IDENTIFICACION DE LÍPIDOS

Cristóbal Barreto hernandez1, José Pérez Camargo1, Vicente Estrada Roman1

1 universidad de sucre; facultad de ingeniería; tercer semestre ingeniería

agroindustrial; laboratorio Bioquímica; grupo 2; puesto 6; Sincelejo/Sucre;
(10/10/2018)

RESUMEN.

En el laboratorio para la identificación de lípidos utilizamos la prueba de

solubilidad, ensayo de tinción, saponificación y el ensayo de Lieberman-Burchard.

La prueba de solubilidad consistió en tomar cuatro tubos de ensayos, y

observamos que solo el tubo 2 (1ml de aceite vegetal + 1ml de éter o cloroformo) y
el tubo 4 (1ml de grasa animal + 1ml de éter o cloroformo) se mezclaron, formando
una mezcla homogénea, las otras dos solo se mezclaron en el instante que se
agito. Después realizamos el ensayo de tinción, y observamos que en los cuatro
tubos de ensayos la coloración inicial vario. Después, seguidamente realizamos la
prueba de saponificación, y observamos que en el tubo 1 (2ml de aceite vegetal y
añada 2 ml de una solución de NaOH 20% p/v.) dio dos fases, en la parte superior
el aceite vegetal y en la parte inferior NaOH. El tubo 2 (2 ml de grasa animal usada
más 2 ml de una solución NaOH 20% p/v.), observamos una interface; en la parte
media dio un color café, en la parte inferior un color traslucido y en la parte
superior un color naranja. Y el tubo 3 (2 ml de leche y añada 2 ml de una solución
de NaOH 20% p/v.) observamos una sola fase de color chocolate. Luego
realizamos el ensayo de LIEBERMAN-BURCHARD y observamos que la solución
resultante se asemeja a una solución coloide
RESULTADOS

SOLUBILIDAD
Tubo 1 (2 ml de Tubo 2 (1 ml de Tubo 3 (1 ml de Tubo 4 (1 ml de grasa
aceite vegetal y aceite vegetal y grasa animal animal usada o no y
agregue 2 ml de agregue 1 ml de éter usada y agregue 1 ml de éter o
agua.) o cloroformo.) agregue 1 ml de cloroformo.)
agua.)
negativa positiva Negativa positiva

ENSAYO DE TINCIÓN
Tubo 1: (2 ml de Tubo 2: (1 ml de Tubo 3: (1 ml de Tubo 4: (1 ml de
aceite vegetal y grasa animal leche y añada 0.25 aceite vegetal
añada 0.25 ml de usada más 0.25 ml ml de solución agregue 0.25 ml
solución alcohólica de solución alcohólica de de tinta roja)
de sudan III) alcohólica de sudan III)
sudan III)

positiva positiva Positiva positiva

SAPONIFICACION.
Tubo 1: (2 de aceite vegetal
más 2 ml de una solución
de NaOH 20% p/v.)
Tubo 2: (2 ml de grasa Tubo 3: (2 ml de leche y
animal usada más 2 ml añada 2 ml de una
de una solución NaOH solución de NaOH 20%
20% p/v.) p/v.)

positivo Positivo negativo

ENSAYO DE LIEBERMAN-BURCHARD
Tubo de ensayo Resultado

CLOROFORMO (10 ml) + HUEVO (1ml) + … la prueba es positiva ya que dio un

…C4H6O3 (1 ml) + H2SO4 (4 gotas). color verde azuloso.
DISCUSIÓN DE RESULTADOS

 PRUEBA DE SOLUBILIDAD

En el tubo 1 y 3 se puede observar que el aceite vegetal y el aceite animal no

es soluble en agua.
En el tubo 2 y 4 se puede observar que tanto la grasa animal como vegetal son
solubles en éter o cloroformo.

 ENSAYO DE TINCION
Observamos que, en los tubos de aceite vegetal, aceite usado y leche la
solución alcohólica de Sudán III nos puede ayudar a identificar la presencia de
triglicéridos mostrándose de un color rojizo al ser adicionado.
Y en la tinta china-aceite se nota que arriba se destiñe un poco y abajo su color
se torna más fuerte como se muestra en la siguiente imagen.

 SAPONIFICACION

En esta prueba sometimos los 3 tubos de ensayo a un baño de maría con

un tiempo de aproximadamente 20 a 30 minutos.

Después de esto pudimos notar los siguientes cambios que se dieron en

cada tubo de ensayo.
  ENSAYO DE LIEBERMAN-BURCHARD

Reconocimiento del colesterol.

El colesterol es una sustancia no coloreada, por lo que resulta difícil poder
realizar su caracterización.
Para este ensayo usamos técnicas colorimétricas, con la finalidad de poder
agregar grupos cloroformos y poder adquirir una coloración específica para
su análisis.

CONCLUSIONES
 En la prueba de solubilidad las moléculas del agua son polares, las del
aceite y grasas son no polares, debido a las diferentes estructuras y
densidades, no hay adhesión entre las moléculas de agua y la sustancia
lipídica. Por lo tanto, estos dos reactivos se repelen entre sí frente a una
prueba de solubilidad y dan como resultado dos fases. Cuando se agitan
fuertemente, a solución se divide en pequeñísimas gotas formando una
emulsión de aspecto lechoso, que es transitoria, pues desaparece en
reposo por reagrupación de las gotitas de grasa en una capa que, por su
menor densidad, se sitúa sobre el agua. Por el contrario, las grasas y
aceites son solubles en disolventes orgánicos, como el cloroformo, éter, etc.
  El ensayo de tinción con Sudan III es un método utilizado generalmente
para demostrar la presencia mediante tinción de triglicéridos, aunque
también tille otros lípidos. Pertenece al grupo de colorantes indiferentes,
que son aquellos que no tienen afinidad por estructuras ácidas o básicas.
Son insolubles en el agua y tiñen aquellas sustancias que tienen un poder
de disolución superior al del líquido empleado.

 La saponificación es una reacción de un ácido graso (grasa saponificable) y

una base (NaOH). Las grasas se combinan con los iones sodio del
hidróxido. Al reaccionar con el hidróxido de sodio produce una sal que es el
jabón y otro producto secundario que es la Glicerina.

 El ensayo de Liebermann-Burchard, es un meto para identificar Colesterol y

Ergosterol, en el cual se encuentra en un medio ácido fuerte de anhídrido
acético el cual causa que se protone el grupo Hidroxilo, luego por
deshidratación forma el ion carbonilo-3,5-colastadieno el cual se oxida por
presencia del ácido sulfúrico (H2SO4).

RESPUESTA CUESTIONARIO
Prueba de solubilidad:
Los lípidos son insolubles en agua. Esta insolubilidad en agua se debe a que la
estructura química básica de los lípidos consiste en cadenas hidrocarbonadas con
cuchos enlaces C-C y C-H. Estos enlaces no poseen polaridad y no existe
interacción con las moléculas de agua. Cuando se agitan fuertemente en ella se
dividen en pequeñísimas gotas formando una emulsión de aspecto lechoso, que
es transitoria, pues desaparece en reposo por reagrupación de las gotitas de
grasa en una capa que, por su menor densidad, se sitúa sobre el agua. Por el
contrario, las grasas son solubles en disolventes orgánicos, como el éter,
cloroformo, acetona, benceno, etc.
En la imagen podemos observar lo dicho anteriormente que no hay reacción entre
el agua más aceite y también pasa lo mismo con el agua más grasa animal.
Y la reacción del aceite y la grasa animal son solubles en cloroformo, ya que estas
son solubles en compuestos orgánicos.

ENSAYO DE TINCIÓN (PRUEBA DE SUDA III):

El Sudán III es un colorante que se utiliza para detectar específicamente las
grasas, porque es insoluble en agua y en cambio es soluble en las grasas. Al ser
de color rojo, cuando se disuelve tiñe las grasas de color rojo anaranjado.

Compuesto de sudan III

SAPONOFICACION:

Las grasas reaccionan en caliente con el hidróxido sódico o potásico

descomponiéndose en los dos elementos que las integran: glicerina y ácidos
grasos. Éstos se combinan con los iones sodio o potasio del hidróxido para dar
jabones, que son en consecuencia las sales sódicas o potásicas de los ácidos
grasos. En los seres vivos, la hidrólisis de los triglicéridos se realiza mediante la
acción de enzimas específicos (lipasas) que dan lugar a la formación de ácidos
grasos y glicerina.
ENSAYO DE LIEBERMAN-BURCHARD:

Es un reactivo utilizado en un ensayo colorimétrico para determinar el Colesterol y

Ergosterol, este ensayo comienza con un color rosa violeta y progresa a través de
un verde claro y si da un color verde azuloso esto indica una prueba positiva para
coresterol y si la reaccion termina con un color rojo indica la precencia de
ergosterol.
El color es debido al grupo hidroxilo (-OH) de colesterol que al reaccionar con los
reactivos y el aumento de la conjugación de la insaturación en el aniño fusionado
adyacente. Puesto que este ensayo utiliza anhídrido acético y asido sulfúrico como
reactivos, se debe tener pecaución para no recibir quemaduras graves.

BIBLIOGRAFIAS
 https://www.vix.com/es/btg/curiosidades/4036/por-que-los-lipidos-son-
insolubles-en-agua.
 https://es.slideshare.net/Milisanm/reconocimiento-del-colesterol-
quimica.
 http://myslide.es/documents/lipidos-pdf-informe-de-lab-oratorio-
bioquimica.html.
 http://www.academia.edu/16107669/Saponificaci%C3%B3n_de_l%C3%AD
pidos.