciones de transferencia de masa. (2 ed.) México D.F., México: McGraw-Hill.
Van’t Riet, K. (1979). Review of measuring methods and results in nonviscous gas-liquid mass transfer in
stirred vessels. Industrial and Engineering Chemistry Process Design and Development. 18 (3),
pp. 357-363.
Vashitz, O.; Sheintuch M.; Ulitzur S. (1989). Mass transfer studies using cloned-luminous strain of
Xanthomonas campestris. Biotechnology and Bioengineering. 34 (5), pp. 671-680.
Weiland P.; Onken, U. (1981). Fluid dynamics and mass transfer in an airlift fermenter with external
loop. German Chemical Engineering. 4, pp. 42-50.
Welty, J. (1999). Fenómenos de transferencia de momento, calor y masa (2 ed). México D.F., México:
Editorial Limusa.
Wise, W. S. (1951). The measurement of the aeration of culture media. Journal of General Microbiology.
5 (1), pp. 167-177.
Whitman, W.G. (1923). Preliminary experimental confirmation of the two-film theory of gas absorption.
Chemical and Metallurgical Engineering. 29, pp. 146-149.
Xie, M. (2014). Power consumption, local and average volumetric mass transfer coefficient in multiple-
impeller stirred bioreactors for xanthan gum solutions. Chemical Engineering Science. 106, pp
144-156
Yagi, H.; Yoshida, F. (1974). Oxygen absorption in fermenters – effects of surfactants, antifoaming
agents, and sterilized cells. Journal of Fermentation Technology. 52, pp. 905-916.
Yang, J.D.; Wang, N.S. (1992). Oxygen mass transfer enhancement via fermentor headspace
pressurization. Biotecnology Progress. 8, pp. 244-251.
APÉNDICES
A. DATOS EXPERIMENTALES
Cuadro A.1. Porcentajes de oxígeno disuelto en función del tiempo para la corrida con agitación de 300
RPM, aireación de 5 LPM y arreglo 2R en el Biorreactor B.
Ln [100/(100- Ln [100/(100-
Tiempo (s) OD (%) Tiempo OD (%)
OD)] OD)]
0 1 0,01 230 74,1 1,35
10 1 0,01 240 76 1,43
20 1,6 0,02 250 77,5 1,49
30 3,4 0,03 260 79,1 1,57
40 6,1 0,06 270 80,4 1,63
96
97
Cuadro A.2. Viscosidad aparente de la disolución de goma xantán en el Biorreactor 1 para distintas
velocidades de cizalla.
Velocidad de cizalla Viscosidad muestra 1 Viscosidad muestra 2 Viscosidad muestra 3
(s-1) (Pa ∙ s) (Pa ∙ s) (Pa ∙ s)
1,00 0,380 0,551 0,510
1,17 0,351 0,463 0,492
1,37 0,290 0,433 0,439
1,61 0,256 0,402 0,395
1,89 0,297 0,353 0,372
Cuadro A.3. Viscosidad aparente de la disolución de goma xantán en el Biorreactor 2 para distintas
velocidades de cizalla.
Velocidad de cizalla Viscosidad muestra 1 Viscosidad muestra 2 Viscosidad muestra 3
-1
(s ) (Pa ∙ s) (Pa ∙ s) (Pa ∙ s)
1,00 0,461 0,502 0,531
1,17 0,444 0,477 0,512
1,37 0,425 0,421 0,467
1,61 0,373 0,394 0,410
1,89 0,327 0,368 0,358
Cuadro A.4. Viscosidad aparente de la disolución de goma xantán en el Biorreactor 3 para distintas
velocidades de cizalla.
Velocidad de cizalla Viscosidad muestra 1 Viscosidad muestra 2 Viscosidad muestra 3
-1
(s ) (Pa ∙ s) (Pa ∙ s) (Pa ∙ s)
1,00 0,340 0,478 0,520
1,17 0,353 0,442 0,488
1,37 0,312 0,388 0,450
1,61 0,324 0,375 0,423
1,89 0,287 0,342 0,358
Cuadro A.5. Masas medidas en el picnómetro de las disoluciones de goma xantán de los biorreactores.
Biorreactor Masa muestra 1 (g) Masa muestra 2 (g) Masa muestra 3 (g)
1 37,38 37,38 37,38
2 37,44 37,38 37,36
3 37,46 37,30 37,35
A 37,47 37,44 37,39
B 37,47 37,36 37,37
B. DATOS INTERMEDIOS
y = 1.3127x - 0.1668
R² = 0.9916 Biorreactor B
1.50 Biorreactor C
Linear (Biorreactor A)
1.00
Linear (Biorreactor B)
Linear (Biorreactor C)
0.50
0.00
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0
Tiempo (h)
Figura B.1. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 100 RPM, aireación
de 2 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores 1, 2 y 3.
4.00
y = 1.6597x - 0.0708
3.50 R² = 0.9986
y = 1.9242x - 0.1597
3.00
R² = 0.9964
Biorreactor A
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
0.00
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5
Tiempo (h)
Figura B.2. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 100 RPM, aireación
de 4 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores 1, 2 y 3.
100
101
7.00
6.00
y = 5.4951x - 0.3103
R² = 0.9958
5.00
y = 6.4296x - 0.4606
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
R² = 0.9927
4.00
y = 4.8663x - 0.1196
R² = 0.992 Biorreactor A
3.00
Biorreactor B
Biorreactor C
2.00
Linear (Biorreactor A)
Linear (Biorreactor B)
1.00 Linear (Biorreactor C)
0.00
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
Tiempo (h)
Figura B.3. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 100 RPM, aireación
de 8 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores 1, 2 y 3.
5.00
y = 3.0911x - 0.3547
2.50 R² = 0.9967
2.00 Biorreactor 1
1.50 Biorreactor 2
1.00 Biorreactor 3
Figura B.4. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 250 RPM, aireación
de 2 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores 1, 2 y 3.
102
4.00
y = 7.0902x - 0.5902
3.50 R² = 0.9885
y = 4.8807x - 0.1353
3.00 R² = 0.9933
2.00 Biorreactor 2
Biorreactor 3
1.50
Linear (Biorreactor 1)
1.00 Linear (Biorreactor 2)
0.00
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8
-0.50
Tiempo (h)
Figura B.5. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 250 RPM, aireación
de 4 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores 1, 2 y 3.
6.00
y = 6.8711x - 0.3085
5.00 R² = 0.993
y = 6.9119x + 0.0515
4.00 R² = 0.9955
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
y = 6.0195x - 0.0625
R² = 0.9965 Biorreactor 1
3.00
Biorreactor 2
Biorreactor 3
2.00
Linear (Biorreactor 1)
Linear (Biorreactor 2)
1.00 Linear (Biorreactor 3)
0.00
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8
Tiempo (h)
Figura B.6. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 250 RPM, aireación
de 8 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores 1, 2 y 3.
103
4.00
3.50
3.00
2.50
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
y = 16.722x - 0.7898
2.00 R² = 0.9753
0.00
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8
Tiempo (h)
Figura B.7. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 400 RPM, aireación
de 2 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores 1, 2 y 3.
4.50
4.00
3.50
3.00
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
2.50
y = 21.822x - 0.3804
2.00 R² = 0.9737
Biorreactor 1
1.50 y = 13.699x - 0.166
R² = 0.9802
1.00 Biorreactor 2
y = 12.304x - 0.1086
0.50 R² = 0.973 Biorreactor 3
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4
Tiempo (h)
Figura B.8. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 400 RPM, aireación
de 4 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores 1, 2 y 3.
104
5.00
4.50
y = 19.548x - 0.2059
4.00
R² = 0.988
3.50
y = 23.479x - 0.1984
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
3.00 R² = 0.9824
0.00
0.0 0.1 0.1 0.2 0.2
Tiempo (h)
Figura B.9. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 400 RPM, aireación
de 8 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores 1, 2 y 3.
3.50
y = 1.1765x + 0.0836
3.00
R² = 0.9824
y = 1.2641x - 0.252
2.50
R² = 0.9994
Biorreactor 1
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
0.00
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0
Tiempo (h)
Figura B.10. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 100 RPM, aireación
de 2 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores 1, 2 y 3.
105
5.00
y = 2.739x - 0.1757
4.50 R² = 0.9959
4.00
y = 1.1287x + 0.0448
3.50 R² = 0.9842
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
2.00
Biorreactor 1
1.50
Biorreactor 2
1.00
0.50 Biorreactor 3
0.00
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5
Tiempo (h)
Figura B.11. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 100 RPM, aireación
de 4 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores 1, 2 y 3.
6.00
y = 3.8656x - 0.4489
R² = 0.9926
5.00
y = 3.4445x - 0.1825
R² = 0.9975
4.00
y = 5.5757x - 0.3747
Biorreactor 1
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
R² = 0.994
3.00
Biorreactor 2
Biorreactor 3
2.00
Linear (Biorreactor 1)
Linear (Biorreactor 2)
1.00
Linear (Biorreactor 3)
0.00
0.0 0.5 1.0 1.5
-1.00
Tiempo (h)
Figura B.12. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 100 RPM, aireación
de 8 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores 1, 2 y 3.
106
4.50
y = 7.834x - 0.0254
4.00
R² = 0.9961
3.50 y = 9.226x - 0.3677
R² = 0.9904
3.00
Biorreactor 1
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
y = 7.1367x - 0.2126
2.50 R² = 0.9972 Biorreactor 2
Biorreactor 3
2.00
Linear (Biorreactor 1)
1.50 Linear (Biorreactor 2)
0.50
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
Tiempo (h)
Figura B.13. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 250 RPM, aireación
de 2 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores 1, 2 y 3.
6.00
y = 9.5164x - 0.0167
R² = 0.9937
5.00
y = 8.275x - 0.0027
R² = 0.9942
4.00
Biorreactor 1
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
y = 9.8827x - 0.0769
R² = 0.994 Biorreactor 2
3.00
Biorreactor 3
Linear (Biorreactor 1)
2.00 Linear (Biorreactor 2)
Linear (Biorreactor 3)
1.00
0.00
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8
Tiempo (h)
Figura B.14. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 250 RPM, aireación
de 4 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores 1, 2 y 3.
107
5.00
3.00
y = 13.409x - 0.2123 Biorreactor 2
2.50 R² = 0.9703
Biorreactor 3
2.00 Linear (Biorreactor 1)
0.50
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4
Tiempo (h)
Figura B.15. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 250 RPM, aireación
de 8 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores 1, 2 y 3.
5.00
y = 11.607x - 0.0897
4.50 R² = 0.9953
4.00
y = 11.422x - 0.164
3.50 R² = 0.998
Biorreactor 1
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
0.50
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5
Tiempo (h)
Figura B.16. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 400 RPM, aireación
de 2 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores 1, 2 y 3.
108
5.00
0.50
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4
Tiempo (h)
Figura B.17. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 400 RPM, aireación
de 4 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores 1, 2 y 3.
6.00
y = 19.8x - 0.09
5.00 R² = 0.9898
y = 20.108x - 0.1499
R² = 0.9958
4.00
Biorreactor 1
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
y = 20.127x - 0.0615
Biorreactor 2
R² = 0.9913
3.00
Biorreactor 3
Linear (Biorreactor 1)
2.00 Linear (Biorreactor 2)
Linear (Biorreactor 3)
1.00
0.00
0.0 0.1 0.1 0.2 0.2 0.3 0.3
Tiempo (h)
Figura B.18. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 400 RPM, aireación
de 8 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores 1, 2 y 3.
109
3.50
y = 1.5026x - 0.1452
3.00 R² = 0.9993
y = 1.171x - 0.2073
2.50 R² = 0.9992
y = 1.1265x - 0.1611 Biorreactor 1
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
2.00 R² = 0.9992
Biorreactor 2
Biorreactor 3
1.50
Linear (Biorreactor 1)
Linear (Biorreactor 2)
1.00
Linear (Biorreactor 3)
0.50
0.00
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0
Tiempo (h)
Figura B.19. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 100 RPM, aireación
de 2 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores 1, 2 y 3.
4.50
0.00
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5
Tiempo (h)
Figura B.20. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 100 RPM, aireación
de 4 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores 1, 2 y 3.
110
6.00
5.00
4.00
y = 5.9732x - 0.5434
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
3.00 R² = 0.9898
Biorreactor 1
2.00 y = 3.4016x - 0.0247 Biorreactor 2
R² = 0.9865 Biorreactor 3
Linear (Biorreactor 1)
1.00 y = 2.8946x + 0.0082 Linear (Biorreactor 2)
R² = 0.9895
Linear (Biorreactor 3)
0.00
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0
-1.00
Tiempo (h)
Figura B.21. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 100 RPM, aireación
de 8 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores 1, 2 y 3.
5.00
3.00 R² = 0.999
Biorreactor 2
2.50
Biorreactor 3
2.00 Linear (Biorreactor 1)
0.50
0.00
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8
Tiempo (h)
Figura B.22. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 250 RPM, aireación
de 2 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores 1, 2 y 3.
111
5.00
y = 10.358x + 0.0906
4.50 R² = 0.9879
4.00 y = 10.711x - 0.0723
R² = 0.9975
3.50
y = 9.5261x - 0.0473
Biorreactor 1
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
3.00 R² = 0.9962
Biorreactor 2
2.50
Biorreactor 3
2.00 Linear (Biorreactor 1)
0.50
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5
Tiempo (h)
Figura B.23. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 250 RPM, aireación
de 4 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores 1, 2 y 3.
5.00
y = 14.678x - 0.0696
4.50 R² = 0.9924
3.00
R² = 0.9969
Biorreactor 2
2.50
Biorreactor 3
2.00 Linear (Biorreactor 1)
0.50
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4
Tiempo (h)
Figura B.24. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 250 RPM, aireación
de 8 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores 1, 2 y 3.
112
4.00
y = 11.696x - 0.0467
3.50 R² = 0.9955
y = 12.512x - 0.16
3.00
R² = 0.999
2.50 Biorreactor 1
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
y = 10.941x - 0.0482
R² = 0.9959 Biorreactor 2
2.00
Biorreactor 3
0.50
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4
Tiempo (h)
Figura B.25. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 400 RPM, aireación
de 2 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores 1, 2 y 3.
4.50
0.50
0.00
0.0 0.1 0.1 0.2 0.2 0.3 0.3
Tiempo (h)
Figura B.26. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 400 RPM, aireación
de 4 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores 1, 2 y 3.
113
4.50
0.50
0.00
0.0 0.1 0.1 0.2 0.2
Tiempo (h)
Figura B.27. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 400 RPM, aireación
de 8 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores 1, 2 y 3.
5.00
4.50
4.00
3.50
3.00
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
y = 10.646x - 0.0149
2.50 R² = 0.9255
2.00
Repetición 1
1.50
1.00
Linear (Repetición 1)
0.50
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4
-0.50
Tiempo (h)
Figura B.28. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para la corrida con agitación de 10 RPM, aireación de
10 LPM y arreglo de 2R en el Biorreactor A.
114
6.00
5.00
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)] 4.00
3.00
y = 11.235x - 0.2656
R² = 0.9512
2.00
Repetición 1
1.00
Linear (Repetición 1)
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4
-1.00
Tiempo (h)
Figura B.29. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para la corrida con agitación de 20 RPM, aireación de
10 LPM y arreglo de 2R en el Biorreactor A.
4.00
3.50
3.00
R² = 0.9612
2.00
1.50
Repetición 1
1.00
Linear (Repetición 1)
0.50
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4
-0.50
Tiempo (h)
Figura B.30. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para la corrida con agitación de 30 RPM, aireación de
10 LPM y arreglo de 2R en el Biorreactor A.
115
4.00
y = 9.0591x + 0.026
3.50 R² = 0.9721
y = 12.441x + 0.1683
3.00 R² = 0.9381
2.50
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
2.00 Repetición 1
1.50 Repetición 2
Linear (Repetición
1.00 1)
0.50
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5
Tiempo (h)
Figura B.31. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 40 RPM, aireación
de 10 LPM y arreglo de 2R en el Biorreactor A.
3.00
2.50
1.50
1.00 Repetición 1
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3
-0.50
Tiempo (h)
Figura B.32. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para la corrida con agitación de 53 RPM, aireación de
10 LPM y arreglo de 2R en el Biorreactor A.
116
3.00
2.50
2.00
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
y = 8.046x + 0.0322
R² = 0.9352
1.50
Repetición 1
1.00
Linear (Repetición 1)
0.50
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4
Tiempo (h)
Figura B.33. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para la corrida con agitación de 60 RPM, aireación de
10 LPM y arreglo de 2R en el Biorreactor A.
7.00
6.00
5.00
y = 17.832x - 0.045
4.00
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
R² = 0.9343
3.00
Repetición 1
2.00
0.00
0.0 0.1 0.1 0.2 0.2 0.3 0.3
-1.00
Tiempo (h)
Figura B.34. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para la corrida con agitación de 10 RPM, aireación de
20 LPM y arreglo de 2R en el Biorreactor A.
117
4.00
3.50
3.00
y = 17.425x - 0.2423
2.50 R² = 0.9478
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
2.00
1.50
Repetición 1
1.00
0.00
0.0 0.1 0.1 0.2 0.2 0.3
-0.50
Tiempo (h)
Figura B.35. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para la corrida con agitación de 20 RPM, aireación de
20 LPM y arreglo de 2R en el Biorreactor A.
4.00
3.50
2.00
1.50 Repetición 1
1.00
0.50
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4
Tiempo (h)
Figura B.36. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para la corrida con agitación de 30 RPM, aireación de
20 LPM y arreglo de 2R en el Biorreactor A.
118
5.00
y = 10.916x - 0.15
4.00 R² = 0.9807
y = 10.392x + 0.4736
3.00 R² = 0.9263
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
2.00
Repetición 1
Repetición 2
1.00
Linear (Repetición 1)
Linear (Repetición 2)
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4
-1.00
Tiempo (h)
Figura B.37. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 40 RPM, aireación
de 20 LPM y arreglo de 2R en el Biorreactor A.
5.00
2.50
2.00 Repetición 1
Repetición 2
1.50
Linear (Repetición 1)
1.00
Linear (Repetición 2)
0.50
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5
-0.50
Tiempo (h)
Figura B.38. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 53 RPM, aireación
de 20 LPM y arreglo de 2R en el Biorreactor A.
119
4.50
4.00
3.50
3.00
y = 12.378x - 0.3928
2.50
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
R² = 0.949
2.00
1.50 Repetición 1
1.00
Linear (Repetición 1)
0.50
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4
-0.50
-1.00
Tiempo (h)
Figura B.39. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 60 RPM, aireación
de 20 LPM y arreglo de 2R en el Biorreactor A.
3.50
3.00
y = 7.1478x - 0.0653
2.50 R² = 0.9884
2.00
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
1.50
Repetición 1
1.00
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5
-0.50
Tiempo (h)
Figura B.40. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 10 RPM, aireación
de 10 LPM y arreglo de 2M en el Biorreactor B.
120
4.50
4.00
3.50
2.50
2.00
1.50
Repetición 1
1.00
0.00
0.0 0.2 0.4 0.6
-0.50
Tiempo (h)
Figura B.41. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 20 RPM, aireación
de 10 LPM y arreglo de 2M en el Biorreactor B.
3.50
3.00
1.50
Repetición 1
1.00
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5
-0.50
Tiempo (h)
Figura B.42. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 30 RPM, aireación
de 10 LPM y arreglo de 2M en el Biorreactor B.
121
4.00
3.50
y = 9.45x - 0.1159
3.00 R² = 0.9864
2.50
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
2.00
1.50 Repetición 1
1.00
Linear (Repetición 1)
0.50
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5
-0.50
Tiempo (h)
Figura B.43. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 40 RPM, aireación
de 10 LPM y arreglo de 2M en el Biorreactor B.
4.50
4.00
3.50
3.00
y = 13.538x - 0.2481
R² = 0.9773
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
2.50
2.00
Repetición 1
1.50
1.00
Linear (Repetición 1)
0.50
0.00
0.0 0.1 0.1 0.2 0.2 0.3 0.3
-0.50
Tiempo (h)
Figura B.44. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 50 RPM, aireación
de 10 LPM y arreglo de 2M en el Biorreactor B.
122
4.50
4.00
3.50
2.50
2.00
1.50 Repetición 1
1.00
Linear (Repetición 1)
0.50
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4
-0.50
Tiempo (h)
Figura B.45. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 10 RPM, aireación
de 20 LPM y arreglo de 2M en el Biorreactor B.
5.00
4.50
4.00
3.50
y = 15.157x + 0.0516
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
3.00 R² = 0.9741
2.50
2.00
Repetición 1
1.50
0.50
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3
Tiempo (h)
Figura B.46. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 20 RPM, aireación
de 20 LPM y arreglo de 2M en el Biorreactor B.
123
5.00
4.50
4.00
3.00
2.50
2.00
Repetición 1
1.50
1.00
Linear (Repetición 1)
0.50
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3
Tiempo (h)
Figura B.47. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 30 RPM, aireación
de 20 LPM y arreglo de 2M en el Biorreactor B.
4.00
y = 16.112x - 0.1707
3.50
R² = 0.9717
3.00
y = 14.34x - 0.1348
2.50 R² = 0.9579
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
2.00
1.50 Repetición 1
Repetición 2
1.00
Linear (Repetición 1)
0.50 Linear (Repetición 2)
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3
-0.50
Tiempo (h)
Figura B.48. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 40 RPM, aireación
de 20 LPM y arreglo de 2M en el Biorreactor B.
124
4.50
4.00
3.50
3.00
y = 13.538x - 0.2481
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
2.50 R² = 0.9773
2.00
Repetición 1
1.50
1.00
Linear (Repetición 1)
0.50
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3
-0.50
Tiempo (h)
Figura B.49. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 50 RPM, aireación
de 20 LPM y arreglo de 2M en el Biorreactor B.
8.00
7.00
y = 9.26x + 0.4428
6.00 R² = 0.9143
5.00
y = 16.591x - 0.1332
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
4.00 R² = 0.9705
3.00
Repetición 1
2.00 Repetición 2
Figura B.50. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 67 RPM, aireación
de 20 LPM y arreglo de 2M en el Biorreactor B.
125
4.00
2.50 R² = 0.9886
2.00 Biorreactor A
1.50 Biorreactor B
Linear (Biorreactor
1.00
A)
0.50
0.00
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0
Tiempo (h)
Figura B.51. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 53 RPM, aireación
de 5 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores A y B.
5.00
4.50
y = 5.7546x - 0.2034
4.00 R² = 0.9617
3.00 Biorreactor A
2.50 Biorreactor B
Linear (Biorreactor A)
2.00
Linear (Biorreactor B)
1.50
1.00
0.50
0.00
0.0 0.2 0.4 (h)
Tiempo 0.6 0.8
Figura B.52. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 53 RPM, aireación
de 10 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores A y B.
126
4.00
3.50
3.00
2.50
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
Biorreactor A
2.00 Biorreactor B
1.00
y = 7.436x - 0.3268
R² = 0.9761
0.50
0.00
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8
Tiempo (h)
Figura B.53. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 53 RPM, aireación
de 13 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores A y B.
3.00
2.50
2.00
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
Biorreactor A
1.50
Biorreactor B
0.00
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8
Tiempo (h)
Figura B.54. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 132 RPM, aireación
de 5 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores A y B.
127
4.50
2.50 Biorreactor A
Biorreactor B
2.00
Linear (Biorreactor A)
1.50 Linear (Biorreactor B)
1.00
0.50
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
Tiempo (h)
Figura B.55. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 132 RPM, aireación
de 10 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores A y B.
5.00
4.50
y = 7.2594x + 0.0134
4.00 R² = 0.9614
3.50
y = 6.5481x + 0.1594
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
3.00 R² = 0.9576
Biorreactor A
2.50
Biorreactor B
2.00 Linear (Biorreactor A)
1.00
0.50
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
Tiempo (h)
Figura B.56. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 132 RPM, aireación
de 13 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores A y B.
128
3.00
y = 7.9634x + 0.0438
R² = 0.9992
2.50
y = 8.4009x - 0.1097
2.00 R² = 0.9992
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
Biorreactor A
1.50
Biorreactor B
Linear (Biorreactor A)
1.00
Linear (Biorreactor B)
0.50
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4
Tiempo (h)
Figura B.57. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 211 RPM, aireación
de 5 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores A y B.
4.50
R² = 0.9982
2.50 Biorreactor A
Biorreactor B
2.00
Linear (Biorreactor A)
1.50
Linear (Biorreactor B)
1.00
0.50
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4
Tiempo (h)
Figura B.58. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 211 RPM, aireación
de 10 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores A y B.
129
3.00
y = 12.158x + 0.0016
2.50 R² = 0.9601
y = 13.776x - 0.133
2.00
R² = 0.999
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
Biorreactor A
1.50
Biorreactor B
Linear (Biorreactor A)
1.00 Linear (Biorreactor B)
0.50
0.00
0.0 0.1 0.1 0.2 0.2 0.3
Tiempo (h)
Figura B.59. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 211 RPM, aireación
de 13 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores A y B.
4.50
4.00
y = 24.499x - 0.2355
3.50 R² = 0.9992
3.00
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
y = 24.803x - 0.2226
2.50 R² = 0.9988 Biorreactor A
2.00 Biorreactor B
Linear (Biorreactor A)
1.50
Linear (Biorreactor B)
1.00
0.50
0.00
0.0 0.1 0.1 0.2 0.2
Tiempo (h)
Figura B.60. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 300 RPM, aireación
de 5 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores A y B.
130
6.00
y = 28.601x - 0.3781
5.00
R² = 0.9991
4.00
y = 33.811x - 0.6135
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
0.00
0.0 0.1 0.1 0.2 0.2
-1.00
Tiempo (h)
Figura B.61. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 300 RPM, aireación
de 10 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores A y B.
5.00
y = 31.129x - 0.4115
4.00 R² = 0.9988
y = 32.194x - 0.3997
3.00 R² = 0.9992
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
Biorreactor A
2.00 Biorreactor B
Linear (Biorreactor A)
0.00
0.0 0.1 0.1 0.2 0.2
-1.00
Tiempo (h)
Figura B.62. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 300 RPM, aireación
de 13 LPM y arreglo de 2R en los Biorreactores A y B.
131
3.50
2.50
y = 1.8287x - 0.0434
R² = 0.9964
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
2.00
Biorreactor A
Biorreactor B
1.50
Linear (Biorreactor A)
0.50
0.00
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0
Tiempo (h)
Figura B.63. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 60 RPM, aireación
de 5 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores A y B.
4.50
4.00
2.50 Biorreactor A
R² = 0.9804
2.00 Biorreactor B
Linear (Biorreactor A)
1.50
Linear (Biorreactor B)
1.00
0.50
0.00
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8
-0.50
Tiempo (h)
Figura B.64. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 60 RPM, aireación
de 10 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores A y B.
132
4.00
Biorreactor A
2.00
Biorreactor B
0.50
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
Tiempo (h)
Figura B.65. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 60 RPM, aireación
de 13 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores A y B.
3.50
3.00
2.50
2.00
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
Biorreactor A
1.50 Biorreactor B
y = 3.131x - 0.2756
R² = 0.9928 Linear (Biorreactor A)
1.00
Linear (Biorreactor B)
y = 3.6929x - 0.0197
0.50 R² = 0.9487
0.00
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
-0.50
Tiempo (h)
Figura B.66. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 150 RPM, aireación
de 5 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores A y B.
133
4.50
4.00
R² = 0.9618 Biorreactor A
2.00
Biorreactor B
1.50
Linear (Biorreactor A)
1.00 Linear (Biorreactor B)
0.50
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
-0.50
-1.00
Tiempo (h)
Figura B.67. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 150 RPM, aireación
de 10 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores A y B.
4.00
y = 7.9925x - 0.5298
3.50 R² = 0.9853
3.00
y = 8.2312x - 0.506
2.50 R² = 0.9845
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
Biorreactor A
2.00
Biorreactor B
1.50 Linear (Biorreactor A)
Linear (Biorreactor B)
1.00
0.50
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
-0.50
Tiempo (h)
Figura B.68. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 150 RPM, aireación
de 13 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores A y B.
134
4.00
y = 7.5711x + 0.4645
R² = 0.9171
3.50
y = 7.2968x + 0.1865
3.00 R² = 0.9848
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
2.50
Biorreactor A
2.00
Biorreactor B
1.50 Linear (Biorreactor A)
Linear (Biorreactor B)
1.00
0.50
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5
Tiempo (h)
Figura B.69. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 240 RPM, aireación
de 5 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores A y B.
4.00
3.50
3.00
2.50
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
Biorreactor A
2.00 Biorreactor B
y = 12.84x + 0.205
R² = 0.9249 Linear (Biorreactor A)
1.50
Linear (Biorreactor B)
1.00
y = 12.106x + 0.0019
R² = 0.99
0.50
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4
Tiempo (h)
Figura B.70. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 240 RPM, aireación
de 10 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores A y B.
135
4.50
2.50 Biorreactor A
2.00 Biorreactor B
Linear (Biorreactor A)
1.50
Linear (Biorreactor B)
1.00
0.50
0.00
0.0 0.1 0.1 0.2 0.2 0.3
Tiempo (h)
Figura B.71. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 240 RPM, aireación
de 13 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores A y B.
5.00
4.50
y = 21.504x - 0.2484
4.00
R² = 0.9978
3.50
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
3.00
y = 21.001x - 0.3815
Biorreactor A
2.50 R² = 0.9987
Biorreactor B
2.00
Linear (Biorreactor A)
1.50 Linear (Biorreactor B)
1.00
0.50
0.00
0.0 0.1 0.1 0.2 0.2 0.3
Tiempo (h)
Figura B.72. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 342 RPM, aireación
de 5 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores A y B.
136
6.00
y = 27.068x - 0.2813
5.00 R² = 0.9974
R² = 0.9992
Biorreactor A
3.00
Biorreactor B
Linear (Biorreactor A)
2.00
Linear (Biorreactor B)
1.00
0.00
0.0 0.1 0.1 0.2 0.2 0.3
Tiempo (h)
Figura B.73. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 342 RPM, aireación
de 10 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores A y B.
7.00
R² = 0.9962
4.00
Biorreactor A
Biorreactor B
3.00
Linear (Biorreactor A)
1.00
0.00
0.0 0.1 0.1 0.2 0.2 0.3
Tiempo (h)
Figura B.74. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 342 RPM, aireación
de 13 LPM y arreglo de MR en los Biorreactores A y B.
137
3.50
2.50
y = 1.697x + 0.0071
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
R² = 0.991
2.00
Biorreactor A
Biorreactor B
1.50
Linear (Biorreactor A)
0.50
0.00
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0
Tiempo (h)
Figura B.75. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 67 RPM, aireación
de 5 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores A y B.
3.50
y = 4.4941x - 0.2707
3.00
R² = 0.9966
2.50
y = 4.4409x - 0.3397
2.00
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
R² = 0.9971
Biorreactor A
1.50 Biorreactor B
Linear (Biorreactor A)
1.00 Linear (Biorreactor B)
0.50
0.00
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
-0.50
Tiempo (h)
Figura B.76. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 67 RPM, aireación
de 10 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores A y B.
138
4.50
R² = 0.9789
2.50 Biorreactor A
Biorreactor B
2.00
Linear (Biorreactor A)
1.50
Linear (Biorreactor B)
1.00
0.50
0.00
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8
Tiempo (h)
Figura B.77. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 67 RPM, aireación
de 13 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores A y B.
3.00
2.50
2.00
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
1.50
y = 2.5227x + 0.0917
R² = 0.9594 Biorreactor A
1.00
Biorreactor B
y = 2.2632x + 0.0361 Linear (Biorreactor A)
0.50 R² = 0.9669
Linear (Biorreactor B)
0.00
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
Tiempo (h)
Figura B.78. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 169 RPM, aireación
de 5 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores A y B.
139
4.00
y = 4.0303x + 0.1824
3.50
R² = 0.9584
3.00
y = 4.9309x - 0.1796
R² = 0.9579
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
2.50
Biorreactor A
2.00
Biorreactor B
0.50
0.00
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8
Tiempo (h)
Figura B.79. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 169 RPM, aireación
de 10 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores A y B.
4.50
R² = 0.984
2.50 Biorreactor A
Biorreactor B
2.00
Linear (Biorreactor A)
1.50 Linear (Biorreactor B)
1.00
0.50
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
Tiempo (h)
Figura B.80. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 169 RPM, aireación
de 13 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores A y B.
140
3.50
2.00
Biorreactor A
Biorreactor B
1.50
Linear (Biorreactor A)
1.00 Linear (Biorreactor B)
0.50
0.00
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8
Tiempo (h)
Figura B.81. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 270 RPM, aireación
de 5 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores A y B.
4.50
4.00
y = 7.9285x + 0.0696
3.50 R² = 0.9354
R² = 0.9591
2.50 Biorreactor A
Biorreactor B
2.00
Linear (Biorreactor A)
1.50 Linear (Biorreactor B)
1.00
0.50
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5
Tiempo (h)
Figura B.82. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 270 RPM, aireación
de 10 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores A y B.
141
4.50
4.00
y = 9.1249x + 0.2235
3.50 R² = 0.9177
3.00
y = 10.408x - 0.127
Ln [Cl*/(Cl*-Cl)]
R² = 0.9644
2.50 Biorreactor A
Biorreactor B
2.00
Linear (Biorreactor A)
1.50 Linear (Biorreactor B)
1.00
0.50
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4
Tiempo (h)
Figura B.83. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 270 RPM, aireación
de 13 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores A y B.
4.00
2.50 R² = 0.9902
Biorreactor A
2.00
Biorreactor B
1.50 Linear (Biorreactor A)
Linear (Biorreactor B)
1.00
0.50
0.00
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5
Tiempo (h)
Figura B.84. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 384 RPM, aireación
de 5 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores A y B.
142
4.00
R² = 0.9981
Biorreactor A
2.00
Biorreactor B
0.50
0.00
0.0 0.1 0.1 0.2 0.2 0.3 0.3
Tiempo (h)
Figura B.85. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 384 RPM, aireación
de 10 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores A y B.
4.00
2.50 R² = 0.9928
Biorreactor A
2.00
Biorreactor B
1.50 Linear (Biorreactor A)
Linear (Biorreactor B)
1.00
0.50
0.00
0.0 0.1 0.1 0.2 0.2 0.3 0.3
Tiempo (h)
Figura B.86. Ln[CL/(CL-OD)] en función del tiempo para las corridas con agitación de 384 RPM, aireación
de 10 LPM y arreglo de 2M en los Biorreactores A y B.
143
Cuadro B.2. Masa promedio del picnómetro, masa promedio del líquido y densidad promedio de las
distintas disoluciones de goma xantán en los biorreactores.
Masa promedio Masa promedio Densidad promedio
Muestra
picnómetro (g) líquido (g) (g/mL)
Biorreactor 1 37,38 9,56 0,976
Biorreactor 2 37,39 9,57 0,977
Biorreactor 3 37,37 9,55 0,975
Biorreactor A 37,43 9,61 0,981
Biorreactor B 37,40 9,58 0,978
Promedio general de densidad 0,977
Cuadro B.3. Velocidad de agitación, flujo de gas, velocidad superficial y viscosidad aparente de los
distintos tratamientos en el biorreactor de 7 L para los 3 arreglos de impulsores.
Velocidad Viscosidad
Velocidad de Flujo de gas, Q
Tratamiento superficial, vs aparente, µa
agitación, N (s-1) (m3/s)
(m/s) (Pa∙s)
100 RPM, 2 LPM 1,67 3,33 x 10-5 1,66 x 10-3 0,068
-5 -3
100 RPM, 4 LPM 1,67 6,67 x 10 3,32 x 10 0,068
100 RPM, 8 LPM 1,67 1,33 x 10-4 6,63 x 10-3 0,068
250 RPM, 2 LPM 4,17 3,33 x 10-5 1,66 x 10-3 0,036
-5 -3
250 RPM, 4 LPM 4,17 6,67 x 10 3,32 x 10 0,036
Cuadro B.4. Razón de potencia, potencia sin aireación (PO) y potencia con aireación (PG) para los
impulsores superior e inferior en los distintos tratamientos en el biorreactor de 7 L para el
arreglo 2R.
PG/PO PG/PO PO inferior PG inferior PO superior PG superior
Tratamiento
(inferior) (superior) (W) (W) (W) (W)
100 RPM, 2 LPM 0,337 0,424 0,021 0,0071 0,019 0,0081
100 RPM, 4 LPM 0,260 0,348 0,021 0,0055 0,019 0,0066
100 RPM, 8 LPM 0,201 0,286 0,021 0,0042 0,019 0,0054
250 RPM, 2 LPM 0,376 0,354 0,330 0,1240 0,297 0,1051
250 RPM, 4 LPM 0,291 0,290 0,330 0,0958 0,297 0,0862
Cuadro B.5. Razón de potencia, potencia sin aireación (PO) y potencia con aireación (PG) para los
impulsores superior e inferior en los distintos tratamientos en el biorreactor de 7 L para el
arreglo MR.
PG/PO PG/PO PO inferior PG inferior PO superior PG superior
Tratamiento
(inferior) (superior) (W) (W) (W) (W)
100 RPM, 2 LPM 0,511 0,424 0,0053 0,0027 0,019 0,0081
100 RPM, 4 LPM 0,401 0,348 0,0053 0,0021 0,019 0,0066
100 RPM, 8 LPM 0,315 0,286 0,0053 0,0017 0,019 0,0054
250 RPM, 2 LPM 0,420 0,354 0,0824 0,0346 0,297 0,1051
250 RPM, 4 LPM 0,330 0,290 0,0824 0,0272 0,297 0,0862
Cuadro B.6. Razón de potencia, potencia sin aireación (PO) y potencia con aireación (PG) para los
impulsores superior e inferior en los distintos tratamientos en el biorreactor de 7 L para el
arreglo 2M.
PG/PO PG/PO PO inferior PG inferior PO superior PG superior
Tratamiento
(inferior) (superior) (W) (W) (W) (W)
100 RPM, 2 LPM 0,511 0,495 0,0053 0,0027 0,0047 0,0023
100 RPM, 4 LPM 0,401 0,420 0,0053 0,0021 0,0047 0,0020
100 RPM, 8 LPM 0,315 0,357 0,0053 0,0017 0,0047 0,0017
250 RPM, 2 LPM 0,420 0,373 0,0824 0,0346 0,0742 0,0277
250 RPM, 4 LPM 0,330 0,317 0,0824 0,0272 0,0742 0,0235
Cuadro B.7. Potencia total y potencia por unidad de volumen en los distintos tratamientos en el
biorreactor de 7 L para el arreglo 2R.
Potencia total, P Potencia por volumen, P/V
Tratamiento
(W) (W/m3)
100 RPM, 2 LPM 0,015 3,79
100 RPM, 4 LPM 0,012 3,03
100 RPM, 8 LPM 0,010 2,42
250 RPM, 2 LPM 0,229 57,26
250 RPM, 4 LPM 0,182 45,49
Cuadro B.8. Potencia total y potencia por unidad de volumen en los distintos tratamientos en el
biorreactor de 7 L para el arreglo MR.
Potencia total, P Potencia por volumen, P/V
Tratamiento
(W) (W/m3)
100 RPM, 2 LPM 0,011 2,69
100 RPM, 4 LPM 0,009 2,18
100 RPM, 8 LPM 0,007 1,77
250 RPM, 2 LPM 0,140 34,92
250 RPM, 4 LPM 0,113 28,34
Cuadro B.9. Potencia total y potencia por unidad de volumen en los distintos tratamientos en el
biorreactor de 7 L para el arreglo 2M.
Potencia total, P Potencia por volumen, P/V
Tratamiento
(W) (W/m3)
100 RPM, 2 LPM 0,0050 1,26
100 RPM, 4 LPM 0,0041 1,03
100 RPM, 8 LPM 0,0034 0,84
250 RPM, 2 LPM 0,0623 15,59
250 RPM, 4 LPM 0,0507 12,68
Cuadro B.11. Velocidad de agitación, flujo de gas, velocidad superficial y viscosidad aparente de los
distintos tratamientos en el biorreactor de 70 L para el arreglo 2R.
Velocidad Viscosidad
Velocidad de Flujo de gas, Q
Tratamiento superficial, v aparente, µa
agitación, N (s-1) (m3/s) s
(m/s) (Pa∙s)
53 RPM, 5 LPM 0,88 8,33 x 10-5 1,08 x 10-5 0,105
-5
53 RPM, 10 LPM 0,88 1,67 x 10 2,17 x 10-5 0,105
-5 -5
53 RPM, 13 LPM 0,88 2,17 x 10 2,82 x 10 0,105
132 RPM, 5 LPM 2,20 8,33 x 10-5 1,08 x 10-5 0,056
132 RPM, 10 LPM 2,20 1,67 x 10-5 2,17 x 10-5 0,056
-5 -5
132 RPM, 13 LPM 2,20 2,17 x 10 2,82 x 10 0,056
Cuadro B.12. Velocidad de agitación, flujo de gas, velocidad superficial y viscosidad aparente de los
distintos tratamientos en el biorreactor de 70 L para el arreglo MR.
Velocidad Viscosidad
Velocidad de Flujo de gas, Q
Tratamiento superficial, vs aparente, µa
agitación, N (s-1) (m3/s)
(m/s) (Pa∙s)
-5 -5
60 RPM, 5 LPM 1,00 8,33 x 10 1,08 x 10 0,0967
60 RPM, 10 LPM 1,00 1,67 x 10-5 2,17 x 10-5 0,0967
60 RPM, 13 LPM 1,00 2,17 x 10-5 2,82 x 10-5 0,0967
-5 -5
150 RPM, 5 LPM 2,50 8,33 x 10 1,08 x 10 0,0517
150 RPM, 10 LPM 2,50 1,67 x 10-5 2,17 x 10-5 0,0517
150 RPM, 13 LPM 2,50 2,17 x 10-5 2,82 x 10-5 0,0517
Cuadro B.13. Velocidad de agitación, flujo de gas, velocidad superficial y viscosidad aparente de los
distintos tratamientos en el biorreactor de 70 L para el arreglo 2M.
Velocidad Viscosidad
Velocidad de Flujo de gas, Q
Tratamiento -1 3 superficial, vs aparente, µa
agitación, N (s ) (m /s)
(m/s) (Pa∙s)
-5 -5
67 RPM, 5 LPM 1,12 8,33 x 10 1,08 x 10 0,0897
67 RPM, 10 LPM 1,12 1,67 x 10-5 2,17 x 10-5 0,0897
67 RPM, 13 LPM 1,12 2,17 x 10-5 2,82 x 10-5 0,0897
-5 -5
169 RPM, 5 LPM 2,82 8,33 x 10 1,08 x 10 0,0477
169 RPM, 10 LPM 2,82 1,67 x 10-5 2,17 x 10-5 0,0477
-5 -5
169 RPM, 13 LPM 2,82 2,17 x 10 2,82 x 10 0,0477
Cuadro B.14. Razón de potencia, potencia sin aireación (PO) y potencia con aireación (PG) para los
impulsores superior e inferior en los distintos tratamientos en el biorreactor de 70 L para
el arreglo 2R.
PG/PO PG/PO PO inferior PG inferior PO superior PG superior
Tratamiento
(inferior) (superior) (W) (W) (W) (W)
53 RPM, 5 LPM 0,472 0,588 0,08 0,04 0,07 0,04
53 RPM, 10 LPM 0,365 0,482 0,08 0,03 0,07 0,03
53 RPM, 13 LPM 0,331 0,448 0,08 0,03 0,07 0,03
132 RPM, 5 LPM 0,527 0,491 1,20 0,63 1,08 0,53
132 RPM, 10 LPM 0,407 0,403 1,20 0,49 1,08 0,44
132 RPM, 13 LPM 0,369 0,374 1,20 0,44 1,08 0,40
Cuadro B.15. Razón de potencia, potencia sin aireación (PO) y potencia con aireación (PG) para los
impulsores superior e inferior en los distintos tratamientos en el biorreactor de 70 L para
el arreglo MR.
PG/PO PG/PO PO inferior PG inferior PO superior PG superior
Tratamiento
(inferior) (superior) (W) (W) (W) (W)
60 RPM, 5 LPM 0,993 0,574 0,01 0,01 0,10 0,06
60 RPM, 10 LPM 0,779 0,471 0,01 0,01 0,10 0,05
60 RPM, 13 LPM 0,711 0,437 0,01 0,01 0,10 0,04
150 RPM, 5 LPM 0,816 0,479 0,13 0,10 1,59 0,76
150 RPM, 10 LPM 0,640 0,393 0,13 0,08 1,59 0,62
150 RPM, 13 LPM 0,584 0,364 0,13 0,07 1,59 0,58
Cuadro B.16. Razón de potencia, potencia sin aireación (PO) y potencia con aireación (PG) para los
impulsores superior e inferior en los distintos tratamientos en el biorreactor de 70 L para
el arreglo 2M.
PG/PO PG/PO PO inferior PG inferior PO superior PG superior
Tratamiento
(inferior) (superior) (W) (W) (W) (W)
67 RPM, 5 LPM 0,970 0,828 0,01 0,01 0,01 0,01
67 RPM, 10 LPM 0,761 0,704 0,01 0,01 0,01 0,01
67 RPM, 13 LPM 0,694 0,662 0,01 0,01 0,01 0,01
169 RPM, 5 LPM 0,796 0,624 0,18 0,15 0,16 0,10
169 RPM, 10 LPM 0,624 0,530 0,18 0,11 0,16 0,09
169 RPM, 13 LPM 0,569 0,498 0,18 0,10 0,16 0,08
Cuadro B.17. Potencia total y potencia por unidad de volumen en los distintos tratamientos en el
biorreactor de 70 L para el arreglo 2R.
Tratamiento Potencia total, P (W) Potencia por volumen, P/V (W/m3)
53 RPM, 5 LPM 0,08 1,95
53 RPM, 10 LPM 0,06 1,55
53 RPM, 13 LPM 0,06 1,43
132 RPM, 5 LPM 1,16 29,10
132 RPM, 10 LPM 0,92 23,12
132 RPM, 13 LPM 0,85 21,19
149
Cuadro B.17. Potencia total y potencia por unidad de volumen en los distintos tratamientos en el
biorreactor de 70 L para el arreglo 2R (continuación).
Tratamiento Potencia total, P (W) Potencia por volumen, P/V (W/m3)
211 RPM, 5 LPM 4,71 117,80
211 RPM, 10 LPM 3,73 93,37
211 RPM, 13 LPM 3,42 85,53
300 RPM, 5 LPM 13,50 337,51
300 RPM, 10 LPM 10,68 267,09
300 RPM, 13LPM 9,78 244,50
Cuadro B.18. Potencia total y potencia por unidad de volumen en los distintos tratamientos en el
biorreactor de 70 L para el arreglo MR.
Tratamiento Potencia total, P (W) Potencia por volumen, P/V (W/m3)
60 RPM, 5 LPM 0,07 1,66
60 RPM, 10 LPM 0,05 1,35
60 RPM, 13 LPM 0,05 1,25
150 RPM, 5 LPM 0,86 21,60
150 RPM, 10 LPM 0,71 17,63
150 RPM, 13 LPM 0,65 16,32
Cuadro B.19. Potencia total y potencia por unidad de volumen en los distintos tratamientos en el
biorreactor de 70 L para el arreglo 2M.
Tratamiento Potencia total, P (W) Potencia por volumen, P/V (W/m3)
67 RPM, 5 LPM 0,02 0,49
67 RPM, 10 LPM 0,02 0,40
67 RPM, 13 LPM 0,01 0,37
169 RPM, 5 LPM 0,25 6,20
169 RPM, 10 LPM 0,20 5,03
169 RPM, 13 LPM 0,19 4,65
(C.1)
í [ ]
Utilizando el valor de porcentaje de oxígeno disuelto del Cuadro A.1., fila 2, columna 2; conociendo que
el porcentaje de saturación es de 100 se obtiene:
í [ ]
Resultado que se encuentra tabulado en el mismo cuadro en la columna 3, fila 2. Este cálculo se lleva a
cabo con los demás valores del Cuadro A.1., columnas 2 y 5; y los resultados se muestran en las
columnas 3 y 6 del mismo cuadro.
Una vez que se han convertido todos los porcentajes al valor logarítmico, estos se grafican en función
del tiempo utilizando una hoja de cálculo. La hoja de cálculo luego se programa para realizar una
regresión lineal a los datos y obtener la ecuación de la recta correspondiente. En esta recta, la pendiente
corresponde al valor del kLa. Para los datos del Cuadro A.1., la gráfica correspondiente es la línea naranja
de la Figura B.60, siendo la ecuación dentro del recuadro del mismo color, la regresión lineal de los
datos.
150
151
(4.2)
(4.3)
Utilizando los parámetros expuestos en el Cuadro 4.2 y conociendo que Cp = 0,2% y TM= 28 °C se pueden
sustituir los términos en las ecuaciones. Si bien no hay valor para TM = 28 °C se hace la aproximación a
TM = 25 °C dado que no son valores muy distintos.
Nótese que el índice de comportamiento es predicho como si fuera el resultado de la resta a partir de la
unidad debido a la forma en que lo expresa García-Ochoa al momento de hacer la correlación. Como en
la presente investigación se utiliza como un número solo, n es en realidad el inverso del complemento
de la unidad, es decir n = -0,6604. Estos índices están tabulados en el Cuadro B.1, columna 3.
C.4. Cálculo del porcentaje de error entre los índices de consistencia (K) y de
comportamiento (n) experimentales y predichos.
Para obtener el porcentaje de error se utiliza la ecuación C.2:
| | (C.2)
| |
Utilizando los datos del Cuadro B.1, fila 2, columnas 2 y 3 se tiene que
| |
| |
Resultado que se encuentra tabulado en el Cuadro B.1, fila 2, columna 4. El mismo cálculo se lleva a
cabo para el índice de comportamiento utilizando los datos del Cuadro B.1 la fila 3, columnas 2 y 3, y el
resultado se muestra en el mismo cuadro.
152
(C.3)
Utilizando los datos del Cuadro A.5, fila 2, columnas 2, 3 y 4 se tiene que
Resultado que se encuentra tabulado en el Cuadro B.2, fila 2, columna 2. Se procede de igual manera
para las otras muestras de goma xantán en el Cuadro A.5, filas 3 a la 6 y columnas 2, 3 y 4, y los
resultados se tabulan en la columna 2 del Cuadro B.2.
í (C.4)
Utilizando el dato del Cuadro B.2, columna 2, fila 2 y sabiendo que la masa del picnómetro vacío es de
27,82 g, se obtiene:
Resultado que se encuentra tabulado en el Cuadro B.2, columna 3, fila 2. Se procede de igual manera
para las demás masas promedio del Cuadro B.2, y los resultados se presentan en el mismo cuadro.
(C.5)
153
Utilizando el dato del Cuadro B.2, columna 3, fila 2 y sabiendo que el volumen del picnómetro es de
9,799 mL, se obtiene:
Resultado que se encuentra tabulado en el Cuadro B.2, fila 2, columna 4. Se procede de igual manera
para las demás masas netas del Cuadro B.2, y los resultados se presentan en el mismo cuadro. Una vez
que se obtienen todas las densidades promedio, se puede realizar un promedio general de estas, cuyo
resultado es ρgeneral = 0,977 g/mL.
(C.6)
Utilizando los el valor del cuadro B.3, columna 3, fila 2 y sabiendo que el área transversal del biorreactor
de 7 L es de 0,0201 m2 (DT = 0,16 m) se tiene entonces
Resultado que se encuentra tabulado en el Cuadro B.3, columna 4, fila 2. Se procede de igual manera
para el resto de tasas de aireación del Cuadro B.3 y los resultados se muestran en el mismo cuadro. Este
cálculo es el mismo que se lleva a cabo para los datos del Cuadro B.11, B.12 y B.13 con la diferencia de
que el área transversal es de 0,0769 m2 ya que el biorreactor de 70 L tiene un DT = 0,313 m.
(C.7)
Utilizando los índices del modelo de viscosidad del Cuadro B.1, columna 2 y con el dato del Cuadro B.3,
columna 2, fila 2, se obtiene:
154
Resultado que se encuentra tabulado en el Cuadro B.3, fila 2, columna 5. Se procede de igual manera
para las demás velocidades de agitación del Cuadro B.3 y los resultados se muestran en el mismo
cuadro. Este procedimiento también se utiliza en los Cuadros B.11, B.12 y B.13.
P (7.3)
( ) ( )
P
Para el arreglo de 2R, los valores de los exponentes del modelo se toman del Cuadro 7.3, y el cálculo se
hace primero para el impulsor en la posición inferior. El valor de Vn es equivalente a 2 L en el biorreactor
de 7 L, g es 9,81 m/s2, DA y ω se obtienen del Cuadro 5.3. En el caso del tratamiento de 100 RPM y 2
LPM, los valores de Q y de N se obtienen del Cuadro B.3. Se cuenta entonces con todos los valores para
despejar la relación de potencias:
P
( ) ( )
P
Resultado que se encuentra tabulado en el Cuadro B.4, fila 2, columna 2. El mismo cálculo se realiza para
los demás tratamientos y se los resultados se encuentran en el Cuadro B.4. La ecuación 7.3 se utiliza a
su vez para obtener esta relación para el impulsor superior, para los arreglos de MR y 2M, y para los
cálculos que corresponden a los biorreactores de 70 L. En cada caso, se debe cerciorarse de que los
valores de los exponentes, N, DA, Q, Vn y ω correspondan. Vn para el caso de los biorreactores es de 20 L.
Todos los resultados que provienen de la aplicación de esta fórmula se tabulan en los Cuadros B.4, B.5,
B.6, B.14, B.15 y B.16.
(7.4)
155
Con los valores del Cuadro B.2, fila 7, columna 5, del Cuadro B.3, fila 2, columna 2, y sabiendo que DA =
0,06 m y NP = 6 para turbinas Rushton, se puede calcular la potencia consumida por el impulsor inferior
en la corrida de 100 RPM y 2 LPM.
Resultado que se encuentra tabulado en el Cuadro B.4, fila 2, columna 4. El mismo procedimiento se
utiliza para obtener las potencias sin aireación para los distintos tratamientos, utilizando las velocidades
de agitación del Cuadro B.3, columna 2, y los resultados se encuentran en el Cuadro B.4, columna 4.
Para llevar a cabo el cálculo para el impulsor superior, se debe introducir un factor de 0,9 en la ecuación
7.4. Es así como:
Resultado que se encuentra tabulado en el Cuadro B.4, fila 2, columna 6. Ambos procedimientos, para
impulsores inferior y superior, se lleva a cabo con los datos provenientes de los Cuadros B.3, B.11, B.12 y
B.13 y los resultados se tabulan en los Cuadros B.4, B.5, B.6, B.14, B.15 y B.16. Es importante corregir el
diámetro de agitación para cada impulsor (ver Cuadros 5.3 y 6.3) y el número de potencia a 1,5 cuando
se trabaje con hélices marinas.
(C.8)
Utilizando los datos del Cuadro B.4, fila 2, columnas 2 y 4 se tiene que:
Resultado que se encuentra tabulado en el mismo cuadro en la columna 5. Se procede de igual forma
para todos los demás pares de datos en los cuadros B.4, B.5, B.6, B.14, B.15 y B.16 y los resultados
quedan en los mismos cuadros. Para este cálculo no existe ninguna consideración especial entre los
tipos de turbinas ni la posición de estas.
(C.9)
156
Resultado que se encuentra tabulado en el Cuadro B.7, columna 2, fila 2. Se procede de igual forma para
todos los demás pares de datos en los cuadros B.4, B.5, B.6, B.14, B.15 y B.16 y los resultados se
muestran en los cuadros B.7, B.8, B.9, B.17, B.18 y B.19.
(C.10)
Haciendo uso de los datos del Cuadro B.7, columna 2, fila 2 y sabiendo que el volumen de trabajo es de
4 L se tiene que:
Resultado que se encuentra tabulado en el Cuadro B.7, columna 3, fila 2. Se procede de igual forma para
todos los demás datos en los cuadros B.7, B.8, B.9, B.17, B.18 y B.19, y los resultados se encuentran en
los mismos cuadros. Para los datos provenientes de los biorreactores de 70 L, se debe recordar a la hora
de hacer el cálculo que el volumen de trabajo de estos es de 40 L.
(7.1)
Tomando los datos del Cuadro B.10, columna 1, fila 3 y sabiendo que DA = 6 cm:
Resultado que se encuentra tabulado en el Cuadro B.10, fila 3, columna 2. Para las otras velocidades de
agitación del Cuadro B.10, columna 1 se realiza el mismo cálculo y los resultados se presentan en el
mismo cuadro.
157
(7.2)
Tomando los datos del Cuadro B.10, fila 3, columna 2 y del Cuadro 6.3, para el arreglo de 2R se tiene:
Resultado que se encuentra tabulado en el Cuadro B.10, fila 3, columna 3. Se procede de igual manera
para las demás velocidades de punta del Cuadro B.10 y se presentan los resultados en el mismo cuadro.
Para el caso del arreglo MR, se toma como diámetro del agitador, el valor intermedio entre el de la
turbina Rushton y el de la hélice marina.
C.18. Cálculo del porcentaje de error entre los valores de kLa experimentales y
predichos por las correlaciones.
Para obtener el porcentaje de error se utiliza la ecuación C.2 modificada. El denominador de la ecuación
es el valor experimental y no el predicho. Utilizando los datos del Cuadro 8.13, fila 2, columnas 3 y 4 se
tiene que
| |
| |
Resultado que se encuentra tabulado en el Cuadro 8.13, fila 2, columna 5. El mismo cálculo se lleva a
cabo para calcular los demás porcentajes de error utilizando los datos de los Cuadros 8.13, 8.14, 8.15,
8.16, 8.17 y 8.18 y los resultados se muestran en los mismos cuadros.
D. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Se introduce el agitador ultrasónico al beaker que contiene el agua y se inicia la agitación a 3 000 RPM.
Gradualmente se va agregando la goma xantán y el p-clorocresol a la mezcla, cerciorándose de que no
se formen grumos ni que el polvo se quede adherido a las paredes del agitador o del beaker. Si los
grumos se forman, se raspan con una paleta metálica y se aumenta la velocidad de agitación hasta que
se disuelvan por completo. Una vez que todo el polvo se ha vertido, se aumenta la velocidad de
agitación a 6 000 RPM y se deja homogenizar por unos 10 minutos.
Cuando la disolución está lista, se coloca dentro de uno de los biorreactores de 7 L y se le agregan 3
gotas de antiespumante. Para que este se distribuya adecuadamente, se prende el agitador del
biorreactor a una velocidad de 500 RPM. Se toma una pequeña muestra (15 mL) que se almacena en un
tubo tipo Falcon en el cuarto frio para luego servir de referencia en las pruebas de viscosidad y
densidad.
El procedimiento de armado de la tapa del biorreactor inicia con el lavado, secado y desinfección de las
piezas con una disolución de etanol al 70 % v/v. Se colocan todas las piezas sobre una toalla para evitar
que toquen las superficies sucias de la mesa de armado. Un recuento de las piezas totales se muestra en
la Figura D.1.
El orden de armado de las piezas de la tapa no es estricto, pero se recomienda partir de las piezas más
grandes (piezas A, B, C, D, E y F según el Cuadro 5.2), luego armar las piezas más cercanas al centro de la
tapa (piezas M, N, Ñ, O, P y Q según el mismo cuadro), y terminar con las piezas intermedias (G, H, I, J, K
y L según el mismo cuadro). Las piezas se deben enroscar a mano y luego ajustar las tuercas con una
llave para que queden aseguradas. En el eje deben además colocarse los impulsores deseados y en el
arreglo requerido.
Una vez que se han colocado y asegurado todas las piezas de la tapa, esta se coloca sobre el cuerpo del
biorreactor y se sella con los 6 tornillos más externos. Los tornillos que se encuentran opuestos entre sí
deben socarse simultáneamente para evitar que la tapa se desvíe de su posición final. La configuración
final de la tapa se muestra en la Figura D.2.
158
159
Cuando el biorreactor se ha sellado, se deben hacer las conexiones pertinentes entre este y el
biocontrolador. Dichas conexiones se describen a continuación:
La calibración del sensor de pH debe hacerse antes de introducir el sensor en el biorreactor que ya
contiene la disolución con la cual se va a trabajar. El procedimiento se detalla a continuación:
1. Encender el controlador.
2. Presionar el botón del parámetro “pH” para ir a al menú de opciones de pH.
3. Cerciorarse de que el controlador de pH se encuentre apagado (se puede ver como que el botón
que muestra el valor de pH está de color gris).
4. Accionar el botón “Calibrate pH” (Calibrar pH) para iniciar el menú de calibración.
5. Seleccionar “2-point calibration” (Calibración en dos puntos). Los pasos 2-5 se muestran en la
Figura D.3.
161
Figura D.3. Imagen del biocontrolador ez-Control del biorreactor de 7 L que muestra los pasos 2-5 de la
calibración de pH (Applikon Biotechnology, 2008).
Figura D.4. Imagen del bio controlador ez-Control del biorreactor de 7 L que muestra el paso 6 de la
calibración de pH (Applikon Biotechnology, 2008).
162
Figura D.5. Imagen del bio controlador ez-Control del biorreactor de 7 L que muestra el paso 7 de la
calibración de pH (Applikon Biotechnology, 2008).
Nota: no hay un orden específico sobre las disoluciones tampón. Las disoluciones con las que se trabaja
en CENIBiot son de valores 4,01 y 7,00 unidades de pH. Estas se muestran en la Figura D.6.
La calibración del sensor de oxígeno disuelto es uno de los pasos más importantes en la preparación
biorreactor para su uso. Como paso previo a la calibración, este sensor debe estar conectado al bio
controlador mientras se encuentra encendido para que se polarice. La polarización toma alrededor de 6
horas aunque es recomendable que se dé en un período mayor a las 15 horas para tener mejores
resultados. Posterior a esto, se toman los siguientes pasos:
2. Cerciorarse de que el controlador de oxígeno se encuentra desactivado (se puede ver como que
el botón que muestra el valor de oxígeno disuelto está de color gris).
3. Oprimir el botón de “Menu” (Menú) y luego el de “Manual Control” (Control manual) para
desplegar la pantalla donde se controlan las válvulas de las líneas de nitrógeno, oxígeno, aire y
dióxido de carbono.
4. Accionar el botón de la válvula de aire y desactivar la de nitrógeno. Se deja airear la disolución
por unos 20 min con un flujo alto (p.e. 8 LPM).
5. Seleccionar el botón azul de oxígeno disuelto y en dicho menú seleccionar la opción “Calibrate”
(Calibrar). Este paso se muestra en la Figura D.7.
Nota: En ciertos controladores, si la opción se encuentra activada, en vez de presentar un botón único
de “Calibrate” hay dos que lo sustituyen y se denominan “1-point calibration” y “2-point calibration”
(Calibración en un punto y en dos puntos respectivamente). Si este es el caso, seleccionar “1-point
calibration”.
Nota: se recomienda, como parte del proceso de verificación de la buena calibración y funcionamiento
del sensor, realizar un desplazamiento completo de todo el oxígeno en la disolución con nitrógeno para
corroborar que se alcanza un valor de 0 % de oxígeno disuelto. Si el valor luego de 20 min de ingresar
164
nitrógeno puro no es menor a 0,5 % o es negativo, se debe realizar una calibración de dos puntos. Para
este procedimiento se debe referir al manual de operación del fabricante.
Figura D.7. Imagen del bio controlador ez-Control del biorreactor de 7 L que muestra el paso 5 de la
calibración de oxígeno disuelto (Applikon Biotechnology, 2008).
1. Insertar el termopar en una disolución de temperatura conocida (p.e. agua con hielo).
2. Esperar a que la temperatura, como se muestra en el botón de variable de proceso, sea estable.
3. Presionar el botón “1-point calibration” (Calibración en un punto).
4. En el panel numérico, ingresar el valor de la temperatura en grados Celsius.
Figura D.8. Imagen del bio controlador ez-Control del biorreactor de 7 L que muestra el paso 1 del
llenado de la chaqueta (Applikon Biotechnology, 2008).
Figura D.9. Imagen del bio controlador ez-Control del biorreactor de 7 L que muestra los pasos 3 y 4
del llenado de la chaqueta (Applikon Biotechnology, 2008).
Tanto la temperatura como la velocidad de agitación se pueden ajustar a los valores deseados a partir
del menú principal. Seleccionando las viñetas de “Temperature” (Temperatura) y “Stirrer” (Agitador), se
despliega el submenú para cada una de estas variables. Dentro de dicho submenú, están las opciones de
“Set ____” (Ajustar ____) y “Start _______ Controller” (Iniciar Controlador de _____) para cada
parámetro. En el botón “Set ____” se muestra un teclado para ingresar el valor deseado y luego se
oprime “Enter” (Ingresar). El botón “Start _______ Controller” no despliega ningún menú y solamente
cambia de color a verde que significa que se encuentra encendido.
En BioXpert XP, el término “Receta” (Recipe) corresponde al conjunto necesario de información que
describe de manera única los requerimientos productivos para un producto en específico. En el caso de
la recopilación de datos, una Receta define cuáles parámetros en línea, fuera de línea, fórmulas,
constantes, perfiles, puntos de consigna, fases, alarmas y variables, son monitoreados y de qué manera.
Para la presente investigación, se requiere únicamente tomar datos de porcentaje de oxígeno disuelto,
como parte de la variable de respuesta que es el kLa, y del pH y la temperatura a manera de parámetros
de control. La creación de una Receta sigue los pasos descritos a continuación:
2. El primer paso consiste en darle nombre a la nueva Receta y catalogar su versión (Figura D.11).
Cuando se han completado ambos pasos, se oprime Siguiente (Next).
3. El segundo paso ofrece 3 opciones para obtener las variables que se quieren medir: desde un
nuevo conjunto de variables definidos, desde las variables asignadas a una Unidad (Unit), y
desde una Receta que ya existe. Se selecciona la opción “desde las variables asignadas a una
Unidad”. (Figura D.12)
4. Al seleccionar la opción anterior, se despliega un menú con las Unidades instaladas en el equipo.
Se busca la Unidad que corresponde al biorreactor deseado y se oprime Siguiente. Cada
biorreactor tiene su código de CENIBiot los cuales corresponden a las Unidades mostradas.
(Figura D.13)
5. Todas las variables que se encuentran disponibles para dicha Unidad se muestran luego en el
Administrador de Variables (Variable Wizard) cuando se marca la casilla de Editar Receta (Edit
Recipe). Este menú sirve luego para editar los tipos de variable, seleccionar las unidades de
ingeniería, intervalo de muestreo y ámbitos de escala para cada una de estas variables. Desde
acá se puede eliminar las variables que no son de interés. (Figura D.14)
6. Se oprime Finalizar (Finish) y con esto queda creada la Receta. La Receta puede ser utilizada
múltiples veces ya que son instrucciones genéricas de tratamiento de datos para cada proceso
que se lleve a cabo en alguna de las Unidades.
Un Proceso es la etapa final en la cadena para tomar datos experimentales de un biorreactor que se
encuentre en funcionamiento. Sigue los pasos a continuación:
2. El primer paso consiste en darle nombre al Proceso y escribir los comentarios pertinentes
(Figura D.16). Cuando se han completado ambos pasos, se oprime Siguiente (Next).
4. En el tercer paso, se selecciona la Unidad en la cual se va a llevar a cabo el Proceso (Figura D.18).
Se oprime Siguiente (Next).
5. En este paso se selecciona la Receta que se desea utilizar en el Proceso (Figura D.19). Cuando se
oprime Siguiente, el programa valora si la Unidad y la Receta son compatibles; es decir, que las
variables que va a registrar la Receta provienen efectivamente de la Unidad. Si esto es
satisfactorio, el programa indica que no hay errores en el pareo y se puede continuar (Figura
D.20). Si existiere un error, el sistema indica que se debe regresar y seleccionar un nuevo par
Unidad-Receta antes de continuar.
6. El paso final en la creación del Proceso es el que señala cuando se inicia la prueba. Si se oprime
Finalizar, el Proceso está creado pero debe de ponerse a correr en un momento posterior. Si la
casilla de Iniciar Proceso (Start Process) se encuentra activada, se puede indicar la duración del
Proceso y cuándo se inicia y se termina (Figura D.21).
7. El Proceso queda entonces creado y se obtiene un menú general sobre este. A partir de este
menú se puede Iniciar (Start), Pausar (Pause), Resumir (Resume) y Abortar (Abort) el Proceso.
Además en la viñeta de Tablas, Cuadros y Gráficos (Charts) se pueden elaborar dichas
herramientas para la muestra y exportación de datos (Figura D.22).
Como el eje no forma parte de la tapa en este tipo de biorreactor, este se debe introducir antes de
poner la tapa. El acople del eje es magnético por lo que no es necesario utilizar herramientas para
fijarlo. Debe introducirse con mucho cuidado para que la fuerza de atracción magnética no tire del eje
con rapidez y dañe el fondo con el impacto. Los impulsores deben haber sido colocados antes de
introducir el eje ya que el interior del biorreactor es poco accesible.
Junto al eje, las mamparas y el burbujeador son los otros dos accesorios que deben quedar puestos
antes de que se cierre la tapa. Las mamparas poseen una ranura en la pared del tanque en donde se
deben ajustar y luego fijar con una tuerca. Son posiciones fijas que se encuentran en cada uno de los
cuadrantes del biorreactor. El burbujeador, por su parte, se introduce en el biorreactor y su conexión
con la línea de aire debe hacerse pasar a través de un orificio en la pared del biorreactor y luego
ajustarse con una prensa. La disposición interna del biorreactor ya con las piezas de su interior listas se
muestra en la Figura D.23.
Figura D.23. Configuración final del interior del biorreactor de 70 L luego de la colocación del eje, de las
mamparas y del burbujeador.
175
El procedimiento de armado de la tapa del biorreactor inicia con el lavado, secado y desinfección de las
piezas con una disolución de etanol al 70 % v/v. Debido a que la tapa de este biorreactor posee menos
accesorios que la de 7 L, es un proceso más rápido y que requiere la manipulación de menos piezas. Se
recomienda armar la tapa una vez que esta se encuentre sobre el biorreactor y sus tornillos externos se
hayan socado bien.
El orden de armado de las piezas de la tapa no es estricto, pero se recomienda partir de las piezas más
grandes (piezas A, D y F según el Cuadro 6.2) y luego armar las piezas más pequeñas de la tapa (piezas B,
C, E, G, H, I y J según el mismo cuadro). Las piezas enroscables se deben introducir a mano y luego
ajustar las tuercas con una llave para que queden aseguradas. Las piezas que tienen conexiones
sanitarias deben llevar un empaque entre las dos uniones y luego ajustarse muy bien con la prensa. La
configuración final de la tapa se muestra en la Figura D.24.
Figura D.24. Configuración final de la tapa del biorreactor de 70 L luego del proceso de armado.
176
En este biorreactor las conexiones son las mismas que en el de 7 L. Las únicas diferencias son las
siguientes:
Se debe incluir la conexión eléctrica para el bombillo. El cable viene en conjunto con el del
sensor de nivel.
No hay que acoplar el sistema de termocirculación ni el motor porque estos ya son fijos en el
biorreactor.
El sensor de temperatura no se introduce en un termopozo, sino en un puerto cercano a la base
donde se encuentra en contacto directo con el contenido del biorreactor.